核苷（酸）类药治疗慢性乙肝患者HBV逆转录酶区基因耐药的变异分析

目的：了解核苷（酸）类药物治疗慢性乙型肝炎过程中HBV耐药变异特点。方法：收集163份长期核苷（酸）类药物治疗的慢性乙型肝炎患者血清标本,用半巢式聚合酶链反应-直接测序法获得HBV全长逆转录酶区序列,用生物信息学技术筛查该区内6个经典耐药变异位点并鉴定基因型,分析慢性乙型肝炎核苷（酸）类药物耐药特征及与HBV基因型关系。结果：163份慢性乙型肝炎患者血清标本中有64份（占39.26%）发现了已知耐药位点变异。拉米夫定（1amivudine,LAM）治疗组耐药性变异比例高于阿德福韦（adefovir dipivoxil,ADV）治疗组。单用LAM组和单用ADV组发现已知耐药位点变异比例分别为39.40%和12.90%。19例LAM和ADV序贯治疗的患者中出现5例（占26.32%）多药耐药变异特征,而LAM与ADV联合治疗的16例患者中未发现后续ADV耐药变异。耐药变异与HBV基因型相关性分析显示,存在RT基因耐药位点变异的单用LAM组、单用ADV组、LAM和ADV序贯治疗组和LAM治疗后加用ADV组间的HBV基因型比例差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：慢性乙型肝炎长期核苷（酸）类药物治疗,耐药变异复杂,对LAM耐药的患者,改用ADV比加用ADV更易导致多重耐药变异。核苷（酸）类药物耐药变异与HBV基因型别无关。     

乙型肝炎病毒感染与肝细胞癌关系的新进展

乙型肝炎病毒(HBV)与肝细胞癌(HCC)关系密切,其中,HBV基因变异会引起自身生物学特性、致病性等改变,并直接影响HCC进程。与HCC发生、发展关系密切的HBV基因变异包括S区变异、前C区变异和X区变异等。此外,核苷类药物治疗中所出现的耐药与PreS/S突变也有一定关联。现对近年来HBV感染与HCC间研究的新进展予以综述,旨在说明HBV感染在HCC的发生、发展中扮演着重要角色。     

替诺福韦治疗慢性乙肝病毒感染研究

以核苷类药物治疗慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是当前临床研究热点之一,替诺福韦作为广谱抗病毒药物,继研究其抗艾滋病作用之后,发现该药在对于艾滋病毒合并HBV中能够起到明显的抗HBV作用,同时发现其对于其他核苷类药物诱生的HBV变异株同样有很强的抗病毒活性.本文就替诺福韦的基础药理及目前临床研究结果做一综述.     

中药复方抗乙型肝炎病毒实验研究进展

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种严重危害人类健康的疾病，具有传染性强，流行面广和发病率高的特点。目前广泛用于临床治疗HBV慢性感染的药物为干扰素(IFN)及核苷类药物。IFN是目前疗效较为肯定的抗HBV药物，但仅对20％～30％的病例有效。核苷类似药物拉米呋啶可抑制HBV—DNA多聚酶活性，治疗后患血清中HBV—DNA滴度明显下降，但易出现耐药变异病毒株，且停药后病毒复制易反弹。化学合成药物的毒副反应及耐药变异病毒株的出现，使人们更加关注传统中医药疗法，因此从中药复方中筛选出有确切疗效的抗HBV药物是当前中药研究的一个热点。笔就近年来有关中药复方抗HBV的实验研究概况综述如下。     

慢性乙肝治疗：免疫控制还是病毒抑制？

慢性乙型肝炎现有两类抗病毒治疗药物：核苷类似物和干扰素（如派罗欣）。 1核苷类似物 核苷类似物口服方便，抑制HBV DNA作用强，副作用相对较少；但是这类药物没有免疫调节作用，治疗后患者发生HBsAg血清转换极为罕见，需要长期治疗，而长期治疗后会产生耐药变异的风险，而且逐年增加，使药物的疗效降低。     

乙型肝炎病毒YVDD和YIDD变异株的构建

WHO估计全世界乙肝病毒感染为3．5亿。中国感染总人数1．2亿。因为乙肝病毒感染易慢性化，可引起肝硬化甚至肝癌。因此人们在不断探索新的治疗方法以改善HBV感染的预后。拉米夫定等核苷类药物抗HBV治疗是继干扰素后一种新的抗HBV疗法。现在临床已广泛使用。治疗有效者HBV复制可受到很大程度的抑制。血清转氨酶稳定。临床症状明显改善。但长期服用可使HBVP区聚合酶基因发生变异。由野生型YMDD变异成YVDD或YIDD型。从而产生抗药性，HBV DNA阳性。因此笔者构建HBV YVDD和YIDD变异株。为建立拉米夫定耐药模型。筛选抗乙肝病毒药物打下前期基础。     

上海市公共卫生临床中心2005～2007年抗HBV核苷类药物的利用分析

目的调研上海市公共卫生临床中心近年来抗HBV核苷类药物的使用情况，为临床合理用药提供依据。方法收集本院2005-2007年抗HBV核苷类药物的使用数据，对其用药金额和用药频度等数据进行统计分析。结果我院抗HBV核苷类药物的用药金额呈逐年上升趋势，2006年与2007年用药金额增长幅度分别为178．00％和68．99％，该类药品年增长的幅度远远超出了总药品金额的增长；在药品构成比中拉米夫定逐年下降，但在用药频度排序中，始终为第一位；各品种日均费用稳中稍降，思替卡韦位列第一。结论我院抗HBV核苷类药物使用正逐步规范合理，但仍应密切注意耐药情况，根据病人具体情况，合理选用药物。     

抗乙肝病毒核苷类药物的研究进展

目的综述抗乙肝病毒核苷类药物的研究进展，使得医务人员对核苷类药物有更深入的了解。方法通过收集文献。对已上市和仍处于临床实验阶段的核苷类药物的成分和临床作用研究进展进行综述。结果近年来开发出了许多新的抗乙肝病毒的核苷类药物有很强的抗乙肝病毒作用，耐药性变异发生更低，患者耐受性良好，但是停药后易复发，长期治疗后产生耐药性的趋势越来越明显，因此，开发高效低毒且生物利用度高的新型核苷类药物是拉乙肝病毒感染药物研究的热点。     

核苷(酸)类药物抗病毒治疗过程中需要注意的问题

<正>乙型肝炎病毒(HBV)载量是慢性乙型肝炎(慢性乙肝)患者进展为肝硬化及肝癌的危险因素,有效的抗病毒治疗可以延缓或阻止慢性乙肝患者的疾病进程,有相当部分的慢性乙肝患者需要抗病毒治疗。目前我国用于治疗慢性乙肝的核苷(酸)类药物主要有4种:拉米夫定(LAM)、阿德福韦(ADV)、替比夫定(LdT)和恩替卡韦(ETV),第五种核苷(酸)类药物替诺福韦(TDF)也已批准在中国上市。核苷(酸)类药物是HBV的抑制剂,它不能彻底清除人体内的HBV。所以在慢性乙肝患者用核苷(酸)类药物抗病毒治疗时,需要长期服用。长期服用核苷(酸)类药     

乙型肝炎病毒表型耐药体外实验模型研究进展

现已上市的口服核苷类药物在治疗乙型肝炎过程中均可出现耐药性[1],特别是最近报道发现联合核苷类药物治疗的患者出现多重耐药性等更引起临床医师的高度关注[2-3].有关乙型肝炎病毒(HBV)耐药的研究,如临床耐药和HBV基因组序列分析等已开展十余年,取得了很多重要的成果,但越来越复杂的病毒突变问题要求更有效的研究手段加以分析.近年来已有一些表型耐药分析技术成功地应用于HBV交叉耐药研究和抗HBV治疗监测,本文将对基于聚合酶代谢和基于培养细胞株两种HBV表型耐药体外实验研究模型进行综述.     

核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎病毒学突破/反弹的临床特点

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者在应用核苷(酸)类似物[NA(s)]治疗过程中出现病毒学突破/反弹的临床特点及乙肝病毒(HBV)聚合酶基因突变模式。方法采用PCR产物直接测序法,对2008年10月-2011年5月在北京佑安医院门诊及住院部接受NA(s)抗病毒治疗过程中出现病毒学突破/反弹的70例CHB患者血清进行测序,回顾性分析其HBV逆转录基因的耐药突变模式及临床特点。结果 70例患者应用NA(s)中位治疗时间21(12～65)个月;HBV DNA定量平均水平(5.26±1.57)logcopies/ml;其中检测到HBV逆转录酶基因耐药的40(40/70)例,单NA(s)药耐药的30(30/40)例,多药耐药(MDR)的10例(10/40);出现生化学突破的31例;出现MDR的患者均有多NA(S)用药经历,与单药耐药比较差异有统计学意义(P<0.05);生化学反弹患者的HBV DNA定量水平高于无生化学反弹患者(P<0.05);检测出HBV逆转录酶耐药位点患者的HBV DNA水平高于未检测出耐药位点者(P<0.05);单药耐药与MDR患者HBV DNA水平及ALT水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论序贯多NA(s)抗病毒治疗可选择出多药耐药;多药耐药(MDR)与单药耐药患者生化学及HBV DNA水平无明显差异。     

慢性乙型肝炎患者基因耐药变异的病毒学及血清学分析

目的：探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者应用核苷（酸）类似物治疗后基因耐药变异的病毒学及血清学变化。方法选择2010年6月至2011年12月北京军区总医院287例CHB患者,按照服用拉米夫定（LAM）、阿德福韦酯（ADV）、替比夫定（LdT）和恩替卡韦（ETV）分为4组。定期检测血清HBV DNA载量与ALT水平,用聚合酶链反应-逆向点杂交法检测血清HBV DNA耐药变异位点。结果 LAM治疗后24个月耐药率为41.9%（31/74）;ADV耐药率为7.7%（7/91）;LdT耐药率为10.8%（4/37）;ETV耐药率较低,为2.3%（2/85）。 CHB患者抗病毒基因耐药变异组ALT异常率（27.3%）明显高于未变异组（9.9%）,差异有统计学意义（P 〈0.05）;未变异组HBV DNA转阴率（62.6%）明显高于变异组（20.5%）,差异有统计学意义（P 〈0.05）。结论 LAM、ADV、LdT和ETV均会出现不同程度的耐药变异。定期进行基因耐药检测有助于及时调整治疗方案,提高疗效。     

核苷(酸)类似物抗HBV过程中出现短暂性病毒学突破与逆转录酶区基因变异的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者经核苷(酸)类似物抗病毒治疗后出现短暂性病毒学突破与逆转录酶区基因变异的关系。方法在随访门诊中抽取16例接受核苷(酸)类似物抗病毒治疗出现短暂性病毒学突破者的预留血清,并提取HBV DNA,采用巢式PCR方法扩增HBV逆转录酶区基因,PCR产物回收纯化后直接测序,将直接测序结果用DNASTAR进行分析,找出HBV逆转录酶区基因的变异位点和相应的氨基酸。结果 16例短暂性病毒学突破患者HBV逆转录酶区均出现不同程度的点突变,其中主要的变异位点rtI/F122L、rtQ130P、rtS135Y、rtK149Q、rtW275替换为终止密码子(TAG)、rtV266I、rtH/Q271E的发生频率分别为56.3%、37.5%、43.8%、56.3%、50.0%、37.5%和37.5%,但无一例出现既往报道的常见耐药位点(rtI169T、rtV173L、rtL180M、rtA181V/T、rtT184G、rtA194T、rtS202I/G、rtM204I/V、rtI233V、rtN236T、rtM250V/L)变异。结论短暂性病毒学突破者逆转录酶区可出现不同程度的核苷酸位点变异及氨基酸替换,但均未检测到核苷(酸)类似物相关的常见耐药位点的变异。     

HBV P基因YMDD变异的检测及临床应用的初步研究

目的采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测，对其临床意义进行初步的研究。方法应用分子克隆方法，构建YMDD、YVDD和YIDD变异的阳性质粒，并对该方法进行敏感性及特异性试验。对65例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功，且该方法具有较好的敏感性和特异性。65例未经拉米夫定治疗的乙型肝炎患者存在YMDD变异，出现变异6例，阳性率为9．07％；其中YIDD和YI／YMDD各1例，YVDD3例，YV／YMDD1例。结论本检测方法简便、实用，在未经抗病毒治疗的患者中可存在YMDD变异，其与野生株一样是自然存在的，抗病毒药物压力不是导致HBV YMDD变异的唯一因素。     

慢性乙型肝炎患者在核苷(酸)类药物规范化治疗前耐药突变研究简

目的研究慢性乙型肝炎患者在核苷（酸）类药物（NAs）规范化治疗前耐药突变情况。方法在我国北方地区4家医院收集148例慢性乙型肝炎患者在NAs规范化治疗前的血清,提取血清中HBVDNA,用巢式聚合酶链反应一直接测序法获得HBV全长RT区序列,用生物信息学技术筛查该区内11个经典耐药突变位点（rt169、rt181、rt184、rt194、rt202、rt204、rt236、rt250、rt80、rt173和rt180）并鉴定患者HBV基因型。采用SPSS13．0软件进行统计分析。计量资料采用x-±s表示,计量资料的比较采用t检验,计数资料的比较采用x2检验。P〈0．05为差异有统计学意义。结果148例慢性乙型肝炎患者中,有142例血清HBVRT区在11个经典耐药突变位点上均为野生型氨基酸;6例患者检出经典耐药突变,分别为rtM204I2例,rtA181V、rtA181T、rtL180M＋rtM204I、rtL80V＋rtL180M＋rtM204I各1例,其在半年以前均有不规范NAs治疗史。148例患者基因型分布为：B基因型占4．1％（6／148）,C基因型占95．3％（141／148）,D基因型占0．6％（1／148）。结论依据PCR产物直接测序结果,本研究中慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗基线时体内HBV以野生株为优势株,检出NAs耐药突变株的患者均有既往不规律抗病毒治疗史。基线耐药检测有助于NAs个体化治疗方案的优化。     

对慢性乙型肝炎及肝硬化患者的核苷（酸）类药物耐药位点的分析

目的 研究接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清乙型肝炎病毒（HBV）P区基因序列突变率,突变形式及用药情况,为评估病情进展和实施下一步抗病毒治疗方案提供较为全面的信息.方法 选取浙江中医药大学附属第六医院2009年3月～2012年10月447例接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者为研究对象,采用基因直接测序法,对其血清HBV P区基因PCR扩增产物进行测序,分析各个耐药位点,同时搜集相关用药史进行回顾性分析.结果 在447例病例中存在位点突变者227例（50.8％）,共存在30种变异形式,变异形式以M204I、L180M＋ M204V、L180M＋ M204I三者居多.其余种类复杂多样,大多以联合突变形式出现;耐药药物的使用及产生的耐药位点基本一致;主要的变异位点集中发生在M204I和L180M,余均较为分散.且经统计分析,乙型肝炎及肝硬化两总体的突变率有统计学差异.结论 对核苷（酸）类似物抗病毒治疗中出现病毒学突破的慢性乙型肝炎及肝硬化患者血清中HBVP区基因耐药位点的分析研究对合理用药以及发生耐药后及时调整治疗方案有重要的作用.     

核苷类药物在慢乙肝抗病毒治疗中的作用

本文就乙型肝炎病毒及其复制过程、核苷类药物在慢乙肝抗病毒治疗中的作用进行扼要阐述。     

泛昔洛韦和胸腺肽联合治疗过程中乙肝病毒聚合酶基因突变谱 …

目的 探讨泛昔洛韦治疗过程中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）耐药性的产生与多聚酶基因变异的可能关系。方法 慢性ＨＢＶ无症状携带者２９例，接受泛昔洛韦和胸腺肽联合治疗，１５例单用胸腺肽治疗。所有患者治疗时间为半年，随访半年，收集每位患者治疗前、治疗中和治疗后半年系列血清标本，进行血生化、ＨＢＶ ＤＮＡ定量和ＨＢＶ标志物等常规检测，同时应用ＰＣＲ的方法扩增ＨＢＶ聚合酶基因Ｂ区和Ｃ区序列，ＰＣＲ产物直接测序或克隆     

基因芯片技术在检测乙型肝炎病毒 P区YMDD变异中的研究

目的 用基因芯片检测未经抗病毒治疗的HBV DNA阳性血清中HBV P区YMDD变异情况,从分子生物学角度了解YMDD两种变异的状态,为科学合理地指导临床抗病毒治疗及预测患者临床预后提供有力的依据。方法 将150份未经抗毒治疗的HBV DNA阳性血清,用PCR方法扩增P区,扩增产物与基因芯片上的寡核苷酸进行杂交,杂交结果通过扫描仪扫描到计算机上,经软件分析可得到HBVY MDD野生型及其YVDD和／或YIDD变异型结果,并对部分阳性标本用基因序列测序证实。结果 150份HBV DNA阳性血清,用基因芯片方法检出阳性标本(包括YMDD野生型和变异型)共122例,占81．3％,阴性标本28例,占18．7％;在122例阳性标本中,单纯YMDD野生型(即无变异标本)有90例,占73．8％;YVDD变异28例,占22．9％;YIDD变异2例,占1．6％;YVDD和YIDD混合变异2例,占1．60A,,变异株检出率为26．2％,而且变异株均与野生株共存。其中8份阳性标本进行基因序列测序,证实与芯片检测结果完全一致。结论(1)用当前先进的基因芯片技术检测HBVP区YMDD变异,操作简便,结果可靠,特异性高。(2)基因芯片可快速、同时、多人份检出HBVYMDD野生株及其YIDD和／或YVDD突变株的共同感染。(3)部分HBV感染者在未经抗病毒治疗情况下已自然存在HBV YMDD变异,而且变异株均与野生株共存,其中以YVDD变异为多。(4)HBV感染患者在治疗前后有必要检测是否存在HBV YMDD变异株感染,为指导临床科学合理用药和制定治疗方案提供依据。     

慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗不同阶段HBV DNA多聚酶分析

目的分析拉米夫定治疗不同时期HBV DNA多聚酶区耐药突变的变化规律和主要耐药突变的分布情况。方法将接受拉米夫定治疗的98例患者根据治疗时间进行分组,采用PCR方法对其血清HBV多聚酶区进行扩增并对聚合酶链反应（PCR）产物进行直接测序。结果拉米夫定治疗后血清HBV DNA水平≥10^4copies／ml的患者中,治疗时间〈6个月6例,其中1例发生突变;6～12个月13例,其中7例发生突变;12～24个月19例,其中13例发生突变;24～36个月20例,其中19例发生突变,各组之间耐药突变发生率比较差异有统计学意义（P〈0．05）。耐药患者中有10种突变类型,其中以rtM204I突变最多见,为14例（35．0％）,其次为rtL180M／M204V（17．5％）、rtL180M／M2041（12．5％）。结论对拉米夫定治疗6个月以上而没有达到病毒学完全应答的患者进行乙肝病毒基因耐药突变的检测,有助于及时准确的调整治疗方案。