补肾活血法对免疫介导型再障小鼠造血调控因子影响的实验研究

建立免疫介导型再障小鼠模型,胃饲补肾活血方药,观察造血调控因子IL-2、IL-10、IFNγ、TNFα分泌水平的变化.结果免疫介导型再障小鼠造血负调控因子IL-2、IFNγ、TNFα显着高于正常对照组(P《0.05),IL-10低于正常对照组,(P《0.05).补肾活血中药组IL-2、IFNγ、TNFα显著低于模型组(P《0.05),IL-10显着高于模型组(P《0.05),说明补肾活血方药可通过抑制造血负调控因子的分泌,减轻免疫因素对机体的损害,恢复机体的造血功能.     

补肾方药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

为探讨不同补肾方药治疗再障的作用机理，用温肾方、滋肾方灌喂DBA／2大鼠，抽取、制备含中药血清：Ba1b／C小鼠经^60Co5．5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含补肾方药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞，检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果：液体培养体系中滋肾血清使正常小鼠的IL-3浓度升高．而在再障小鼠IL-3浓度则表现降低，温肾血清仅使正常小鼠的IL-3浓度升高；两组中药血清对IFN-γ无影响。结论：滋肾方对IL-3的生成有影响，温肾方、滋肾方对培养体系中IFN-γ的生成均无影响。推测补肾方药临床治疗再障的作用是影响IL-3的生成。也可能影响造血组织局部IFN-γ的生成进而促进造血干／祖细胞增殖、分化有关。     

再障小鼠骨髓淋巴细胞Th1/Th2细胞亚群漂移与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用

目的:探讨再生障碍生贫血(再障)小鼠骨髓淋巴细胞的Th1/Th2细胞亚群的漂移与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用.方法:建立再障小鼠模型,取再障和正常组小鼠骨髓淋巴细胞,在终浓度为15 mg/L植物血凝素(PHA)条件下培养,用双抗体夹心ELISA方法检测小鼠骨髓淋巴细胞培养上清Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4、IL-10水平;用RT-PCR技术检测小鼠骨髓淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达强度.结果:再障小鼠IL-2、IFN-γ水平及转录因子T-bet mRNA表达显著高于正常组(P<0.01);而IL-4、IL-10水平及GATA-3 mRNA表达水平明显低于正常组(P<0.01).结论:再障小鼠出现Th细胞向Th1亚群漂移现象,导致机体Th1细胞的优势应答状态,从而诱导细胞毒性T淋巴细胞对造血干细胞的细胞毒作用,而T-bet表达增强与GATA-3低表达可能是再障Th1优势分化的重要原因.     

补肾调肝化瘀中药对再障大鼠血清TNF-α、IL-1β水平的影响

目的:建立白消安诱发造血功能障碍大鼠模型,胃饲补肾调肝化瘀中药,观察血清TNF-a、IL-1β水平的变化。结果:白消安诱发造血功能障碍大鼠TNF-a显著高于正常对照组(P<0.05),IL-1β低于正常对照组(P<0.05);补肾调肝化瘀中药治疗组TNF-a显著低于模型组(P<0.05),IL-1β显著高于模型组(P<0.05)。结论:补肾调肝化瘀中药可通过改善造血系统细胞因子分泌异常,减轻免疫因素对机体的损害,促进骨髓造血功能的恢复。     

健脾补肾活血方药对再生障碍性贫血小鼠CTL介导的造血抑制因子影响

目的探讨细胞毒性T细胞介导的造血抑制因子对再生障碍性贫血的作用,分析健脾补肾活血方药的免疫调控机制。方法采用流式细胞仪检测不同拆方分组免疫介导再障小鼠脾淋巴细胞表面抗原CD8、γδTCR的表达,ELISA法检测各组小鼠培养细胞γ-IFN、α-TNF水平,观察其变化。结果再障组CD8+、γδTCR+T比例明显上升,γ-IFN、α-TNF水平亦升高,健脾补肾活血全方组CD8+、γδTCR+T下降,γ-IFN、α-TNF水平降低,与再障对照组比较有明显差异(P<0.001),健脾补肾组、温肾组、滋肾组、CSA组均有不同影响,健脾组、活血组作用不显。结论细胞毒性T细胞增加与造血负调控因子表达升高是导致再障的主要机制,两者具有相关性,健脾补肾活血方药可通过调节该免疫环节恢复骨髓造血,组方中以补肾中药为核心,健脾、活血中药起协同作用。     

活血方对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

目的 检测免疫介导再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓造血细胞在含活血药血清液体培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度,探讨活血方药治疗再障的作用机制。方法 用活血方中药煎剂灌喂SD大鼠,抽取、制备含中药血清;Balb/c小鼠经60Co 5.5 Gy γ射线照射后,由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液,形成免疫介导再障模型。在含活血药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞,检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果 正常活血血清组IL-3浓度显著高于正常对照血清组(P<0.01),而再障活血血清组IL-3浓度则显著低于再障对照血清组(P<0.01),正常活血血清组、正常对照血清组IFN-γ均为0。再障活血血清组、再障对照血清组两组间IFN-γ无差异(P>0.05)。结论 活血方药临床治疗再障的作用可能是影响IL-3的生成而进一步促进造血干/祖细胞增殖、分化。     

人脐带间充质干细胞对再生障碍性贫血小鼠造血的影响

目的:通过从脐带中分离和培养脐带间充质干细胞(MSCs),探讨其对再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓造血的影响。方法:原代贴壁法培养人脐带MSCs,将小鼠分为模型组、对照组、MSCs输注组进行实验。经静脉输注免疫介导方法建立再障模型小鼠,分别于3、7、14、21、28 d观察其外周血象指标变化和骨髓组织形态;ELISA检测造血负调控因子(IFN-γ)的水平,计数骨髓造血干细胞集落生成单位。结果:原代培养中脐带组织块直接贴壁后8～10 d,边缘爬出长梭形MSCs,随传代培养呈平行、漩涡状生长;再障小鼠经MSCs输注治疗后外周血象明显增高,IFN-γ水平下降(P0.01);治疗组骨髓红细胞集落形成单位与粒-巨噬细胞集落形成单位均较模型组明显增高(P0.01),成纤维细胞集落形成单位计数差异无统计学意义(P0.05)。结论:人脐带来源的MSCs对再障模型小鼠骨髓可发挥造血支持作用。     

补肾益髓法对辐射损伤小鼠造血生长因子的影响

目的探讨补肾益髓法的代表药益髓生血颗粒促进骨髓造血的机制。方法 78只雄性昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、益髓生血颗粒高、中、低剂量组,每组13只。采用60Co-γ射线全身一次性照射造成小鼠骨髓急性损伤模型。以益髓生血颗粒高、中、低3个剂量及重组人粒细胞刺激因子分别作用于骨髓急性损伤小鼠14 d后,采用放射免疫法检测外周血及骨髓中干细胞因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)、粒-单系祖细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒系祖细胞集落刺激因子(G-CSF)的含量。结果与模型组相比,益髓生血颗粒高剂量组血中GM-CSF、骨髓中IL-3和SCF含量明显升高(P0.05),中剂量组血中GM-CSF、骨髓中IL-3含量明显升高(P0.05),低剂量组血及骨髓中GM-CSF、骨髓中IL-3和SCF含量明显升高(P0.05)。结论补肾益髓法可增加辐射损伤小鼠骨髓微环境中造血生长因子GM-CSF、IL-3、SCF的含量,从而有效促进髓系造血。     

补肾调肝化瘀方对再生障碍性贫血模型大鼠的调控因子的影响

目的:探讨补肾调肝化瘀方治疗再生障碍性贫血(CAA)的免疫学作用机理。方法:用马利兰造成大鼠AA模型,观察该方对AA模型大鼠造血细胞,造血调控因子白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-a)的作用。结果:显示补肾调肝化瘀方对马利兰引起的大鼠外周血白细胞、血红蛋白和血小板数量的恢复有明显促进作用,并且能降低IL-2、TNF?a的含量。结论:该方具有改善细胞因子分泌异常,促进骨髓造血功能恢复的作用。     

泻肝方药血清免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

目的：检测免疫介导再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓造血细胞在含泻肝方血清的液体培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度，探讨泻肝方药治疗再障的作用机理。方法：用泻肝方灌喂DBA/2大鼠，抽取、制备含中药血清；Balb／C小鼠经^60Co5 Gy γ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含泻肝方血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞，检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果：泻肝方药对再障小鼠IL-3、IFN-γ的总量无明显影响。结论：泻肝方药可能通过使局部IFN-γ浓度降低进而影响造血干／祖细胞增殖、分化。     

除湿止痒合剂对变应性接触性皮炎小鼠模型Th1/Th2相关细胞因子水平的影响

目的:观察除湿止痒合剂对变应接触性皮炎小鼠模型血清中IL-4、INF-γ的变化影响.方法:将48只BALB/C小鼠随机分成4组(空白组,模型组,对照组,中药组),用二硝基氟苯(DNFB)制成变应接触性皮炎小鼠模型,灌胃给药,观察各组小鼠耳部肿胀厚度差的变化,并以酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠IL-4、INF-γ的水平.结果:中药组及对照组耳厚度差均小于模型组(P<0.05),中药组、对照组小鼠血清中IL-4水平低于模型组小鼠(P<0.05),INF-γ水平无明显差异(P>0.05).结论:除湿止瘁合剂对变应接触性皮炎小鼠模型血清中IL-4有明显抑制作用,提示该药Th2具有一定的调节作用.     

阿胶酶解成分对贫血小鼠造血系统的保护机制

运用5-氟脲嘧啶制备的小鼠贫血模型研究降解分离后所得阿胶有效组分A、B的升高红、白血球的作用机制.结果显示:体外消化液中提取的A、B组分能促进贫血小鼠外周血白细胞和红细胞的升高,促进骨髓和脾造血干/祖细胞集落BFU-E,CFU-E,CFU-GM的增加,提高外周血GM-CSF,IL-6,EPO的含量,降低负相造血因子INF-γ、TGF-β含量,刺激肝和肾EPO和GMCSF mRNA表达.从而说明从体外模拟人胃、肠的消化系统分离的阿胶组分A、B能够刺激造血.该有效补血活性成分的升高红、白血球的作用机制可能与保护贫血小鼠造血微环境和造血干、祖细胞,刺激髓外造血器官相关造血细胞因子表达有关.     

Th1/Th2细胞失衡对重型再生障碍性贫血CD34+细胞的免疫抑制效应

再生障碍性贫血(再障)的发病与T细胞介导的造血抑制有密切联系[1,2].我们曾发现,重型再障患者骨髓的Th1样细胞因子干扰素(IFN)γ水平明显上调,而Th2样因子IL-4却大致正常,间接提示重型再障可能存在Th1/Th2细胞比例失衡[3].为探讨Th1/Th2细胞失衡对骨髓造血功能的效应,们利用CD34+细胞和Th细胞的混合培养体系,在体外模拟Th1/Th2细胞的交互调节过程,观察了对CD34+细胞扩增和集落形成的影响.     

川芎嗪改善免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓微环境作用的研究

通过建立免疫介导的再生障碍性贫血(再障)小鼠模型,探讨川芎嗪对再障骨髓微环境的作用机制。结果表明:川芎嗪组PbO_2为(10.32±1.27)kPa,显著高于再障组(4.32±2.86)kPa,P<0.01。再障组骨髓傲血管扩张、断裂、痴血,造血组织容量百分率为24.9％±9.6％,CFU-F为12.5±7.3/2×10~6骨髓有核细胞(BM-NC).川芎嗪组骨髓微血管较清楚、完整、无断裂及瘀血,造血组织容量百分率为52.8％±15.6％,CFU-F为     

再障经验方对急性再生障碍性贫血影响的体外研究

目的:探讨再障经验方治疗急性再生障碍性贫血的机制。方法:采用酶联免疫法检测急性再生障碍性贫血患者及正常对照者骨髓上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α),γ干扰素(IFN-γ)、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的含量,并观察再障经验方在体外对骨髓单个核细胞经植物血球凝集素诱生的造血负调控因子的调变作用。结果:急性再生障碍性贫血患者骨髓上清液中TNF-α、IFN-γ、sIL-2R的含量明显高于正常对照者,有显著性差异(P<0.05);体外试验显示,在多数急性再生障碍性贫血患者中再障经验方可明显抑制IFN-γ、sIL-2R的分泌(P<0.05或P<0.01),而对TNF-α无明显影响(P>0.05)。结论:再障经验方可能通过下调IFN-γ、sIL-2R的含量而促进造血功能恢复,起到治疗急性再生障碍性贫血的作用。     

当归六黄汤对瘀热内结模型小鼠Th1/Th2细胞因子的影响

目的探讨当归六黄汤对反复呼吸道感染(RRST)瘀热内结型小鼠Th1/Th2细胞因子的调控。方法 ICR小鼠随机分为正常组、模型组、中药组(当归六黄汤组)与西药组(匹多莫德组),正常组腹腔注射生理盐水,余3组小鼠分别予腹腔注射脂多糖(LPS)2 mg/kg(用生理盐水配制成2mg/ml);正常组和模型组给予生理盐水灌胃,中药组给予当归六黄汤颗粒,西药组给予匹多莫德10ml/(kg·d);连续给药4周。用ELISA法测小鼠血清IL-4、IL-12、IL-10、INF-γ含量。结果与正常组比较,模型组小鼠血清中IL-4、IL-10水平降低,IL-12、IFN-γ水平增高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,中药组能显著降低IL-4、INF-γ水平,提高IL-12、IL-10水平,差异有统计学意义(P0.05)。结论当归六黄汤对瘀热内结型反复呼吸道感染(RRST)小鼠的Th1/Th2细胞因子具有调节作用,其既可以上调Th1类细胞因子IL-12,同时上调Th2类因子IL-10,从而控制反复呼吸道感染的发生。     

健脾补肾活血方及其拆方对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响

目的:采用细胞培养方法,从细胞凋亡角度探讨健脾补肾活血方对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)模型小鼠的疗效及其促进骨髓造血的作用机制。方法:复制AA小鼠模型并制备AA小鼠血清,以健脾补肾活血方及其拆方灌胃大鼠制备含中药血清,共同培养正常小鼠骨髓造血细胞,24 h后采用流式细胞仪和透射电镜观察细胞的凋亡情况。结果:AA小鼠血清能诱导正常小鼠骨髓造血细胞发生凋亡,经健脾补肾活血方及其拆方的药物血清作用后,各组小鼠骨髓造血细胞的凋亡率均下降,其中,补肾方的疗效优于健脾方和活血方,健脾补肾活血方(全方)的效果最好。电镜观察造血细胞超微结构的结果亦表明补肾方的作用较好,但以全方作用最佳。结论:健脾补肾活血方及其拆方均可不同程度地降低骨髓细胞凋亡率,可促进骨髓恢复造血功能。     

平喘合剂对哮喘患儿IgE、 IL -2、 IL -4及IFN -γ水平的影响及机理探讨

目的:观察平喘合剂对哮喘患儿IgE、IL-2、IL -4及IFN -γ水平的影响,探讨其作用机制.方法:120例哮喘患儿随机分为治疗组60例和中药对照组、西药对照组各30例,分别测定治疗前后血清总IgE、IL-2、IL-4及IFN -γ水平.结果:平喘合剂可以明显降低血清总IgE、IL-2、IL-4水平,提高IFN -...     

扶正养营汤对免疫介导再生障碍性贫血小鼠的治疗作用

目的：观察扶正养营汤对免疫介导再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓增殖及外周血IL-2水平的影响。方法：采用完全随机数字表法将制作的免疫介导再障小鼠(BALB/c)模型40只分为4组,另用10只同批正常小鼠设为正常对照组(E组)。采用盲法分别胃饲生理盐水(A组及E组)、扶正养营汤(B组)、环孢霉素A (C组)、扶正养营汤+环孢霉素A (D组)共10d。检测各组小鼠外周血象、骨髓有核细胞计数、测定各组骨髓造血组织容量及外周血IL-2水平。结果：A组小鼠外周血象、骨髓有核细胞数、造血组织容量显著低于E组(P<0.05);B,C,D组较A组增加(P<0.05),尤以D组最为明显(P<0.05);而B组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组小鼠外周血IL-2水平明显高于E组(P<0.05);B,C,D组低于A组(P<0.05);D组低于B组及C组(P<0.05);B组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：扶正养营汤具有促进免疫介导再障小鼠骨髓增殖,降低其外周血IL-2水平的作用。     

化瘀补肾方对去卵巢小鼠骨折愈合及氧化应激的影响

目的:观察化瘀补肾方对去卵巢小鼠骨折愈合及氧化应激的影响。方法:3月龄雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、化瘀补肾方组,每组10只。模型组和化瘀补肾方组小鼠行双侧卵巢切除术(OVX),假手术组仅切除卵巢周围部分脂肪组织。术后3个月,各组小鼠均建立左侧胫骨骨折复合髓内固定模型。造模后,化瘀补肾方组小鼠灌胃给予7.33 g/kg化瘀补肾方药液,另两组小鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液,连续14 d。末次给药后,取血,分离胫骨组织。X线及Micro-CT扫描观察骨折愈合情况;阿尔新蓝/橙黄G染色后镜下观察骨痂组织形态学变化。试剂盒测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;免疫组化检测骨痂组织Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达;免疫荧光检测骨痂组织Runt相关转录因子2(Runx2)、SOD表达;试剂盒检测骨痂组织MDA含量。TUNEL法检测骨痂组织细胞凋亡。结果:(1)胫骨X线及Micro-CT检测显示,模型组小鼠骨痂稀疏,骨折线清晰;化瘀补肾方组小鼠骨痂较致密,骨折线略模糊。(2)阿尔新蓝/橙黄G染色显示,模型组小鼠骨痂组织中软骨基质较多,骨小梁稀疏;化瘀补肾方组骨痂组织中软骨基质较少,骨小梁致密。(3)模型组骨痂组织Runx2、CollagenⅠ的表达较假手术组显著降低(P0.01),化瘀补肾方组骨痂组织Runx2、 CollagenⅠ的表达较模型组明显升高(P0.05)。(4)化瘀补肾方组骨痂组织细胞凋亡较模型组明显减少(P0.01)。(5)与假手术组相比,模型组小鼠血清及骨痂组织SOD水平显著降低(P0.01),MDA含量显著升高(P0.01);与模型组相比,化瘀补肾方组小鼠血清及骨痂组织SOD水平明显升高(P0.05),MDA含量明显下降(P0.01)。结论:化瘀补肾方能够促进去卵巢小鼠的骨折愈合,其作用机制可能与提高血清及局部骨痂组织的抗氧化酶水平、减轻氧化应激状态、抑制细胞凋亡有关。