B7基因转染对小鼠肝癌细胞致瘤性的影响

目的：研究小鼠Ｂ７基因转染对小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ６细胞株细胞形态、生长速度及致瘤性的影响。方法：用逆转录病毒载体，将小鼠Ｂ７基因导入小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ６细胞株中，经Ｇ４１８筛选，获得高表达Ｂ７分子的阳性细胞克隆，采用ＣＴＬＡ４Ｉｇ的间接免疫荧光法检测Ｂ７分子的表达情况，并观察了Ｂ７基因转染对细胞形态、生长速度及致瘤性的影响。结果：①亲本小鼠肝癌细胞株Ｈｅｐａｌ６不表达Ｂ７分子，转染Ｂ７基因的Ｈｅｐａｌ６细胞高表达Ｂ７分子；②转染Ｂ７基因的Ｈｅｐａｌ６细胞与亲本Ｈｅｐａｌ６细胞相比，体外生长速度和细胞形态无明显改变，但免疫原性大大增强，致瘤性消失。结论：Ｂ７基因转染使得小鼠肝癌细胞株Ｈｅｐａｌ６免疫原性大大增强，致瘤性消失     

白细胞介素12基因转染抑制B16细胞成瘤性及转移性的研究

目的探讨白细胞介素１２（ＩＬ１２）基因转移对弱免疫原性的小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞生长与转移的影响。方法构建小鼠ＩＬ１２两个亚单位ｐ４０、ｐ３５ｃＤＮＡ表达载体;经脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮ介导,将两真核表达载体同时导入Ｂ１６细胞;应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测ｐ４０、ｐ３５ｍＲＮＡ表达;用生物学活性检测法（致分裂激活的活化的小鼠脾细胞增殖）检测ＩＬ１２分泌;经皮下或静脉接种肿瘤细胞,检测其体内成瘤性及转移性。结果ＩＬ１２基因转染的Ｂ１６细胞（Ｂ１６ＴＩＬ１２）能够表达ｐ４０及ｐ３５ｍＲＮＡ,分泌有生物活性的ＩＬ１２;Ｂ１６ＴＩＬ１２细胞体内成瘤性降低,成瘤延迟,肿瘤生长慢,荷瘤小鼠存活期延长（Ｐ＜００１）;肺转移率降低,肺内转移灶明显减少（Ｐ＜００１）。结论ＩＬ１２基因转染可明显抑制肿瘤生长与转移     

B7修饰的肿瘤细胞疫苗体内外抗肿瘤作用

目的：研究小鼠Ｂ７修饰的肿瘤细胞疫苗的体内外抗肿瘤作用。方法：应用逆转录病毒载体，将小鼠Ｂ７１和Ｂ７２导入小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ６细胞株中，Ｇ４１８筛选后获高表达Ｂ７分子的阳性细胞克隆，经丝裂霉素处理制备成肿瘤细胞疫苗（ＴＣＶ），观察ＴＣＶＢ７体外刺激的脾细胞对不同肿瘤细胞系的抗瘤活性及对不同动物模型的体内免疫保护作用和免疫治疗作用。结果：①ＴＣＶＢ７体外刺激的脾细胞对亲本肝癌细胞和小鼠ＮＫ敏感的Ｙａｃ１细胞的体外细胞毒作用明显增强；②在免疫模型中，经ＴＣＶＢ７免疫的小鼠，能对同系肝癌细胞产生完全的免疫保护作用，并能保持无瘤状态长期存活；③在早期模型中，经ＴＣＶＢ７治疗的小鼠，能部分产生对同系肝癌细胞的免疫治疗作用，肿瘤的生长速度减缓，荷瘤小鼠的生存期延长。肿瘤组织（尤其是肿块包膜下）中淋巴细胞浸润增加；④在晚期模型中，经ＴＣＶＢ７治疗的小鼠，未能产生对同系肝癌细胞的免疫治疗作用。结论：Ｂ７修饰的肿瘤细胞疫苗能明显刺激增强体内外抗肿瘤作用。     

逆转录病毒介导的重组TNF－α抗小鼠肿瘤效应的研究

利用逆转录病毒介导的基因转移技术，将重组ＴＮＦ－α基因导入小鼠平滑肌肉瘤细胞系Ｓ１８０中，对转导后肿瘤细胞的增殖、致瘤效应等进行体外和体内的观察。结果表明；逆转录病毒中介的重组ＴＮＦ－α基因导入，在小鼠体外和体内都有显著的抗肿瘤效应，这为ＴＮＦ－α的肿瘤基因治疗的临床应用奠定了基础。     

一株小鼠自发性乳腺癌细胞系MA—891的建立及其免疫生物学…

从津白Ⅱ号小鼠自发性乳腺癌ＴＡ２ＭＡ８９１建立了体外长期传代细胞系ＭＡ８９１。ＭＡ８９１细胞保持了ＴＡ２ＭＡ８９１的高转移特性，皮下接种后肿瘤进行生长，并无一例外地发生肿瘤肺转移。ＭＡ８９１细胞的免疫原性极弱，表现为：（１）淋巴细胞－肿瘤细胞混合培养（ＭＬＴＣ）只能诱导出低水平的细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬ）；（２）肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）含量少，体外经ＩＬ－２扩增后只表现出微弱的细胞毒活性；（３）在上     

B7修饰的肿瘤细胞疫苗体内外抗肿瘤作用

目的：研究小鼠Ｂ７修饰的肿瘤细胞疫苗的体内外抗肿瘤作用，方法：应用逆转录病毒载体，将小鼠Ｂ７－１和Ｂ７－２导入小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ－６细胞株中，Ｇ４１８筛选后获高表达Ｂ７分子的阳性细胞克隆，经丝裂霉素处理制备成肿瘤细胞疫苗（ＴＣＶ），观察ＴＣＶＢ７体外刺激的脾细胞对不同肿瘤细胞系的抗瘤活性及对不同动物模型的体内免疫保护作用和免疫治疗作用。结果：（１）ＴＣＶＢ７体外刺激的脾细胞对亲本肝癌细胞和小鼠     

GM—CSF基因转导的肿瘤疫苗研究

目的：观察ＧＭ－ＣＳＦ基因转导的肿瘤细胞免疫小鼠的抗肿瘤效果。方法：用电穿孔法将小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的表达质粒导入ＲＭＡ淋巴瘤细胞,经Ｇ４１８筛选后,将ＧＭ－ＣＳＦ高表达克隆（ＲＭＡ－ＧＭ）细胞皮下接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,观察成瘤性,以及经丝裂霉素－Ｃ处理灭活的ＲＭＡ－ＧＭ细胞免疫小鼠,观察抗肿瘤作用。结果：ＲＭＡ－ＧＭ细胞免疫小鼠及亲代肿瘤细胞攻击后与对照组相比,肿瘤生长速度减慢,小鼠生存期明显延长     

B7-1基因修饰的肿瘤细胞瘤苗抗小鼠胃癌效应的实验研究

探讨Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗对小鼠胃癌的治疗效果。方法：在已建立高表达Ｂ７－１分子的小鼠前胃癌细胞系ＭＦＣ－Ｂ７的基础上,观察ＭＦＣ－Ｂ７细胞体外激活脾淋巴细胞的能力,体内成瘤性变化及作为瘤苗对荷瘤鼠胃癌的治疗效果。结论：Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞免疫原性明显增强,有希望作为瘤苗用于此类肿瘤的治疗。     

B7—1基因转染小鼠EL—4淋巴瘤细胞的致瘤性研究

目的研究Ｂ７１基因转染小鼠ＥＬ４淋巴瘤细胞的致瘤性，为制备基因转染瘤苗提供实验依据。方法将Ｂ７１基因转染小鼠ＥＬ４淋巴瘤细胞后，用Ｇ４１８选择和克隆的方法获得高表达Ｂ７１分子的ＥＬ４Ｂ７１＋细胞，然后进行小鼠的体内致瘤试验。结果ＥＬ４Ｂ７１＋细胞接种小鼠后，与野生型ＥＬ４（ＥＬ４Ｗｔ）相比，肿瘤结节形成时间和荷瘤小鼠存活时间明显延长，ＥＬ４Ｂ７１＋细胞协同ＩＬ２接种小鼠后，效果更加显著。结论Ｂ７１基因转染小鼠ＥＬ４淋巴瘤细胞的致瘤性比野生型ＥＬ４（ＥＬ４Ｗｔ）低。     

病毒介导多种基因对胆管癌细胞免疫原性的影响

目的 探讨IFN－γ、IL－2或B7－1基因修饰对胆管癌细胞免疫原性的作用。方法 构建携带人IFN－γ或IL－2基因的逆转录病毒表达载体，和含人B7－1基因的腺病毒载体，导入胆管癌细胞系QBC939，运用淋巴细胞杀伤试验、肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤性分析、混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养，研究导入的目的基因对QBC939细胞免疫原性的影响。结果 导入IFN－γ基因的QBC939细胞体外能增强胆管癌病人外周血淋巴细胞杀伤亲本瘤细胞的活性；导入IL－2基因的QBC939细胞在裸鼠体内的成瘤性降低；导入B7－1基因的QBC939细胞能刺激外周血T淋巴细胞的增殖。结论 人IFN－γ、IL－2和B7－1基因修饰能增强胆管癌QBC939细胞的免疫原性。     

Co-modification of IL-2-TNFα fusion gene and B7.1 gene to murine breast tumor cells leads to improved tumor rejection and vaccine effect

Objective To improve the vaccine potency of gene-modified tumor cells.Methods Using recombinant adenoviruses, we expressed the B7.1 gene in murine breast tumor cell line EMF(6) and a subline previously transfected with retrovirus vector XdF harboring the IL-2-TNFα fusion gene.Results Immunization/challenge experiments demonstrated that IL-2-TNFα/B7.1 co-modified tumor cells possessed a lower tumorigenicity in vivo and an improved tumor-specific vaccine potency compared with single gene transfectant (P<0.05). Three weeks after immunization with a variety of tumor cells, the mixed lymphocyte and tumor cells reaction assay (MLTB) and (51) Cr-release assay were performed to test cellular immunity function. The results indicated that IL-2-TNFα and B7.1 together induced a more potent antitumor immune response than either molecule alone, 25% higher than IL-2-TNFα and 20% higher than B7.1, respectively.Conclusion The IL-2-TNFα fusion gene and B7.1 gene act in concert to improve their antitumor effectiveness.     

Experimental study on the antitumor effect of mouse B7-1 gene

ＴｗｏｓｉｇｎａｌｔｈｅｏｒｙｆｏｒＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｔｕｍｏｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ［１－２］．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓｆｅｃｔ...     

Preliminary Study on the Cooperation of IL-6 and mB7-1 in the Induction of Effective Antitumor Immunity In Vitro

Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅｒｏｌｅｏｆＢ７ｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｎｇａｎｄｉｎａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｈａｓｂｅｃｏｍｅｏｎｅｏｆｔｈｅｈｏｔｓｐｏｔｓ．Ａｔｔｈｅ...     

双表达B7-1、B7-2基因肿瘤疫苗治疗小鼠肝癌优于单表达疫苗的研究

目的:研究B7-1、B7-2基因对肿瘤的免疫治疗作用。方法:应用转染有B7-1、B7-2基因的肝癌细胞株H22/B7-1、H22/B7-2,建立小鼠肝癌模型,观察小鼠成瘤期、荷瘤小鼠存活期及肿瘤结节大小。结果:各实验组动物都发生肿瘤,接种H22/B7-1 H22/B7-2组成瘤率低,对照组动物肿瘤呈进行性生长;组间成瘤潜伏期不同,与对照组相比,凡接种有H22/B7-2的小鼠肿瘤形成有迟发性;接种转B7基因细胞的小鼠肿瘤生长都较对照组慢;同时接种H22/B7-1和H22/B7-的小鼠能负载大于107的肿瘤细胞。转基因细胞在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显增强。结论:B7-1、B7-2都能增强肝癌细胞的免疫原性。B7-2在抗肿瘤早期发挥作用,B7-1随后起放大和调节作用。B7-1与B7-2联用效果优于单一应用。     

基因修饰的树突状细胞融合后的瘤苗抗肿瘤免疫应答的实验研究

目的观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因修饰的树突状细胞（ＤＣ）与肿瘤细胞融合后，体内诱导的抗肿瘤免疫应答及对荷瘤小鼠的治疗效果。方法从Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾脏中分离ＤＣ，用重组腺病毒载体进行ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰，再与Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞进行融合，通过抗Ｉａ抗体磁珠阳性选择和贴壁培养富集融合细胞。结果经灭活的、由ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰的ＤＣ与Ｂ１６．Ｆ１０融合的ＦＤ－ＧＭ能在体内诱导出更强的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ），抵抗野生型Ｂ１６．Ｆ１０细胞的再次攻击，使经治疗的肺转移荷瘤小鼠的存活期明显延长，肺转移结节显著减少。结论肿瘤细胞与ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰的树突状细胞融合后进行体内免疫，能诱导出显著的抗肿瘤免疫反应，可望成为肿瘤基因治疗的新途径。     

Anti-tumor effect of murine renal cell carcinoma cells genetically modified to express B7-1 combined with cytokine secreting fibroblasts

Recently, many experiments have shown that the expression of the costimulatory molecule B7-1 on tumor cells can induce tumor-specific immunity. These results suggest that tumor cells modified to express costimulatory molecules can be used as a potential tumor vaccine. For this purpose, we transduced B7-1 gene into renal adenocarcinoma cells of spontaneous origin (Renca) in BALB/c mouse using the retroviral vector system. Our results indicated that approximately 60% of cells expressed B7-1 gene product using the retroviral vector system, and that B7-1 transduction did not affect the expression of MHC molecules on tumor cells nor the in vitro growth rate of tumor cells, but only in vivo tumorigenicity. As for the antitumor effect on the remote site, there were no significant differences among parental Renca, Renca lac Z and Renca B7-1 sublines, although tumors grew a little more slowly in the mice injected with Renca B7-1 cells as a vaccine. Even if the growth of tumors was significantly delayed in the mice treated by Renca B7-1 as a vaccine combined with the injection of BALB/c3T3 IL-12 near to the tumor on the same or following day, no significant antitumor effects were observed when the Renca B7-1 cells were injected as a vaccine compared with cytokines near the vaccine site. These results indicated that B7-1 gene transduction can decrease the tumorigenicity of murine renal cell carcinoma cells, but fails to induce sufficient antitumor response when it is used as a tumor vaccine. It is necessary to develop immunogenicity, by such means as irradiation or a combination of appropriate cytokines, to stimulate effective tumor immunity in a therapeutic setting.     

mRNA差异显示法在分离肿瘤转移相关基因中的初步应用

用mRNA差异显示技术（mRNAdifferentialdisplay）对分别用200U／ml重组人IFN－a和IFN－Υ处理的MA891肿瘤细胞系总mRNA进行分析，分离出10个差异表达的片段，并进行了克隆。因IFN－a抑制MA891细胞系的肺转移能力，而IFN－Υ则增强其肺转移能力，故认为该10个片段所代表的基因中可能有某个或几个基因与肿瘤转移有关。     

小鼠肝癌细胞系Hepa1-6 B7.1瘤苗抗肿瘤免疫的实验研究

目的：研究小鼠肝癌细胞系Hepal-6转染B7.1基因后在体内外抗肿瘤免疫的作用。方法：采用脂质体介导的方法用pLXSNB7.1转染PA317包装细胞，经G418筛选出高滴度阳性的细胞克隆，以流式细胞仪检测B7.1分子的表达情况；用所获病毒上清进一步感染Hepal-6细胞，观察转染B7.1基因后Hepal-6细胞作为肿瘤疫苗在体内外诱发抗肿瘤免疫的情况。结果：Hepal-6/B7.1高表达B7.1分子，其致瘤性明显降低。接种小鼠后成瘤率为20%，而亲代Hepal-6细胞成瘤率为100%，转B7.1基因肿瘤细胞疫苗可抑制肿瘤生长速度，延长荷瘤小鼠生存期；且转B7.1基因肿瘤细胞疫苗具有保护性免疫反应。结论：转B7.1基因的肿瘤细胞作为肿瘤疫苗可有效地激发机体的抗肿瘤免疫反应。     

α-γ-干扰素诱导基因的差异表达

目的为分离转移相关基因,对两种干扰素诱导出现的差异表达ｃＤＮＡ片段进行序列测定。方法以α－和γ－干扰素分别处理ＭＡ８９１细胞,提取其ＲＮＡ,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ进一步确定用差异显示法所获得的基因片段的差异性。选择表达差异明显的片段进行ＤＮＡ测序。结果Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明,差异显示法得到的１０个ｃＤＮＡ片段中,４个确属差异表达片段。测序结果显示,Ｇ１５γ属尚无同源性报道的新基因;Ｃ４α与小鼠一种次要组织相容性复合体基因高度同源;Ｔ２γ与小鼠β－ａｃｔｉｎ基因高度同源;Ｔ１１γ与褐鼠高血压相关基因高度同源。结论确定了α－、γ－干扰素处理ＭＡ８９１细胞出现４条ｃＤＮＡ差异显示片段的核苷酸序列,为研究其与肿瘤转移的联系打下了基础。