补肾益肺解毒法对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞、Foxp3及B7-H3的影响

目的:研究补肾益肺解毒法对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)、转录因子Foxp3及共刺激因子B7-H3表达的影响。方法:建立32只6~8周龄C57BL/6雄性小鼠Lewis肺癌细胞皮下移植瘤模型后,将32只造模后小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组及综合组,每组各8只,单笼饲养。模型组以0.4 m L生理盐水灌胃14 d,并分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射生理盐水1 m L;中药组以0.4 m L中药液灌胃14 d,并分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射生理盐水1 m L;化疗组以0.4 m L生理盐水灌胃14 d,分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射DDP溶液1 m L;综合组以0.4 m L中药液灌胃14 d,在第1天、第3天、第5天腹腔注射DDP溶液1 m L。给予药物干预14d后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量等,流式细胞术检测各组小鼠外周血和移植瘤CD4~+CD25~+Treg细胞的比例、Foxp3以及B7-H3的含量。结果:补肾益肺解毒法可改善肺癌小鼠的行为体征,增加饲料消耗量、体质量和去瘤体质量,减少移植瘤重量,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。补肾益肺解毒法治疗可显著降低Lewis肺癌小鼠外周血和移植瘤CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3以及B7-H3的水平,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:补肾益肺解毒法通过降低CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3以及B7-H3的水平增强机体的抗肿瘤免疫应答发挥抑瘤作用。     

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Foxp3+CD4+CD25+调节性 T 细胞影响的研究

目的研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响,探讨薏苡仁酯类风湿关节炎治疗中的可能机制。方法从25只小鼠随机选取5只为正常组,剩余20只小鼠进行CIA造模。造模成功后随机分为造模对照组10只及薏苡仁酯组10只。薏苡仁酯组予薏苡仁酯注射液25 m L/kg,正常组及造模对照组注射生理盐水25 m L/kg,均每天腹腔内注射1次。共用药21天。用药后对各组关节炎进行评分,计算关节炎指数,并应用流式细胞术测定小鼠外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg比例。结果与正常组比较,造模对照组关节炎指数明显升高(P0.01),薏苡仁酯组较造模对照组小鼠关节炎指数明显下降(P0.01)。与正常组比较,造模对照组Foxp3+CD4+CD25+Treg水平均明显下降(P0.01),薏苡仁酯组较造模对照组用药后Foxp3+CD4+CD25+Treg水平明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论薏苡仁酯能上调CIA小鼠Foxp3+CD4+CD25+Treg比例,可能在CIA的发病中具有一定的免疫调节作用。     

葛根散对结直肠癌小鼠模型肝脏微环境Treg细胞的影响

目的探讨葛根散对结直肠癌小鼠肝脏微环境中Treg细胞的影响,印证中医治未病"瘥后防复"的理论应用。方法取对数生长期的CT26细胞接种于BALB/C小鼠脾脏,建立结直肠癌肝转移模型。将12只模型小鼠随机分入两组:对照组和治疗组。对照组每天给予0.2ml生理盐水灌胃,治疗组按0.2 g生药/10 g给予0.2 ml葛根散药液灌胃,1次/d,持续2周后处死,制作病理切片,用免疫组化检测Foxg3蛋白的表达,用流式细胞术(FCM)检测CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+Treg细胞的含量及比例。结果治疗组肝转移瘤组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg数量较对照组明显减少(P<0.01)。结论葛根散减少结直肠癌肝转移的机制之一可能就是通过减少肝脏微环境中Treg细胞数量,改善肝脏微环境中的免疫抑制状态来达成的。     

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Foxp3^+ CD4^+ CD25^+调节性T细胞影响的研究北大核心CSCD

目的研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响,探讨薏苡仁酯类风湿关节炎治疗中的可能机制。方法从25只小鼠随机选取5只为正常组,剩余20只小鼠进行CIA造模。造模成功后随机分为造模对照组10只及薏苡仁酯组10只。薏苡仁酯组予薏苡仁酯注射液25 m L/kg,正常组及造模对照组注射生理盐水25 m L/kg,均每天腹腔内注射1次。共用药21天。用药后对各组关节炎进行评分,计算关节炎指数,并应用流式细胞术测定小鼠外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg比例。结果与正常组比较,造模对照组关节炎指数明显升高(P<0.01),薏苡仁酯组较造模对照组小鼠关节炎指数明显下降(P<0.01)。与正常组比较,造模对照组Foxp3+CD4+CD25+Treg水平均明显下降(P<0.01),薏苡仁酯组较造模对照组用药后Foxp3+CD4+CD25+Treg水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论薏苡仁酯能上调CIA小鼠Foxp3+CD4+CD25+Treg比例,可能在CIA的发病中具有一定的免疫调节作用。     

安胎汤对先兆流产大鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞免疫调节的影响

目的:从CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞变化角度探讨安胎汤对先兆流产大鼠的影响及作用机制。方法:将大鼠雌雄以2∶1的比例配对后筛选出孕鼠48只,以缩宫素及针灸合谷、三阴交穴的方法建立先兆流产模型,随机分为6组,分别为正常妊娠组、安胎汤低剂量组、安胎汤中剂量组、安胎汤高剂量组、黄体酮组及先兆流产大鼠模型组。于妊娠第13天取大鼠外周血后即用流式细胞仪检测CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞百分率,然后处死大鼠,计数双侧子宫着床点数及活胎数。结果:安胎汤可提高先兆流产孕鼠胚胎吸收率和CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞百分率,降低胚胎吸收率(P0.01)。结论:安胎汤通过调节先兆流产大鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞百分率达到保胎目的,且疗效与剂量相关。     

苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞及相关调控分子的干预作用

目的:观察苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠脾CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达及相关调控分子的干预作用。方法:复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌动物模型,动态观察苏木、苏木+黄芪抑瘤率、肺转移抑制率,流式细胞术检测小鼠脾CD4+CD25+Treg表达,免疫磁珠分选小鼠脾CD4+CD25+细胞,RT-PCR检测小鼠脾CD4+CD25+细胞和瘤组织Foxp3、CTLA-4mRNA表达。结果:苏木组6d、苏木+黄芪组10d瘤重低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组20d肺转移抑制率为77.75%;15d苏木+黄芪组小鼠脾CD4+CD25+细胞表达低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组荷瘤小鼠瘤组织CTLA-4、Foxp3mRNA表达及脾CD4+CD25+分选后细胞Foxp3 mRNA表达低于荷瘤对照组(P0.05)。结论:益气活血中药组方苏木+黄芪可调节荷瘤小鼠脾Treg及相关调控分子表达,并且在淋巴组织和肿瘤微环境中都表现出作用。     

二陈汤加沙参、麦冬对Lewis肺癌小鼠免疫功能及肿瘤血管生成的影响

目的观察二陈汤加沙参、麦冬对Lewis肺癌小鼠免疫功能及肿瘤血管生成的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法 30只C57BL/6小鼠腋窝皮下注射Lewis肺癌细胞造模。随机分为模型组、中药组和顺铂组,每组10只。模型组予0.4 mL/20 g生理盐水灌胃,中药组予0.4 mL/20 g二陈汤加沙参、麦冬药液灌胃,顺铂组予3 mg/kg顺铂溶液200μL/20 g腹腔注射,每日1次,连续3 d,并予0.4 mL/20 g生理盐水灌胃,每日1次,连续14 d。称定小鼠体质量、瘤质量、胸腺质量和脾质量,计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞亚群水平;Western blot检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)-1、VEGFR-2、p-p38、p-JNK的表达。结果与模型组比较,各给药组小鼠瘤质量显著降低(P0.01),组间差异无统计学意义(P0.05),中药组和顺铂组抑瘤率分别为33.64%、46.53%,中药组胸腺指数、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、B细胞水平均显著升高,VEGFR-2、p-JNK表达明显降低,顺铂组CD8~+明显升高(P0.05,P0.01);与顺铂组比较,中药组胸腺指数、CD3~+、CD4~+、CD8~+均显著升高,VEGFR-2、p-p38、p-JNK表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论二陈汤加沙参、麦冬可提高Lewis肺癌小鼠免疫功能,同时抑制肿瘤血管生成,其抗肿瘤作用机制可能与抑制VEGFR-2表达、降低p-JNK活性相关。     

CD4+CD25+调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响

目的:探讨CD4+CD2+5调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响。方法:选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测BALB/c小鼠脾细胞悬液CD4+T细胞中CD28分子的表达水平及凋亡细胞的数量。结果:在注射STZ第2周和4周,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的CD28水平未见明显变化;凋亡细胞的数量在注射STZ第2周明显升高(P<0.05),第4周进一步明显升高(P<0.01)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能通过抑制CD28共刺激抑制BALB/c小鼠CD4+T细胞活化,从而影响细胞免疫功能。诱导免疫细胞凋亡可能是CD4+CD2+5调节性T细胞发挥抑制作用的又一表现形式。     

抗心磷脂抗体导致妊娠丢失的免疫病理机制 及安子合剂的干预作用

目的:探讨抗心磷脂抗体(ACA)导致妊娠丢失与CD4+ CD25+ FOXP3+调节性T( CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg)细胞的关系及安子合剂的免疫调节机制.方法:将BALB/c小鼠随机分组:空白组、模型组、安子合剂组(低、中、高剂量组)、阿司匹林组.于妊娠第1天,空白组和模型组以等量蒸馏水灌胃,安于合剂组(低、中、高剂量组分别以37.7,75.4,150.8 g·kg-1·d-1)药液ig,阿司匹林组以0.019 5 g·kg-1·d-1ig,连续给药14 d.于妊娠第8,12天通过给孕鼠腹腔注射抗心磷脂抗体-IgG(ACA-IgG),建立ACA阳性妊娠丢失动物模型.用流式细胞仪测定各组孕鼠外周血CD4+ CD25+ FOXP3 +Treg细胞的比例;用ELISA法测定各组孕鼠外周血ACA的滴度;并观察各组孕鼠胚胎吸收及胎鼠发育情况.结果:模型组CD4+ CD25+ FOXP3+Treg细胞的比例较空白组显著下降(2.67±0.51)％,(9.849±1.774)％,P＜0.01;与模型组相比,安子合剂低、中剂量组均能显著升高CD4+ CD25+ FOXP3 +Treg细胞的比例(9.47±1.26),(7.61±1.07)％,P＜0.01,显著降低ACA的滴度(P＜0.01),安子合剂低剂量组优于中剂量组.安子合剂低剂量组能显著降低胚胎吸收率,显著增加胎鼠和胎盘质量(P＜0.05).结论:ACA导致妊娠丢失的病理机制与免疫调节细胞-CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg细胞比例减少有关.安子合剂干预ACA导致妊娠丢失的免疫调节机制是通过增加CD4+ CD25+ FOXP3 +Treg细胞的比例来实现的,其作用的强弱与药物的剂量相关.     

益气温阳颗粒联合贝伐珠单抗对肺癌小鼠肿瘤组织微环境的影响

目的 观察益气温阳颗粒联合贝伐珠单抗对肺癌小鼠肿瘤组织微环境的影响.方法 将50只C57 BL/6 J雄性小鼠随机分为5组,每组10只.模型组、贝伐珠单抗组、益气温阳组及贝伐珠单抗+益气温阳组小鼠于右腋窝皮下接种Lewis细胞,接种后3 d,贝伐珠单抗组给予贝伐珠单抗15 mg/kg腹腔注射(每周2次),益气温阳组给予...     

益髓生血颗粒对AA大鼠CD4 + CD25 + Foxp3调节性T细胞的影响

目的：观察益髓生血颗粒对再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）大鼠CD4 + CD25 + 调节性T细胞（Regulatory T Cell,Treg细胞）的影响及其治疗AA的作用机制。方法：取雄性SD大鼠按体重随机分组。其中模型组连续7周隔天皮下注射苯（1 mL ? kg -1 ）、取材10天前开始腹腔注射环磷酰胺（25 mL ? kg -1 ）,连续3天,第4周将模型组大鼠按体重随机分为模型组、司坦唑醇组、益髓生血颗粒组,灌胃给药。正常组及模型对照组给予等体积生理盐水。实验结束时,检测外周血WBC、RBC、HGB、PLT;制备血涂片、骨髓涂片;免疫组织化学法检测脾组织Treg细胞Foxp3蛋白表达;RT-PCR法检测骨髓组织Foxp3 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组WBC、RBC、HGB、PLT均显著减少（P<0.01）,血涂片示血细胞通透性差、白细胞减少、退化细胞增多,骨髓涂片示脂肪滴明显增加、造血细胞均明显降低、非造血细胞增多;经益髓生血颗粒组治疗后WBC、RBC、HGB、PLT均显著增加（P<0.01）,血涂片及骨髓涂片显示细胞通透性好转、形态趋于正常、脂肪滴明显减少,造血细胞均明显增加,脾组织Foxp3蛋白及骨髓组织Foxp3 mRNA表达明显升高（P<0.01）。结论：益髓生血颗粒可上调Foxp3的因及蛋白表达,调控AA免疫功能,进而改善AA免疫环境,促进骨髓造血功能的恢复,发挥治疗AA的重要作用。     

异基因脐血干细胞穴位移植对类风湿关节炎大鼠外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:观察异基因脐血干细胞(h UCBSCs)穴位移植对类风湿关节炎大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的干预作用及相关机制。方法:先进行脐血CD34+细胞分选,将100只大鼠随机分为正常对照组、模型组对照组、h UCBSC尾静脉注射治疗组、h UCBSCs外关穴注射治疗组、甲氨喋呤(MTX)灌胃治疗组,每组20只。采用邓安梅法建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型。于大鼠免疫后第31天(除正常组及模型组用等体积蒸馏水)向外关穴、尾静脉注射0.5 m L氯化钠注射液和0.5m L h UCBSCs悬液(含干细胞2×107/m L),4周后采用流式细胞仪,对外周血CD4+CD25+细胞的百分含量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例进行检测。结果:h UCBSCs外关穴注射治疗组外周血CD4+CD25+细胞的百分含量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例与甲氨喋呤组比较明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),h UCBSC尾静脉注射治疗组与甲氨喋呤组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:h UCBSCs外关穴穴位注射治疗可能通过上调CD4+CD25+调节性T细胞水平,抑制关节炎症和关节骨破坏吸收,有助于类风湿关节炎的治疗。     

基于细胞介导的免疫应答观察逐水饮治疗肺癌胸腔积液疗效及机制探究

目的:基于细胞介导的免疫应答观察逐水饮治疗小鼠Lewis肺癌胸腔积液模型的疗效并探究其作用机制。 方法:85只C57BL/6小鼠随机分为空白参照组、模型组、逐水饮组、顺铂组、逐水饮联合顺铂组,每组各17只。空白参照组予腹腔注射氯化钠溶液,其余各组小鼠腹腔注射Lewis肺癌细胞悬液来构建小鼠模型,造模第4 天开始进行药物干预,连续干预10 d,收集并记录MPE体积、胸壁转移瘤个数以及生存天数; 测定外周血Th₁₇、Treg细胞数量、TGF-β1以及CTLA-4含量。结果:药物干预后,与模型组比较,其余三组的MPE减少、胸壁转移瘤个数减少、生存天数延长,差异有统计学意义(均P<0.05)。各组Th₁₇数量高于空白参照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。逐水饮联合顺铂组的Th₁₇细胞数量高于逐水饮组、顺铂组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。各组Treg细胞数量均高于空白参照组,差异具有统计学意义(均P<0.05),逐水饮联合顺铂组的Treg细胞数量低于逐水饮组、顺铂组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。各组的TGF-β1水平较空白参照组均有升高,逐水饮组、顺铂组、逐水饮联合顺铂组的TGF-β1水平与模型组比较降低,差异具有统计学意义(均P<0.05)。各组的CTLA-4水平较空白参照组有升高,逐水饮组、顺铂组、逐水饮联合顺铂组的CTLA-4水平与模型组比较均降低,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:逐水饮联合化疗药物可能通过调整Th₁₇/Treg免疫失衡状态,纠正免疫缺陷,改善微环境免疫抑制情况以此达到减少MPE聚集的作用。     

扶正培元方对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸相关T细胞亚群比例的调控作用

目的 观察扶正培元方对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫逃逸相关T细胞亚群比例的调控作用.方法 按随机数字表法将30只健康C57BL/6J小鼠分为中药组、中药加化疗组、化疗组、模型组和正常对照组,每组6只.除正常对照组外,其余各组小鼠右侧腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞悬液0.2 ml.于接种次日开始给药,中药组灌胃扶正培元方8.17 g/kg;中药加化疗组腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg,同时灌胃扶正培元方8.17 g/kg;化疗组腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg,灌胃等体积生理盐水;模型组和正常对照组灌胃等体积生理盐水.连续给药后13 d,采用流式细胞仪检测各组荷瘤小鼠脾细胞CD4、Foxp3、CD8、CD28细胞表达.结果 与模型组比较,化疗组及中药加化疗组瘤重[(1.76±0.42)g、(1.40±0.43)g比(4.37±0.59)g]减轻(P<0.01);中药组及中药加化疗组小鼠脾细胞CD4+Foxp3+T细胞[(11.25±1.69)%、(9.30±2.68)%比(14.21±1.50)%]下降(P<0.05或P<0.01).结论 扶正培元方可调节荷瘤小鼠调节性T细胞比例,改善其体内存在的免疫耐受状态.     

自拟固胎煎对复发性流产小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响

[目的]观察自拟固胎煎对自然流产模型小鼠脾脏Th17/Treg细胞及对妊娠结局的影响。[方法]采用CBA/J雌鼠×BALB/c雄鼠建立正常妊娠模型,以CBA/J雌鼠×DBA/2雄鼠建立自然流产模型,自然流产孕鼠分为自然流产组、地屈孕酮组、中药低、中、高剂量组,正常妊娠组和自然流产组给予生理盐水,中药低、中、高剂量组分别给予7.125、14.25、28.5 g/kg自拟固胎煎汤剂,地屈孕酮组给予3.0 mg/kg地屈孕酮溶液,连续2周灌胃,每日1次。给药结束后处死并解剖小鼠,观察子宫胚胎数量并计算胚胎丢失率,流式细胞法检测脾脏中Th17细胞、Treg细胞含量及Th17/Treg细胞比例。[结果] 1)与自然流产组相比,中药低剂量组胚胎丢失率差异无统计学意义(P0.05);中药中剂量组、高剂量组和地屈孕酮组胚胎丢失率均显著降低(P0.05),且中药中剂量组、中药高剂量组、地屈孕酮组3组间比较,胚胎丢失率差异均无统计学意义(P0.05)。2)与自然流产组相比,中药低剂量组Th17细胞数、Treg细胞数及Th17/Treg细胞百分率比值均无统计学差异(P0.05);中药中剂量组、高剂量组和地屈孕酮组,Th17细胞数及Th17/Treg细胞百分率比值均显著降低(P0.05),Treg细胞数均显著升高(P0.05);且中药中剂量组、中药高剂量组、地屈孕酮组3组间比较,Th17细胞数、Treg细胞数及Th17/Treg细胞百分率比值差异均无统计学意义(P0.05)。[结论]自拟固胎煎可降低Th17/Treg比例,诱导免疫耐受,减少胚胎丢失率,改善妊娠结局。     

安子合剂对ACA阳性先兆流产患者CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg细胞免疫调节的影响

目的:观察安子合剂对ACA阳性先兆流产患者CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞免疫调节的影响。方法:选取ACA阳性先兆流产患者为治疗组(27例),给服中药安子合剂,125ml,2次/日,连服4周;选取正常孕妇为对照组(15例)。检测患者治疗前后及正常孕妇外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的比例,并测定患者治疗前后血清ACA指标、B超检查胚胎发育情况等。结果:治疗组患者治疗前CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的比例显著低于正常妊娠对照组(P<0.01);治疗后,其细胞比例显著高于治疗前(P<0.01)。27例患者中20例ACA阳性的转阴率达85.00%,7例ACA定量滴度较治疗前显著下降(P<0.01)。保胎的成功率达92.59%。结论:ACA阳性先兆流产患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的比例低于正常妊娠妇女,存在免疫调节异常;安子合剂治疗ACA阳性先兆流产的作用机理之一与增加CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的比例、调节妊娠期机体免疫功能有关。     

益气补肾中药对自然流产模型小鼠脾脏和母胎界面CD4~+CD25~+T细胞表达的影响

目的 观察益气补肾中药对自然流产模型小鼠脾脏和母胎界面CD4+CD25+ T淋巴细胞表达的影响。