中药软肝饮对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响

[目的]研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-1及Smad3,Smad7表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组,模型对照组,软肝饮治疗组,鳖甲软肝片对照组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组TGF-1、Smad3和Smad7的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组TGF-1、Smad3表达明显增强,Smad7表达明显下降。经软肝饮治疗后大鼠肝脏TGF-1表达比模型组减弱。软肝饮同时下调Smad3的表达,上调Smad7的表达。另外,软肝饮组大鼠肝脏病理变化显著改善。[结论]肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGF-1/Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制TGF-1表达,下调Smad3及上调Smad7的表达。     

扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的：探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法：本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组（5只）、模型组（18只）和扶正化瘀方组（14只）。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体（TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ）、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）,分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂（SB-431542）组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果：体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论：扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。     

缬氨酸对肝纤维化的影响

目的研究缬氨酸对复合法诱导的肝纤维化大鼠肝组织中瘦素、TGF-β1的作用,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法 36只Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组、肝纤维化模型组和缬氨酸治疗组。应用复合造模法完成肝纤维化模型,缬氨酸治疗组于第7周开始用大鼠灌胃针灌注缬氨酸1.2g.kg-1.d-1,实验于10周末全部结束。采用HE和Masson两种染色方法观察肝组织病理学改变,同时应用免疫组织化学法检测瘦素、TGF-β1在肝脏内的表达,并应用图像分析系统对其阳性表达结果进行定量分析,比较各组间的变化特点。结果肝纤维化模型组较正常组纤维化程度加重,且瘦素与TGF-β1的表达也增多（P〈0.01）;缬氨酸治疗组中的肝组织纤维化程度明显减轻,瘦素与TGF-β1的表达也减少（P〈0.05）。结论缬氨酸可能是通过抑制肝组织中瘦素、TGF-β1的表达,从而延缓肝纤维化的发生发展。     

肝纤维化大鼠TGF-β1与TIMP-1 mRNA的表达及补肾柔肝方的治疗作用

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织金属蛋白酶抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)的影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,对模型组和治疗组运用DMN诱导大鼠肝纤维化.治疗组在造模4周后给予补肾柔肝方灌胃,剂量10 g·kg-1·d,共治疗4周.第8周末处死全部大鼠,对肝组织进行HE和天狼猩红染色观察,并采用RT-PCR半定量方法,检测大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1mRNA的表达水平.结果:肝组织病理学研究结果显示DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化,模型组肝组织TIMP-1和TGF-β1mRNA表达明显增强,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱,而正常对照组表达较少.结论:TIMP-1与TGF-β1mRNA的表达与肝纤维化的发生密切相关,中药复方补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1具有明显的抑制作用,可达到抗肝纤维化的作用.     

软肝宁煎剂对肝纤维化大鼠防治作用的实验研究

目的观察软肝宁煎剂防治肝纤维化的作用并探讨其作用机制。方法采用CCl4复合因素诱导Wistar大鼠建立肝纤维化模型,设正常对照组、肝纤维化模型组、软肝宁煎剂预防组和软肝宁煎剂治疗组。实验结束后分别测定各组大鼠的肝脏指数和肝功能：ALT、AST,肝纤维化指标,透明质酸（HA）,并作肝组织病理学检测及肝组织中转化生长因子（TGF—β1）免疫组化染色。结果1．软肝宁煎剂预防组、治疗组与模型组肝纤维化大鼠组织学比较有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）;2．在肝脏指数方面：预防组与模型组比较有显著性差异（P〈0．05）,而治疗组无明显差异;3．软肝宁煎剂能明显降低大鼠血清中ALT、AST和大鼠肝脏组织中HA的含量,与模型组比较有显著性差异（P〈0．01）;4．软肝宁煎剂预防组和治疗组与模型组比较,明显抑制了TGF—β1的表达。结论软肝宁煎剂可通过保护肝细胞,减轻肝细胞损伤,促进ECM的降解,减少细胞因子TGF—β1的产生及释放来防治大鼠肝纤维化的发生和发展。     

不同剂量虫草对肝纤维化小鼠肝脏TGF-β1、Smad3的影响

目的明确不同剂量冬虫夏草对四氯化碳小鼠肝纤维化的作用及对TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达的影响。方法四氯化碳(CCl4)皮下注射复制BALB/c小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以不同剂量虫草煎剂,直至造模结束。HE染色观察肝组织炎症,天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组化测定Smad3在肝脏内的表达,RT-PCR测定TGF-β1mRNA在肝脏内的表达。结果与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,肝脏胶原沉积,可见纤维间隔形成,肝脏Hyp含量、TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量均显著增加。与模型组比较,虫草组肝脏炎症与胶原沉积减轻,TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量明显降低,以虫草高剂量组为明显。结论肝纤维化BALB/c小鼠的肝脏TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达明显上升,虫草制剂有良好的抗肝纤维化作用,高剂量虫草有着更好的抗肝纤维化作用,其作用机制与下调Smad3蛋白及TGF-β1mRNA表达有关。     

干扰素-α对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的：观察干扰素-α（interferonα,IFN-α）对四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制。方法：45只Wistar大鼠随机分为正常组（n=15）、模型组（n=15）、IFN-α治疗组（n=15）。正常组大鼠予以橄榄油2 mL/kg腹腔注射,每周注射2次,共8周;模型组及IFN-α治疗组大鼠予以50%CCl4 2 mL/kg腹腔注射造模,每周注射2次,共8周;IFN-α治疗组于第9周予以IFN-α每日10万U/只,皮下注射,共治疗3周。11周末处死所有大鼠。取肝组织进行炎症活动度半定量评分、纤维化半定量评分,检测羟脯氨酸含量,Ⅰ型和Ⅲ型胶原、转化生长因子-β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）及组织金属蛋白酶抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）mRNA表达量,以及MMP-9和TIMP-1蛋白表达量。结果：与模型组比较,IFN-α治疗组肝组织炎症活动度半定量评分、纤维化半定量评分显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;羟脯氨酸含量及Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达量显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1,CTGF,α-SMA,TIMP-1 mRNA表达量及TIMP-1蛋白表达量显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,MMP-9蛋白及mRNA表达量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IFN-α可明显减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化及肝脏炎症反应,其作用机制可能为下调促肝纤维化因子TGF-β1和CTGF的表达,抑制肝星状细胞的活化,减少细胞外基质的合成;抑制肝纤维化降解因子TIMP-1的表达,调节细胞外基质的降解。     

绞股蓝总皂苷对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的：观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：将Wistar雄性大鼠设为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、秋水仙碱组,除正常组外采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。造模第7周开始予相应的药物干预,每日给药剂量为股蓝总皂苷200 mg/kg、秋水仙碱0.1 mg/kg,共3周。观察大鼠一般情况变化,肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,肝组织病理及胶原沉积;检测肝组织肝星状细胞（HSC）活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,肝组织TGF-β1/Smad信号通路指标TGF-β1、TGF-β1受体1（TβR-Ⅰ）、TGF-β1受体2（TβR-Ⅱ）、Smad2/p-Smad2、Smad3/p-Smad3蛋白表达。结果：模型组大鼠一般状态较差,肝组织Hyp含量较正常组显著增高,肝小叶被破坏,肝细胞脂肪变性伴炎性细胞浸润,并有大量纤维结缔组织增生;大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著升高,而Smad3蛋白表达与正常组比较无差异。绞股蓝总皂苷组及秋水仙碱组大鼠肝组织Hyp含量显著降低,肝组织病理改善;绞股蓝总皂苷组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及Smad3蛋白表达无显著变化;秋水仙碱组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2及Smad3蛋白表达无显著变化。结论：绞股蓝总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有显著的干预作用,其作用机制可能与抑制HSC活化、TGF-β1分泌及其信号通路中p-Smad2、p-Smad3表达有关。     

干扰素-α对CCl4诱导的大鼠肝纤维化治疗作用

目的：观察干扰素-α对CCl4诱导的SD大鼠肝纤维化治疗作用,并探讨其机制。方法：SD雄性大鼠39只,随机分为正常组（n=10）,每只大鼠给予花生油0.003 mL/g皮下注射,共10周。模型组（n=15）,每只大鼠给予40%CCl4（CCl4∶花生油=2∶3）0.003 mL/g皮下注射,每周2次,共10周。干扰素-α治疗组（n=14）。每只大鼠给予40%CCl4（CCl4∶花生油=2∶3）0.003 mL/g皮下注射,每周2次,共10周。于第7周皮下注射干扰素α-2b每日10万单位/只,至第10周。于第10周末处死所有大鼠,留取肝组织行HE和Masson染色观察肝脏组织的病理变化及进行肝纤维化分期、半定量评分,采用免疫组织化学检测肝组织中Ⅰ型胶原、α平滑肌激动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、转化生长因子β1（transforming growth factor beta1,TGF-β1）的表达。结果：CCl4诱导的SD大鼠肝纤维化的肝脏病理检查HE染色示,纤维化分期模型组明显高于正常组（P〈0.01）,干扰素-α治疗组明显低于模型组（P〈0.05）;Masson染色纤维半定量评分,模型组明显高于正常组（P〈0.01）,干扰素-α治疗组明显低于模型组（P〈0.05）。大鼠肝免疫组织化学染色,I型胶原免疫组化半定量评分模型组明显高于正常组（P〈0.01）,干扰素-α治疗组明显低于模型组（P〈0.05）;α-SMA免疫组化半定量评分模型组明显高于正常组（P〈0.01）,干扰素-α治疗组明显低于模型组（P〈0.05）;TGF-β1免疫组化表达,模型组明显高于正常组（P〈0.01）,干扰素-α治疗组明显低于模型组（P〈0.05）。结论：干扰素α-2b可降低CCl4诱导的SD大鼠肝纤维化,其机制可能与抑制肝星状细胞活化,降低TGF-β1表达有关。     

PICK1在肝纤维化中的表达变化及功能研究

目的：研究蛋白激酶 C 结合蛋白1（PICK1）在小鼠肝纤维及活化的肝星状细胞中的表达变化,并探讨其对人肝星状细胞株（LX-2）活化的影响。方法建立四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维化模型,观察 PICK1在肝纤维化过程中的表达变化;转化生长因子β1（TGF-β1）刺激 LX-2活化,West-ern blot 测定 PICK1的蛋白表达情况;转染 PICK1过表达质粒至 LX-2中,再以 TGF-β1诱导活化,Western blot 检测PICK1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、I 型胶原（Col1a1）和Smad2、3及其磷酸化水平的蛋白表达情况。结果正常组小鼠肝脏中 PICK1表达较高,随着肝纤维化的加重,PICK1的表达逐渐递减。TGF-β1诱导活化的 LX-2细胞中 PICK1表达降低。转染 PICK1过表达质粒后,TGF-β1诱导的α-SMA、Colla1的表达明显减少,且 Smad2、3磷酸化水平显著下降。结论 PICK1在纤维化肝组织及活化的 HSC 中表达下调。过表达 PICK1可抑制 TGF-β1诱导的 LX-2活化,可能是通过抑制 TGF-β／Smad 通路而发挥作用,为肝纤维化的防治研究提供了新的思路和靶点。     

抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肝脏TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的 观察抵当陷胸汤通过调节TGF-β1/Smad3信号通路干预糖尿病大鼠肝纤维化病变的部分机制。方法 根据数字随机表法将34只SD大鼠分为空白组（10只）、模型组（8只）、抵当陷胸汤组（8只）和ALT-711组（8只）,按55 mg/kg剂量腹腔单次注射链脲佐菌素溶液制备糖尿病模型,予以相应的药物每天按相应剂量经胃灌药,于第8周末,麻醉后取材。采用Western blot法和实时荧光定量PCR法分别检测大鼠肝脏转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）及其信号蛋白Smad3蛋白及其mRNA表达水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠肝组织TGF-β1、Smad3蛋白及mRNA表达水平均明显上调（P<0.05）,p-Smad3蛋白表达水平明显上调（P<0.05）;与模型组比较,抵当陷胸汤组和ALT-711组大鼠肝脏组织TGF-β1、Smad3蛋白及mRNA表达水平均明显下调（P<0.05）,p-Smad3蛋白表达水平明显下调（P<0.05）;抵当陷胸汤组和ALT-711组大鼠肝脏组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白及TGF-β1、Smad3 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 抵当陷胸汤通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路激活干预糖尿病肝纤维化病变。     

黄芪注射液对肝纤维化大鼠模型肝细胞胶原及TGF-β_1表达的影响

目的探讨黄芪注射液抗肝纤维化及对TGF-β1、Col-Ⅰ表达的影响。方法将35只SD大鼠随机分为正常对照组、CCl4诱导肝纤维化模型组和黄芪干预组。至造模第10周,处死所有大鼠,采用PV免疫组化方法检测Col-Ⅰ在各组肝组织中的表达,ELISA法检测TGF-β1在各组血清中的表达。结果经CCl4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型,随着肝纤维化程度的进展,肝组织中Col-Ⅰ和血清中TGF-β1表达明显增强。在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组肝组织中Col-Ⅰ表达的平均光密度值分别为0.298、0.315、0.503,模型组与前两组比较差异均有显著性（P〈0.01）,而黄芪干预组与正常组肝组织比较差异无统计学意义（P〉0.05）。在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组大鼠血清中TGF-β1表达含量分别为491.29pg/L、629.91pg/L、959.09pg/L,呈递增趋势。模型组与前两组比较差异均有显著性（P〈0.01）,黄芪干预组与正常组比较其表达含量无显著差异（P〉0.05）。结论黄芪注射液可以显著抑制实验性肝纤维化大鼠模型的肝纤维化,这种抑制作用可能与抑制I型胶原蛋白及TGF-β1的表达有关。     

实验性四氯化碳诱致的大鼠肝纤维化自发逆转研究

目的研究肝纤维化大鼠在去除诱导因素后肝脏的病理学改变,以及转化生长因子(TGF)-β1表达的动态变化及组织分布。方法30只雄性SD大鼠随机均分为5组,1组作为正常对照组(N组),另4组建立大鼠四氯化碳(CCl4)肝纤维化模型后随机处死6只大鼠,定为肝纤维化组(F组),以后分别于停止注射后第7、20、30天各随机处死6只大鼠,分别定为肝纤维化自发逆转组(T1、T2、T3组),观察肝纤维化分级,应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1。结果停止注射CCl4后30 d肝纤维化分级明显下降,停止注射CCl4后7 d TGF-β1表达水平已有下降。结论去除致病因子后纤维化肝脏发生自发逆转过程,TGF-β1水平的下降早于病理组织学改变,与肝纤维化自发逆转过程密切相关。     

肝复健方对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

目的 观察以"浊毒"立论的肝复健方对猪血清诱导的大鼠肝纤维化(HF)肝脏转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅱ型受体(TβRⅡ) mRNA水平和Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白表达的影响.方法 SD大鼠腹腔注射猪血清0.5 mL,每周2次,连续8周制备HF模型,每天灌胃分别给予不同剂量的肝复健方(15.0、22.5、30、0 g/kg)和秋水仙碱(0.154 g/kg)治疗至12周末.实验结束后,RT-PCR法检测肝组织TGF-β1及其受体TβRⅡmRNA的表达,Weston-blot法检测肝组织Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,模型组TGF-β1、TβRⅡ及Smad2/3、Smad4表达明显增强,Smad7表达明显下降;经肝复健方治疗后大鼠肝脏TGF-β1及其受体TβRⅡ表达均比模型组减弱,Smad2/3、Smad4的表达减弱而Smad7蛋白的表达增强.结论 肝复健方能抑制TGF-β1及其受体TβRⅡ mRNA的表达,下调Smad2/3、Smad4蛋白表达,上调Smad7蛋白的表达.肝复健方对大鼠HF肝脏TGF-β/Smad信号通路有明显的影响,这可能是其治疗HF的机制之一.     

酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1／Smads信号分子表达的变化

目的观察TGF-1／Smads信号分子在酒精性肝纤维化大鼠肝组织中的变化,探讨酒精性肝纤维化的发病机制。方法50只SD大鼠,随机分成模型组和对照组各25只。模型组用56度白酒灌胃（15m1．kg-1·d-1）致肝纤维化,对照组以等量生理盐水代替灌胃。6个月后全部处死取肝待检。采用HE染色观察肝纤维化程度,免疫组化法观察肝组织中TGF-β1蛋白的表达水平,RT-PCR法观察肝组织中TGF—β1和SmadsmRNA的表达水平。结果6个月酒精灌胃能成功制作大鼠酒精性肝纤维化模型。和对照组相比较,模型组肝组织中TGF—p1蛋白表达水平显著升高（P〈0．01）,TGF-β1,smad3,samd4mRNA表达水平显著升高（均P〈0．01）,而smad7mRNA水平显著降低（P〈0．05）。结论TGF-βl／Smads信号通路参与酒精性肝纤维化的形成过程,其中Smad7起着对肝纤维化负调控的作用。     

转化生长因子β1在白细胞介素10干预肝纤维化大鼠肝星形细胞的表达

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在白细胞介索10(IL-10)干预肝纤维化大鼠星形细胞中的表达,阐明外源性IL-10的抗纤维化作用及可能机制.方法60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组,8只)、肝纤维化模型组(C组,28只)和IL-10干预组(Ⅰ组,24只),分别于CCl4造模第7周及11周采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注分离肝星形细胞.半定量RT-PCR法检测各组新分离肝星形细胞中TGF-β1mRNA的表达水平;SP免疫细胞化学法检测各组原代培养72 h后肝星形细胞TGF-β1蛋白的表达水平.并于上述两个时间段分别将各组肝组织行苏木精-伊红染色判断炎症和肝纤维化程度.结果成功建立大鼠肝纤维化模型及IL-10干预模型,并对大鼠肝星形细胞进行分离及原代培养.与正常组相比,纤维化模型组TGF-β1的mRNA水平显著升高(P＜0.01),经IL-10干预后则明显降低(P＜0.01).纤维化模型组星形细胞TGF-β1mRNA水平在第11周时低于第7周(P＜0.05).SP免疫细胞化学法检测各组TGF-β1的蛋白表达情况与mRNA结果相平行.结论IL-10可抑制肝纤维化大鼠星形细胞中TGF-β1表达,具有抗纤维化作用.     

ZEB-1因子在大鼠肝纤维化体内外TGF-β通路中的研究

目的探讨ZEB1在大鼠肝纤维化模型和肝星状细胞中的动态变化和意义。方法健康雄性SD大鼠30只,分为健康对照组和模型组,模型组按造模后不同时间点分为2、4、6、8周4个亚组,每组6只。模型组腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)诱导形成大鼠肝纤维化模型,测定不同时间点ALT、AST的变化,肝组织经HE、Masson染色,光学显微镜下观察;采用RT-PCR检测不同时间点肝脏ZEB-1mRNA的表达。大鼠HSCT-6细胞用不同浓度TGF-β1因子刺激48h后提取RNA,检测不同TGF-β1浓度下ZEB-1mRNA的表达。各组间均数比较采用单因素分析。结果 DMN腹腔注射成功诱导大鼠肝纤维化,4、6周纤维化明显。模型组血清ALT、AST在2周开始升高,4周达到最高峰,并明显高于健康对照组。ZEB-1mRNA在正常肝组织中少量表达,模型组表达逐渐升高,4周表达最高,随后又逐渐降低,相关性分析显示与TGF-β1呈正相关。HSC-T6细胞中,不同浓度TGF-β1刺激后,ZEB-1mRNA呈浓度梯度变化,随着TGF-β1浓度的升高,ZEB-1表达量增加。结论 ZEB-1可能参与肝纤维化的发生,并与肝纤维化的发展密切相关。     

肝心宁对大鼠肝纤维化α-SMA,MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响

目的研究肝心宁对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）蛋白表达的影响。方法将68只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组。采用四氯化碳皮下注射并饲以高脂低蛋白饲料和30%酒精诱导大鼠肝纤维化模型。各组分别处理,6周末用免疫组织化学染色法检测肝组织中α-SMA,MMP-13及TIMP-1蛋白表达情况。结果肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组和秋水仙碱组与模型组相比,α-SMA及TIMP-1均明显降低,P〈0.05;肝心宁高剂量组与肝心宁低剂量组和秋水仙碱组相比,α-SMA及TIMP-1均明显降低,P〈0.05;肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组和秋水仙碱组与模型组相比,MMP-13显著升高,P〈0.05;肝心宁高剂量组与肝心宁低剂量组和秋水仙碱组相比,MMP-13显著升高,P〈0.05。结论肝心宁抑制大鼠肝脏纤维组织的形成可能与其降低α-SMA,TIMP-1蛋白表达并增强MMP-13蛋白表达有关。     

RNA干扰治疗肝纤维化的实验研究

目的观察转化生长因子（TGF-β1）小干扰RNA（siRNA）对小鼠免疫性肝纤维化的阻断作用。方法设计3条针对TGF-β1不同靶位的短发夹RNA（shRNA）,以及1条无关对照序列（HK）,克隆至pGenesil-1质粒中,构建重组真核表达载体pGenesil-TGF-β1-m1、pGenesil-TGF-β1-m2、pGenesil-TGF-β1-m3和pGenesil-HK。30只雄性昆明小白鼠随机分为6组：正常组、模型组、无关序列对照组（pGenesil-HK）、序列1治疗组（pGenesil-TGF-β1-m1）、序列2治疗组（pGenesil-TGF-β1-m2）、序列3治疗组（pGenesil-TGF-β1-m3）。采用尾静脉注射刀豆蛋白A（Con A）制备免疫性肝纤维化动物模型。3个序列治疗组、无关序列对照组分别于第2、4、6周,在Con A注射后24 h内,尾静脉高压注射pGenesil-TGF-β1-m1、pGenesil-TGF-β1-m2、pGenesil-TGF-β1-m3和pGenesil-HK。第7周处死全部小鼠。常规生化方法测定肝组织羟脯氨酸（HYP）含量;应用半定量RT-PCR技术检测肝组织内TGF-β1、Smad3、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA的表达。结果治疗组小鼠HYP较模型组明显降低（P〈0.01）;RT-PCR显示治疗组肝脏内TGF-β1、Smad3及α-SMA mRNA表达较模型组明显降低（P〈0.01）,而Smad7 mRNA表达增强（P〈0.01）。在3个治疗组中,pGenesil-TGF-β1-m1治疗组的疗效最佳。结论 TGF-β1 siRNA能有效抑制小鼠免疫性肝纤维化的发生,其机制可能是抑制肝内TGF-β1、Smad3及α-SMA表达,并促进Smad7表达,从而下调HSC的激活信号,减少胶原合成。     

骨髓间充质干细胞移植抗大鼠肝纤维化的作用及机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（ MSCs ）移植对大鼠肝纤维化模型的作用与机制。方法分离大鼠MSCs培养传代至第4代。采用大鼠腹腔注射四氯化碳制造肝纤维模型。将造模成功SD大鼠60只,随机分为3组,每组20只：（1）对照组：鼠尾静脉注射等量的生理盐水;（2） MSCs 组：鼠尾静脉注射MSCs 悬液;（3）诱导组：鼠尾静脉注射经肝细胞生长因子（HGF）诱导14 d后的MSCs悬液。于移植后第1周、2周、3周、4周分别处死大鼠5只,检测大鼠血清透明质酸（ HA）、层黏蛋白（ LN）、Ⅳ型胶原水平;光镜下观察肝组织纤维化程度;分别用PCR法及Western检测大鼠肝脏Col-Ⅰ、RhoA、Cdc42、Rac1 mRNA基因及其蛋白质表达水平。结果（1）诱导组与MSCs组的纤维化程度评分随着时间延长逐渐下降,且在第4周诱导组评分明显低于MSCs组（ P＜0．05）。（2）移植3周后各组血清HA、LN、Ⅳ型胶原含量均显著下降,4周时诱导组和MSCs组各指标含量明显低于对照组,并且诱导组低于MSCs组（ P＜0．05）。（3） MSCs移植后诱导组、MSCs组大鼠肝脏组织Col-Ⅰ、RhoA、Cdc42、Rac1 mRNA和蛋白表达均随时间延长而下降,移植4周时诱导组各项指标明显低于MSCs组和对照组（ P＜0．05）。结论 MSCs移植可抑制肝纤维化大鼠肝组织中HA、LN、Ⅳ型胶原的分泌,并可下调肝纤维化大鼠肝组织Rho信号通路相关因子RhoA,Cdc42,Rac1 mRNA及蛋白表达。 HGF诱导MSCs后抗大鼠肝纤维化作用显著增强。