肝细胞生长因子对大鼠系膜细胞炎症介质与基质表达的影响

目的：研究肝细胞生长因子(HGF)对大鼠肾小球系膜细胞合成、分泌炎症介质及细胞外基质的影响。方法：以不同浓度HGF与大鼠系膜细胞共孵育，观察不同时间培养细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β(TGF—β)、纤连蛋白(Fn)表达的变化。结果：HGF可时间依赖及浓度依赖的降低培养大鼠系膜细胞IL-6、TGF—β及Fn表达水平。结论：HGF可抑制大鼠系膜细胞炎症介质及细胞外基质表达，可作为一种新型的肾脏保护性因子，对肾脏疾病的治疗具有一定的意义。     

低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞表型转化的影响

目的通过低密度脂蛋白(LDL)的刺激,观察LDL对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的诱导作用。方法采用不同浓度的LDL(0,25,50,100,150μg/ml)刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的水平,以台盼蓝染色检测LDL对系膜细胞的毒性作用,MTT比色法检测细胞增殖,透射电镜观察系膜细胞的形态学变化,免疫细胞化学染色及Western blot检测α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果在LDL作用下,倒置显微镜下细胞变为长梭形,透射电镜下细胞表面微绒毛减少。免疫细胞化学染色及Western blot显示α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN表达增强。结论在LDL刺激下,系膜细胞可以发生表型转化。     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨脂联素在糖尿病肾病中可能的保护作用.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:对照组、高糖A组、高糖B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次为2.5 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml),作用24 h,RT-PCR法测定各组细胞VEGF mRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF蛋白的含量.结果 与对照组相比,高糖A组、高糖B组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达升高(P＜0.05);脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达低于高糖B组(P＜0.05).结论 高糖可刺激大鼠肾系膜细胞VEGF表达增高,脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达.     

肝细胞生长因子对高糖条件下系膜细胞基质降解酶系统及转化生长因子β1的影响

目的通过体外培养大鼠肾系膜细胞,研究肝细胞生长因子(hepatocyte grouth factor,HGF)对高糖条件下系膜细胞表达及分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及其抑制物金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,从而探讨HGF在糖尿病肾病中肾脏保护作用的机制。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,分为正常对照组、高糖刺激组及HGF干预组,通过MTT比色测定不同时间、不同HGF浓度对大鼠肾系膜细胞增殖的影响;采用ELISA法测定细胞上清中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、HGF以及Ⅳ型胶原(Ⅳcol)的含量;以RT-PCR法检测系膜细胞MMP-9,TIMP-1、TGF-β1及HGF基因的表达。结果同正常对照组相比高糖刺激系膜细胞增生,HGF可以抑制高糖引起的系膜细胞增生。通过外源添加HGF可以显著抑制高糖条件下系膜细胞Ⅳcol、TIMP-1及TGF-β1的分泌,但对高糖条件下系膜细胞MMP-9的分泌则无显著影响。同高糖刺激组相比,外源HGF使系膜细胞MMP-9及HGF基因表达明显增强,而显著抑制系膜细胞TIMP-1及TGF-β1基因的表达。结论HGF对于高糖条件下的大鼠肾系膜细胞可能具有保护性作用,这一作用可能同以下途径有关:HGF抑制高糖刺激所导致的系膜细胞增生;HGF抑制TIMP-1mRNA表达及蛋白合成,促进MMP-9mRNA表达,从而调节MMP-9与TIMP-1之间的比例促进ECM降解;HGF显著抑制TGF-β1mRNA表达及蛋白合成,并且促使内源HGFmRNA表达增高,从而恢复TGF-β1与HGF之间的平衡。     

β-连环素互作蛋白1参与PPARγ转录活性调控及在高糖诱导系膜细胞表型转化中的作用

目的 探讨β-连环素互作蛋白1(β-catenin-interacting protein 1,ICAT)在过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)转录活性调控中的作用及在高糖诱导系膜细胞表型转化中的意义.方法 将人肾小球系膜细胞分别用常规葡萄糖浓度(5.5 mmol/L,对照组)和高糖(30 mmol/L,高糖组)培养48 h,检测PPARγ、ICAT和β-catenin的mRNA及蛋白质表达变化.观察过表达ICAT和敲减ICAT及β-catenin对上述培养条件下系膜细胞PPARγ转录活性的影响.利用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹技术检测不同分组中细胞表型转化标志物平滑肌动蛋白d(α-smooth muscular actin,α-SMA)表达水平.利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖水平.结果 与对照组比较,高糖培养可诱导系膜细胞表型标志蛋白α-SMA的表达上调以及系膜细胞增殖;高糖培养虽对系膜细胞PPARγ蛋白表达水平无影响(P＞0.05),但可使PPARγ转录活性明显降低(P＜0.01),同时,可抑制系膜细胞ICAT表达和促进β-catenin表达;过表达ICAT可部分升高高糖培养的系膜细胞PPARγ的转录活性(P＜0.01);在常规糖浓度条件下,敲减ICAT可降低PPARγ的转录活性(P＜0.01),敲减β-catenin表达,同样可降低PPARγ的转录活性(P＜0.01);高糖培养条件下,过表达ICAT可抑制系膜细胞α-SMA的表达与细胞增殖.结论 ICAT可能是PPARγ转录活性的重要调控分子之一,并参与介导了高糖诱导系膜细胞表型转化.     

低密度脂蛋白对肾小球系膜细胞、TGF-β和FN mRNA表达的影响

目的:观察低密度脂蛋白(LDL)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MsC)生长及转化生长因子β(TGF-β)和纤维连接蛋白(FN)基因表达的影响.方法:体外培养的MsC培养液中加入LDL共同孵育,采用3H-TdR渗入法检测MsC增殖情况;应用Northern blot检测TGF-β mRNA和FN mRNA的表达;应用斑点杂交法检测抗TGF-β抗体对FN mRNA表达的影响.结果:(1) LDL刺激MsC在小剂量以剂量依赖(50～150 μg/ml)和时间依赖(24～72 h)促进增殖(P<0.05),大剂量(200 μg/ml)抑制增殖(P<0.05).(2) Northern blot显示LDL刺激MsC增殖,其TGF-β和FN mRNA表达以剂量和时间依赖方式增强.TGF-β mRNA表达较FN mRNA提前24 h.(3) Dot blot 显示,加入抗TGF-β抗体后,FN mRNA的表达较未加前明显减弱.结论:LDL不仅可刺激肾小球MsC的增殖,并且增加TGF-β和FN mRNA的表达.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的　研究血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ )、高糖及血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂 (AT1RA)对于大鼠系膜细胞 (MCs)上葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)表达及MCs所合成的系膜区细胞外基质 (ECM )的影响。方法　采用免疫组化法检测大鼠系膜细胞上GLUT1蛋白的合成 ,半定量聚合酶链式反应 (RT PCR)测定系膜细胞GLUTmR NA水平 ,ELISA法测定细胞培养上清液中纤连蛋白 (FN)的表达。结果　ANGⅡ作用后能显著增加大鼠MCs GLUT1的转录及蛋白合成 (P <0 .0 5 ) ,这种作用具有浓度及时间依赖性且能被AT1RA伊贝沙坦 (Irbesartan)所阻断。高糖 (2 7.8mm1/L)作用 4h后未能增加MCsGLUT1的转录及表达。ANGⅡ能使培养的MCs上清液中FN含量显著增加 (P <0 .0 0 1) ,Irbesartan能使增加的FN降低 5 0 .5 4%。结论　ANGⅡ能从转录水平刺激MCs上GLUT1的表达 ,增加ECM的合成 ,ANGⅡ的这种作用通过AT1受体介导并能被AT1RA阻断。ANGⅡ可通过上调GLUT1的表达参与糖尿病肾病 (DN)的发生及发展。     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌MCP-1的影响

目的 研究重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖和表达MCP-1的影响.方法 以大鼠MC为研究对象,高糖组浓度为30 mmol/L,分别以不同浓度rHuEPO(1,10,50,100 IU/ml)分别干预24,48,72 h,CCK-8比色法检测细胞增殖情况.用ELISA法和reahime PCR法测定干预24,48,72h时细胞MCP-1表达水平.结果 rHuEPO能促进高糖诱导的MCs增生,呈剂量和时间依赖性.正常培养的系膜细胞MCP-1蛋白和mRNA有低水平的表达,高糖组刺激24,48,72h均有高水平的表达,rHuEPO在1,10,50,100 IU/ml时,作用于高糖培养的MCs,细胞MCP-1的表达均显著降低.结论 rHuEPO能刺激高糖培养的系膜细胞增殖,抑制高糖培养的系膜细胞表达MCP-1.     

脂联素干预对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达色素上皮衍生因子的影响

目的:探讨脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法:体外常规培养大鼠系膜细胞,传代后分组:对照组(培养液葡萄糖浓度5.6 mmol/L) 、高糖A 、B组(培养液葡萄糖浓度分别为15,30 mmol/L)、脂联素A、B、C、D组 (30 mmol/L葡萄糖培养液+脂联素,使培养液脂联素浓度分别为2.5,5,10,20 mg/L),分别作用24 h后,RT-PCR法测定各组细胞PEDF mRNA的表达水平;ELISA法测定各组上清液中PEDF蛋白的含量.结果:(1)与对照组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达显著降低(P<0.05);(2)脂联素干预各组高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达恢复(P<0.01).结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF的表达,脂联素干预可逆转这一改变.     

过氧化脂质体增殖激活受体-γ对系膜细胞炎症的调控作用

目的了解过氧化脂质体增殖激活受体-γ(PPARγ)在核转录水平对人系膜细胞(HMCL)炎症过程的调控作用.方法培养人系膜细胞,利用IL-1β制备炎症性系膜细胞模型,酶联免疫吸附方法(ELISA)测定培养细胞上清液TNF-γ和IL-6水平;蛋白印迹方法测定HMCL中.加入不同浓度的罗格列酮(RGZ)、曲格列酮(TGZ)及15d-PGF2,PPARγ蛋白水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测培养细胞中PPARγ和炎症因子的mRNA表达.结果 IL-1β(10 ng/ml)可使炎性细胞因子TNF-γ和IL-6蛋白、mRNA表达增加,正常人系膜细胞可低水平表达PPARγ,炎症刺激后PPARγ蛋白和mRNA表达显著增加,PPARγ特异性配基曲格列酮(TGZ)可下调PPARγ表达.三种结构不同的PPARγ特异性配基TGZ、RGZ和15d-PGJ2可下调炎症刺激后IL-6和TNF-γ蛋白水平,且这种抗炎效应的作用环节在mRNA水平.结论 PPARγ可能是系膜细胞炎症与抗炎反应过程中炎症自我限制的一个重要靶位,作用于这一靶位的特异性配基有望成为治疗肾小球肾炎的新药.     

血红素氧合酶-1在姜黄素抑制氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察姜黄素对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在姜黄素抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞并行免疫组化鉴定,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖率、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HO-1mRNA水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测HO-1及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平。结果 Ox-LDL呈浓度依赖性(0～150μg/mL)地诱导VSMC增殖,达到200μg/mL具有细胞毒性;姜黄素呈浓度依赖性(40、80μmol/L)地抑制Ox-LDL(100μg/mL)所诱导的VSMC增殖,HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)可明显减弱此抑制效应;姜黄素可诱导VSMC上调HO-1mRNA和蛋白表达;姜黄素可减弱Ox-LDL诱导VSMCs增殖细胞核抗原的高表达,此效应可被HO-1抑制剂ZnPPⅨ抑制。结论姜黄素通过降低HO-1介导的PCNA表达,进而抑制Ox-LDL诱导大鼠血管平滑肌增殖。     

2型糖尿病患者血清低密度脂蛋白免疫复合物的检测及临床意义

采用ELISA法测定102例2型糖尿病（T2DM）患者（其中54例合并大血管病变）、45例大血管病变患者及30例正常对照者的血清低密度脂蛋白免疫复合物（LDL-ICs）浓度。T2DM及大血管病变患者血LDL—ICs浓度均高于正常对照者,糖尿病合并大血管病变者高于单纯糖尿病、单纯大血管病变患者;血清LDL-ICs浓度与体重指数、血糖化血红蛋白、血压、总胆固醇、甘油三酯水平呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇水平呈负相关,与低密度脂蛋白胆固醇水平无相关性。LDL-ICs、血压、糖化血红蛋白是糖尿病大血管病变的危险因素。     

低密度脂蛋白受体基因多态性与高血压关系的研究

目的 探讨低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)基因HincⅡ多态性与高血压的关系.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法,测定高血压组86例,对照组120例的LDLR基因型.结果 LDLR分CC、CT、TT三种基因型.高血压组CC型、CT型、TT型分别占18.60%、65.12%、16.28%,对照组分别为1.67%、75.83%和22.50%,高血压组CC型较对照组有增高趋势(P＜0.05).高血压组C等位基因频率为26.74%,对照组为12.92%,高血压组C等位基因频率高于对照组(P＜0.05).结论 高血压组C等位基因频率高于对照组,提示低密度脂蛋白受体C等位基因可能在高血压的发病机制中发挥作用.     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体与内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶关系的研究

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)活化人脐静脉内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路中的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用不同浓度的ox-LDL孵育,通过W estern印迹检测LOX-1、p38MAPK蛋白水平,逆转录聚合酶链法观察LOX-1 mRNA表达,并以LOX-1特异阻断性抗体(JTX92)预处理内皮细胞,检测p38MAPK蛋白水平。四氮唑蓝法观察ox-LDL对细胞活力的影响。结果ox-LDL引起内皮细胞形态结构的改变,而且抑制内皮细胞的生长(P<0.05);ox-LDL呈浓度依赖性地上调LOX-1蛋白和mRNA表达(均P<0.05),并呈浓度依赖性激活p38MAPK通路,不同浓度ox-LDL(25μg/m l,50μg/m l,100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白质表达水平均明显高于对照组(48±7,79±15,113±14 vs 24±5,P<0.01);JTX92+ox-LDL(100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白水平明显低于ox-LDL(100μg/m l)组,(58±13 vs 113±14,P<0.01)。结论ox-LDL通过LOX-1途径激活p38MAPK信号通路,LOX-1上调是ox-LDL致动脉粥样硬化的重要环节。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1及血脂水平的研究

目的 探讨不同程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者体内植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）及血脂的水平.方法 对2011年1月-7月间具有睡眠障碍症状的门诊患者94例进行多导睡眠图（PSG）监测,根据睡眠呼吸暂停低通气指数（AHI）分为3组,轻中度OSAHS组（5次/h≤AHI≤30次/h）27例,重度OSAHS组（AHI＞ 30次/h）37例,正常对照组（AHI＜5次/h）30例,均检测血清LOX-1、TG、TC、HDL-C、LDL-C.结果 重度OSAHS组血清LOX-1水平最高,轻中度组、正常对照组依次减低,差异有统计学意义（P＜0.01）.OSAHS患者血清LOX-1水平与AHI、夜间最长呼吸暂停时间（LAT）呈正相关（r值分别为0.645、0.501,P＜0.01）,与夜间最低血氧饱和度（SaO2）呈负相关（r=-0.647,P＜0.01）.OSAHS组患者血脂水平与正常对照组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 OSAHS所造成的夜间间歇缺氧可导致血清LOX-1水平升高,血脂水平不能有效预测OSAHS患者脂代谢紊乱的程度.     

化学修饰低密度脂蛋白与颈动脉粥样硬化相关性的研究

目的观察各类型化学修饰低密度脂蛋白(LDL)与颈动脉粥样硬化(AS)的关系。方法使用复式超声确诊颈AS病人78例,其中伴有糖尿病者30例,不伴糖尿病者48例。氧化修饰低密度脂蛋白(Ox-LDL)测定采用化学法。糖化修饰低密度脂蛋白(Gly-LDL)测定采用微柱亲和层析法。糖氧化修饰低密度脂蛋白(Gly-ox-LDL)测定采用微柱亲和层析加荧光分光光度法。结果血浆Ox-LDL、Gly-LDL和Gly-ox-LDL含量在伴有糖尿病组分别为(1.49±0.48)nmol/ml、(8.66±2.42)%和(0.118±0.083)nmol/ml;在不伴糖尿病组分别为(1.43±0.45)nmol/ml、(6.38±3.03)%和(0.088±0.034)nmol/ml。两病例亚组各修饰型LDL含量与对照组间差异有显著性意义(P均<0.05)。伴有糖尿病组Gly-LDL和Gly-ox-LDL含量与不伴糖尿病组间差异均有显著性意义(P<0.05)。结论化学修饰LDL在颈AS形成中起重要作用,其中Ox-LDL起的作用最重要。     

氧化型低密度脂蛋白对骨髓内皮前体细胞增殖、凋亡及NO分泌功能的影响

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖、凋亡及一氧化氮(NO)分泌功能的影响. 方法: 密度梯度离心法获得猪的骨髓EPCs,不同浓度ox-LDL(B组5 mg/L,C组10 mg/L,D组20 mg/L)作用于EPCs,MTT法检测ox-LDL对EPCs增殖能力的影响,流式细胞仪检测ox-LDL对细胞的凋亡率的影响,硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO含量的变化,观察ox-LDL对细胞及其功能的影响. 结果: 与对照组相比,ox-LDL抑制EPCs增殖(B组0.189±0.007,C组0.112±0.008,D组0.070±0.008)(n=8),促进EPCs的凋亡(B组18.35±0.08,C组24.22±0.07,D组40.37±0.13) (n=6),损伤细胞的分泌功能,作用随ox-LDL浓度增大而增强(P《0.001). 结论: Ox-LDL抑制EPCs的增殖,损伤细胞分泌功能,促进细胞凋亡,与临床上观察到的冠心患者EPCs数量减少可能有一定的关系.     

氧化低密度脂蛋白在2型糖尿病肾病发展中的变化及其意义

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）通过直接作用和间接作用（内皮细胞-NO-血小板机制）对糖尿病肾病（DN）发生和发展的影响及意义。方法以24小时尿蛋白排泄率（UAER）将73例DM患者分成三组,用ELISA法测定其血清ox-LDL、一氧化氮（NO）及血管性假血友病因子（vWF）,并以25例正常人作对照。结果血浆ox-LDL浓度在2型DM组中与对照组比较显著升高（P〈0.01）,并且与尿蛋白呈显著性正相关（P〈0.01）,且ox-LDL与血NO呈负相关,与vWF呈正相关。结论ox-LDL是DN的危险因子,它通过直接作用和间接作用（内皮细胞-NO-血小板机制）加重DN,促使DN的发生和发展。     

氧化应激和植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1在氧化低密度脂蛋白上调内皮细胞自噬水平中的作用

目的 探讨氧化应激和植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)上调人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬水平中的作用.方法 用LOX-1 mAb及抗氧化剂维生素C(vitC)、vitE预处理ox-LDL作用的HUVEC;酶联免疫技术观察培养上清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化物(SOD)含量;免疫印迹技术检测自噬标记物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin1及溶酶体膜蛋白2a(Lamp2a)蛋白含量.结果 ox-LDL作用在0.5 h和6 h能显著减少细胞培养上清中TSOD活力[0.5 h(32.73±1.09比40.16±1.28)U/ml;6 h(29.32±1.56比40.16±1.28)U/ml,均P＜0.01];增加其MDA含量[0.5 h(1.11±0.04比0.57±0.05)nmol/ml,P＜0.01;6 h(0.69±0.03比0.57±0.05)nmol/ml,P＜0.05],与上调自噬水平的高峰时间点相吻合,该作用能部分性被抗氧化剂vitC、vitE拮抗.ox-LDL诱导的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达上调能被viC、vitE(0.5 h,vitC:3.11±0.02比4.31±0.50;vitE:3.46±0.19比4.31±0.50,均P＜0.05;6 h,vitC:1.44±0.05比2.31±0.16,P＜0.05)而非LOX-1 mAb抑制;LOX-1mAb能抑制ox-LDL诱导的Lamp2a表达上调(0.5 h,0.75±0.02比1.12±0.02,P＜0.01;6 h,0.88±0.02比1.06±0.04,P＜0.05),而vitC和ritE仅能抑制Lamp2a 6 h的表达上调(vitC,0.73±0.01比1.06±0.04,P＜0.01;vitE,0.84±0.02比1.06±0.04,P＜0.05).结论 100μg/ml ox-LDL上调HUVEC的自噬水平作用不依赖LOX-1受体途径,而是与氧化应激有关.自噬溶酶体形成的增加可能与LOX-1受体介导的ox-LDL入胞有关,氧化应激仪参与了晚期人胞后ox-LDL对自噬溶酶体形成增加的调节.

Abstract：

Objective Our previous studies found that 100 μg/ml oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) could up-regulate the autophagic level in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). The present study was conducted to observe the roles of oxidative stress and lectin-like oxidized low density lipoprotein-1 ( LOX-1 ) in the ox-LDL-induced up-regulation of autophagy. Methods Prior to the ox-LDL exposure, LOX-1mAb, vitamin C and vitamin E were used to study the roles of LOX-1 and oxidative stress in the activation of autophagy. The contents of total-superoxide dismutase (T-SOD) and MDA (malondialdehyde) in the culture medium were detected with enzyme linked immunosorbent assay. Western blot was employed to detect the levels of autophagic marker microtubule-associated protein light chain 3 ( MAP1-LC3 ) - Ⅱ/LC3- Ⅰ , beclinl and lysosome associated membrane protein 2a (lamp2a). Results After the ox-LDL exposure, the down-regulated level of T-SOD [0. 5 h (32. 73 ± 1.09 vs 40. 16 ± 1.28) U/ml,P ＜0. 01; 6 h ( 29. 32 ± 1.56 vs 40. 16 ± 1.28 ) U/ml, P ＜ 0. 01]and the up-regulated level of MDA [0.5 h(1.11 ±0.04 vs 0.57 ±0.05) nmol/ml, P＜0. 01; 6 h (0.69 ±0.03 vs 0.57 ±0.05) nmol/ml,P ＜0. 05]in culture medium were also significant at 0. 5 h and 6 h. The ox-LDL-induced increased ratio of LC3- Ⅱ/LC3- Ⅰ was reversed by the pretreatments of vitamin C and vitamin E (0. 5 h, vitC:3. 11 ±0. 02 vs 4.31 ±0.50, P＜0. 05; vitE: 3.46 ±0. 19 vs 4.31 ±0.50, P ＜0.05;6 h,vitC: 1.44 ±0.05 vs 2.31 ±0. 16,P ＜0. 05 ), but not LOX-1mAb. LOX-1 mAb decreased the ox-LDL-induced elevated level of lamp2a protein while vitamin C and vitamin E only inhibited the elevation of lamp2a at the timepoint of 6 h, but not 0. 5 h. Conclusion Oxidative stress, rather than LOX-1, plays an important role in the ox-LDL-induced upregulation of autophagy in HUVEC. The formation of autolysosomes is associated with the LOX-1-mediated endocytosis of ox-LDL. Oxidative stress only plays a minor role in the formation of autolysosomes induced by the engulfed ox-LDL.     

坎地沙坦对动脉粥样硬化大鼠血清氧化低密度脂蛋白的影响

目的:探讨坎地沙坦对动脉粥样硬化大鼠血清中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平的影响。方法:正常大鼠饲喂高脂饲料建立动脉粥样硬化(AS)大鼠模型。将实验大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、坎地沙坦低(1 mg/kg.d,C组)、中(5 mg/kg.d,D组)、高(10mg/kg.d,E组)剂量组。12周后腹主静脉取血酶联免疫夹心法测定血清中ox-LDL水平;取同部位腹主动脉光镜下观察形态学改变。结果:与B组相比C、D、E组均可以显著降低血清ox-LDL水平(P<0.01)无剂量依赖性;B组与A组相比主动脉出现动脉粥样硬化的形态学改变,与B组相比C、D、E组动脉粥样硬化的形态学改变有所减轻。结论:坎地沙坦可降低动脉粥样硬化大鼠血清中的ox-LDL水平,从而抑制动脉粥样硬化的发生、发展。