升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路及气道重塑的影响

目的观察升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路和气道重塑的影响。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、哮喘组、激素组、布地奈德组、升陷乌梅汤组。除正常组外,其余各组采用卵蛋白致敏、雾化激发建立哮喘大鼠模型,并予各给药组大鼠腹腔注射糖皮质激素干预,在此基础上予升陷乌梅汤组大鼠灌胃、布地奈德组大鼠雾化吸入。观察各组大鼠肺功能及支气管病理改变,并采用Western blot及RT-qPCR法检测TGF-β1/Smad信号通路相关因子蛋白及mRNA表达的变化。结果①与正常组比较,哮喘组大鼠肺组织中胶原蛋白表达、WAi/Pbm、WAm/Pbm及WAe/Pbm升高(P<0.05),信号通路因子TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达均升高(P<0.05),而肺功能中FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%及FEF75%均降低(P<0.05),肺组织中Ai/Pbm以及通路因子Smad6、Smad7的蛋白和mRNA表达均降低(P<0.05)。②与哮喘组比较,各给药组均可减少肺组织中WAi/Pbm、WAm/Pbm和WAe/Pbm(P<0.05),降低TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达及TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P<0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%和FEF75%(P<0.05),增加Smad6、Smad7的mRNA表达(P<0.05);且升陷乌梅汤组较激素组可进一步减少WAi/Pbm、WAm/Pbm、WAe/Pbm,降低TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P<0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF75%,增加Smad6的蛋白和mRNA表达以及Smad7的mRNA表达(P<0.05)。结论升陷乌梅汤可在激素干预基础上进一步阻止TGF-β1/Smad信号通路的异常激活,抑制气道重塑发展,延缓肺功能下降。     

TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中的动态变化

[摘要] 目的 探讨TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中的动态变化,及其在哮 喘发病中的可能机制。方法　以卵蛋白雾化复制哮喘模型, 在激发哮喘2 、4、8周后处死,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平, 用免疫组织化学染色法检测支气管肺组织TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4、Smad7的蛋白表达,同时用图像分析法测量大鼠气道形态学参数。结果　大鼠哮喘激发后2 周开始出现气道平滑肌增厚, 随着激发时间的延长,其气道平滑肌逐渐增厚。同时,哮喘大鼠支气管肺组织TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4的蛋白表达以及TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平逐渐升高, 而Smad7的蛋白表达逐渐下降,呈现一定的动态变化。结论　哮喘气道重塑的改变是一个动态的过程,TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中呈现动态变化过程,其中TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4与气道重塑呈正相关,而Smad7则与气道重塑呈负相关。     

血小板衍生生长因子和转化生长因子—β1在致敏大鼠模型肺泡巨噬细胞中的表达变化

目的：探讨肺泡巨噬细胞在支气管哮喘气道重塑中的作用。方法：16只Wistar大鼠随机分成2组：正常组、哮喘模型组,每组8只,采用鸡卵清白蛋白腹腔致敏和反复雾化吸入复制大鼠过敏性哮喘气道炎症模型。应用免疫组化和原位杂交法观察血小板衍生生长因子－b(PDGF-b)、转化生长因子－β1（TGF－β1）在肺泡巨噬细胞中的表达。结果：2组间肺泡巨噬细胞PDGF－b蛋白表达阳性率和表达强度差异无显著性,而模型组TGF－β1蛋白表达阳性率（P＜0．05）和表达强度计分（P＜0．05）高于正常组。原位杂交法显示,模型组TGF－β1 mRNA的表达阳性率（P＜0．05）亦高于正常组。结论：哮喘肺泡巨噬细胞表达高水平TGF－β1可能参与哮喘气道重塑过程。     

阳和平喘颗粒通过TGF-β1/Smad信号通路影响慢性哮喘大鼠气道重塑的机制

目的 观察阳和平喘颗粒对慢性哮喘气道重塑的影响,并探究其作用机制。方法 将50只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、阳和平喘颗粒低剂量组和阳和平喘颗粒高剂量组,每组10只;采用卵清蛋白致敏激发复制哮喘大鼠模型。苏木素-伊红染色观察支气管肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中白细胞介素4（interleukin 4, IL-4）、白细胞介素6（interleulin 6, IL-6 ）水平;Western blot法检测支气管肺组织中转化生长因子β1（transforming growth factor-beta 1, TGF-β1）、Smad2与Smad3蛋白相对表达水平。结果 与正常组比较,模型组支气管管腔变窄,平滑肌层及基底膜层增厚,周围可见炎症细胞浸润,BALF中IL-4、IL-6水平升高（P＜0.05）,支气管肺组织中TGF-β1、Smad2与Smad3蛋白相对表达水平升高（P＜0.05）;与模型组比较,阳和平喘颗粒高、低剂量组和地塞米松组大鼠支气管肺组织病理学改变较轻, BALF中IL-4、IL-6水平下降（P＜0.05）,支气管肺组织中TGF-β1、Smad2与Smad3蛋白相对表达水平降低（P＜0.05）,与阳和平喘颗粒低剂量组比较,阳和平喘颗粒高剂量组和地塞米松组差异显著（P＜0.05）。结论 阳和平喘颗粒可以改善慢性哮喘大鼠的气道重塑,减轻气道炎症,其机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠表达P62、TGF-β1的影响

目的探讨古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠P62、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分成正常组、哮喘组、肾阳虚哮喘组、古汉养生精低、中、高剂量组,每组5只。以氢化可的松制备肾阳虚模型,卵蛋白与氢氧化铝致敏激发制备哮喘模型,造模成功后 通过灌胃方式,各剂量组予以相应剂量古汉养生精,在最后一次激发24 h后,于大鼠左肺切取部分组织,用于行苏木精-伊红(HE)染色,应用图像分析技术测定支气管基底膜周径(Pbm)、支气管管壁面积(Wat)、支气管内壁面积(Wai)、支气管管壁平滑肌面积(Wam),所得数据采用Pbm进行标化,得到Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm等重塑指标;取右肺组织使用qRT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达,采用Western blot检测肺组织P62蛋白的表达。结果肾阳虚哮喘组大鼠病理改变较哮喘组大鼠明显,各剂量组较肾阳虚哮喘组大鼠病理改变明显减轻(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm较哮喘组升高,各剂量组较肾阳虚哮喘组降低(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组肺组织中TGF-β1 mRNA表达量较正常组明显上升(P＜0.05),各剂量组TGF-β1 mRNA表达量较肾阳虚哮喘组降低(P＜0.05)。肾阳虚哮喘组P62表达较哮喘组降低,而各剂量组P62表达较肾阳虚哮喘组升高(P＜0.05)。结论古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠的气道重塑有抑制作用,可能机制与调控P62、TGF-β1的表达相关。     

青蒿琥酯抑制Wnt/β-catenin信号通路和改善大鼠哮喘模型气道炎症及气道重塑关系的研究

目的 研究Wnt/β-catenin信号通路在哮喘气道炎症和气道重塑中的作用,探讨青蒿琥酯（artesunate,ART）治疗哮喘的可能机制。方法 采用卵白蛋白（OVA）激发和雾化吸入的方式建立哮喘模型,并予以药物治疗。观察各组大鼠肺组织的病理形态改变、外周血、支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞计数;Image-Pro plus 6.0图像分析软件测量大鼠肺组织支气管壁厚度和平滑肌厚度;免疫组化法检测大鼠肺组织β-catenin和WISP-1表达情况,RT-PCR检测大鼠肺组织WISP-1表达情况,ELISA法检测血清及BALF中IL-6的表达情况。结果 ART干预哮喘组大鼠气道炎性细胞浸润、支气管壁厚度、平滑肌厚度均明显低于哮喘组大鼠,差异有统计学意义（P<0.01）;ART干预哮喘组肺组织β-catenin、WISP-1蛋白和WISP-1 mRNA的表达均明显低于哮喘组,差异有统计学意义（P<0.01）;ART干预哮喘组大鼠血清及BALF中IL-6水平表达均明显低于哮喘组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 ART改善哮喘大鼠气道炎症及气道重塑的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性及下调IL-6水平有关。     

TGF-β和Smad6在哮喘大鼠气道重塑中的表达及福莫特罗的影响

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β,）和Smad6在支气管哮喘（简称哮喘）大鼠肺组织中表达变化及福莫特罗对其表达的影响。方法无特定病原体级（SPF）健康雄性SD大鼠60只,根据干预方法和时间分为对照组（A2和A4）,哮喘组（B2和B4）,福莫特罗组（C2和C4）,每组10只。用卵白蛋白（ovalbumin,OVA）致敏与激发,建立哮喘大鼠气道重塑模型,福莫特罗组模型制作同哮喘组,在激发阶段,激发前30min给予福莫特罗灌胃处理．各组均在末次激发后1～2h处死大鼠。采用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度（Wat）及支气管平滑肌厚度（Wam）;免疫组化法测定肺组织中TGF-β1及Smad6蛋白表达。结果（1）Wat：02组和B2组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,两者均显著厚于A2组（均P〈0．01）,C4组显著薄于B4组（P〈0．01）,两者均显著厚于A4组（均P〈0．01）;（2）Wam：C2组显著薄于B2组（P〈0.01）,两者均显著厚于A2组（均P〈0.01）,C4组显著薄于B4组,两者均显著厚于A4组（均P〈0．01）;（3）肺组织TGF-β1蛋白平均吸光度值：C2组低于B2组（P〈0．05）,两者均显著高于A2组（均P〈001）,C4组低于B4组（均P〈0．05）。两者均显著高于A4组（均P〈0．01）;（4）肺组织Smad6蛋白平均吸光度值：C2组与B2组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,两者均显著低于A2组（均P〈0．01）,C4组显著低于B4组（P〈0．01）,两者均显著高于A4组（均P〈0．01）。结论TGF-β1在哮喘气道重塑大鼠肺组织中表达增高,Smad。表达减低;TGF一13,和Smad。表达失衡可能促进了哮喘气道重塑的发生和发展;福莫特罗可抑制哮喘大鼠TGF-β1,表达,促进Smad。表达,作用随激发时间延长而增强。     

PI3K／Akt／p70^S6K途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的 观察哮喘大鼠肺组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)活性变化,以探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号转导途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用.方法 采用卵蛋白致敏和激发方法将24只SPF级健康雄性SD大鼠制成慢性哮喘模型,随机分为哮喘组(A组)和渥曼青霉素(wortmannin)干预组(W组),同时设正常对照组(C组,共12只),分别观察各组大鼠气道炎症和细胞浸润情况,并测定气道壁厚度(Wat)、气道平滑肌层厚度(Wam)、支气管基底膜周径(Pbm)和肺组织中P-Akt、p-p70S6K、cyclinD1表达水平.结果 A组和W组大鼠Wat/Pbm、Wam/Pbm、肺组织P-Akt、p-p70S6K蛋白、cyclinD1 mRNA的含量均大于C组(均P＜0.01);W组大鼠上述各指标的含量均小于A组(均P＜0.01).肺组织P-Akt蛋白的含量与Wam/Pbm、p-p70S6K蛋白含量和cyclinD1 mRNA含量均呈显著正相关性(均P＜0.01).结论 哮喘大鼠肺组织中P13K/AktJp709S6K途径激活,抑制该途径可减少哮喘大鼠ASMCs增殖,从而减轻哮喘气道重塑;同时CyclinD1在哮喘大鼠肺组织中表达增高,且与p-Akt及p-p70S6K表达趋势一致,提示P13K信号转导途径可能通过激活cyclinD1促进ASMCs增殖.     

地塞米松对RSV 诱发哮喘大鼠气道重塑形态学及ICAM-1表达的影响

目的：探究地塞米松对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）诱发哮喘大鼠气道重塑形态学以及细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）表达的影响,论述地塞米松用于防治哮喘的潜在机制。方法：将60 只SD 雄性大鼠随机分为6 组,每组10 只,分别为正常组、模型组、泼尼松与沙丁胺醇治疗组、地塞米松高、中、低剂量组。在通过卵清蛋白以及RSV 成功构建哮喘大鼠模型后,处死大鼠获取肺组织进行苏木素- 伊红（HE）染色,观察各组炎症反应,通过图像分析软件检测各组大鼠气道壁总面积（totalbronchial wall area,WAt）、支气管底膜周径（perimeter of the basement membrane,Pbm）以及管壁平滑肌面积（airway bronchial smooth muscle area,WAm）。采用免疫组化法检测各组大鼠肺组织中ICAM-1 的表达水平。结果：相较于模型组,泼尼松及沙丁胺醇治疗组、地塞米松中、高剂量组大鼠炎症反应减轻,WAt/Pbm、WAm/Pbm以及ICAM-1 表达量相较于模型组也显著降低,差异有统计学意义。结论：地塞米松能够显著缓解哮喘造成的气道重塑症状,可能与其降低肺组织中ICAM-1 表达相关。     

大鼠哮喘模型中转化生长因子-β1对气道重构调节作用的研究

目的 观察哮喘大鼠模型气道重构的病理特点，探讨转化生长因子－β1（TGF－β1）与气道重构的关系以及激素干预对气道重构的影响。方法 建立大鼠哮喘模型。实验分成对照组、哮喘组及激素处理组，其中每组各分成1周、2周二个时段。图像分析肺内支气管平滑肌厚度。苦味酸天狼猩红染色，在偏振光显微镜下观察胶原沉积情况，图像分析胶原厚度。免疫组化方法检测TGF－β1的表达，定量光密度值。结果 （1）哮喘组诱喘1周后出现管壁增厚、平滑肌增生以及胶原沉积等气道重构的特征，2周后上述改变加重，与TGF－β1的表达呈正相关；（2）激素组与哮喘组比较，炎症反应轻微，平滑肌增生、胶原沉积不明显，TGF－β1表达不强；与对照组间差异无显著性。结论 反复的变应原吸入可导致气道重构，而TGF－β1在气道重构中可能起重要作用，激素的干预可能减缓气道重构的发生。     

人胰高血糖素样肽-1突变体基因的构建和表达

目的构建人胰高血糖素样肽-1突变体（^2Gly-hGLP-1）基因，并表达GST一^2Gly-hGLP-1。方法用限制性内切酶双酶切载有hGLP cDNA的重组克隆质粒PMD18T simple和原核表达质粒pGEX-4T-1，将GLP-1定向插入原核表达载体pGEX-4T-1^＊中，筛选出阳性克隆。在获得重组hGLP-1基因工程菌的基础上，利用定向突变的技术改造其第2位丙氨酸为甘氨酸，经酶切克隆于pGEX-4T-1^＊中，构建pGEX-4T-1^＊／^2Gly-hGLP-1表达载体。转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达。结果经测序分析，证明^2Gly-hGLP-1已经克隆到pGEX-4T-1^＊中。Western blot证实，该蛋白可被特异性hGLP-1识别。结论成功构建和表达了人胰高血糖素样肽-1突变体原核表达质粒。     

瘦素对大鼠肝星状细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶-1基因表达的影响

目的:探讨瘦素(Leptin)对大鼠肝星状细胞(HSC)硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)基因表达的影响,为进一步寻找糖尿病人合并脂肪肝的形成机制提供新的思路。方法:将培养好的肝星状细胞系分为两组,分别应用100ng/ml瘦素和DMEM细胞培养液培养,运用RealTimePCR的方法研究瘦素对SCD-1基因的调节作用。结果:应用RealTimePCR技术检测瘦素可以下调SCD-1基因的表达,下调倍数0.315倍。结论:高浓度瘦素可能通过下调SCD-1基因表达参与脂肪肝的形成,可能是导致糖尿病及代谢综合征合并脂肪肝的原因之一。     

散发神经鞘瘤的Schwannomin/Merlin表达分析

目的分析schwannomin merlin(S M)在神经鞘瘤中的表达。　方法用S M氨基端抗体NF2 (A - 19) ,通过免疫组织化学和Westernblotting分析S M在神经鞘瘤中的表达。　结果免疫组织化学发现所有神经鞘瘤无NF2(A - 19)免疫活性 (阳性细胞见于非肿瘤细胞 ) ,2 8例 (78% )S M表达下降 (与正常比小于 70 % ) ;81%听神经瘤 (13 16 )、75 %的非听神经瘤 (15 2 0 )表达下降 ;中等度下降 (35 %～ 6 9% ) 13例 (听神经瘤 3例 ,非听神经瘤 10例 ) ,表达重度下降 (<35 % ) 15例 (听神经瘤 10例 ,其它 5例 )。在听神经瘤中 ,S M表达重度下降肿瘤的生长指数显著高于S M表达中等度下降或正常者 (P <0 .0 5 )。　结论神经鞘瘤中S M表达下降。     

盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞鸟氨酸脱羧酶表达的影响

[目的]观察盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达的影响.[方法]以不同浓度的盐酸小檗碱作用于HT29细胞72 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖抑制,采用荧光定量PCR法及Western blot方法分别检测ODC mRNA及蛋白的表达水平.[结果]盐酸小檗碱可抑制HT29细胞增殖,剂量依赖性地显著下调ODC蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),但对ODCmRNA表达无显著影响.[结论]盐酸小檗碱具有抑制HT29细胞的增殖作用,其机制可能与下调ODC蛋白表达相关.     

线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在膀胱癌组织、癌旁组织、膀胱正常粘膜组织中的表达及其临床意义。方法:应用流式细胞术方法检测44例膀胱癌组织,44例癌旁组织及12例膀胱正常粘膜组织Omi/HtrA2的表达。结果:1Omi/HtrA2的阳性表达率为膀胱癌组织81.9%(36/44),癌旁组织31.9%(14/44),正常膀胱粘膜25.0%(3/12);2Omi/HtrA2在膀胱移行细胞癌的阳性表达率情况为G1级83.3%(10/12),G2级65.2%(15/23),G3级22.2%(2/9);3Omi/HtrA2的表达与性别、年龄和临床分期无明显的关系。结论:1Omi/HtrA2在膀胱移行细胞癌组织中的阳性表达率明显高于正常粘膜组织和癌旁组织。2Omi/HtrA2蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达水平与患者的年龄、性别以及肿瘤的分期无关,与膀胱癌病理分级有关。     

子宫内膜癌中乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2的表达及意义

目的:探讨乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化S-P法检测43例子宫内膜癌组织、31例子宫内膜增生症组织及20例正常子宫内膜组织中乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2蛋白的表达,并结合各临床病理学参数进行分析。结果:乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2在正常子宫内膜组织、增生症组织及子宫内膜癌中的表达呈上升趋势,其表达有显著性差异。子宫内膜癌中,乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2的表达随手术-病理分期的升高、组织学病理分级下降和肌层浸润程度增加而逐渐升高,二者呈正相关。结论:乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-2可能与子宫内膜癌的发生发展有关,有望作为判断子宫内膜癌生物学行为和预后的参考指标。     

大鼠马钱子碱中毒肝细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的研究

目的:研究马钱子碱中毒后不同时间段内肝细胞Bcl-2和Caspase-3表达的病理变化。方法:用20只Wistar大鼠为正常对照组,40只Wistar大鼠复制马钱子中毒模型,用免疫组织化学技术对中毒后大鼠肝细胞Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达进行检测,并用图像分析对检测结果进行分析。结果:大鼠在马钱子中毒低、中剂量后的1～7d不同时间段内,肝细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白阳性表达数均明显高于正常对照组,中毒组与对照组相比,差异有显著性。结论:Bcl-2和Caspase-3参与了马钱子碱中毒的病理生理过程。     

MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜和在位内膜中的表达

目的 :探讨 MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜和在位内膜中的表达情况 ,研究子宫腺肌症的发病机制。方法 :采有免疫组织化学方法检测 MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜 40例和在位内膜 40例中的表达。结果 :MMP1在子宫异位内膜腺体中阳性表达率较高 ( 85 % ) ,异位和在位内膜之间有显著性差异 ;MMP2在子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞、腺体中表达一致 ;TIMP2在子宫异位内膜间质中阳性表达率 ( 1 5 % )低于在位内膜间质细胞中阳性表达率 ( 4 0 % ) ,二者有显著性差异。结论 :MMP1可能参与子宫腺肌症的发生、发展 ;MMP2在子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞中均有较强的表达 ,说明子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞具有同源性 ;TIMP2不仅对 MMP2有抑制 ,且对 MMP1也有抑制作用 ,MMPs- TIMPs平衡失调可能有利于子宫腺肌症的发生、发展     

催乳素对人B淋巴细胞IgG基因表达影响的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)对B淋巴母细胞系IM-9细胞IgG基因表达的影响。方法:应用人PRL(10ng/ml)刺激IM-9细胞,培养48h后用试剂盒提取细胞总RNA,反转录为cDNA,RT-PCR扩增IgGcDNA,琼脂糖凝胶电泳观察扩增情况。结果:该cDNA片段的大小为98bp,LPS、PRL与LPS-PRL组cDNA条带在第24循环时出现,LPS-Br与LPS-PRL-Br组cDNA条带在第28循环时出现,并随循环数的增加亮度逐渐增强,LPS-PRL组该cDNA条带亮度最强。结论:PRL能够上调B淋巴细胞中IgG基因的表达,但该功能能够被Br拮抗。     

重组金属蛋白酶蛋白的纯化及鉴定

目的 构建创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)金属蛋白酶(vvp)基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性. 方法 采用pET-32a质粒构建vvp基因原核表达载体,在E.coliBL21(DE3)宿主菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的重组金属蛋白酶蛋白rvvp表达,采用His-Ni亲和层析法提纯rVvp,SDS-PAGE检测表达和提纯效果.采用兔抗Vv全菌抗体的Western Blot鉴定其特异性和免疫原性. 结果 在1mmol/L IPTG诱导下,rvvp产量较高.提纯的rvvp经SDS-PAGE后仅显示分子量为86KD的单一蛋白条带.重组蛋白rvvp能与兔抗Vv全菌抗体发生特异性结合. 结论 本研究成功地构建了创伤弧菌vvp基因高效原核表达系统,所表达的rvvp具有良好的免疫反应性,可作为Vv免疫检测试剂盒及疫苗的抗原.