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目的 探究microRNA-138(miR-138)对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响并探讨其相关机制.方法 RT-PCR检测胃癌和癌旁组织中miR-138的表达及miR-138与上皮标志物E-Cadherin及间质标志物Vimentin表达的相关性;使用TargetScan 7.2预测miR-138的可能结合靶点,荧光素酶报告实验、Western blot及RT-PCR检测miR-138对SYT13的调控作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测miR-138调控SYT13对MGC803细胞侵袭迁移能力的影响.结果 miR-138在胃癌中表达下调(P<0.001),并与E-Cadherin表达呈正相关(r=0.3022,P<0.05),与Vimentin表达呈负相关(r=0.4762,P<0.05).miR-138与SYT13存在结合位点,共转染miR-138和SYT13,荧光素酶活性降低(P<0.05),过表达miR-138,SYT13的mRNA(P <0.05)和蛋白(P <0.001)表达被抑制.过表达miR-138抑制MGC803细胞侵袭能力(P<0.001),而同时过表达SYT13,MGC803细胞侵袭能力恢复(P <0.001).同时miR-138抑制胃癌细胞迁移,而SYT13促进迁移能力.结论 miR-138可以通过下调SYT13的表达抑制胃癌MGC803细胞的侵袭和迁移能力. 相似文献
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《陕西医学杂志》2017,(10):1332-1334
目的:探讨miR-9对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:慢病毒悬液感染鼻咽癌C666-1细胞,流式细胞仪分选并鉴定,获得表达miR-9的C666-1细胞及对照细胞,应用体外划痕实验、Transwell侵袭实验分析miR-9对鼻咽癌C666-1细胞体外迁移、侵袭能力的影响。结果:制作划痕12h后,穿越划痕的C666-1/miR-9细胞数(47.167±2.552)显著少于C666-1/PLVTHM细胞(95.917±3.118)(t=41.912,P<0.01);接种12h后,穿透基质胶的C666-1/miR-9细胞数(32.667±3.257)显著少于C666-1/PLVTHM细胞(81.833±4.366)(t=31.270,P<0.01)。结论:miR-9过表达能抑制鼻咽癌细胞的体外迁移和侵袭能力,在鼻咽癌中发挥抑癌作用。 相似文献
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目的 探讨慢病毒介导miR-145对成骨肉瘤细胞MG-63侵袭及迁移能力的影响。 方法 通过慢病毒携带miR-145表达载体转染骨肉瘤MG-63细胞,实验分为:转染组(转染miR-145阳性序列)、对照组(转染阴性对照序列)、空白组(PBS)。利用生物信息学软件预测血管内皮生长因子(VEGF)为miR-145的候选靶基因,利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-145对靶基因VEGF的直接调控作用。实时荧光定量PCR检测基因表达,Western-blot检测蛋白表达,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移运动能力。 结果 与对照组比较,转染组细胞内荧光素酶活性明显下降(P<0.05); 与对照组和空白组比较,转染组miR-145 mRNA的表达量显著增加(P<0.05),VEGF mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.05),穿膜细胞数及细胞划痕愈合率均显著降低(P<0.05)。 结论 miR-145通过靶向VEGF基因,进而抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭及迁移能力。 相似文献
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目的:探究爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)下调miR-34c促进鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。方法:采用qPCR检测EBV阴性鼻咽癌SUNE1、CNE2、HK1细胞和EBV阳性C666-1细胞中miR-34c表达水平。构建miR-34c模拟物以分析miR-34c对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。使用CCK-8、划痕愈合试验以及Transwell细胞侵袭试验检测鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western blotting测定细胞中迁移、侵袭相关蛋白以及Erk1/2信号通路蛋白的表达水平。结果:miR-34c在EBV阳性C666-1细胞表达下调(P<0.05)。CCK-8结果显示,miR-34c组C666-1细胞在16、24、48 h的活力明显低于EBV组(P<0.01)。划痕试验和Transwell试验结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭能力均明显增强(P<0.01)。Western blotting结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭相关蛋白Vimentin、Snail、MMP-2、MMP-3及E... 相似文献
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目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P<0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P<0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因. 相似文献
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目的探讨沉默环状RNA hsa_circ_0124696(circROBO1)对鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移的影响机制。 方法qRT-PCR检测鼻咽癌及癌旁组织中circROBO1表达。采用干扰小RNA(siRNA)沉默鼻咽癌CNE2细胞中circROBO1的表达,Transwell及HE染色检测circROBO1对CNE2细胞迁移能力和体内肺转移的影响。TargetScan在线软件预测circROBO1下游miR-217与下游靶基因KRAS的靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向调控关系。蛋白免疫印迹检测siRNA沉默CNE2细胞中circROBO1表达对KRAS的影响。 结果鼻咽癌组织中circROBO1表达高于癌旁组织(P<0.05)。与转染si-circNC的对照组相比,si-circROBO1组鼻咽癌CNE2细胞侵袭与体内肺转移能力均显著降低(P<0.05)。circROBO1下游miR-217与KRAS之间存在靶向结合位点,并且circROBO1可影响KRAS的蛋白和mRNA表达量。 结论沉默circROBO1通过miR-217下调KRAS抑制鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移。 相似文献
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目的探讨miR-34a在人鼻咽癌CNE2细胞中的生物学功能。方法采用MTT、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验分别检测过表达miR-34a对人鼻咽癌CNE2细胞的生长与侵袭作用。结果 MTT检测发现,过表达miR-34a可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长增殖;细胞划痕和Transwell侵袭实验显示,在鼻咽癌CNE2细胞中过表达miR-34a 48 h后划痕愈合率为40.3%±9.0%,与对照组(76.3%±6.8%)比较,能明显减缓CNE2细胞划痕的愈合,转染miR-34a mimics 48 h后穿过基底膜的细胞数为71±10,与对照组(147±5)比较,能明显减缓CNE2细胞侵袭能力(P〈0.01)。结论 miR-34a可抑制鼻咽癌CNE2细胞生长与侵袭。 相似文献
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目的 探讨PVT1加重宫颈癌细胞的恶性生物学行为的作用机制.方法 设计shRNA干扰PVT1,接着用sh-PVT1单独或联合miR-484 inhibitor转染SiHa细胞,荧光定量检测PVT1及miR-484的表达水平;荧光素酶报告实验确定PVT1和miR-484的靶向关系;BrdU染色检测PVT1对细胞生长的影响;Transwell和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力;Western blot检测细胞增殖、侵袭迁移相关蛋白的表达及p38MAPK的磷酸化情况;免疫荧光检测p38的细胞核转位情况.结果 sh-PVT1转染能降低宫颈癌细胞PVT1表达水平(P<0.05),促进miR-484表达(P<0.05);miR-484 in-hibitor能明显减弱sh-PVT1对miR-484表达的促进作用(P<0.05);荧光素酶报告实验表明PVT1上有miR-484的结合位点;干扰PVT1可抑制宫颈癌细胞增殖及增殖细胞核抗原-67(Ki-67)和增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达水平(P<0.05);sh-PVT1还能抑制宫颈癌细胞侵袭、迁移及血管内皮细胞生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶9(MMP-9)、E-cad-herin的蛋白表达,显著增强N-cadherin的蛋白表达(P<0.05);此外,抑制miR-484表达明显减弱sh-PVT1对宫颈癌细胞侵袭、迁移和上皮-间质转化(EMT)过程的抑制作用(P<0.05).结论 PVT1可通过干扰miR-484促进宫颈癌细胞的生长、运动和上皮间质转化,并诱导p38MAPK通路的活化,进而加重宫颈癌细胞的恶性生物学行为. 相似文献
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银屑病患者皮损中细胞衰老、增殖和凋亡检测 总被引:3,自引:1,他引:2
目的:探讨银屑病患者皮损中细胞增殖、衰老和凋亡的变化。方法:应用组织化学、免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶(TDT)介导的d-UTP-生物素缺口末端标记(TUNEL)等技术原位检测了20例银屑病患者(试验组)皮损和10例正常人(对照组)皮肤细胞中与衰老细胞相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)、增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡细胞。结果:银屑病皮损中衰老细胞、增殖细胞和凋亡细胞数均比正常人皮肤增多,试验组与对照组阳性率分别为55%/10%、80%/30%、70%/20%,经χ^2检验,P<0.05,差异有统计学意义。结论:衰老细胞与凋亡细胞的增加共同对银屑病增殖代谢加快起到部分代偿作用。 相似文献
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一种新的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离纯化及培养方法的探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立一种简捷的分离纯化培养子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的方法。方法:选择子宫全切育龄妇女的新鲜子宫内膜组织,经单酶消化、二次筛网过滤及贴壁纯化技术分离纯化培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,光镜及免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:腺上皮细胞漩涡状生长,细胞呈蝌蚪形或类圆型,细胞角蛋白19免疫组化染色阳性,纯度可达92%。基质细胞呈平行状生长,细胞呈梭形或多角形。波形蛋白免疫组化染色阳性,纯度达95%以上。每例子宫肌瘤切除标本可获得(10~25)×106原代基质细胞和(4~6)×106原代腺上皮细胞。结论:该培养方法可获得高产量的纯化的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。 相似文献
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目的:建立稳定的同时分离原代大鼠肝细胞(HC)、肝星状细胞(HSC)和Kupffer细胞(KC)的方法,并初步评估其在体外培养的特征。方法:通过胶原酶原位灌注获得肝脏单细胞悬液,随后行等密度离心结合选择性贴壁纯化肝脏原代细胞,细胞的产量和活力经自动细胞计数仪计算出,纯度经免疫荧光、特殊染色及吞噬等实验进行鉴定。结果:大鼠原代HC产量为(21.0±8.2)×106/g肝组织,活力为92.1%±2.1%,纯度为96.5%±2.2%;原代HSC产量为(2.5±0.8)×106/g肝组织,活力为90.1%±3.8%,纯度为93.1%±1.5%;原代KC产量为(4.1±1.2)×106/g肝组织,活力为96.2%±2.7%,纯度为95.1%±1.4%。分离的HC、HSC和KC适合体外长期培养。HSC在体外培养过程中失去维生素A,逐渐向成纤维细胞表型转变。KC在体外可增殖,至14 d时仍表达CD68,具有较强的吞噬能力。结论:成功建立同时分离和培养大鼠HC、HSC和KC的方法,为进一步研究肝脏病理生理提供细胞基础。 相似文献
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目的探讨天然药物Serrin B和Nodosin对人早幼粒白血病细胞株HL60、人胃腺癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株LOVO、人胶质瘤细胞株U87、人肺腺癌细胞株AGZY的毒性作用。方法将对数期生长的HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株接种于96孔板中,细胞贴壁后,分别加入Serrin B或Nodosin,使药物的终浓度分别为0.00、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μmol.L-1,24 h后用四甲基偶氮唑盐法检测细胞株的死亡率。结果 Serrin B对HL60、SGC7901、LOVO、U87和AGZY细胞株均有较强的毒性作用(P<0.01),且其毒性作用呈现剂量-效应关系。Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87细胞株具有较强的毒性作用(P<0.05,P<0.01),而对AGZY细胞株无明显毒性作用。结论 Serrin B和Nodosin是中药溪黄草抗癌作用的有效成分,为人类多种肿瘤治疗的新药研究开发提供新的思路。 相似文献
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树突状细胞是体内功能最强的抗原递呈细胞,细胞移行是其接受抗原刺激、激发T细胞免疫反应的基础,两者之间相互协调影响。从血液中的前体细胞到次级淋巴器官中成熟细胞的转化的过程中,趋化因子及其受体、黏附分子及基质金属蛋白酶的共同作用使树突状细胞得以精确迁移,发挥抗原递呈作用。 相似文献
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大鼠肝星状细胞的分离、培养与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:改进大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离质量。方法:取成年雄性Wistar大鼠,用链蛋白酶、胶原酶体内门静脉灌注消化大鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:肝星状细胞得率为2.8×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。Desmin阳性细胞原代培养达90%以上,传代培养达95%以上。结论:改良大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,有利于原代大鼠肝星状细胞的生物学研究。 相似文献
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利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞,并进行传代培养,采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力,并表达神经巢蛋白,分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原,为中枢神经系统的干细胞。 相似文献
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运用鉴别细胞群体生物学特性的常规方法和流式细胞光度术(FCM),我们研究了正了酸对人肺癌细胞(PLA-801D)的某些生物学作用。当培养液中含2或3mmol/L丁酸时,细胞分裂和增生受到明显抑制,群体倍增时间几乎延长1倍,细胞周期行进受阻,大多数细胞阻断在G1期,平皿集落形成率从23.9%降为1.9%,饱和密度从237.4万/ml降至48.8万/ml,细胞群体提前3d进入饱和状态。与此同时,细胞变扁平,几乎丧失叠堆生长能力,表面膜活动减弱,核形趋于规则,染色质颗粒分散变稀疏,细胞间粘着连接明显增多。以上发现提示丁酸可使PLA-801D肺癌细胞获得一些相对正常的生长特性和表型,显示丁酸对该细胞有一定程度的分化诱导作用和潜在的抗癌作用。 相似文献
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目的:探讨人表皮干细胞的体外快速分离培养及鉴定方法。方法:运用DispaseⅡ酶和胰蛋白酶两步法从手术切除的人包皮组织中分离获得表皮干细胞。倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况;检测细胞克隆形成率及克隆维持时间;免疫组化染色观察表皮干细胞标志物β1整合素和角蛋白19(K19)的表达。以角质形成细胞作为对照。结果:组织学观察显示,培养24h后细胞呈克隆状生长;所分离、培养细胞的克隆形成率高于对照角质形成细胞组;免疫组化染色显示,培养细胞β1整合素及K19均呈阳性表达。结论:成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养。 相似文献
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目的:研究人骨形态发生蛋白(human bone morphogenetic proteins, hBMP)对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用。方法:用hBMP2,3,6,12重组腺病毒(AdBMP2,3,6,12)干预大鼠骨肉瘤细胞株UMR106,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果:与空白对照组和实验对照组比较,AdBMPs的干预致骨肉瘤细胞株细胞存活率降低,并呈一定的时间依赖性;凋亡率均随时间延长而增加,并且TUNEL和 AO/EB两种检测方法的结果一致;3个检测时间点的细胞穿膜数均明显减低;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性在干预第3天开始逐渐增加,至第9天仍可观测到,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:以腺病毒介导基因转入的作用方式,hBMP2,3,6,12可以抑制大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的增殖和迁移,并诱导其凋亡和向成骨细胞分化。 相似文献