AML—M5b外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点

目的研究AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点，并分析分选的患者T细胞经体外诱导、活化及短期培养后其TCR Vβ亚家族的利用及克隆性增殖情况。方法运用RT—PCR-基因扫描技术分析初治AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族利用和克隆性增殖，免疫磁珠分选患者T淋巴细胞，体外利用自体白血病DC细胞联合CD3单抗、CD28对T细胞进行诱导、活化，并对诱导后T细胞进行TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖分析。结果9例患者T细胞在体外获得增殖，TCR即分析显示患者外周血T细胞均表达部分Vβ亚家族，体外诱导前后的T细胞TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖特点不完全相同，有部分出现新的邯亚家族表达及克隆性增殖，有部分Vβ亚家族在诱导前后始终表现为克隆性增殖，体外杀伤性分析发现诱导后的T细胞对自体白血病细胞具有一定的识别作用。结论AML—M5患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖，部分Vβ亚家族T细胞在诱导前后始终保持克隆性增殖状态，可能是机体针对白血病相关抗原的特异性CTL，体外诱导活化及短期培养后患者T细胞TCR Vβ亚家族表达数量增加，并出现新的克隆性增殖Vβ亚家族T细胞，提示体外诱导活化能够产生白血病患者自体的白血病特异性CTL。     

肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及记忆性T细胞表达的研究

目的 探讨肺癌患者外周血T细胞及胸水肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的T细胞受体(TCR)Vβ亚家族及记忆性T细胞的表达情况.方法 分离健康人和肺癌患者的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD45RO和CD28的表达情况,统计分析Vβ24个亚家族及记忆性T细胞的特点.结果 43例肺癌患者外周血TCR Vβ亚家族主要...     

应用RT—PCR和基因扫描分析TCR Vβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞

目的：了解急性单核细胞白血病（AML-M5）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT-PCR分别扩增9例M5病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ谱系的表达情况。PCR 产物进一步经基因扫描分析,确定T细胞克隆性。结果：9例AML-M5病人仅存在1-10个Vβ亚家族T细胞,而正常血标本则可检测到24个Vβ亚家族。基因扫描分析显示：8例病人的某些Vβ亚家族出现这一主峰图象（寡克隆性T细胞）。Vβ2寡克隆T细胞发现于6例病人中。结论：结果提示AML-M5病人存在克隆性增殖的T细胞,主要为Vβ2亚家族,推测这可能是对白血病细胞（M5）相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

中老年男性非小细胞肺癌患者TCR Vβ基因表达谱分析

目的分析非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）T细胞受体（TCR）Vβ基因在中老年男性患者外周血的表达情况。方法分离健康人及患者外周血的T细胞,用流式细胞术分析TCR Vβ各亚家族表达谱,统计分析其特点。结果患NSCLC的中老年男性外周血中TCR Vβ部分亚家族高表达,其中CD8＋TCR Vβ3、4、9表达有统计学意义（P均〈0.05）,同时CD8＋TCR Vβ3与Vβ4两基因表达有相关性;r=0.541,P=0.008。结论患NSCLC的中老年男性CD8＋TCR Vβ在外周血呈倾斜性分布,推测与肿瘤表位特异性表达有关。     

KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞杀伤活性和TCR Vβ T细胞增殖的研究

【摘　要】　目的　了解急性髓系白血病KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞的特异性细胞毒作用和T细胞受体(TCR) Vβ谱系表达和克隆性情况。方法　分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照，建立TCR Vβ谱基因扫描技术，并用其检测5例健康个体T细胞克隆表型。采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养方法，以照射后的KG1a细胞作为刺激原体外诱导外周血单个核细胞增殖，应用LDH释放法检测不同效靶比时诱导前后T细胞杀伤KG1a细胞的活性，同时利用基因扫描技术分析诱导后TCR Vβ亚家族的克隆性增殖特点。结果　基因扫描显示5例健康人全部TCR Vβ谱型均呈高斯(钟型)分布，各亚家族表达频率接近，但呈现不同的多态性和长度分布。KG1a细胞可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞，并具有特异性识别和杀伤KG1a细胞的功能。结论　KG1a细胞在体外可诱导T细胞呈克隆性增殖，此优势增殖的克隆性T细胞具有特异性细胞毒作用，对KG1a细胞具有选择性杀伤作用。     

抗原特异TCRα和β链基因克隆及分子空间结构预测

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克隆全长TCRα和β基因序列,利用Primer Premier 5.0分析软件推算其相应的氨基酸序列,并通过自动化蛋白质模建服务器SWISS-MODEL进行三维空间结构预测。然后利用蛋白质三维图像分析软件Rasmol对所获得的TCR三维空间结构进行显示和分析。结果获得DLBCL相关抗原特异TCRα6和β13全长基因序列及其氨基酸序列。2例患者的TCR Vα6的空间结构与PDB ID:3ffcD模型相似,序列同源性分别为92.16%和91.71%;而2个TCR Vβ13也均具有同一个空间结构模型PDB ID:2ialD,序列同源性分别为92.95%和92.18%。结论来自不同DLBCL患者外周血中克隆性增殖的TCR Vα6或Vβ13亚家族T细胞的TCR具有高度同源性的空间结构,提示其可能识别相同的肿瘤抗原表位。     

CML患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 了解慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者慢性期(chronic phase,CP)和缓解期(complete remission,CR)外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)Vδ亚家族T细胞的分布和克隆性情况.方法 利用RT-PCR扩增8例CML-CP和8例CML-CR患者外周血T细胞中8个Vδ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解TCR Vδ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性.10例健康人外周血作为对照.结果 8例CML-CP患者外周血T细胞平均表达(3.25±0.89)个Vδ亚家族,主要以Vδ1、Vδ2和Vδ3的表达为主,而8例CR期患者则平均表达(3.50±0.76)个Vδ亚家族,主要集中在Vδ1、Vδ2、Vδ3和Vδ8中表达;两组与健康对照组(3.50±0.52)比较无统计学意义.此外,Vδ8表达频率在CML-CR患者(5/8)中略高于健康人(3/10)和CML-CP患者(2/8).基因扫描绝大多数患者和健康人外周血TCR Vδ亚家族T细胞均存在克隆性增殖现象,主要以Vδ1-Vδ3为主,但在CML-CR患者中,表达V87亚家族的两例样本均呈克隆性增殖,这在10例健康人中均未检测到.结论 3组样本的外周血T细胞中TCR Vδ谱系和克隆性增殖类似,提示CML患者T细胞免疫抑制可能并不主要累及TCR Vδ谱系变化,并在CML-CR期所出现了一些不同的Vδ表达和克隆模式.     

APL细胞诱导脐血TCR Vα和Vβ亚家族T细胞增殖和细胞毒性研究

目的 了解急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞体外诱导脐血T细胞的TCR Vα和Vβ亚家族克隆性增殖及针对APL细胞特异性杀伤情况.方法 采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用APL细胞体外诱导脐血T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因和24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各亚家族的T细胞克隆性增殖特点,并应用LDH法分析诱导增殖的T细胞针对APL细胞特异性杀伤作用.结果 经APL细胞刺激后增殖的脐血T细胞表达部分Vα和Vβ谱系基因,并在Vα10、Vβ5和Vβ15出现有克隆增殖趋势,诱导后T细胞对APL细胞的杀伤性均高于未诱导组的T细胞.结论 APL细胞体外诱导脐血T细胞出现抗原相关的TCR Vα和Vβ亚家族优势利用和克隆性增殖;诱导后的T细胞对APL细胞具有特异性细胞毒性作用.     

超抗原肠毒素B对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

目的 观察超抗原肠毒素B(SEB)活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义.方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞,RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应.结果 与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖;而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCR Vβ14亚族.SEB刺激的T细胞早期(8 h)出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达(P<0.01或P<0.05).结论 CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志.     

CML患者外周血TCR Vγ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）慢性期（CP）和缓解期（CR）病人外周血T细胞中T细胞受体（TCR）Vγ基因谱系的分布和克隆性情况。方法 利用RT-PCR检测8例CML-CP和8例CML-CR病人外周血T细胞3个TCR Vγ亚家族的表达,了解TCR Vγ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。10例健康成人外周血作为对照。 结果 8例CP期和8例CR期的CML病人外周血T细胞分别平均表达（1.88±0.64,2.13±0.83）个亚家族,两者比较尚无统计学差异,但均明显低于健康对照组（P=0.000,P=0.036）。CP和CR期病人TCR VγⅢ的表达率明显低于健康对照组（2.9±0.32）（P=0.013,P=0.043）,基因扫描显示CML-CP 和CML-CR出现克隆模式的改变主要集中在TCR VγⅡ亚家族。结论 CP期病人外周血 TCR Vγ基因谱系出现限制性利用和克隆性增殖T细胞,主要可能与病人处于细胞免疫抑制状态有关,即使CR期病人其T细胞仍处于一定程度的免疫抑制状态。     

bcr-abl多肽诱导健康人外周血αβ+T细胞克隆性增殖

目的 分析bcr-abl多肽诱导健康人外周血T细胞TCR Vα和TCR Vβ基因选用和克隆性增殖情况,了解bcr-abl多肽相关的αβ+T细胞克隆.方法 利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽(KQSSKALQR)联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0201限制性)扩增,同时设不...     

基因扫描分析一例cGVHD病人稳定性克隆性扩增的TCR Vβ6，Vβ17和Vβ19T细胞

目的　分析慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)中TCRVβ谱系的分布和克隆性。方法　应用RT PCR扩增一例CML异基因骨髓移植后cGVHD病人第 35,39,4 3和 4 5个月的外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族的CDR3,了解病人TCRVβT细胞的表达 ,PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性。结果　cGVHD病人每个标本存在 14 16个Vβ家族T细胞 ;寡克隆T细胞可见于Vβ6 ,16 ,17,19和 2 1亚家族 ,稳定性克隆性TCRVβ6、17和 2 1T细胞可见于全部标本。结论　cGVHD病人存在倾斜性分布和克隆性生长T细胞 ,它可能与cGVHD的发生有关     

转录因子GATA-2基因在淋巴系白血病中的表达特点

我了解ＧＡＴＡ－２基因在淋巴系白血病中的表达情况。方法 利用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）、慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）、多毛细胞白血病（ＨＣＬ）和淋巴细胞白血病等１０１０例病人外周血单个核细胞吕ＣＡＴＡ－２基因。结果 ＧＡＴＡ－２基因在ＡＬＬ和ＣＬＬ中的表达率分别为７９．２％和９４．４％,３例ＨＣＬ均表达ＧＡＴＡ－２,３例淋巴瘤细胞白血病仅１例表达ＧＡＴＡ－     

T细胞受体基因与疾病研究概况及进展

T细胞受体(TCR)基因与疾病的发生、诊断及治疗密切相关,弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征、IgA肾病中TCR有其不同基因型的表达特点。在弥漫性大B细胞淋巴瘤中,TCRVβ13和TCRVβ15亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高;在慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征中,外周血TCRVβ20基因优势克隆;在IgA肾病中,TCRCα-575A/G及TCRCα-560C/T基因多态性与疾病的发生相关。现就TCR基因在肿瘤治疗上的研究现状以及通过TCR基因修饰的T细胞在治疗恶性肿瘤等疾病方面的巨大发展潜能予以综述。     

白血病患者骨髓中VEGF、bFGF、slOAM．1及CD105表达与髓血屏障调节机制关系研究

目的：探讨白血病患者骨髓中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、可溶性细胞间粘附分子一l（siCAM一1）及CDl05表达与髓血屏障调节机制的关系。方法：采用ELISA检测63例白血病患者骨髓中VEGF、bFOF、siCAM一1表达,采用原位杂交法,用CDl05标记骨髓活化的血管内皮细胞。结果：急性髓系白血病患者VEGF、bFGF、sicAM一1、CDl05表达高于对照组,急性淋巴细胞白血病患者中B—ALL的VEGF、bFGF、siCAM—l、CDl05表达高于对照组,T～ALI。的bFGF、CDl05表达高于对照组,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;VEGF、siCAM一1表达与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;慢性粒细胞白血病患者VEGF、bFGF、siCAM-1、CDl05表达高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;慢性淋巴细胞白血病患者sicAM—l表达高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）,VEGF、bFGF、CDl05表达与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：骨髓VEGF、bFGF、siCAM一1及CDl05表达在不同类型白血病中水平不同,并影响白血病患者髓血屏障的正常调节机制。