HepaCAM联合吡柔比星抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖

目的：研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）联合吡柔比星（pirarubicin,THP）对膀胱癌细胞BIU-87的增殖影响。方法：将BIU-87细胞分为空白处理组、hepaCAM过表达腺病毒（adenovirus-GFP-hepaCAM,Ad-GFP-hepaCAM）处理组、THP处理组、Ad-GFP-hepaCAM联合THP处理组。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞周期,real-time PCR检测细胞周期相关基因cyclinD1,CDK2的mRNA表达。将空白、空载腺病毒（adenovirus-GFP,Ad-GFP）、hepaCMA过表达腺病毒（Ad-GFP-hepaCAM）处理的BIU-87细胞分别注射于裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤情况并记录瘤体体积,4周后处死裸鼠。切取各组瘤体组织,组织切片行HE染色和免疫组化检测hepaCAM蛋白的表达。结果：Ad-GFP-hepaCAM联合THP处理组,与THP处理组比较,BIU-87细胞增殖受到明显抑制（F=2.702,P=0.00）;细胞周期明显阻滞于G0/G1期（F=10.989,P=0.000）;cyclinD1、CDK2的mRNA 表达明显下调（F=5.4299,P=0.000）。Ad-GFP-hepaCAM处理组的BIU-87细胞成瘤体积明显低于空白处理组（F=12.587,P=0.000）。结论：hepaCAM基因能够增强吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞的增殖抑制作用。     

HepaCAM基因对人膀胱癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响.方法:运用脂质体转染方法,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒转入T24细胞株,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;RT-PCR及Western blot方法检测目的基因和蛋白表达;MTT法及克隆形成实验研究hepaCAM基因对T24细胞体外生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR技术测定周期调控蛋白CyclinD1的mRNA表达变化.结果:RT-PCR和Western blot方法分别检测到hepaCAM的基因表达和蛋白表达,MTT检测转染hepaCAM基因的细胞生长速度较对照组和空载体组明显减慢(P<0.01),克隆形成率明显小于对照组和空载体组(P<0.01).细胞周期中G0/G1期比例明显增高(P<0.05),而S期比例减少;CyclinD1 mRNA表达明显下调(P<0.05).结论:HepaCAM基因通过阻滞细胞于G0/G1期,减少CyclinD1 mRNA表达,抑制T24细胞的增殖.     

HepaCAM基因转染对膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨外源性肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)转染对人膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)表达的影响。方法使用脂质体2000转染法将携带野生型hepaCAM基因的质粒(pEGFPN2-hepaCAM)及空载质粒(pEGFPN2)转染人膀胱癌BIU-87细胞,建立稳定过表达hepaCAM基因的BIU-87细胞株。以转染空载质粒及未转染的BIU-87细胞株作为对照,采用MTT法检测各组细胞生长能力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hepaCAM、VEGF mRNA水平的变化,Western blot检测VEGF蛋白水平的变化。结果MTT实验示:hepaCAM基因转染(实验组)BIU-87细胞生长与空载体组和未处理组细胞比较明显受到抑制(P<0.05);hepaCAM基因在膀胱癌BIU-87细胞不表达,转染后hepaCAM mRNA明显增强(P<0.05);实验组VEGF mRNA表达(0.527±0.031)与未处理组(0.803±0.042)、空...     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.     

PTEN基因影响K562细胞周期的分子机制探讨

【目的】探讨抑癌基因PTEN对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞周期的影响。【方法】将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及对照载体腺病毒（Ad-GFP）转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞凋亡率和细胞周期的变化;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN、CyclinD1、CyclinD2、CDK4、P27Kip1 mRNA水平变化,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化。【结果】与Ad-GFP组比较,Ad-PTEN-GFP转染K562细胞后,细胞凋亡率最高为30%,细胞周期显示：G0/G1期细胞比例由54.9%增加至78.5%,G2/M期比例由30.2%降至13.6%,Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4 mRNA及Cyclin D1蛋白表达降低,P27Kip1 mRNA及蛋白表达增加。【结论】PTEN基因高表达可以促进K562细胞凋亡,并通过抑制Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4及增加P27Kip1表达使细胞周期阻滞在G0/G1期。     

阿霉素诱导肝细胞黏附分子基因下调肾癌细胞细胞分裂周期基因2的表达

目的:研究阿霉素联合hepaCAM基因对肾癌细胞786-0生物学的影响。方法：阿霉素处理后,用腺病毒向肾癌786-0导入肝细胞黏附分子（Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）,以噻唑蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测抑制率,流式细胞术（Flow cytometer,FCM）测细胞周期,实时荧光定量聚合酶链反应（Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）、Western blot检测hepaCAM和细胞分裂周期基因2（Cell division cycle 2,cdc2）的mRNA及蛋白水平。结果：MTT显示：与对照组相比,实验组抑制率显著升高（P＜0.01）。FCM证实：实验组出现明显G2/M期阻滞。RT-qPCR及Western blot检测到实验组cdc2 mRNA及蛋白水平显著下调（P＜0.01）。结论：阿霉素处理后,导入hepaCAM基因,可引起细胞抑制率显著升高及G2/M期阻滞,这可能与阿霉素诱导hepaCAM下调cdc2的表达有关。     

siRNA干扰wnt5a表达对Jurkat细胞生长的影响及机制研究

目的:干扰wnt5a在Jurkat细胞中的表达,探讨wnt5a对Jurkat细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用及其机制。方法:采用大肠杆菌BJ5183内同源重组的方法构建特异性干扰wnt5a的腺病毒Ad5-wnt5asi,感染Jurkat细胞。实验分为实验组(感染重组腺病毒的Jurkat细胞)、空载体组(感染腺病毒的Jurkat细胞)及空白对照组(Jurkat细胞)。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测各组细胞wnt5a、β-catenin、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin dependent proteinkinaseⅡ,CaMKⅡ)、cyclinD1、c-myc、survivin mRNA表达,Western blot检测干扰前后β-catenin、CaMKⅡ、cyclinD1蛋白表达。结果:(1)实验组细胞增殖与空载体组及空白对照组相比显著增高(P<0.05)。(2)实验组与其他两组相比,G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增多(P<0.05),G2期细胞比例无明显差异(P>0.05)。实验组与其他两组相比,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。(3)实验组细...     

反义MAT1重组腺病毒对人胰腺癌细胞BxPC-3的周期调控作用

目的探讨MAT1基因在胰腺癌BxPC3细胞周期G1/S转换中的作用。方法应用同源重组技术构建含反义MAT1基因的腺病毒载体;细胞生长分析采用台盼蓝染色计数法;Western印迹检测细胞MAT1、细胞周期素D1(cyclinD1)、cyclinE和pRb的蛋白表达;采用流式细胞仪分析反义MAT1基因转染后BxPC3细胞周期的变化。结果编码反义MAT1的重组腺病毒Ad MAT1AS感染滴度为5×1010pfu/ml;BxPC3细胞感染Ad MAT1AS后,MAT1、cyclinE和pRb蛋白表达明显下调,同时出现了明显的细胞G1期阻滞,79%的细胞处于G0/G1期,而空白对照组及空载体组则为40%至44%的细胞处于G0/G1期。结论MAT1基因在胰腺癌BxPC3细胞周期G1→S转换中发挥重要作用。     

hepaCAM与藏花素联合应用对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）与藏花素联用对前列腺癌（prostate cancer,PCa）细胞DU145增殖的影响。方法：四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞增殖效应;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;实时荧光定量PCR、Western blot法检测细胞周期调节因子cyclinD1及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达变化。结果：hepaCAM过表达腺病毒与藏花素单独使用均能抑制PCa细胞DU145的增殖[48 h抑制率分别为（12.0±2.0）%,（22.0±1.0）%],但两者联用比单独应用效果更加明显[48 h抑制率为（54.0±1.0）%,P=0.000]。Real-time PCR结果显示,hepaCAM过表达腺病毒及藏花素联合作用与藏花素单独使用相比,cyclinD1 mRNA表达下调（P=0.048）;两者联合应用与hepaCAM过表达腺病毒或藏花素单独使用相比,PCNA mRNA水平下调（P=0.047,P=0.006）。Western blot结果显示,与单独使用hepaCAM过表达腺病毒或藏花素相比,两者联用组cyclinD1蛋白表达明显降低（P=0.002,P=0.002）,同时PCNA蛋白表达也降低（P=0.000,P=0.003）。结论：hepaCAM基因过表达腺病毒与藏花素联用对PCa DU145细胞增殖的抑制有明显的协同作用,作用机制与下调cyclinD1和PCNA的表达有关。     

培门冬酶抗人套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1细胞作用机制的研究

目的:观察培门冬酶(oncaspar)体外对人套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1细胞增殖抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法:MTT法研究不同浓度的oncaspar作用于Jeko-1细胞24,48h后增殖抑制效应;流式细胞术(FCM)检测Jeko-1细胞凋亡的情况及细胞周期分布的改变;SYBR GreenⅠ实时荧光定量技术(qRT-PCR)检测Jeko-1细胞cyclinD1mRNA表达的变化。结果:oncaspar能明显地抑制Jeko-1细胞的生长,oncaspar处理48h组的抑制效果显著高于药物处理24h组(P<0.05);FCM检测示oncaspar处理组与对照组相比,Jeko-1细胞的早期凋亡率明显增加,并使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05);qRT-PCR结果示oncaspar能明显抑制Jeko-1细胞cyclinD1mRNA的表达,2-△△CT=0.42±0.11。结论:oncaspar在体外能显著抑制Jeko-1细胞的生长,并诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期。     

肝细胞黏附分子基因在膀胱移行细胞癌中的表达

目的研究编码人类免疫球蛋白类细胞黏附分子的肝细胞黏附分子(hepaCAM)基因的表达与膀胱移行细胞癌(TCCB)生物学行为之间的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测在28例正常膀胱黏膜组织、34例TCCB组织及2株TCCB癌细胞株中hepaCAM基因的表达情况,并对TCCB患者hepaCAM基因的表达情况与其临床病理学指标进行分析。结果hepaCAM在正常膀胱黏膜组织标本中的表达均一,82.4%的TCCB组织中表达降低,17.6%的TCCB组织中表达缺失,2株TCCB T24细胞株和B IU-87细胞株中hepaCAM表达完全缺失,TCCB组织中hepa-CAM基因表达半定量值低于正常膀胱黏膜组织(P<0.05)。hepaCAM基因表达与TCCB的病理学分级有关(P<0.05),与临床分期、性别及是否复发无明显相关(P>0.05)。结论TCCB组织中hepaCAM表达降低与其临床病理分级相关,提示其可能与TCCB的恶性改变有关。     

生长抑素类似物对胆管癌SK-ChA-1细胞株及其相关基因表达的影响

目的探讨生长抑素类似物SMS201-995抑制人胆管癌增殖时对SK-ChA-1细胞细胞周期及cyclinD1和p16蛋白的影响.方法采用血清饥饿法将SK-ChA-1细胞同步化,同步化释放后SMS201-995处理48h收取不同时相细胞,以流式细胞仪(flow cytometer)分析细胞周期相分布;并同时用免疫组化和原位杂交检测cyclinD1和p16基因表达水平.结果SMS处理SK-ChA-1细胞后6、12 h可抑制SK-ChA-1细胞经血刺激由G0/G1进入S期.CyclinD1蛋白表达在SMS处理SK-ChA-1细胞后6 h明显减弱.p16蛋白在细胞周期各时相呈稳定性低表达.SK-ChA-1细胞cyclinD1和p16 mRNA各时相表达无明显变化.结论SMS诱导的cyclinD1蛋白量降低可能与SMS干扰细胞G1-S期转换,阻遏SK-ChA-1细胞增殖有关.     

RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞失巢凋亡的影响

目的： 观察RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞株BIU-87增殖和失巢凋亡的影响。方法： 构建针对MTA1基因的小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）,应用MTA1 siRNA转染处理人膀胱癌细胞株BIU-87后,分别采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白的表达,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测BIU-87细胞失巢凋亡。结果： 与对照组比较,MTA1 siRNA转染组MTA1 mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性（P<0.01）。MTA1 siRNA转染组软琼脂集落形成数明显减少,且与浓度相关（P<0.01）。琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术结果显示,MTA1 siRNA转染可诱导BIU-87细胞失巢凋亡,且与浓度相关（P<0.01）。结论： MTA1 siRNA可抑制膀胱癌细胞株BIU-87增殖,诱导失巢凋亡可能是其机制之一。     

Evaluation of tumor formation of three bladder cancer cell lines in nude mice

This study examined the differences in tumor formation of three bladder tumor cell lines (BIU-87, T24 and EJ) after subcutaneously transplanted into nude mice, in order to find the best technique for establishing in vivo bladder tumor model. BIU-87, T24 and EJ cells at logarithmic phase were re-suspended in serum-free medium. The cells suspensions of the identical concentration were subcutaneously transplanted into nude mice and then the success rate and tumor growth were compared among the three cell groups. The results of tumor formation were pathologically evaluated. Lung, liver and kidney tissues were also pathologically examined for distant metastasis. The proliferation of the three cells were determined by immunohistochemically detecting the PCNA expression in the tumors. The results showed that the success rates of EJ and T24 cells were significantly higher than that of BIU-87 cells and no distant metastasis was noted among the three groups. The proliferation levels of EJ and T24 cells was significantly higher than that of BIU-87. But at the later stage of tumor formation, as compared with T24 cells, EJ grew more vigorously, soon resulting in the central necrosis of tumor, which affected the measurement of the actual size of the tumors. Moreover, PCNA staining exhibited that the proliferation of EJ and T24 was significantly higher than that of BIU-87 cells. It is concluded that as compared with BIU-87 cells, EJ and T24 cells had higher success rates, with not significant differences in death rate and distant metastasis found among them. There existed no significant difference in tumor formation between EJ and T24 cells and T24 cells do not rupture easily, which makes it a better cell line for the establishment of in vivo bladder tumor model.     

白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞周期影响及其机制研究

目的:研究白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞的抗肿瘤作用,并探讨其分子机制.方法:用MTT法检测白藜芦醇对鼠纤维肉瘤细胞系S180增殖的影响;PI单标流式细胞术检测白藜芦醇对S180细胞周期分布的影响;Western blot方法检测白藜芦醇对S180细胞 cyclinD1,P21Cip1蛋白表达的影响.结果:白藜芦醇对S180细胞增殖呈双相作用:低浓度促进细胞增殖;高浓度抑制细胞增殖,其抑制作用呈时效和量效关系.白藜芦醇治疗组S180细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于 G0/G1期.白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白 cyclinD1 的表达.上调白藜芦醇P21Cip1蛋白表达.结论:白藜芦醇低浓度促进S180细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖.白藜芦醇可通过凋节细胞周期蛋白 cyclinD1,p21Cip1的表达调控细胞周期进程,抑制细胞增殖.     

RNA干扰HER2/neu对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向HER2/neu基因的siRNA对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响。方法化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA在脂质体的介导下转染BIU-87细胞,实验分为HER2/neu siRNA组、空脂质体组、阴性siRNA序列组,以未转染BIU-87细胞为空白对照组。利用CCK-8法评价HER2/neu基因siRNA对BIU-87细胞体外生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测转染前后细胞中HER2/neu mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染HER2/neu siRNA后BIU-87细胞的存活率显著下降,从(82.37±0.90)%降低到(56.76±1.70)%,差异有统计学意义(P<0.05);同时能诱导细胞凋亡,HER2/neu siRNA组凋亡率达(45.60±0.70)%,与空白对照组、空脂质体组、阴性siRNA序列组比较差异有统计学意义(P<0.05);靶向HER2/neu基因siRNA能显著降低BIU-87细胞中HER2/neu mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA能有效抑制HER2/neu基因在BIU-87细胞中的表达,进而能有效抑制BIU-87细胞的增殖和诱导凋亡的作用。     

榄香烯联合热疗诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡及对p-Akt表达的影响

目的探讨榄香烯联合热疗诱导人膀胱癌细胞株-87（BIU-87）膀胱癌细胞凋亡及对磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）蛋白表达的影响。方法采用流式细胞仪和透射电子显微镜分析和观察不同浓度榄香烯与热疗单独或联合对BIU-87膀胱癌细胞作用结果;Westernblotting检测榄香烯（40mg／L）与热疗单独或联合作用于人BIU膀胱癌细胞24h后p-Akt蛋白的表达。结果榄香烯联合热疗处理后BIU-87细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变,不同浓度的榄香烯组、热疗组和榄香烯联合热疗组作用于人BIU-87膀胱癌细胞24h均可使细胞凋亡率增加,但榄香烯联合热疗组的作用显著强于前两者;凋亡率增加的同时下调了p-Akt蛋白的表达。结论榄香烯联合热疗可诱导人BIU-87膀胱癌细胞凋亡,且过程中下调了p-Akt蛋白的表达。