结核分枝杆菌对miR-21和TLR-4/NF-κB信号通路的影响研究

目的 研究结核分枝杆菌(Mtb)H37Rv及BCG感染RAW264.7和THP-1细胞后,对miR-21表达及Toll样受体(TLR)-4/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 体外培养RAW264.7和THP-1细胞及Mtb H37Rv、BCG;建立Mtb感染RAW264.7和THP-1细胞模型;RAW264.7及THP-1细胞分别分为对照组,H37Rv感染组,BCG感染组;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21、TLR4、NF-κB mRNA表达;利用ELISA检测感染12 h后细胞上清液、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10水平.结果 与对照组比较,H37Rv感染组及BCG感染组RAW264.7、THP-1细胞凋亡率均明显升高(P<0.05).与H37Rv感染组比较,BCG感染组THP-1细胞凋亡率明显升高,RAW264.7凋亡率明显降低(P<0.05).在RAW264.7细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组miR-21低表达,而TLR4、NF-κB mRNA高表达,且BCG感染组TLR4、NF-κB mRNA较H37Rv感染组高表达(P<0.05).在THP-1细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组miR-21低表达,TLR4、NF-κB mRNA高表达,且BCG感染组TLR4、NF-κB mRNA较H37Rv感染组高表达(P<0.05).在RAW264.7细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组TNF-α、IL-6、IL-10表达水平均明显升高,BCG感染组TNF-α、IL-6表达水平较H37Rv感染组明显降低,IL-10明显升高(P<0.05).在THP-1细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组TNF-α、IL-6、IL-10表达水平均明显升高,BCG感染组TNF-α、IL-6表达水平较H37Rv感染组明显升高,IL-10明显降低(P<0.05).结论 Mtb感染巨噬细胞后,可能通过抑制机体miR-21表达,从而激活TLR-4/NF-κB信号通路,促进巨噬细胞凋亡.     

猪苓多糖对卡介苗刺激巨噬细胞表达前炎症细胞因子mRNA的影响

目的检测猪苓多糖（polyporus polysaccharide，PPS）协同卡介苗（bacillus calmette guerin，BCG）对巨噬细胞自介索-1β（Interleukin-lbeta，IL-1β）和肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-alpha，TNF-α）mRNA表达的影响，研究其参与免疫启动的过程。方法将BCG或BCG加PPS作用于体外培养的小鼠巨噬细胞J774细胞株，运用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测巨噬细胞IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平。结果单用BCG或BCG和PPS合用刺激巨噬细胞后，IL-1β和TNF-53 mRNA表达水平较阴性对照组均显著升高。BCG和PPS合用，巨噬细胞IL-1βmRNA表达水平比单用BCG高，两者差异有显著性。同等剂量的情况下，单用BCG或BCG和PPS合用，两者TNF-α mRNA表达水平无明显差异。表达峰值时间：TNF-α为0．5h，IL-1β为3h。结论BCG可增强巨噬细胞IL-1β和TNF-α mRNA的表达，一定剂量的PPS能协同BCG提高IL-1β mRNA的表达，参与免疫启动反应。     

烟草烟雾暴露对肺腺癌患者外周血HDAC2、IL-8和TNF-α表达的影响

目的探讨烟草烟雾暴露对肺腺癌患者外周血组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响及其相互关系。方法收集广西医科大学第一附属医院和附属肿瘤医院2014年4月至2015年3月术后病理确诊为肺腺癌的病例73例,术前均行肺功能检查;收集同期无烟草烟雾暴露无慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)的健康志愿者14例。根据有无烟草烟雾暴露及肺功能分为正常对照组(A组,14例)、无烟草烟雾暴露无慢阻肺肺腺癌组(B组,19例)、烟草烟雾暴露无慢阻肺肺腺癌组(C组,33例)、烟草烟雾暴露合并慢阻肺肺腺癌组(D组,21例)。实时荧光PCR检测各组外周血单核细胞(PBMCs)中HDAC2 mRNA、IL-8 mRNA、TNF-αmRNA的表达,ELISA检测各组外周静脉血清中IL-8、TNF-α的含量。结果与A组比较,B组PBMCs中HDAC2 mRNA的表达差异无统计学意义(P0.05),C组、D组PBMCs中HDAC2mRNA的表达均下调(P0.05),其中D组下调最明显。与A组比较,各肺腺癌组PBMCs中IL-8mRNA、TNF-αmRNA的表达以及外周静脉血清中IL-8、TNF-α的浓度均显著上调(P0.05),且D组上调最明显。肺腺癌患者PBMCs中HDAC2 mRNA的表达在性别、年龄、TNM分期方面的差异均无统计学意义(P0.05);PBMCs中IL-8 mRNA、TNF-αmRNA的表达以及血清IL-8、TNF-α的含量在性别、年龄方面的差异无统计学意义(P0.05),在Ⅲ期患者PBMCs中的表达及血清中含量均较Ⅰ、Ⅱ期高(P0.05),Ⅰ期与Ⅱ期比较差异无统计学意义(P0.05)。结论烟草烟雾暴露导致肺腺癌患者外周血HDAC2表达下调,IL-8、TNF-α表达上调,加重炎症反应,在合并慢阻肺者表现更明显,可能与肺腺癌的预后有关。     

阿托伐他汀对人CD4~+T淋巴细胞Sprouty 2基因表达的影响

目的研究阿托伐他汀在体外对人CD4+T淋巴细胞Sprouty 2表达的影响。方法取20例健康志愿者的新鲜外周血,免疫磁珠分选出CD4+T淋巴细胞,随机分为空白组、植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激组、PHA+1μmol/L阿托伐他汀组(低浓度组)、PHA+5μmol/L阿托伐他汀组(中浓度组)和PHA+10μmol/L阿托伐他汀组(高浓度组),体外培养48 h后收集各组细胞及培养基上清液,荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测Sprouty 2 mRNA表达水平,Western blitting检测Sprouty 2蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养基上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)浓度。结果①与空白组比较,PHA刺激后,CD4+T淋巴细胞Sprouty 2 mRNA、Sprouty 2蛋白表达及上清液TNF-α、IL-10浓度均升高(P<0.05)。②与PHA刺激组比较,高浓度组CD4+T淋巴细胞Sprouty 2蛋白相对表达量和上清液IL-10浓度增加(均P<0.05),而低、中浓度组具有增高趋势(P>0.05),并随着阿托伐他汀药物浓度的增高而增加;而各组上清液TNF-α浓度降低,高浓度组差异具有统计学意义(P<0.05)。③Sprouty 2蛋白相对表达量与TNF-α、IL-10的直线相关性分析显示,TNF-α的分泌水平与Sprouty 2的表达量呈明显的负相关(r=-0.785,P<0.05),IL-10的分泌水平与Sprouty 2的表达量呈明显的正相关(r=0.717,P<0.05)。结论阿托伐他汀能够通过调控人CD4+T淋巴细胞Sprouty 2的表达而发挥抗炎的作用。     

Exendin-4对肿瘤坏死因子-α诱导的单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的观察exendin-4对大鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法试验分组:对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组(10 ng/ml)、TNF-α(10 ng/ml)+E1组(1 nmol/L exendin-4)、TNF-α(10 ng/ml)+E5组(5 nmol/L exendin-4)、TNF-α(10 ng/ml)+E10组(10 nmol/L exendin-4)。收集24 h细胞,提取RNA,采用实时荧光定量检测细胞内MCP-1 mRNA的表达;分别在24、48 h收集各组细胞培养上清液,采用ELISA检测培养细胞上清中MCP-1、FN的浓度。结果孵育24 h时,TNF-α组MCP-1 mRNA和细胞培养上清MCP-1、FN表达较对照组明显增加(P<0.01);与TNF-α组比较,TNF-α+E5组、TNF-α+E10组细胞内MCP-1 mRNA和培养上清内MCP-1、FN含量均明显降低;孵育48 h时,TNF-α组细胞培养上清MCP-1、FN表达较对照组明显增加(P<0.01);与TNF-α组比较,TNF-α+E1组、TNF-α+E5组、TNF-α+E10组细胞培养上清内MCP-1、FN含量均明显降低;并且随着时间的延长和exendin-4浓度的增加,培养上清内MCP-1、FN含量降低更加明显。结论 Exendin-4可明显抑制TNF-α诱导的系膜细胞MCP-1 mRNA的表达,并以剂量和时间依赖的方式抑制TNF-α诱导的系膜细胞培养上清内MCP-1、FN的含量,提示exendin-4可能会对肾脏具有一定保护作用。     

IL-10在系统性红斑狼疮患者PBMC B细胞刺激因子表达中的作用

 【目的】探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)B细胞刺激因子(Blys)基因和蛋白在体外的表达及IL-10对其表达的影响。【方法】梯度密度离心法分离25例系统性红斑狼疮患者和20名女性健康志愿者外周血单个核细胞,分为2组,IL-10(100ng/mL)组和培养基组(仅含RPMI1640培养基),分别于培养0、6、12、24、72h离心收集PBMCs,RT-PCR法检测刺激后0～24h细胞Blys mRNA表达,流式细胞仪和直接免疫荧光法检测72h膜结合型Blys蛋白表达。【结果】①系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA和蛋白表达体外高于健康对照(P<0.001)。②IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA表达,12h作用最强(0.487±0.058 vs 0.251±0.050,P<0.001;0.638±0.084 vs 0.392±0.059,P<0.001)。③IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白表达(FACs,4.53±0.71 vs 3.24±0.57,P<0.001;5.79±0.91 vs 4.55±0.83,P<0.001)。④直接免疫荧光法检测外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白显示，IL-10刺激后Blys表达增强。【结论】IL-10可上调系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys基因和蛋白表达。     

IL-10对TNF-α诱导的泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的抑制作用

目的:观察白介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的干预作用.方法:THP-1单核细胞经诱导转化为巨噬细胞源性泡沫细胞后随机分为4组:对照组,培养液中不加任何其他物质;TNF-α组,培养液中加10μg/L TNF-α;IL-10组,培养液中加10μg/L IL-10;IL-10 TNF-α组,培养液中加10μg/L IL-10预先孵育2 h后,再加10μg/L TNF-α.采用RT-PCR和Western-Blot检测各组0 h、6 h、12 h、24 h、48 h ABCA1 mRNA和蛋白表达.结果:TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(F=782.94,F=768.12,P均＜0.05).IL-10组ABCA1 mRNA表达在24 h和48 h有轻微增加(P＜0.05),但ABCA1蛋白表达在各时间点无明显变化.IL-10 TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低(F=697.23,F=749.64,P均＜0.05),但同TNF-α组相比,其下降程度有所减轻(P＜0.05).结论:IL-10可部分抑制TNF-α所引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调.     

严重烧伤大鼠离体肺泡巨噬细胞CD14表达调控的实验研究

目的 探讨严重烧伤对体外培养大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14膜蛋白(CD14)和 mRNA基因表达变化的影响,以及抗CD14抗体对AM产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的调控作用.方法 (1)成年SD大鼠84只,分为烧伤组和内毒素(LPS)组(每组42只),每组均分为1,2,4,6,8,10和12 h共7个时相点,并设对应的对照组(各6只大鼠).大鼠烧伤和LPS注射后检测外周血LPS浓度.(2)成年SD大鼠168只,分为烧伤血清组、血清抗体组、LPS组、LPS抗体组(每组42只),每组均分为1,2,4,6,8,10和12 h共7个时相点,并设对应的对照组(各6只大鼠);各组大鼠行全肺在体支气管肺泡灌洗分离AM,并按时相点分别进行体外培养.以上4组分别加入烧伤血清、烧伤血清+抗体、LPS、LPS+抗体,在以上相同时相点终止培养,RT-PCR、免疫组织化学及ELISA方法 分别检测4组AM在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达及分泌TNF-α和IL-6的变化.结果 (1)烧伤组与烧伤对照组、LPS组与LPS对照组比较发现,烧伤及LPS注射后大鼠各时相点外周血LPS浓度均明显高于对照组.(2)烧伤血清组、LPS组与对应的对照组比较发现,烧伤血清组、LPS组大鼠AM各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达均明显增高,AM培养上清中TNF-α和IL-6浓度亦相应显著增高(P<0.01).以烧伤血清与AM培养1 h后,烧伤血清组培养上清中TNF-α和IL-6浓度即显著增加.与烧伤血清组比较,血清抗体组AM在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达显著降低(P<0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P<0.01).与LPS组比较,LPS抗体组AM在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达显著降低(P<0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P<0.01).结论 严重烧伤后外周血LPS浓度增加,离体AM CD14 mRNA表达和蛋白表达均显著增加,使LPS对免疫系统的激活作用显著增大;AM分泌TNF-α和IL-6明显增加,而抗CD14抗体可以明显拮抗AM合成和分泌炎性介质.提示严重烧伤后通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌是可行的.     

外源性人β防御素-2调节子宫内膜异位症细胞增殖/凋亡及炎性因子的表达

[目的]探讨体外条件下加入外源性人β防御索-2蛋白对子宫内膜异位症(EMs)细胞增殖/凋亡和炎性因子表达的影响.[方法]组织块消化法原代培养EMs细胞,Western Blot法检测EMs细胞hβD-2蛋白、TNF-α及IL-1β的蛋白表达;Western Blot法检测加入重组人hβD-2蛋白(40μg/mL)前后EMs细胞内TNF-α,IL-1β蛋白表达变化;按不同梯度浓度(80、40、20、1O μg/mL)加入人β防御素-2蛋白(hβD-2)后,ELISA法检测EMs细胞培养液上清中TNF-α,IL-1β细胞因子的浓度;加入高剂量hβD-2蛋白(120 μg/mL)并培养EMs细胞24H设为实验组,对照组为完全培养基培养的EMs细胞,MTT法检测实验组及对照组EMs细胞增殖情况;PI法检测实验组及对照组EMs细胞凋亡情况.[结果]原代培养的EMs细胞可表达hβD-2蛋白、TNF-α、IL-1β蛋白;加入外源性重组人hβD-2蛋白后,EMs细胞表达TNF-α、IL-1β蛋白下调;EMs 细胞培养液上清中可检测出TNF-α,IL-1β的表达;在加入hβD-2后,EMs细胞培养液上清内TNF-α、IL-lβ表达下降,且随着加入hβD-2浓度增高其下降趋势增大,差异有统计学意义(80＞40＞20＞ 10 μg/mL,P＜0.05);在EMs细胞培养基中加入高浓度外源性人β防御素2蛋白孵育后(120 μg/mL),与对照组相比,EMs细胞的增殖受到明显抑制,且凋亡明显增加(P＜0.05).[结论]hβD-2可以影响子宫内膜异位症细胞内炎症因子TNF-α,IL-1β的表达,并可抑制EMs细胞的增殖,促进其凋亡.为治疗EMs提供新的理论依据.     

HBV X蛋白对大鼠肾小球系膜细胞增殖及促炎性细胞因子表达的影响

目的探讨HBV X基因表达的蛋白(HBVx)对体外培养的大鼠系膜细胞表达肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6及细胞增殖的影响。方法构建含HBV X基因的真核表达载体pCI-neo-X,采用脂质体法将pCI-neo-X转染给体外培养的大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定体外培养大鼠系膜细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖。结果转染pCI-neo-X的系膜细胞(MC+pCI-neo-X组),HBx在36、48 h表达明显。同时TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达量较未转染和转染空载体组明显增高。上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平在MC+pCI-neo-X组较未转染和转染空载体组均增高,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞增殖在36、48 h MC+pCI-neo-X组最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达TNF-α、IL-1β和IL-6,促进系膜细胞增殖。HBx对系膜细胞的增殖作用可能与TNF-α、IL-1β、IL-6的高表达有关。     

睾酮对小鼠RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子-α和单核细胞趋化蛋白-1表达的影响及其分子机制

目的 探讨雄激素对RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达的影响及其分子机制.方法 (1)用不同浓度睾酮处理小鼠RAW264.7巨噬细胞不同时间,分别用RT-PCR和ELISA法检测细胞TNF-α和MCP-1 mRNA和培养上清液中的表达;(2)10-7 mol/L睾酮处理细胞0、10、30、60、180、360 min后,Western印迹检测磷酸化NF-κB(p-NF-κB)的表达.(3)NF-κB的抑制剂PDTC处理细胞1 h后再用不同浓度睾酮处理,用RT-PCR和ELISA法检测TNF-α和MCP-1的表达.结果 (1)①10-9和10-7 mol/L睾酮处理细胞6 h后,TNF-α mRNA表达分别增加1.78倍和1.87倍(均P<0.05),MCP-1 mRNA的表达也显著增加(均P<0.01);②睾酮处理6 h后TNF-α和MCP-1的分泌量的变化差异均无统计学意义;睾酮处理24 h后,TNF-α和MCP-1的分泌量显著增加(均P<0.05);10-7 mol/L睾酮处理组的分泌量显著高于10-9 mol/L睾酮处理组(均P<0.05).(2)随着睾酮处理时间的增加,p-NF-κB的表达增加,60 min达峰值(2.49±0.40)倍,P<0.05,以后逐渐降低.(3)PDTC预处理后再用睾酮处理6 h,TNF-α和MCP-1 mRNA的表达均低于同浓度单纯睾酮处理组(均P<0.05),但仍高于空白对照组(均P<0.05).PDTC预处理后再用睾酮处理24 h,TNF-α和MCP-1的分泌量均低于同浓度单纯睾酮处理组(除10-9mol/L睾酮组外,均P<0.05),但仍高于空白对照组(均P<0.05).结论 睾酮能促进离体的小鼠RAW264.7巨噬细胞TNF-α和MCP-1表达.NF-κB的活化是介导睾酮这一效应的分子机制之一.     

TREM-1、TNF-α和IL-8在单核细胞源性泡沫细胞中的表达

目的：探讨髓系细胞触发受体1(TREM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)在巨噬细胞源性泡沫细胞产生过程中的表达情况。方法：人单核细胞株（U937）经佛波酯（PMA）诱导贴壁后,分为PMA诱导组、低密度脂蛋白（LDL）诱导组及氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导组。应用RT-PCR法检测上述3组细胞中TREM-1 mRNA表达;用ELISA法检测上述3组细胞培养上清中TNF-α和IL-8含量。结果：与PMA诱导组、LDL组细胞比较,ox-LDL组细胞TREM-1 mRNA表达水平均明显增高（P<0.05）;ox-LDL组培养上清中TNF-α、IL-8含量明显高于LDL组及PMA诱导组（P<0.05）。结论：TREM-1、TNF-α和IL-8在动脉粥样硬化（AS）发生发展中可能存在相互诱导、相互协同作用,共同参与AS的形成。     

白藜芦醇对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中sICAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10μmol/L)预处理24 h后,再用TNF-α(10 ng/ml)处理24 h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平。结果高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7%;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P<0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P<0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P<0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强。结论白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤。     

共刺激分子异常介导寻常型银屑病免疫失衡的实验研究

目的通过检查外周血免疫细胞共刺激分子和细胞因子表达格局,分析寻常性银屑病患者可能发生的免疫异常。方法选择未经治疗的寻常型银屑病患者与正常对照组,抽取外周血并分离单个核细胞(peripheral bloodmonocytes,PBMC),采用RT-PCR对寻常型银屑病患者和正常对照组外周血CD86、B7H1、Foxp3、T-bet、GATA-3指标进行检测。采用流式细胞仪检查两组外周血清中IL-12、IFN-γ、IL-17、IL-2、IL-10、IL-9、IL-22、IL-6、IL-13、IL-4、IL-5、IL-1β、TNF-α含量。结果寻常型银屑病组PBMC中Foxp3和GATA3表达低于正常人群,但T-bet表达增高(P<0.05)。寻常型银屑病患者TNF-α明显高于正常对照组(P<0.05)。寻常型银屑病患者CD86相对表达量(0.3636±0.1003)明显高于对照组(0.1061±0.03883)(P<0.05);而B7H1相对表达量(0.06876±0.03145)明显低于对照组(0.3401±0.1152)(P<0.05)。结论寻常型银屑病患者Th1亚群增加、TNFa水平增高,而Th2和调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)亚群明显降低;寻常型银屑病患者外周血抗原递呈细胞(antigen present cells,APC)表达共刺激分子CD86增加而共抑制分子B7H1降低,提示寻常型银屑病患者体内存在的免疫功能紊乱可能是由于其APC功能异常所致。     

脂多糖对人肺微血管内皮细胞细胞骨架及TNF-α, IFN-γ表达的影响

摘 要 目地 探讨脂多糖 (lipopolysaccharide LPS) 直接诱导人肺微血管内皮细胞 (HPMVEC)后,细胞骨架的改变,肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ）mRN的表达及细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ的表达水平的改变。方法 HPMVEC生长至80 %以上融合时,加入LPS 以 500 ng/ml浓度刺激细胞分别至 0、4、6、8 h,经鬼笔环肽染色后采用激光共聚焦观察HPMVEC细胞骨架的变化。至预定时相点离心收集培养液上清,利用实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、IFN-γ mRNA的表达,采用 ELISA方法测定细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ的表达水平,并进行统计学分析。结果 发现LPS 刺激培养后,8h组细胞开始出现细胞骨架改变;4h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达与0h组无差异（P>0.05）,6h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达则高于0h组（P<0.05）,8h组TNF-α、IFN-γ表达高于0h组（P<0.05）;4h 组细胞培养上清TNF-α、IFN-γ的表达水平与0h组比较无差异（P>0.05）,6h 组细胞培养上清TNF-α、IFN-γ的表达水平与0h组比较升高（P<0.05）,8h组细胞培养上清TNF-α、IFN-γ的表达水平与0h组比较升高（P<0.05）。结论 表明细菌致病因子LPS能直接刺激HPMVEC使细胞结构发生改变,同时影响细胞因子( cytokine, CK)的分泌,使促炎因子TNF-α、IFN-γ分泌升高,参与肺损伤。这可能是LPS发挥其毒性作用诱发ALI/ARDS的一个重要途径。     

黄芪汤调节TLR4/NF-κB信号通路改善高糖诱导足细胞损伤的研究

  目的  探讨黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的作用及机制。  方法  体外培养人足细胞, 采用30 mmol·L-1葡萄糖干预24 h诱导足细胞损伤, 分别设置对照组、模型组、黄芪汤低浓度组(10 μg·mL-1)、黄芪汤中浓度组(30 μg·mL-1)和黄芪汤高浓度组(100 μg·mL-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, 划痕实验检测细胞迁移能力,qPCR法检测TNF-α、IL-6等炎症因子mRNA表达, ELISA法检测足细胞上清TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测足细胞TLR4、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达。  结果  与对照组比较, 模型组细胞划痕愈合率明显降低(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6、CCL24 mRNA表达水平,上清液中TNF-α、IL-6的含量和TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达均显著增加(P < 0.05,P < 0.01)。与模型组相比, 黄芪汤组细胞划痕率明显升高(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6的含量和mRNA表达,以及TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著减少(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  黄芪汤能有效减轻高糖对人足细胞的炎症损伤, 增强细胞增殖、迁移能力, 抑制细胞凋亡, 其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、下调炎症因子的表达有关。      

TNF-α、IL-8与急性重症胰腺炎肺损伤中PMNs凋亡延迟的相关性研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)在急性重症胰腺炎(acute severe pancreatitis,ASP)合并急性肺损伤中中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMNs)凋亡延迟的相关性及其机制。方法选取雄性SD大鼠48只,穿刺胆胰管并注入3.5%牛磺胆酸钠制作ASP合并急性肺损伤大鼠模型,分为牛磺胆酸钠注射后3、6、12 h及对照组。病理检测胰腺及肺组织;于预定时相取支气管灌洗液,密度梯度离心分离PMNs,流式细胞仪测定PMNs凋亡、坏死比例;ELISA检测灌洗液中TNF-α及IL-8的含量;检测NF-κB在肺组织中的表达。结果 ALI大鼠肺灌洗液中PMNs凋亡、坏死比例增加,凋亡延迟。支气管-肺泡灌洗液中的TNF-α及IL-8的含量较对照组显著增加,灌洗液中细胞TNF-α及IL-8 mRNA表达增加,不同干预时间组间具有显著差异,具有时间依赖效应;肺组织中NF-κB的表达显著增加。结论TNF-α、IL-8在ASP合并急性肺损伤中可能发挥一定的作用。     

薄荷醇通过mTOR活化促进人支气管上皮细胞气道炎症相关因子的表达

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞（BEAS-2B）气道炎症相关因子表达的影响及其机制。 方法 将细胞分为4组：正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧光定量 PCR检测瞬时受体电位蛋白-8（TRPM8）、肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β mRNA的表达,Western blot检测BEAS-2B 中磷酸化的mTOR（p-mTOR）、TRPM8、TNF-α和IL-1β的蛋白表达。用流式细胞术检测胞内Ca2+荧光强度。 结果 与正常对照组相比,薄荷醇组中细胞TNF-α和IL-1β mRNA及蛋白表达升高,p-mTOR蛋白表达升高,胞内Ca2+浓度升高（P<0.05）。与正常对照组相比,雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1β mRNA及蛋白表达均无差异（P>0.05）,p-mTOR蛋白表达降低（P<0.05）,胞内Ca2+浓度无差异（P>0.05）。与薄荷醇组相比,薄荷醇+雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1β mRNA及蛋白表达降低,p-mTOR蛋白表达降低,胞内Ca2+浓度降（P<0.05）。 结论 薄荷醇可能通过活化mTOR诱导胞内Ca2+浓度升高,进而促进气道炎症相关因子IL-1β和TNF-α的表达。     

不同相对分子质量一年生膜荚黄芪多糖对RAW264.7细胞炎症相关因子表达的影响

目的：观察不同相对分子质量的一年生膜荚黄芪多糖（APSⅠ）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症模型分泌促炎因子和抗炎因子的影响,探讨APSⅠ的抗炎作用。方法：体外培养RAW264.7细胞,APSⅠ作用于未经刺激的RAW264.7细胞及LPS（1 mg/L）刺激后RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、APSⅠ组及LPS+ APSⅠ不同相对分子质量组(APSⅠ-A,APSⅠ-B,APSⅠ-C),采用CCK-8法检测不同相对分子质量、不同浓度的APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）的分泌量。结果：与空白对照组比较,APSⅠ单独处理组RAW264.7细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）,NO及IL-10表达水平明显增加（P<0.05）,TNF-α的分泌量降低（P<0.05）;与LPS模型组比较, LPS+APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力显著升高（P<0.05或P<0.01）,NO、TNF-α的表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10的分泌增加（P<0.05或P<0.01）;3种不同相对分子质量APSⅠ之间比较,APSⅠ-C对NO、TNF-α的抑制更为明显,且APSⅠ-C促进IL-10分泌的作用强于APSⅠ-A及APSⅠ-B。结论：APSⅠ　可以拮抗LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应;不同相对分子质量APSⅠ的抗炎作用有差异,APSⅠ的生物活性与其相对分子质量存在一定的关联性。     

TRPM7在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡和炎症反应中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道M7 (TRPM7)在七氟烷(Sev)预处理抑制大鼠氧糖剥夺(OGD)海马神经元凋亡和炎症反应中的作用.方法选择出生1d的SD大鼠50只,提取海马神经元,将其分为5组,包括对照组、Sev预处理组(Sev组)、OGD组、Sev预处理+OGD组(Sev+OGD组)和Sev预处理十缓激肽+OGD组(联合组).缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24 h后制备OGD模型.对照组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2％ Sev预处理1 h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;Sev+OGD组神经元行2％ Sev预处理1h,24 h后制备OGD模型;联合组神经元Sev预处理同时在培养基中加入缓激肽(终浓度200 μmol/L),其余处理同Sev+OGD组.正常培养24 h时后,检测海马神经元TRPM7 mRNA和蛋白表达水平、存活率和凋亡率、IL-1β、TNF-α的mRNA及上清蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OGD组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率明显降低(P＜0.05).与OGD组比较,Sev组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而存活率明显升高(P＜0.05).与Sev组比较,联合组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率显著降低(P＜0.05).结论 Sev预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻OGD后海马神经元凋亡和炎症反应.