甘草水提物中miRNA对人免疫细胞基因表达的影响

微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的非编码小分子RNA,其调控基因表达、影响细胞活性的功能已为人们所重视。近年来miRNA的跨界调控成为新的研究方向,为人们更全面地认识和了解miRNA的功能提供了新的视角。植物miRNA由于通常经过了甲基化修饰,因此较为稳定,不易降解。前期研究表明,甘草干燥药材的水煎剂中存在着丰富的小分子RNA,这为了解甘草的作用机制提供了新的思路。在本研究中,利用从甘草水煎剂中提取的小分子RNA以及合成的miRNA模拟物(mimic)作用于分离自健康人的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),然后利用RT-PCR对其模式识别受体(PRR)基因以及部分转录因子、信号分子和细胞因子的基因表达变化进行了分析。结果表明甘草miRNA对人免疫细胞的基因表达具有明显的调节作用,能够显著抑制T细胞分化相关基因的表达,以及炎症和凋亡相关基因的表达。这为进一步更全面地了解甘草的作用机制以及中药新药的研制带来了新的思路。     

肠道菌群影响肠道细胞免疫的研究进展

肠道是机体抵抗外源病原体入侵的重要防线之一，肠道B淋巴细胞及T淋巴细胞作为肠道适应性免疫系统的主要组成部分，其发育和分化受肠道微环境的影响。近年来的研究表明，肠道菌群与肠道免疫系统发育密切相关。本文主要综述肠道菌群对肠道B淋巴细胞、肠道T淋巴细胞的分化及其细胞功能的影响，并对肠道菌影响该过程的部分机制作出阐明，为肠道菌群与肠道免疫的相互作用机制研究奠定基础。     

5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析

 目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析。方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection, MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响。结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+ T细胞和CD4+ T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+ T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响。结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性。     

肿瘤患者偏移的T细胞TCRBV表达谱在自体CIK细胞中的恢复

目的 研究肿瘤患者自体PBMC经体外诱导培养的CIK细胞群TCRBV亚家族表达的变化.方法 Ficoll密度梯度离心法分类人体外周血单核细胞(PBMC),经IFN-γ、OKT-3以及IL-2诱导培养,Trizol试剂提取总RNA,RT-PCR半定量分析24个TCRBV亚家族表达情况,流式分选平台分选CD3+ CD8+细胞和CD3+ CD56+细胞亚群.结果 诱导培养后的CIK中,分化的CD3+ CD56+细胞亚群比例占12.6％～41.7％.PBMC中弱表达或缺失的TCRBV亚家族,在CIK中上调或恢复表达.CIK细胞群中,CD3+CD8+细胞和CD3+ CD56+细胞亚群克隆组成无明显差异.结论 肿瘤患者自体PBMC体外诱导培养CIK细胞后,部分表达偏移的TCRBV亚家族能恢复表达,表明部分受损或被抑制的T细胞克隆在CIK培养中被激活并增殖.     

Survivin启动子介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的抗肿瘤研究

目的 探讨Survivin启动子介导的CD/5-FC自杀系统的抗肿瘤效果.方法 利用Survivin启动子替换pEGFP-N1载体上的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建重组表达载体pSurP-EGFP,通过报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达确定Survivin启动子的特异性;将酿酒酵母的胞嘧啶脱氨酶(CD)基因克隆在pSurP-EGFP中,构建成重组载体pSurP-CD,转染肿瘤细胞后利用毛细管电泳仪检测前药5-氟胞嘧啶(5-FC)的转化效率,同时分析肿瘤细胞的凋亡.结果 GFP的表达表明Survivin启动子具有较好的肿瘤靶向性;毛细管电泳检测表明CD能够有效地将5-FC转化为5-FU,显微镜观察和流式分析表明了Survivin启动子介导的CD的抗肿瘤效果.结论 Survivin启动子能有效地介导CD自杀基因的表达,具有较好的靶向性抗肿瘤效果.     

OP9-DL1细胞共培养系统在T细胞体外定向诱导分化中的应用

T细胞是一类在机体免疫应答中起核心作用的免疫活性细胞。T细胞的分化发育指来自骨髓的淋巴样祖细胞(lymph-oid pregnitors)进入胸腺增殖、分化,并从胸腺皮质迁移至髓质,成为成熟T细胞的过程。长期以来,T细胞发育的体内外研究一直依赖于胸腺。但人或鼠的胸腺组织来源有限且取材困难,加大了T细胞发育的研究难度。近年来,随着T细胞发育过程中一些关键分子的发现及其研究的不断深入,一种可高效诱导造血干/祖细胞在体外向T细胞分化的简单模型骨髓基质细胞OP9-DL1体外培养系统得以建立,这种系统的出现大大简化了T细胞分化发育的研究,本文将就其在T细胞体外定向诱导分化中的应用作一综述。     

PBMC对B7-2基因修饰的肝癌细胞Bel-7402体外杀伤作用的研究

目的研究B7-2基因修饰肿瘤后对T细胞活化的影响,探索B7-2在肿瘤免疫治疗中的作用。方法构建B7-2基因的表达载体,转染Bel-7402细胞,与外周血单核细胞（PBMC）共孵育,利用流式细胞术（FCM）检测Bel-7402细胞的凋亡。结果 B7-2基因修饰的Bel-7402细胞和PBMC细胞共培养4 h后,凋亡率为12.7%,与对照组（7.5%）比较,细胞凋亡率显著增加（P〈0.01）。结论 B7-2基因修饰能够增强肿瘤细胞对淋巴细胞的活化作用,为基于B7-2的抗肿瘤治疗奠定了基础。