大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨组织骨保护素及其配体mRNA表达的影响

目的:观察大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素(osteoprote-gerin,OPG)和骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)mRNA表达的影响,探讨SI防治绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMO)的作用机制。方法:健康雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和SI治疗组。假手术组仅牵动卵巢,其余两组均行双侧卵巢切除术。SI治疗组造模后予以SI50 mg.kg-1.d-1灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,每周用药6 d,共12周。12周后取大鼠L3~L6脊椎行骨密度检测。取大鼠左侧股骨提取总RNA,采用实时定量聚合酶链反应(real-timequantitative polymerase chain reaction,RTQ-PCR)技术检测OPG和OPGL mRNA的表达水平。结果:SI可以增加去卵巢大鼠的腰椎骨密度,上调去卵巢大鼠骨组织中OPG mRNA的表达水平,使OPGL mRNA/OPG mRNA比值下降,但对OPGL mRNA的表达则无明显影响。结论:SI防治PMO的效应可能与其调控OPG mRNA的表达及OPGL mRNA/OPG mRNA比值相关。     

非诺贝特对高甘油三酯血症并骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的 探讨非诺贝特对去卵巢骨质疏松并高甘油三酯(TG)血症大鼠股骨中细胞核因子κB受体活化因子配体/护骨素(RANKL/OPG)mRNA表达的影响.方法 将40只3月龄雌性SD大鼠,用果糖饲养复制高TG模型,大鼠共分为去卵巢+果糖组、去卵巢+果糖+非诺贝特(FF)组、去卵巢+普食组、假手术+果糖组.12周后取股骨检测细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL) mRNA、护骨素(OPG)mRNA表达水平.结果 去卵巢+果糖组的TG水平高于去卵巢+普食组(P＜0.01),也高于去卵巢+果糖+FF组(P＜0.01);去卵巢+果糖组RANKL mRNA/OPG mRNA水平,均高于去卵巢+果糖+FF组、去卵巢+普食组和假手术+果糖组(P＜0.01或＜0.05).结论 非诺贝特可通过降低TG而保持RANKL mRNA/OPG mRNA的平衡.     

抗风湿颗粒对胶原诱导关节炎大鼠骨保护素、核因子-κB受体激活因子配体和巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:观察抗风湿颗粒(Kangfengshi Granules,KFSG)对胶原诱导关节炎大鼠骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)mRNA表达的影响,探讨KFSG治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)治疗组和KFSG治疗组。除正常对照组外,其余各组大鼠予以皮下注射Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。治疗4周后,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠骨组织中OPG、RANKL和M-CSF mRNA的表达水平。结果:造模大鼠90%出现关节炎症状。治疗4周后,模型组、CsA治疗组和KFSG治疗组与正常对照组比较,RANKL mRNA和M-CSF mRNA的表达增高,OPGmRNA的表达降低,RANKL mRNA/OPG mRNA比值亦增高,差异均有统计学意义。KFSG治疗组与模型组比较,OPG mRNA的表达水平上调,M-CSF mRNA的表达水平下调,RANKL mRNA/OPG mRNA比值下降,差异均有统计学意义。结论:KFSG治疗RA骨质破坏的分子机制可能与其上调OPG mRNA的表达、下调M-CSF mRNA的表达及降低RANKL mRNA/OPG mRNA比值有关。     

淫羊藿苷对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞凋亡及骨组织OPG、RANKL mRNA表达影响

目的:探讨淫羊藿苷对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞凋亡及骨组织骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法:选取健康雌性SD大鼠70只,采用去卵巢法建立骨质疏松模型,造模成功的51只大鼠随机分为模型组、尼尔雌醇组、淫羊藿苷组,各17只;对照组15只接受假手术,各组给予相应的药物治疗。对大鼠股骨骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)、血清生化指标水平、骨细胞及成骨细胞凋亡指数(AI)、骨组织OPG mRNA、RANKL mRNA、核因子κβ受体活化因子(RANK)mRNA表达水平进行检测。结果:治疗后,与模型组比较,各组大鼠股骨BMD、BMC水平较高,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组大鼠血清骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)水平较高,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组大鼠骨细胞AI、成骨细胞AI较低,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组大鼠骨组织OPG mRNA表达水平较高,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05);各组骨组织RANKL mRNA、RANK mRNA表达水平较低,且淫羊藿苷组尼尔雌醇组(P0.05)。结论:淫羊藿苷能增加去卵巢骨质疏松大鼠骨密度和骨矿含量,改善血清BGP、ALP、Ca水平,抑制骨细胞及成骨细胞凋亡,可能与上调骨组织OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA、RANK mRNA表达有关。     

补肾中药对去卵巢大鼠骨密度、骨钙含量及骨组织形态学的影响

目的:研究补肾中药对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用及其机制。方法:70只SD大鼠分为5组:正常对照组、假手术组、模型组、雌激素组、补肾中药组。手术12周后开始给药,连续给药12周,检测骨密度、骨钙含量和骨组织病理变化。结果:与假手术组比较,模型组BMD、骨钙含量均显著降低(P<0.01)。治疗后,雌激素组较模型组BMD、骨钙含量均显著增高(P<0.05),中药组较模型组BMD、钙含量均显著增高(P<0.05)。但雌激素组与中药组比较无统计学意义。结论:补肾中药有明显抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用,为临床应用补肾中药治疗绝经后骨质疏松提供实验依据。     

雌、孕激素对去卵巢大鼠骨代谢及肾脏1,25-(OH)2D3受体mRNA表达的影响

目的:观察雌孕激素替代治疗对去卵巢大鼠骨组织计量学参数变化及大鼠肾脏1,25-(OH)2D3受体(VDR)mRNA 表达的影响,并探讨其可能的机制.方法:25只成年SD雌性大鼠,随机分为为5组,假手术组、单纯去势组以及去势 补充雌激素组、去势 补充孕激素组、去势 补充雌、孕激素组,每组5只.喂养3个半月后处死,取出肾脏,RT-PCR方法检测VDR mRNA的表达;取胫骨上段不脱钙骨制片,应用半自动图像数字化分析仪检测各组大鼠骨组织计量学参数.结果:与假手术组、雌激素及雌孕激素组相比,去卵巢大鼠松质骨骨量明显减少,伴有骨结构变差,骨形成和骨吸收的参数值增加(P<0.05);与去卵巢组相比,孕激素组大鼠无显著改变.去卵巢组大鼠肾脏VDR mRNA的相对表达量显著低于假手术组、雌激素组及雌孕激素组(P<0.05);而与孕激素组无显著差异.结论:雌激素能有效地抑制去卵巢大鼠的骨吸收和骨形成,降低骨转换,可能与促进去卵巢大鼠肾脏VDR mRNA的表达有关.     

骨质疏松性椎体骨折患者血清破骨细胞生成抑制因子和破骨细胞分化因子的表达及意义

目的 探讨骨质疏松性椎体骨折患者血清破骨细胞生成抑制因子(osteoclast suppressor,OCIF)和破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)的表达及意义。 方法 选择衢州市人民医院2013年1月—2016年12月符合标准的骨质疏松性椎体骨折患者70例为骨质疏松组,非骨质疏松性椎体骨折患者70例为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(Double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定血清OCIF和ODF水平。采用双能X线骨密度仪测量腰椎正位总体L_1-4骨密度及左侧股骨颈骨密度。采用SPSS20.0统计软件对数据进行分析。 结果 骨质疏松组血清OCIF和ODF水平均高于对照组(均P<0.05)。骨质疏松组腰椎正位骨密度和股骨颈骨密度均低于对照组(均P<0.05)。骨质疏松患者血清OCIF、ODF水平与腰椎正位骨密度、股骨颈骨密度均呈负相关(均P<0.05)。骨质疏松患者血清OCIF、ODF水平与骨折程度无显著相关性(均P>0.05)。 结论 骨质疏松性椎体骨折患者血清OCIF、ODF水平升高,血清OCIF、ODF水平与骨质疏松性椎体骨折患者的骨密度关系密切,与骨折的严重程度关系不大。      

骨保护素在雌性去势大鼠不同时期骨组织的表达

目的观察骨保护素（OPG）在雌性大鼠去势前后骨组织的变化及与相关指标的关系,探讨其在骨质疏松发病机制中的作用.方法SD雌性大鼠随机分为生长期组、成年组、去卵巢（OVX）后1,2,3月组和对照组.测定血清碱性磷酸酶（AKP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）;双能x线吸收法测定骨密度（BMD）.取胫骨进行骨组织计量学测定及免疫组织化学方法结合图像分析进行OPG半定量分析.结果去势大鼠术后1月骨质疏松模型成功.对照组OPG随月龄逐渐增加,去卵巢后表达下降.单位骨小梁面积中OPG与TRAP存在正相关;骨组织总OPG与BMD正相关,与AKP负相关.结论去势引起OPG骨组织表达下降.OPG在骨质疏松发病机制中发挥重要作用.     

成骨生长肽衍生物抗去卵巢大鼠骨质疏松作用的实验研究

目的通过建立去卵巢大鼠骨质疏松模型来研究成骨生长肽衍生物对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用。方法选取3月龄未交配雌性健康SD大鼠48只,按体重随机分为6组,其中5组行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松模型,1组行假手术,给药组分别给予一定剂量的ALEN、OPG、OPG1、OPG2。给药12周后,测定骨密度,血清中的钙、磷、碱性磷酸酶、骨钙素。结果模型组与假手术组比较,骨密度明显降低(P0.05);各给药组及模型组与S组比较,骨密度降低(P0.05),OGP1组与OGP2组比较,骨密度增加(P0.05);模型组与假手术组比较,碱性磷酸酶活性明显升高(P0.05);治疗组与模型组比较,碱性磷酸酶活性明显降低(P0.05);与假手术组比较,其他各组骨钙素活性高(P0.05);其他治疗组分别与阿伦磷酸钠治疗组比较,血清钙浓度升高(P0.05);各治疗组分别与模型组比较,血清磷浓度增高(P0.05)。结论成骨生长肽及其衍生物对去卵巢大鼠骨质疏松具有治疗作用,其中OGPA1对抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用较好。     

破骨细胞分化因子及其受体和反意受体在骨巨细胞瘤中的表达及意义

目的:检测破骨细胞分化因子(ODF)及其受体(RANK)和反意受体-护骨因子(OPG)在骨巨细胞瘤(GCT)组织中的表达,探讨其与GCT中多核巨细胞形成J、affe分级和临床复发的关系。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测5例GCT组织中ODF、OPG、RANK mRNA的表达,用免疫组织化学法检测44例GCT组织中ODF蛋白的表达,统计分析其表达与Jaffe分级和临床复发的关系。结果:GCT组织中ODF、OPG、RANK mRNA均有表达,且ODF表达丰富;GCT组织单核基质细胞和多核巨细胞中均有ODF蛋白的表达,但以单核基质细胞为主,Ⅰ级单核基质细胞中ODF蛋白的表达明显高于Ⅱ、Ⅲ级,ODF蛋白的表达与复发无关。结论:GCT组织中ODF的表达与多核巨细胞的形成及Jaffe分级有关。     

The effects of soybean isoflavaones on the mRNA expression of OPG, ODF and M-CSF in bone tissue of ovariectomized rat

Objective： To observe the effects of the soybean isoflavaones on the rnRNA expression of osteoprotegerin（OPG）, osteoclast differentiation factor（ODF） and macrophage colony stimulating factor（M-CSF） in bone tissue of ovariectomized rat, and to investigate the possible pathway to prevent and treat postrmenopausal osteoporosis using soybean isoflavaones. Methods： Thirty healthy adult SD rats were randomly divided into 3 groups： sham-operated group, ovariectomized group and soybean isoflavaones treated group. All rats were ovariectomized except those in sham-operated group. The bone density of the 3-6th lumbar vertebrae was detected after 12 weeks. Total RNA was extracted from femur bone and the mRNA expression of OPG, ODF and M-CSF was examined by real time PCR. Results： Soybean isoflavaones increased the bone density of the lumbar vertebrae in ovariectomized rat and up-regulated the expression of OPG, whereas down-regulated the expression of M-CSF and the ratio of ODF to OPG. Conclusion： The effects of soybean isoflavaones on postmenopausal osteoporosis are tightly correlated with OPG, M-CSF and the ratio of ODF to OPG.     

二至丸干预去卵巢骨质疏松大鼠骨重建的效应及机制

目的?明确二至丸对去卵巢骨质疏松大鼠骨重建的干预作用,并探究其作用机制。方法?采用卵巢切除术制备绝经后骨质疏松症动物模型,确认造模成功后,将60只模型大鼠随机分为模型组、阿仑磷酸钠组、氟化钠组、二至丸组、女贞子组、墨旱莲组等6组,另设假手术组10只。各组分别予:生理盐水（5?mL/kg）、阿仑磷酸钠（1?mg/kg）、氟化钠（5?mg/kg）、二至丸（2?g/kg）、女贞子（1?g/kg）、墨旱莲（1?g/kg）灌胃,1次/日,连续8周,假手术组给药与模型组相同。采用Micro-CT扫描大鼠股骨;双能Ｘ线吸收法测定模型股骨颈部位的骨密度（BMD）;椎体压缩法检测骨最大载荷量;ELISA法检测血清骨碱性磷酸酶（BALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、β链蛋白（β-catenin）及趋化素（chemerin）;qPCR检测骨组织RANKL、OPG、β-catenin及chemerin基因表达。结果?二至丸、女贞子和墨旱莲可显著增加骨量,提升骨最大载荷量,并修复骨微结构。血清中,二至丸、女贞子和墨旱莲可明显降低TRACP-5b、RANKL、chemerin表达水平,并提升BALP、OPG、β-catenin表达水平。骨组织中,二至丸、女贞子和墨旱莲组明显抑制RANKL、chemerin mRNA表达,并促进OPG、β-catenin mRNA表达增加。结论?二至丸可有效改善去卵巢骨质疏松大鼠的骨代谢异常,其作用机制与调控chemerin密切相关。      

淫羊藿总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA表达的影响

目的:观察淫羊藿总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA表达的影响,探讨其治疗绝经后骨质疏松的作用机制.方法:将10～11 月龄SD雌性大鼠48只, 随机分为假手术组、去卵巢模型组、淫羊藿总黄酮组和雌二醇(E2)组.以双侧卵巢切除法建立大鼠骨质疏松模型.淫羊藿总黄酮组、E2组分别用淫羊藿总黄酮、E2给药...     

Expression of OPGmRNA and ODFmRNA in the patients of hip fracture due to osteoporosis

Objective：To investigate the gene expression of osteoprotegerin（OPG） and osteoclast differentiation factor（ODF） in the bone tissue of patients with hip fracture due to osteoporosis. Methods：OPGmRNA and ODFmRNA in the bone tissue in 50 cases of osteoporosis sufferers（over 50 years old） with hip fracture（Observer Group） and 30 cases of hip facture sufferers with no osteoporosis（Control group） were analyzed with the Semi-Quantitative RT-PCR method. Results：The mRNA expressed of ODF, OPG were both high in the patients with hip fracture. In the control group, the expression of OPG mRNA was observed, while the expression of ODF mRNA was very slight. Conclusion：Aged patients contained all signals including OPG, ODF that are essential for inducing osteoclastogenesis and promoting bone resorption.     

去卵巢大鼠骨质疏松模型特点及尼尔雌醇对其干预作用的研究

目的：多角度分析去卵巢大鼠骨质疏松模型的特点以及考察尼尔雌醇对绝经后骨质疏松的干预作用。方法：将45只12月龄SD♀大鼠随机分为4组,即空白对照组（CONT组）、假手术组（SHAM组）、模型组（OVX组）、尼尔雌醇组（NILE组）。通过测量12周后骨密度、雌激素、子宫脏器系数、股骨三点弯曲测试、股骨干骺端矢状面切片HE染色和扫描电镜观察,分析去卵巢大鼠骨代谢变化情况,并通过该模型的建立,考察了尼尔雌醇对该病的干预作用。结果：模型组的BMD、BMC、雌激素水平和子宫脏器系数、最大载荷、刚度均显著低于对照组（P〈0.05、P〈0.01）,股骨干骺端矢状面的HE染色及扫面电镜显示,与对照组相比,模型组骨小梁的网状结构遭到严重破坏;假手术组的上述指标与对照组比较没有差异,而尼尔雌醇组的上述指标与模型组比较均有显著提高（P〈0.05）,而与对照组比较无差异。结论：去卵巢大鼠骨质疏松模型因双侧卵巢被摘除而缺乏雌激素导致骨量严重丢失,骨松质三维结构被严重破坏,骨组织生物力学性能显著下降;尼尔雌醇能够通过上调雌激素水平而增加骨量,但对生物力学性能的改善作用不明显。     

Expression of OPG mRNA and ODF mRNA in the patients of hip fracture due to osteoporosis

ObjectiveTo investigate the gene expression of osteoprotegerin(OPG) and osteoclast differentiation factor(ODF) in the bone tissue of patients with hip fracture due to osteoporosis.MethodsOPG mRNA and ODF mRNA in the bone tissue in 50 cases of osteoporosis sufferers(over 50 years old) with hip fracture(Observer Group) and 30 cases of hip facture sufferers with no osteoporosis(Control group) were analyzed with the Semi-Quantitative RT-PCR method.ResultsThe mRNA expressed of ODF, OPG were both high in the patients with hip fracture. In the control group, the expression of OPG mRNA was observed, while the expression of ODF mRNA was very slight.ConclusionAged patients contained all signals including OPG, ODF that are essential for inducing osteoclastogenesis and promoting bone resorption.     

PERK信号通路对实验性绝经后骨质疏松雌性大鼠成骨细胞分化的影响

目的：探讨实验性雌性大鼠绝经后骨质疏松（PMOP）治疗前后骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG的变化,阐明PERK信号通路在PMOP发生中的作用。方法：复制雌性大鼠卵巢去势骨质疏松模型。45只大鼠分为正常对照组（大鼠不做处理,15只）、骨质疏松组（雌性大鼠卵巢摘除,15只）和骨质疏松治疗组（大鼠卵巢摘除后尾静脉注射雌激素,15只）。观察各组大鼠血清中Ⅰ型胶原（ColⅠ）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OCN）水平。饲养3个月后取各组大鼠股骨骨干做病理切片,RT-PCR法检测各组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG基因表达水平,Westernblotting法分析PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG蛋白表达水平。结果：与对照组比较,骨质疏松组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,RANKL基因表达水平明显升高（P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,RANKL基因表达水平明显降低（P<0.01）。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,RANKL蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显上升（P<0.05或P<0.01）,RANKL蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。HE染色,与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中骨吸收陷窝变大,骨吸收增强,导致骨质流失;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨质吸收减弱,骨骼恢复正常结构。结论：雌性大鼠卵巢切除及注射雌激素治疗后,其骨组织中PERK表达趋势与成骨细胞转录因子Runx2和osterix变化一致,与破骨细胞转录因子RANKL表达相反,提示PMOP发病时成骨细胞功能减弱与PERK表达下降有关。     

淫羊藿苷对去势雌性大鼠骨质疏松的影响

目的 研究淫羊藿苷对去势雌性大鼠骨质疏松的影响,为开发传统中药治疗骨质疏松症提供理论依据.方法 将60只3月龄健康雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(SHAM组,20只),去势造模组(OVX组,20只),淫羊藿苷组(ICA组,20只).模型建立后ICA组大鼠给予淫羊藿苷(浓度30mg/ml,10ml/kg,1次/d)灌胃90d.处死所有大鼠前采用股动脉取血法采集大鼠血液测定血清雌二醇水平、血碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b),并且用DEXA骨密度仪检测腰椎、股骨和全身骨密度;断颈法处死后采集双侧股骨,左侧股骨做组织病理学切片,右侧股骨匀浆提取骨组织中的Total RNA,RT-Real Time PCR检测OPG、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA的表达水平.结果 OVX组和ICA组的雌二醇水平均显著低于SHAM组(P＜0.01),而ALP水平显著高于SHAM组(P＜0.01),OVX组的TRAP5b水平较SHAM组和ICA组显著升高(P＜0.01);SHAM组和ICA组的腰椎骨密度和全身骨密度均高于OVX组(P＜0.05),SHAM组的股骨骨密度高于OVX组(P＜0.05),而ICA组与OVX组差异无统计学意义;SHAM组和ICA组的OPG、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA相对表达量明显高于OVX组(P＜0.01);SHAM组和ICA组的骨小梁与皮质骨均无变薄断裂,而OVX组有严重的骨质疏松病变特征.结论 淫羊藿苷具有防治去势雌性大鼠骨质疏松的作用.