骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血的疗效评价

目的：观察静脉注射骨髓基质细胞（BMSC）治疗大鼠局灶性脑缺血的疗效。方法：取健康Wistar大鼠45只,雌雄不限,随机分为骨髓基质细胞组（治疗组）,生理盐水组（实验对照组）和空白对照组。Fridenshtein方法分离培养骨髓基质细胞,免疫细胞化学法鉴定骨髓基质细胞,改良Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）1h模型。栓塞24h后,治疗组股静脉注射经BrdU标记的终浓度为3×10^6个/ml骨髓基质细胞1ml,实验对照组股静脉注射1ml生理盐水,空白对照组股静脉不注射。采用免疫组化法检测脑内BrdU阳性细胞的表达,神经功能损伤评分（NSS）检测大鼠神经系统功能,进行疗效评价。结果：免疫细胞化学方法鉴定骨髓基质细胞为CD34（-）,CD54（＋）、CD106（＋）、CD44（＋）。栓塞后3,7,14d在缺血侧半球可以发现大量BrdU阳性细胞,对侧半球也可见少量BrdU阳性细胞。治疗组和两个对照组相比各时间点的神经功能评分均偏小,在栓塞14d时有显著性差异（P〈0.05）。结论：骨髓基质细胞（BMSC）静脉注射后大鼠的神经功能明显得到了恢复,故认为静脉注射骨髓基质细胞治疗局灶性脑缺血简便易行,并且有效。     

大鼠骨髓间充质干细胞的培养及鉴定

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）体外分离培养及鉴定。方法：应用贴壁筛选法分离培养Wistar大鼠髓间充质干细胞,用直接荧光抗体染色法对培养的细胞进行鉴定。结果：体外培养的原代MSC 9d融合,荧光抗体染色CD44、CD105表达阳性,CD14、CD34表达阴性。结论：贴壁筛选法在体外很容易分离培养和扩增MSC,可作为获得MSC的一种有效手段。     

静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血后的bFGF表达

目的探讨静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血后的bFGF表达。方法采用大鼠局灶性大脑中动脉缺血1h模型，观察第3、7、14天生理盐水组，正常对照组，股静脉注射骨髓基质细胞组神经功能的恢复。免疫组化测定脑缺血再灌注第3、7、14天bFGF蛋白表达。结果神经功能评分：生理盐水组和正常对照组相比，各时间点均无显著差异（P〉0．05）；治疗组与对照组相比，治疗组第14天大鼠神经功能缺损评分减低，并且有显著性差异（P〈0．05）。免疫组化结果：在梗塞半球大量BrdU阳性细胞，对侧半球也可见少量BrdU阳性细胞。bFGF蛋白表达：生理盐水组和正常对照组之间，缺血各时间点的表达均无显著性差异（P〉0．05），治疗组与对照组相比各个时间点的表达均显著增加（P〈0．05）。结论静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶脑缺血的机制可能与bFGF蛋白表达增加有关。     

R（＋）-普拉克索对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤的神经保护作用

目的研究R（＋）-普拉克索[ R（＋）-PPX]对短暂性局灶性脑缺血大鼠脑内活性氧自由基（ reactive oxygen species,ROS）产生以及脑损伤的影响,探讨R（＋）-PPX对脑缺血损伤的保护作用,寻找防治缺血性脑血管病的有效方法。方法采用数字表法随机将30只健康雄性SD大鼠分为：假手术组（Sham组,n=10）;大脑中动脉梗死组（MCAO组,n=10）;MCAO＋R（＋）-PPX组[于MCAO前30 min一次性腹腔注射R（＋）-PPX,剂量为1 mg/kg,n=10]。使用线栓法制作大鼠缺血90 min再灌注模型,术中监测大鼠心率、平均动脉压及肛温,使其保持在正常范围。每组分别于脑缺血再灌注后6、24 h取脑组织行TTC染色检测大鼠脑梗死体积,并制作脑组织冰冻切片,采用H2DCF-DA染色法计数半暗带区ROS阳性细胞数目并检测其平均荧光强度。结果1）在MCAO手术过程中,Sham组、MCAO组和MCAO＋R（＋）-PPX组大鼠的心率、平均动脉压及肛温差异均无统计学意义。2）Sham组大鼠无脑梗死发生。缺血再灌注6 h及24 h,MCAO组、MCAO＋R（＋）-PPX组大鼠脑梗死体积均比Sham组显著增加（P〈0.05）且随再灌注时间延长递增（P〈0.05）。再灌注6 h时,MCAO＋R（＋）-PPX组与MCAO组相比,脑梗死体积明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）,而再灌注24 h时,MCAO＋R（＋）-PPX组脑梗死体积与MCAO组相比差异无统计学意义（P 〉0.05）。3）Sham组大鼠脑内无缺血半暗带区。缺血再灌注6 h及24 h,MCAO组、MCAO＋R（＋）-PPX组大鼠脑缺血半暗带区域H2DCF-DA阳性染色细胞数目及平均荧光强度均随再灌注时间延长递增（P〈0.05）。再灌注6 h时,与MCAO组相比,MCAO＋R（＋）-PPX组的H2DCF-DA阳性染色细胞数目及平均荧光强度明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。而再灌注24 h时,MCAO＋R（＋）-PPX组大鼠H2DCF-DA阳性染色细胞数目及平均荧光强度与MCAO组相比差异无统计学意义（P〉0.05?     

Lewis大鼠骨髓间充质干细胞分离培养和鉴定

目的建立从Lewis大鼠骨髓中分离、培养间充质干细胞的方法,并对分离、培养的间充质干细胞进行鉴定.方法采用Percoll（1.073g/L）密度梯度分离和贴壁培养相结合的方法分离培养Lewis大鼠的骨髓间充质干细胞（MSC）.MSC细胞鉴定：采用相差显微镜观察MSC的形态学特征;流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD29,CD90,CD34和CD45的表达率;苏丹Ⅳ染色检测MSC成脂细胞分化;碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测MSC成骨分化.结果原代培养的MSC于24 h后贴壁,48～72 h形成集落,12～15 d可达到80%～90%融合.第1代细胞表面标记物CD29,CD90,CD34和CD45的阳性率分别为80.41%,66.27%,2.73%,0.74%.第3代细胞表面标记物CD29,CD90,CD34和CD45的阳性率分别为89.91%,88.17%,0.81%,0.17%.细胞周期分析显示,第5代细胞G0/G1期细胞占68.9%,S＋G2＋M期为31.1%.用α-MEM培养液培养的第6代细胞部分分化为成骨和成脂细胞.结论采用Percoll（1.073g/L）密度梯度分离和贴壁培养相结合的方法能够成功分离和培养大鼠的MSC.第5代MSC细胞保持分化潜能.     

骨髓基质细胞与bcl-2基因对脑缺血大鼠疗效以及IGF-1表达影响的研究

目的:探讨联合应用骨髓基质细胞与bcl-2基因治疗大鼠脑缺血的疗效,以及对IGF-1表达的影响。方法:40只Wistar大鼠采用改良栓线法制成大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,随机分成空白对照组、bcl-2组、MSC组和MSC bcl-2组,每组10只。各组于再灌注后1、3、7及14d进行神经功能评分;于3d及14d分别处死5只大鼠,采用免疫组化法检测BrdU、IGF-1及bcl-2蛋白的表达;通过TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:再灌注7、14d后各治疗组神经功能评分明显低于空白对照组(P<0.05),而14d时MSC bcl-2组神经功能评分明显低于bcl-2组及MSC组(P<0.05);MSC bcl-2组梗死半球BrdU阳性细胞明显多于MSC组(P<0.05);MSC bcl-2组梗死灶侧皮层表达IGF-1和bcl-2的阳性细胞明显多于bcl-2组及MSC组(P<0.05);MSC bcl-2组凋亡细胞明显少于bcl-2组及MSCs组(P<0.05)。结论:bcl-2基因可抑制MSCs移植后的凋亡,增加其治疗脑缺血的疗效,二者联合应用可产生叠加效应;增加IGF-1的表达可能是MSC治疗脑缺血的机制之一。     

大鼠骨髓细胞CD34+β2m-CD90+亚群肝内移植的研究

目的观察骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞在受体大鼠纤维化肝内的定居、生长以及对受体肝的影响。方法将雄性肝纤维化大鼠的骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞用PKH26-GL标记后，从门静脉注射到预先经放疗的同种模型雌性大鼠肝内；PCR检测雌鼠血清Y染色体的表达，荧光显微镜检测PKH26-GL标记的骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞在受体肝内的分布；病理学检查移植骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞后大鼠肝纤维化组织形态学改变；免疫组化检测肝内白蛋白、α-SMA的表达，放免法测定受体血清层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的水平，斑点杂交检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型前肢原mRNA的表达。结果 在移植后2周内，雌性受体血清一直能检测到Y染色体特异的Sty基因表达，肝内有PKH26-GL红色荧光分布并有聚集成团趋势；受体肝纤维化减轻，间隔和胞周性纤维化较对照组改善；受体血清层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的水平下降（P〈0．05），肝组织α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达下降（P〈0．05），白蛋白的表达升高（P〈0.05）。结论 大鼠骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞自体移植入纤维化肝后，可能定居并有一定程度的增殖；大鼠移植CD34^＋β2m-CD90^＋细胞后，受体肝纤维化程度有减轻的趋势。     

针刺任督脉对脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和CD34表达的影响

目的 探讨任督脉经穴针刺对脑缺血再灌注大鼠脑内血管内皮生长因子（VEGF）和CD34蛋白表达的影响.方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺任督脉组,每组又随机分为7、14 d和28 d各三个亚组.线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型.假手术组切开后不插线直接缝合.利用免疫组化法检测7、14 d和28 d大鼠脑内VEGF和CD34蛋白的表达情况.结果 大鼠MCAO后模型组和针刺任督脉组VEGF和CD34蛋白表达均增加,其中,模型组VEGF表达在7d为最低（169.97±2.42,P＜0.01）,后逐渐增多,CD34表达在14 d为高峰期（164.17±2.86,P＜ 0.01）,后逐渐减少.针刺任督脉组跟模型组的7、14 d和28 d相比,VEGF表达均增加（14.47±0.32） （P＜ 0.01）、（10.16±0.25）（P＜0.01）、（9.17±0.21）（P＜0.01）,且CD34表达均增加（16.00±0.20） （P＜ 0.01）、（19.34±0.38） （P＜ 0.01）、（16.50±0.27） （P＜ 0.01）.结论 针刺任督脉经穴可能通过上调脑内VEGF和CD34蛋白表达,促进微血管新生,这可能为其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一.     

血管内皮生长因子对大鼠脑缺血再灌注模型的神经保护作用

目的 探讨血管内皮生长因子VEGF对大鼠脑缺血再灌注模型的神经保护作用。方法 应用大鼠大脑中动脉缺血再灌注（MCAO）模型，再灌注12h后给予VEGF腹腔注射，检测再灌注不同阶段大鼠神经功能缺损情况，以及梗死区一氧化氮合酶（nNOS）mRNA和超氧化物歧化酶（SOD）蛋白的表达量，与未注射VEGF组比较。结果 注射VEGF组大鼠缺血再灌注24、36和48h神经功能缺损评分明显高于MCAO组；MCAO组大鼠再灌注后nNOS基因表达开始增加，于24h达到高峰开始下降；SOD表达量则在48h内都在升高。注射VEGF组再灌注24、48h的nNOS和SOD的表达量与MCAO比较均明显增高（P〈0．05）。结论 VEGF具有增加再灌注组织一氧化氮合酶和超氧化物歧化酶表达进而促进脑缺血再灌注后神经功能恢复的作用。     

Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的：观察ROCK抑制剂Y－27632对体外缺血清培养的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代分离培养小鼠骨髓单个核细胞,应用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测。成骨、成脂肪、成软骨分化后分别进行茜素红、油红O及甲苯胺蓝染色。将第3代细胞随机分为3组：对照组、模型组（无血清）、Y－27632组（无血清＋10μmol／L Y－27632）,分别于培养后24、48、72 h收集细胞进行流式细胞仪TUNEL法观察各组细胞凋亡率,培养后24 h Western blot法检测ROCK1及cleaved caspase 3表达。结果分离的骨髓单个核细胞CD29（＋）、CD44（＋）、CD90（＋）、CD34（－）,三系分化后茜素红染色（＋）,油红O染色（＋）,甲苯胺蓝染色（＋）。 Y－27632能明显降低由于缺血清培养导致的BMSCs的凋亡率（P＜0.01）,Y－27632能够明显降低ROCK及cleaved－caspase 3表达（ P＜0.01）。结论分离的骨髓单个核细胞就是骨髓间充质干细胞。Y－27632能够抑制由于缺血清培养导致的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡。     

Over-expression of VEGF in marrow stromal cells promotes angiogenesis in rats with cerebral infarction via the synergistic effects of VEGF and Ang-2

This study explored whether the transplantation of modified marrow stromal cells (MSCs) has angiogenic effects in a left middle cerebral artery occlusion infarction/reperfusion (MCAO I/R) rat model and preliminarily examined the mechanism of angiogenesis following cerebral infarction.MSCs were isolated by using a direct adherent method and cultured.Vascular endothelial growth factor (VEGF) was transfected into MSCs by employing the liposome transfection.The transfection efficiency was measured by the optical density method.The protein expression of VEGF gene before and after transfection was measured by Western blotting.SD rat model of transient occlusion of the left middle cerebral artery was established by using an approach of intra-luminal occlusion.Tetrazolium (TTC) and HE staining were performed to observe the cerebral infarction.ELISAs were used to measure the levels of VEGF in the rat cerebral tissues.The expression patterns of angiopoietin-2 (Ang-2) and CD34 in cells surrounding the area of infarction were immunohistochemistrically oserved.Ang-2 protein expression in the tissue surrounding the area of infarction was measured by Western blotting.VEGF expression in the MSCs increased after transfection at a rate of approximately 28%±3.4%.ELISA showed that the expression of VEGF in the cerebral tissue was significantly increased after induction of infarction,peaking on the 4th day and decreasing to the levels of the sham surgery group (normal) within 7 to 10 days.The VEGF level was significantly higher at each time point in the VEGF-MSC and MSC groups compared to the model group.Moreover,the VEGF level was higher in the VEGF-MSC group than in the MSC group and stayed relatively high until the 10th day.The immunohistochemical results showed that 10 days after the infarction,the number of Ang-2 and CD34-expressing cells in the area surrounding the infarction was significantly higher in the VEGF-MSC group and the MSC group compared to the model group.Moreover,the VEGF level was higher in the VEGF-MSC group th     

Combinatorial effects of NaomaiYihao Capsules(脑脉一号胶囊) and vascular endothelial growth factor gene-transfected bone marrow mesenchymal stem cells on angiogenesis in cerebral ischemic tis sues in rats

OBJECTIVE:To investigate the combinatorial effects of Naomai Yihao(NMYH) Capsules(脑脉一号胶囊) and vascular endothelial growth factor(VEGF) gene-transfected bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) on angiogenesis in cerebral ischemic tissues in rats and the mechanism.METHOD:BMSCs were isolated and cultured from bone marrow by an adherence method.Then,BMSCs were transfected with the eukaryotic expression plasmid pEGFP-VEGF 165 by positive ionic liposome transfection.A rat model of middle cerebral artery occlusion(MCAO) was established.Rats were allocated to six groups:model,BMSC,VEGF gene-transfected BMSC transplantation(BMSC/VEGF),NMYH,combined NMYH and BMSC/VEGF(combined treatment group) and sham operation groups.The behavioral rating score(BRS) of rat and the expression of CD34 and VEGF in brain tis sue were measured by immunohistochemistry on days 7,14 and 21 after reperfusion.Angiogenesi was observed and evaluated with laser scanning confocal microscopy.RESULTS:The BRS of rats in NMYH,BMSC transplan tation and combined treatment groups was significantly lower than that of the model group(P< 0.001),with no significant difference between NMYH and transplantation groups(P=0.619).The expression of CD34 andVEGF in NMYH,transplanta tion and combined treatment groups increased(P< 0.001),with a significant difference between NMYH and transplantation groups(P<0.001).The blood vessel area in NMYH,transplantation and com bined treatment groups was significantly increased(P<0.05),without a significant difference between NMYH and transplantation groups(P=0.873).CONCLUSIONS:VEGF gene-transfected BMSCs im prove angiogenesis in the cerebral ischemic area NMYH Capsules promote angiogenesis in MCAO rats treated with BMSC transplantation,which show an improved BRS.The mechanism of angio genesis may be related to up-regulation ofVEGF ex pression.     

大黄酚对局灶性脑缺血再灌注小鼠缺血半暗带区HIF-1α与VEGF表达的影响

目的 研究大黄酚(chrysophanol, CHR)对局灶性脑缺血再灌注小鼠缺血半暗带区缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响,探究CHR对脑缺血再灌注损伤的长期脑保护机制。方法 采用数字表法随机将18只健康雄性2月龄C57BL小鼠分为3组:假手术(Sham)组、大脑中动脉梗塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)组、CHR组(自造模当日至脑缺血再灌注后14 d按0.1 mg·kg^-1·d^-1腹腔注射CHR),每组6只。线栓法制作小鼠MCAO模型,缺血45 min后拔出线栓进行再灌注。于再灌注14 d将小鼠处死、取脑,通过免疫荧光染色方法检测脑组织冰冻切片缺血半暗带区内HIF-1α及VEGF水平,并通过免疫荧光双标染色方法确定HIF-1α、VEGF是否在神经元中表达。结果 1)Sham组小鼠脑内偶见HIF-1α阳性细胞。MCAO组小鼠脑缺血半暗带区HIF-1α的表达水平比Sham组显著升高(P<0.05)。经CHR治疗14 d的脑缺血再灌注小鼠半暗带区内HIF-1α的表达水平比MCAO组显著减少(P<0.05)。2)Sham组小鼠脑内可见大量的VEGF阳性细胞。MCAO组小鼠脑缺血半暗带区VEGF的表达水平比Sham组显著降低(P<0.05)。经CHR治疗14 d的脑缺血再灌注小鼠半暗带区内VEGF的表达水平比MCAO组显著增加(P<0.05)。3)在小鼠脑缺血半暗带区,HIF-1α或VEGF分别与神经元标志物NeuN共定位。结论 CHR可能通过下调HIF-1α的表达水平、上调VEGF的表达水平,减少神经元损伤,从而对脑缺血再灌注损伤发挥长期神经保护作用。     

PTD-BDNF对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的观察PTD—BDNF在实验动物体内对脑缺血再灌注损伤的治疗效果。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型。PTD—BDNF组于缺血再灌注后静脉注射PTD—BDNF 2mg／kg,对照组注射等体积生理盐水。采用TTC染色、HE染色及TUNNEL染色分析PTD—BDNF对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。结果在大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中,与对照组相比,PTD—BDNF融合蛋白使脑缺血梗死体积百分比从18．20％降至10．12％（n=4,P〈0．01）。HE染色可见PTD—BDNF组脑组织缺血坏死程度明显减轻,细胞核皱缩、碎裂现象减少。TUNNEL染色显示梗死灶周边平均每个视野TUNNEL阳性细胞率,从51．24％降至23．54％（n=6,P〈0．01）。结论PTD—BDNF融合蛋白经静脉给药后能通过血脑屏障发挥神经保护作用,减轻脑缺血再灌注损伤,改善神经功能。     

一氧化氮在大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤中对神经生长因子和脑源性神经营养因子表达的影响

目的 采用大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,研究大鼠脑缺血再灌注后不同时间点脑缺血半暗带区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,以及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)抑制剂 N-硝基-L-精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-argininic methyl ester, L-NAME)对脑缺血大鼠再灌注后NGF和BDNF表达的影响,探讨脑缺血损伤的深层机制。方法 将42只健康雄性Sprague-Dawley大鼠采用数字表法随机分为7组:假手术(Sham)组;MCAO再灌注0 h(MCAO 0 h)组;MCAO再灌注6 h(MCAO 6 h)组;MCAO再灌注12 h(MCAO 12 h)组;MCAO再灌注24 h(MCAO 24 h)组;MCAO再灌注72 h(MCAO 72 h)组以及MCAO 24 h+L-NAME 组(于MCAO前30 min腹腔注射L-NAME,剂量为1 mg/kg)。每组6只大鼠。采用改良线栓法制备大鼠MCAO再灌注模型,于缺血90 min 后拔出线栓进行再灌注。免疫荧光染色法检测再灌注大鼠脑组织缺血半暗带区NGF和BDNF的表达。免疫荧光双标染色法将NO所致的组织损伤标志物3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine, 3-NT)分别与BDNF和NGF共定位。结果 MCAO组大鼠再灌注后0、6 h,脑缺血半暗带区域几乎未见NGF和BDNF阳性细胞。再灌注12 h,可见NGF和BDNF阳性细胞。再灌注24 h,半暗带区NGF和BDNF阳性细胞数较再灌注12 h组进一步增多(P<0.05)。至再灌注72 h,半暗带区NGF和BDNF阳性染细胞数较再灌注24 h组减少(P<0.05)。MCAO再灌注24 h组大鼠缺血半暗带区,3-NT分别与NGF和BDNF免疫荧光染色共定位。Sham组大鼠未见3-NT和NGF双标阳性细胞,MCAO再灌注24 h组大鼠半暗带区可见大量3-NT和NGF双标阳性细胞。给予L-NAME后,半暗带区3-NT和NGF双标阳性细胞数目比MCAO 24 h组明显减少(P<0.05)。Sham组大鼠未见 3-NT和BDNF双标阳性细胞,MCAO再灌注24 h组大鼠半暗带区可见大量3-NT和BDNF双标阳性细胞。给予L-NAME后,缺血大鼠半暗带区3-NT和BDNF双标阳性细胞数目比MCAO 24 h组明显减少(P<0.05)。结论 脑缺血再灌注可引起大鼠脑组织缺血半暗带区NGF和BDNF表达上调,最初的上调出现在再灌注12 h左右,随再灌注时间延长,NGF和BDNF表达进一步增加,至再灌注24 h达到高峰,随后在再灌注72 h下降。L-NAME通过抑制NOS活性,减少NO的产生,减少3-NT形成,进而引起NGF和BDNF表达下降,说明脑缺血再灌注过程中,NO促进NGF和BDNF的表达。     

PEP-1-CAT抑制氧化应激条件下大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

目的:研究PEP-1-CAT融合蛋白转导入大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,MSC)的能力,以及其预处理对MSC在氧化应激损伤条件下凋亡的影响及其机制。方法:采用流式细胞仪检测MSC表面标记物CD29、CD90、CD45、CD34,并检测成脂肪细胞和成骨细胞的诱导分化能力。采用免疫荧光染色和Western blot检测融合蛋白His-CAT和His-PEP-1-CAT转导入MSC的能力。DAPI染色和流式细胞仪检测细胞的凋亡率,采用相应的试剂盒分别检测丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性的改变和线粒体膜电位的变化。结果:MSC低表达CD34(1.78%)、CD45(1.41%),高表达CD29(94.3%)、CD90(95.5%),具有成脂、成骨多向分化的潜能。PEP-1-CAT转导入MSC中呈现时间和剂量依赖性特征,而His-CAT不能进入细胞内。与His-CAT组相比较,PEP-1-CAT融合蛋白预处理组MSC的凋亡率明显降低,LDH和MDA含量明显下降,减轻了因氧化应激引起的线粒体膜电位的下降。结论:PEP-1-CAT融合蛋白通过清除活性氧,维持线粒体膜电位的稳定,显著抑制了MSC在氧化应激损伤情况下的凋亡。     

通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达的影响

目的 探究通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型（middle cerebral artery occlusion model/reperfusion model,MCAO/R）大鼠脑保护及血管新生的作用。方法 将150只SD大鼠随机分为假手术组、通督调神针灸组、常规针刺组、通心络药物组和模型对照组,每组30只。通督调神针灸组取百会穴艾灸,大椎穴刺络放血;常规针刺组选取风池、曲池、合谷、足三里、三阴交针刺治疗;通心络药物组予以通心络胶囊,每日每次1.0 g/kg灌胃。假手术组、模型对照组不予治疗;其余各组每日治疗1次,共28 d。治疗第7、14、21、28天处死大鼠立即取脑,脑组织石蜡包埋后切片,免疫组织化学法检测缺血皮质区CD34、CD133阳性表达,采用ELISA法检测VEGFR-2的表达。结果 MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达量在第7天较高,随后逐渐降低;通督调神针灸法、常规针刺及通心络药物均可不同程度促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达（P<0.05）,且通督调神针灸法促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达水平高于常规针刺及通心络药物（P<0.05）。结论 通督调神针灸法能有效促进MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达。     

G-CSF对大鼠脑缺血再灌注模型脑组织内VEGF表达的影响及脑保护作用

目的：研究粒细胞集落刺激因子（G-CSF）在大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中对脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响及脑保护作用。方法：雄性Wistar大鼠40只,随机分为试验组和对照组,参照Zea Longa报道的方法建立大鼠大脑中动脉线栓模型（MACO）。造模成功24 h后,测定神经功能缺失评分。实验组皮下给予G-CSF 20μg/（kg.d）,对照组给予等量生理盐水,连用5 d。测定动物神经功能缺失再评分,断头取脑,取距额极4~6 mm部分,分成两部分,取其一做TTC染色,测定脑梗死面积比;剩余部分做HE染色,观察光镜下结构;免疫组化测定脑梗死周围损伤区VEGF表达情况。结果采用SPSS10.0统计学软件进行统计学分析。结果：造模成功后共入组大鼠29只,其中实验组17只,对照组12只。①实验组与对照组神经功能缺失评分均主要集中在2分,统计学分析未见明显差异（P〉0.05）。②实验组梗死面积与对侧大脑半球面积比小于对照组,两组存在统计学差异（P〈0.05）。③实验组脑梗死周围损伤区组织VEGF表达水平高于对照组,两组间存在统计学差异（P〈0.05）。结论：粒细胞集落刺激因子能增强脑组织VEGF表达,减小脑梗塞面积,从而发挥脑保护的作用。但未发现对神经功能缺失评分有显著影响。     

大鼠间充质干细胞在小鼠肝损伤中的作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在四氯化碳(CCl4)导致小鼠肝损伤中的作用,为临床进行细胞移植治疗肝脏疾病提供新策略.方法 无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓,分离培养及流式细胞仪检测MSC;采用CCl4制作雌性BALB/c小鼠肝损伤模型,肝损伤小鼠随机分为MSC移植组和肝损伤对照组.MSC移植组在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSC,6周后处死小鼠,检测小鼠肝损伤程度和大鼠MSC植入情况.结果 流式细胞仪结果显示:第3代大鼠MSC CD45-/CD90 细胞为94.54%,CD45-/CD44 细胞为91.25%;肝组织学观察显示:MSC移植组肝损伤修复程度明显好于肝损伤对照组;PCR方法证实只有MSC移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在.结论 体外分离培养及扩增的大鼠MSC移植到CCl4肝损伤小鼠体内,可参与肝损伤修复,减轻CCl4导致的肝损伤.