邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChipMouseExon1．0STArray等技术及芯片分析方法，观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个，其中包括Tete3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个，Adipoq、Nream、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个，以及Atp8b3、Pnpla3、Retn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个，有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因，可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

乳酸脱氢酶C4在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)在邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织的表达水平及其意义。方法采用Affy-metrix Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array及其方法检测乳酸转运和氧化相关基因在H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异,芯片重复两次;并采用实时荧光定量PCR对两种高乳酸亲和力的脱氢酶基因Ldhb和Ldhc在各种证候中的表达量进行检测。结果乳酸转运相关基因的表达要高于氧化相关基因,尤其以H22接种后早期最明显;Ldhb基因的表达在H22接种后早期、中期和晚期变化不明显,而Ldhc基因在H22接种后早期气虚、中期和晚期的表达也不明显,且与Ldhb表达量相近,但它在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中表达量显著升高。结论在荷瘤小鼠肿瘤组织中,尤其是H22接种后早期,肿瘤细胞产生的乳酸作用不仅在于氧化产能;LDH-C4可能代替LDH-B4参与了早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织缺氧肿瘤细胞的代谢拯救途径。     

荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸下调的基因

目的:观察H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸组织一致下调的基因。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊和辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和早期气虚证睾丸组织基因表达谱的差异,重点关注早期阶段2个证候一致下调且表达量较大的基因。结果:筛选出早期邪毒壅盛和气虚证一致下调的基因共150个,其中有11类可以简单归类的基因;气虚与邪毒壅盛证这些基因的表达量差异不大,前者略高于后者;中晚期荷瘤小鼠这些基因表达接近正常对照组,甚至上调。结论:肿瘤发生的早期睾丸基因改变以下调为主,一些基因涉及精子发生,提示荷瘤小鼠生殖受到影响;鉴于两个证候这些基因表达的差异不大,及中晚期表达有增加趋势,提示这些基因下调可能与肿瘤早期应激有关;多数基因在睾丸组织中的功能还不清楚,提示有大量探索工作。     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠甲状腺独特上调和下调基因的检测

我们以往的研究一再发现,荷瘤小鼠在肿瘤发生后,会自发形成证候及其演变,早期以邪毒壅盛证、气虚证多见,且发现邪毒壅盛证动物预后差,带瘤生存时间短.鉴于学术界以往的研究观察到中医证候的形成与甲状腺密切相关,那么,邪毒壅盛证发生时,甲状腺是否存在独特的基因表达特征,是否与该证候形成有关?因此,我们通过业已建立的小鼠四诊工作站及其系列标准[1-2],对H22荷瘤小鼠进行辨证,筛选出早期邪毒壅盛证、气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个常见证型,继而采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术对以上各证候荷瘤小鼠甲状腺等组织的基因进行了检测,本文重点报道邪毒壅盛证甲状腺独特上调与下调且表达量较高的基因.     

荷瘤小鼠虚证、实证垂体基因表达的差异

目的:揭示荷瘤小鼠实证与虚证垂体基因表达的差异.方法:采用四诊计量检测方法及计量辨证方法,运用GeneChipMouseExon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表迭的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因.筛选出邪毒壅盛证较其他三个证候一致上调或下调的基Igl.结果:筛选出邪毒壅盛较其他三证一致上调的基因121个.介绍了邪毒壅盛证芯片读数大于1500的9个基因:Gabra6、DOH4S114、Ales2、Pvalb、Plpl、Itprl、Narg2、LOC627016、Gpm6b;一致下调的基因340个.介绍了正常小鼠芯片读数大于1500的21个基因:Abpg、Pip、Dlkl、Car6、Eif3s5、Gnb2、Pcskln、Aplpl、S1c22a17、Dnpep、Rnfl87、IOC639100、Rablb、Aldh2、Pten、Tapbp、2310044H10Rik、Cxxc5、Gamdl、Renl、Lrpll.结论:H22荷瘤小鼠的实证与虚证.其垂体基因存在大量的表达差异.其中部分可能是实证与虚证的标志基因.     

早期气虚证H_(22)荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征

目的:揭示H22荷瘤小鼠早期气虚证肿瘤组织基因表达的特征。方法:利用实验中获得的外显子芯片数据分析H22荷瘤小鼠早期气虚证与邪毒壅盛、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证等3个证候肿瘤组织基因表达的差异。结果:与其它三种证候相比,在早期气虚证小鼠肿瘤组织中,1上调表达的基因有8个,其中包括H2-Eb2和Sla等4个TCR或BCR有关的基因,和P2ry1、Cobra1等4个其他功能类的基因。2下调表达的基因有18个,包括MMP8/9/10等3个MMPs家族基因,S100a8、S100a9等2个S100家族基因,Lcn2、Clec4d等5个细胞因子和粘附分子类基因,以及Slc6a9、Ddit4等其他功能类的基因8个。结论:早期气虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量差异性表达的基因,上调表达的数量少,下调表达的数量多,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

H22荷瘤小鼠早期阶段的辨证论治尝试

目的：观察辨证论治对早期邪毒壅盛证、气虚证H22荷瘤小鼠的疗效。方法：将雄性昆明种小鼠随机分组．除正常组外，腋下接种H22腹水癌细胞．出瘤后．做四诊检测并辨证．按照一定标准从160只荷瘤小鼠中挑选出单纯邪毒壅盛小鼠36只、气虚证小鼠30只，将2组小鼠分别分为对照组、成方组、辨证组．成方组予固定成方．辨证组予邪毒方或益气方，综合比较药物对各组疾病与证候的疗效。结果：辨证论治在延长小鼠带瘤生存时间和抑制肿瘤生长方面的优势不突出，但具有显著地保护荷瘤小鼠阳气的作用，有助于减缓邪毒壅盛荷瘤小鼠阴虚的发生发展。结论：辨证论治对于提高早期邪毒壅盛证、气虚证荷瘤小鼠的生存质量有益。     

雄激素合成酶在H22荷瘤小鼠不同证候表达差异

目的:研究睾丸雄激素合成酶与肿瘤状态下小鼠证候的关系。方法:采用实验小鼠及其标准化四诊与辨证方法筛选H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证,并以Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array技术检测睾丸组织基因芯片表达谱,重点分析睾丸基因芯片中雄激素合成酶及其调节因子在不同证候小鼠中的差异表达。结果:与正常组比较,Star、Stard5、Cyp17a1、Hsd3b6、Hsd17b3、Sult1e1等基因在早期邪毒壅盛证和气虚证小鼠呈现下调趋势,且在中晚期阳气虚证和气阴阳虚证下调幅度更加显著,Cyp11a1、Hsd3b1、Hsd17b10、Hsd17b11、Hsd17b12、Fdx1、Fdxr、Por、Sult1a1等仅在中晚期阳气虚证和气阴阳虚证中显著下调,Cyp17a1仅在睾丸组织特异性中表达。结论:H22荷瘤小鼠肿瘤形成后,自发产生的虚证越严重,其睾丸雄激素合成酶基因转录活性越低。     

阳气虚证H22荷瘤小鼠垂体差异表达的基因

目的:筛选荷瘤小鼠阳气虚证垂体差异表达的基因,并简要分析其功能特征.方法:采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,及GeneChip Mouse Exon1.0 ST Array等技术,检测H122荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因,筛选阳气虚证差异表达的基因.结果:筛选到阳气虚证独特上调的基因14个:LOC669166、Cd8b1、Cd3d、Ly6d、Lat、Orm2、Dntt、1700021K02Rik、A130072A22Rik、IDC669782、Ptpre、Igk-V21-9、Cxcll3、LDC668417,其中多数基因在正常小鼠及其他证候小鼠的垂体表达很低或几乎关闭;独特下调的基因3个:Wfdc1、Spook3、Mfan4.结论:H22荷瘤小鼠阳气虚证垂体基因表达与其他证候存在较大差异,其中部分可能是阳气虚证的标志基因.     

荷瘤小鼠常见证候在神经-内分泌-免疫网络组织基因转录的特征

目的:揭示邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证等4个同病异证荷瘤小鼠在神经-内分泌-免疫网络组织差异转录基因的总体特征。方法:对2006和2009年2批实验所检测以上4个证候及正常对照小鼠下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸、胸腺、脾脏等60张芯片,近100万个核心基因进行分析,观察其一致性上调或下调的基因数与量的特征。结果:肿瘤发生后脾脏、胸腺、睾丸等组织基因一致性差异表达的数量大,其次是垂体和肾上腺,与疾病的关系密切;早期气虚证荷瘤小鼠突出表现为下丘脑基因表达趋于活跃;而同期的邪毒壅盛证荷瘤小鼠则突出表现为肾上腺基因表达趋于抑制,这可能与该证候荷瘤小鼠预后差有关。结论:荷瘤小鼠同病异证在神经-内分泌-免疫网络组织转录组方面有其特征性的物质基础。     

同病异证H22肝癌小鼠甲状腺AC-cAMP信号通路基因差异表达的特征

目的 观察同病异证H22肝癌小鼠甲状腺AC-cAMP信号通路基因差异表达的特征.方法 采用小鼠计量化四诊和辨证方法及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,观察肿瘤邪毒证、气虚证甲状腺激素生成和释放相关AC-cAMP信号通路及相关基因表达特征.结果 ①一些基因相对关键,Tg和转录因子Pa...     

审证求因治疗系统性红斑狼疮

目的:总结作者辨证论治系统性红斑狼疮临床经验。方法:以医案形式阐述系统性红斑狼疮的病因病机、证型、治法、方药。结果:系统性红斑狼疮的病因病机为禀赋不足,情志内伤,外邪侵袭,脏腑虚损,热毒燔灼形成热毒炽盛证;脏腑虚损,气血阴阳失调,久之,形成气阴两伤证;阴病及阳,脾阳不足,水湿不运,肾阳不足,肾水泛滥形成脾肾阳虚证;脾失健运,或肝木侮脾形成脾虚肝旺证;肝气郁结,气血凝滞形成气滞血瘀证。结论:辨证论治系统性红斑狼疮有较好疗效。     

荷瘤小鼠证候的发生、演变、兼证及预后

目的观察荷瘤小鼠证候及其演变。方法采用小鼠四诊工作站及其标准,定量检测小鼠瘤径、体重、腋温、爪、尾显微数码拍照屏提取r值、小鼠水平和垂直移动,估算出瘤体积和去瘤体重。并据此建立痰瘀邪盛、阴虚、气虚、阳虚、阳气虚等辨证标准,计量辨证。结果荷瘤小鼠肿瘤早期增长速度差异大;随着病情的发展,不同虚证发生率和程度增加,以气虚最严重,其次是阳气虚,阴虚发生率低。随着病情的发展,荷瘤小鼠虚证兼证的比例增加,无证可辨和单证的数量下降,复合证组合显著增加。早期肿瘤增长迅速者,预后差,相关分析具有统计意义(P=0.01),阳气虚、气虚、阳虚等预后较差。病程中,腋温下降、体重持平和下降是预后差的重要标志。研究提示,早期控制肿瘤增长十分必要;治疗重点应在肿瘤局部,不宜损伤机体正气;扶持阳气十分必要。建议,作为肿瘤疗效比较,要求在荷瘤小鼠出瘤后,依据肿瘤大小分层随机分组,以免造成分组偏倚,影响疗效评价。结论本研究在疾病小鼠证候采集中,首次采用了标准化四诊检测技术,四诊和辨证实现了计量化,所建立的方法和思路,有助于揭示疾病状态下证候的自然发生及其演变,为中医药病证结合和辨证论治的基础研究提供了方法学,具有重要的学术意义和应用价值。     

沉脉的特征、形成机制及主病研究

从脉象特征、影响因素、形成机制、浮沉比较、所主病证5个方面对沉脉进行了阐述。其特征是脉位较低,轻取不应,重按乃得;影响因素包括体型、季节、性别;沉脉的形成与疾病的表里、气血的强弱、气机郁滞的程度、邪气的性质及多少有密切关系;借助浮沉脉象的比较,可判断正气的强弱,邪气的多少以及病位和病势;沉脉主里此为常规,多见于阴寒内盛、水饮、阳气虚衰、气机郁滞、血虚、阴虚内热等情况;沉脉也有主表之时,多见于表证初期和太少两感。     

糖尿病周围神经病变的中医证候分布

目的探讨糖尿病周围神经病变的中医证候分布特点。方法选取114例糖尿病周围神经病变患者进行中医辨证和临床分级。结果(1)单证出现率依次为气虚证49.12%、火热证38.59%、血瘀证36.84%、阴虚证27.19%、阳虚证14.91%、痰湿证8.77%、血虚证0.88%。(2)1级中气虚证、火热证的出现率较高(67.65%,32.35%);2级中血瘀证、阴虚证和阳虚证明显增加(52.11%、26.76%、11.27%);3级中阴虚证、阳虚证达高峰(均为100%)。(3)1级单证出现率为67.65%,2级两证出现率为57.75%,3级三证出现率为55.56%。(4)证候组合形态有15种,1级中气虚证和火热证的出现率较高(35.3%、32.4%);2级中火热血瘀证、火热证和气虚血瘀证出现率较高(19.7%、18.3%、14.1%);3级中阴阳两虚血瘀证出现率较高(55.6%)。结论气虚证、火热证、血瘀证、阴虚证、阳虚证、痰湿证可以作为糖尿病周围神经病变的基本证候,且与病情进展相关。     

6种胃溃疡小鼠模型的证候特征及比较

目的研究胃溃疡不同模型小鼠证候的发生和演变,以及疾病与证候的关系。方法在文献报道的基础上,采用水浸拘束法、乙酸法、磷酸组胺法、消炎痛法、利血平法、乙醇法等6种不同方法建立小鼠胃溃疡疾病模型,并设置正常、禁食、假手术等对照组,运用业已建立的小鼠标准化、计量化的四诊检测和辨证方法,对以上各模型进行了客观、动态、量化的检测和证候评价。结果6种造模方法均能不同程度地造成胃黏膜损伤。其中,水浸拘束模型气血阴阳损伤程度轻,恢复快;乙酸法模型出现气损、阳竭,以及精血虚少的证候;磷酸组胺小鼠仅在早期有胃热证的倾向;消炎痛模型出现短暂气虚、阳虚证候,但精血损伤证候持续较长;利血平模型出现典型的胃寒证、阳虚证(主要是心阳虚、脾阳虚)和阴虚,是一个严重的气血阴阳虚证复合模型;乙醇法造模后即出现典型的胃热证,恢复期甚至出现气盛表现。结论不同造模方法的胃溃疡模型小鼠存在各自的证候特点,符合"有是病便有是证"的中医理论;同时其证候是可以通过四诊客观化方法检测到,并可以用于治则治法制定的参考,以及作为疗效评价指标。