人根尖乳头干细胞生成牙髓牙本质复合体的实验研究

目的应用组织工程方法,探讨人根尖乳头干细胞（SCAP）进行牙髓牙本质复合体再生的可能性。方法从牙根未发育完
全的健康阻生智齿中分离牙乳头,用组织贴块法培养SCAP。细胞分别在成骨诱导液中培养3周及普通培养基中培养60 d后,
用茜素红检测钙结节形成情况,免疫荧光法和RT-PCR检测成骨细胞标志物碱性磷酸酶（ALP）、骨涎蛋白（BSP）、骨钙素（OC）和
牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。选取5~6周雌性裸鼠6只,将SCAP与羟磷灰石/磷酸三钙（HA/TCP）复合培养作为实验组,仅
有HA/TCP作为对照组,分别植入同一只裸鼠背部皮下,左右侧各1个。8周后移植物行HE染色和免疫组化染色观察新生组织
情况。结果SCAP在体外经成骨诱导3周及普通培养基培养60 d后,茜素红染色阳性,且表达成骨细胞标志物ALP、BSP、OC
和DSP。实验组移植物8周后可见牙髓牙本质样结构形成,且紧靠牙本质样结构内侧的细胞DSP阳性表达,而对照组未见任何
硬组织形成。结论SCAP可应用于组织工程,进行牙髓牙本质复合体再生。
     

免疫磁珠法筛选人乳牙牙髓干细胞及其培养鉴定

摘要：目的应用免疫磁珠法分离筛选人乳牙牙髓干细胞,并做培养鉴定。方法采用STRO-1为标记物以免疫磁珠分离
筛选人乳牙牙髓干细胞,观察细胞形态及生长情况,流式细胞仪检测细胞表型,并检测细胞体外多向分化能力。结果应
用免疫磁珠法筛选人乳牙牙髓细胞可获得乳牙牙髓干细胞,经统计学处理证明看其生长速度慢于牙髓细胞,细胞表型分
析证实CD29、CD105高表达,CD34、CD45低表达。矿化诱导和成脂诱导证实STRO-1+乳牙牙髓细胞具有干细胞多向分
化的能力。结论免疫磁珠法是有效的分离纯化人乳牙牙髓干细胞的方法。所分离的细胞具有干细胞的表型特点及多向
分化能力。     

Importin 8在成骨分化中的细胞内定位及表达差异

目的观察Importin 8（IPO8）在成骨分化过程中的细胞内定位与表达差异。方法对人成骨样SaOS-2细胞进行成骨诱导
分化,采用茜素红染色、免疫细胞化学方法和实时定量PCR技术检测成骨分化效果及分化过程中IPO8的细胞内定位和表达差
异。结果茜素红染色显示SaOS-2细胞成骨诱导第10天可见大量红色结节样结构。免疫细胞化学方法显示,IPO8主要定位于
细胞核周胞质。诱导至第3天,IPO8胞浆胞核均有表达,但明显开始向核内移动。至第7天,核内表达更明显,而到第10天,细
胞呈骨细胞样,IPO8均匀分布于胞质内。实时定量PCR技术检测发现,OPN基因在SaOS-2细胞成骨分化过程中表达增加,而
IPO8基因在成骨分化至第3天时表达最高,之后呈下降趋势。结论IPO8在成骨分化过程中的细胞内定位与表达存在明显差
异,提示IPO8可能参与成骨细胞分化过程的调控。
     

P27蛋白在胞浆中的表达与鼻咽癌临床病理学特征的关系

目的评估p27蛋白在胞浆中表达与鼻咽癌患者临床病理学特征的关系。方法利用免疫组化检测P27蛋白在鼻咽癌组织
与鼻咽组织之间的表达。利用统计学方法分析P27蛋白在鼻咽癌与鼻咽组织胞浆中表达差异以及P27蛋白在胞浆中表达与与
鼻咽癌患者临床病理参数之间的相关性。结果免疫组化结果显示,P27蛋白是一个核浆表达蛋白。与正常鼻咽组织相比,P27
蛋白在鼻咽癌组织胞浆中的表达明显下调（P=0.047）,且下调表达与T分级（P=0.033）呈负相关。此外,P27蛋白在鼻咽癌组织
胞浆中的表达与淋巴结转移和临床分期虽然无显著意义,但也展现了明显负相关趋势（P=0.157,P=0.090）。结论P27蛋白在细
胞胞浆中过低表达可能促进鼻咽癌的发生发展,且其可作为预测鼻咽癌患者预后的不利因素之一。
     

纤维调节素在大鼠牙本质和牙髓中的免疫组织化学表达

目的 研究纤维调节素在大鼠牙本质和牙髓中的免疫组织化学表达.方法 用免疫组织化学技术,对正常Lewis鼠磨牙牙本质和牙髓和口腔其它组织的纤维调节素及相关蛋白多糖和胶原的组织分布进行分析.结果 纤维调节素在牙齿的前期牙本质有阳性反应,然而成牙质细胞并未见明显的着色.内皮细胞、内皮下或血管平滑肌,以及红细胞、白细胞、横纹肌对纤维调节素有轻到中度着色.胶原蛋白I在前期牙本质有强烈的阳性反应.结论 纤维调节素可能参与牙本质的早期形成.     

钠钙交换体1型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达

目的:探讨钠钙交换体1(NCX1)型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达,进一步解释牙髓组织的修复和传感功能。方法:选取就诊患者因正畸减数或阻生拔出的新鲜健康第三磨牙24颗。取牙髓行牙本质涎磷蛋白抗体染色、改良Bielschowsky银染色以分别定位成牙本质细胞层、神经组织;用特异性抗体染色分析NCX1在人牙髓组织成牙本质细胞层、神经组织中的表达情况。结果:免疫组化染色显示,人牙髓成牙本质细胞胞体和神经组织的NCX1型通道蛋白均为阳性表达。Image-Pro Plus 6.0半定量分析显示,牙冠部和牙根部上段成牙本质细胞中的NCX1型通道蛋白表达水平分别为0.152±0.023、0.135±0.020,两者差异无统计学意义(t=1.425,P=0.352)。结论:人牙髓组织成牙本质细胞层及神经组织中均存在明显的NCX1型通道蛋白表达,其在牙冠部及牙根部上段牙本质细胞中的表达差异不明显。     

肝细胞生长因子在大鼠修复性牙本质形成过程中的表达研究

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在大鼠修复性牙本质形成过程中的作用.方法 以窝洞预备形成大鼠修复性牙本质模型,免疫组织化学染色法检测HGF在窝洞预备后3 d、15 d、30 d的大鼠牙髓组织中的表达,采用积分光密度值(IOD)定量修复性牙本质形成不同阶段HGF的表达.结论 窝洞预备后3 d,HGF在大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中呈强阳性表达(IOD为8.995±0.943);窝洞预备后15 d,HGF在两种细胞的表达仍呈阳性(IOD为5.624±0.951), 但弱于3 d组(P＜0.01);30 d组(4.073±0.127)和正常对照组(4.279±0.348)大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中HGF均呈弱阳性表达,两者间差异无统计学意义.结论 HGF参与了牙髓损伤早期修复及修复性牙本质形成的过程.     

瞬时感受器电位通道1在臭氧致小鼠肺组织炎症中的表达

目的探讨经典瞬时感受器电位通道1（TRPC1）在臭氧暴露下小鼠肺组织中的表达情况。方法采用臭氧暴露建立小鼠肺
组织炎症模型,通过对小鼠行为学观察、支气管肺泡灌洗液的细胞分类计数和肺组织病理形态分析证实模型建立成功后,
RT-PCR法检测肺组织TRPC1 mRNA的表达,Western blot法和免疫组织化学染色法分别观察TRPC1蛋白在肺组织的表达和
定位情况。结果RT-PCR和Western blot 结果显示,与对照组相比,臭氧组小鼠肺组织TRPC1 mRNA及其蛋白表达上调（P<
0.05）;免疫组织化学染色法进一步证实,臭氧组小鼠肺组织TRPC1蛋白在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、浸润的炎症细胞的
表达均较对照组明显增强（P<0.05）;相关性分析显示,小鼠肺组织中TRPC1 mRNA和蛋白的表达均与支气管肺泡灌洗液中白
细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数呈显著性正相关（P<0.01）。结论TRPC1可能与小鼠肺组织炎症发病机制有关。
     

牙体脱钙法和劈牙取髓法观察牙髓组织中VEGF表达的效果比较

目的:对牙体脱钙和劈牙取髓法在牙髓血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)免疫组织化学研究中的染色效果进行比较,初步探讨牙体脱钙技术在牙髓免疫组织化学研究中的应用.方法:取因正畸治疗需要而拔除根尖孔完全闭合的健康下颌前磨牙30颗,分别通过牙体脱钙和劈牙取髓制作牙体牙髓联合切片和牙髓切片,进行VEGF免疫组织化学染色,在显微镜下观察两者的染色效果和组织结构特点.结果:牙体脱钙法制得的牙体牙髓联合切片组织染色效果良好,牙髓细胞、成牙本质细胞、牙本质小管结构清晰,VEGF阳性染色空间分布定位明确;劈牙取髓法制得的牙髓切片成牙本质细胞残缺不全,组织厚薄不一,染色对比度差.结论:牙体脱钙技术应用于牙髓免疫组织化学研究的组织染色效果良好、结构清晰,能够保全牙髓组织.     

釉原蛋白对牙髓硬组织形成的诱导作用

目的：探讨釉原蛋白对牙髓硬组织形成的诱导作用,为釉原蛋白诱导硬组织形成功能的研究提供实验依据。方法：Wistar雄性大鼠16只,随机分为正常对照组和实验组［连续注射环磷酰胺（CP）14 d］,采用组织学和免疫组织化学的方法,观察切牙成牙本质细胞及牙髓组织发生的各种变化及与釉原蛋白的关系。结果：实验组注射CP后切牙形成端处于细胞增殖期和分化期的成牙本质细胞和牙髓细胞发生了广泛的水肿、变性甚至部分坏死、消失。牙髓损害区唇侧成釉器对应的牙髓侧,可见骨样牙本质样的硬组织形成;成釉器的增殖端附近可见成釉细胞分化,而且在新生硬组织表面分泌很厚的釉基质,经免疫组织化学染色釉原蛋白呈阳性表达。正常对照组无变化。结论：CP抑制成牙本质细胞形成后,釉原蛋白具有诱导牙髓形成硬组织的作用。     

CGRP影响人牙髓干细胞增殖分化的研究

目的 研究降钙素基因相关肽(CGRP)对人牙髓干细胞增殖分化的调控作用,并初步探讨CGRP的调控信号通路.方法 首先获取健康的牙髓,体外培养并筛选牙髓干细胞;采用MTT法检测不同浓度的CGRP对牙髓干细胞的增殖作用,获取适宜的作用浓度;利用茜素红染色法观察CGRP作用下牙髓干细胞形成矿化结节的效果;在实时定量RT-PCR法及免疫印迹法检测CGRP作用下牙髓干细胞中Ⅰ型胶原(Col-1)、转录因子Runx2的mRNA和蛋白表达水平;最后利用实时定量RT-PCR法检测MAPK信号通路抑制剂作用下CGRP对牙髓干细胞中Ⅰ型胶原、Runx2 mRNA表达水平的影响.结果 经过筛选培养获得生长稳定的牙髓干细胞;MTT法检测可知CGRP可促进牙髓干细胞的增殖,在CGRP的浓度达到10-7 mol/L时效果最显著;在CGRP作用牙髓干细胞28 d后,经茜素红染色可见矿化结节;经实时定量RT-PCR法和免疫印迹法检测可知CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1、Runx2的mRNA和蛋白表达水平得到显著提高;MAPK信号通路中ERK激酶通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Runx2表达的水平,ERK激酶和p38通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1表达的水平.结论 CGRP能够促进牙髓干细胞的增殖分化,这一作用受到MAPK信号通路的调控.     

rhBMP2对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响

目的：研究重组人骨形成蛋白2（rhBMP₂）对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响,为人牙髓干细胞的研究提供理论依据。方法：酶消化法获得人牙髓干细胞,光镜下进行形态学观察,免疫荧光法检测细胞表面标志的表达;取第5代牙髓干细胞, 分为实验组（加含50 μg•L^-1rhBMP₂的培养液）及阴性对照组（只加入培养液）,检测碱性磷酸酶活性和Delta蛋白表达的变化。结果：人牙髓干细胞呈集落状生长, 免疫组织化学检测显示nestin、 vimentin染色呈阳性,免疫荧光法检测STRO-1呈阳性。与阴性对照组比较,实验组第7、14及21天碱性磷酸酶活性均明显升高（P<0.01）,第21天Western blotting法检测Delta蛋白表达明显升高(P<0.05)。 结论：培养的牙髓干细胞具有干细胞特性,并且rhBMP₂可使其碱性磷酸酶活性增高并上调Delta蛋白表达,提示Delta蛋白可能参与牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。     

巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA在人炎症牙髓组织中的表达及意义

目的:探讨炎症牙髓中巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)的表达,揭示MIP-1α在牙髓炎发生及发展中的可能作用.方法:选择正常牙髓组织及炎症牙髓组织各4例,采用HE染色观察正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织形态学改变,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织中MIP-1α的表达.结果:正常牙...     

人结肠癌细胞Dickkopf-1的表达水平及意义

目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1（DKK1）的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞（SW480、SW620、HT29、
LS174T、LOVO、HCT116）分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测
DKK1的蛋白表达情况。结果荧光定量分析显示,DKK1在HT29、HCT116中的表达高于其他四株细胞（P<0.05）;Western blot
显示,DKK1在HCT116、HT29中的表达同样高于其他四株细胞;细胞免疫组化染色显示,DKK1在六株结肠癌细胞株中呈阳性
表达。结论DKK1在6株人结肠癌细胞系中的表达具有差异性。
     

miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3 促进肝癌细胞增殖

目的检测MicroRNA-128a（miR-128a）在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制。方法收
集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a 在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用
miR-128a mimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用
双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3’UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;
Western blot检测细胞周期蛋白变化。结果在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-128a
促进肝癌细胞增殖（P<0.05）;在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3’URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）;抑
制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1 和CDK4表达下调。结论miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控
RND3促进肝癌细胞增殖。
     

急性髓系白血病CDX2和β-catenin基因表达的相关性

目的研究急性髓系白血病（AML）患者CDX2与β-catenin基因表达的相关性。方法实时定量PCR方法检测92例初诊
AML、30例非恶性血液病患者（对照）CDX2及β-catenin mRNA表达,Western blot检测其中的26例AML、8例非恶性血液病患
者CDX2、β-catenin蛋白表达。结果AML组CDX2 mRNA和蛋白表达阳性率分别为84.78%和76.92%,对照组未检测到表达
（P<0.01）;β-catenin mRNA和蛋白在两组均表达,但AML组显著高于对照组（P<0.01）。CDX2、β-catenin mRNA表达均与初诊
时白细胞数、LDH水平呈正相关（P<0.01）。AML患者获得完全缓解时,CDX2 mRNA转阴、β-catenin mRNA表达显著下降,复
发时两者均增高。AML患者CDX2与β-catenin无论在mRNA和蛋白水平表达均呈显著正相关（P<0.01）。结论AML患者存
在CDX2基因过表达及Wnt/β-catenin信号通路激活,且CDX2与β-catenin表达呈显著正相关。
     

MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能

目的检测MicroRNA-218（miR-218）在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能。方法收集46例肝细胞癌及对
应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218 在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系
HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化。结
果miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-218低表达与肿瘤大小（>5 cm）和高TNM分期（Ⅲ+
Ⅳ）具有显著相关性（P<0.05）;在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达
（P<0.05）。结论miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增
殖和促进凋亡。
     

8Br-cAMP对人牙髓细胞NO表达的影响

目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)信号通路激活剂8溴-环单磷酸腺苷(8 Br-cyclic adenosine monophosphate, 8Br-cAMP)与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的关系.方法采用RT-PCR、蛋白免疫印迹、硝酸还原酶法检测iNOS/NO表达. 结果 8Br-cAMP能够上调LPS诱导的人牙髓细胞iNOS/NO表达. 结论 PKA信号通路参与LPS诱导人牙髓细胞 iNOS表达的调节.