狼疮方对体外扩增小鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:狼疮方对体外扩增小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的影响。方法:免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4+CD2+5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞;用CFSE法检测CD4+CD25+调节性T细胞体外抑制CD4+CD2-5T细胞的增殖情况。结果:经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4+CD25+T细胞数量明显升高,扩增后的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4+CD25+T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异(P0.05)。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4+CD2+5T细胞和扩增的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论:狼疮方有助于提高小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

毛细支气管炎患儿外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的检测及其意义

目的探讨毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的表达,在毛细支气管炎发生发展机制中的作用。方法用流式细胞术检测48例毛细支气管炎患儿及19例健康对照者外周血中CD4+CD25+Treg的表达水平。结果毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的百分比明显低于健康对照组(P<0.01)。结论毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+Treg数量减少,这种细胞免疫功能失调可能与其免疫学发病机制有关。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在儿童特发性血小板减少性紫癜患者中的表达及意义

目的探讨儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达及意义。方法用流式细胞术检测27例ITP患儿和21例健康儿童外周血T淋巴细胞亚群的比例,以及CD4+T淋巴细胞表面CD25、FasL和Fas的表达率。结果ITP患儿CD3、CD4、CD4/CD8比值与对照组比较显著降低,CD4+CD25+调节性T细胞明显减少,CD4+CD25-细胞无明显改变,CD4+FasL+增多,CD4+Fas+减少。结论儿童ITP患者CD4+CD25+调节性T细胞显著减少,破坏自身免疫耐受,在ITP的发病中起重要作用。     

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Foxp3+CD4+CD25+调节性 T 细胞影响的研究

目的研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响,探讨薏苡仁酯类风湿关节炎治疗中的可能机制。方法从25只小鼠随机选取5只为正常组,剩余20只小鼠进行CIA造模。造模成功后随机分为造模对照组10只及薏苡仁酯组10只。薏苡仁酯组予薏苡仁酯注射液25 m L/kg,正常组及造模对照组注射生理盐水25 m L/kg,均每天腹腔内注射1次。共用药21天。用药后对各组关节炎进行评分,计算关节炎指数,并应用流式细胞术测定小鼠外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg比例。结果与正常组比较,造模对照组关节炎指数明显升高(P0.01),薏苡仁酯组较造模对照组小鼠关节炎指数明显下降(P0.01)。与正常组比较,造模对照组Foxp3+CD4+CD25+Treg水平均明显下降(P0.01),薏苡仁酯组较造模对照组用药后Foxp3+CD4+CD25+Treg水平明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论薏苡仁酯能上调CIA小鼠Foxp3+CD4+CD25+Treg比例,可能在CIA的发病中具有一定的免疫调节作用。     

补肺液对哮喘豚鼠脾脏CD_4~+CD_(25)~+Tr细胞数量的影响

目的:观察不同剂量补肺液灌服对哮喘豚鼠体内脾脏CD4+CD+25Tr(CD4+CD2+5Tregulatorycell,+CD4CD+25调节性T细胞)细胞的影响。方法:将50只SPF清洁级豚鼠随机分为5组,分别为模型组(A)、正常对照组(B)、低剂量补肺液组(C)、中剂量补肺液组(D)和高剂量补肺液组(E),除B组外各组均进行哮喘造模,采用流式细胞仪检测豚鼠脾细胞悬浊液中CD+4CD2+5Tr细胞数量。结果:模型组哮喘豚鼠脾脏细胞悬浊液中CD4+CD2+5Tr细胞数量明显降低(P0.01),给予补肺液后各组豚鼠脾细胞悬浊液中CD+4CD+25Tr细胞数量明显升高,其中B组与E组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:哮喘豚鼠脾细胞悬浊液中CD+4CD2+5Tr细胞数量减少,补肺液可有效提高+CD4CD2+5Tr细胞数量,调节其免疫,且给药剂量与细胞数量呈正相关。     

肺岩宁方对晚期非小细胞肺癌患者血清调节性T细胞CD_4~+CD_(25)~+的影响

目的:观察益气养精的中药方剂肺岩宁方对晚期非小细胞肺癌患者血清调节性T细胞CD4+CD25+、CD3、CD4、CD8、NK水平以及中医证候的影响。方法:30例确诊为Ⅲa、Ⅲb、Ⅵ期非小细胞肺癌患者,中医辨证为精气亏虚型,中药肺岩宁方治疗2个月,观察患者血清CD4+CD25+、CD3、CD4、CD8、NK以及中医证候的变化。结果:肺岩宁方可以提高晚期非小细胞肺癌患者CD3、CD4及NK细胞水平,同时显著降低CD4+CD25+调节性T细胞水平,对中医证候改善的总有效率为87%,同时观察到治疗前后中医证候积分与CD4+CD25+调节性T细胞水平具有正相关性。结论:肺岩宁方可以明显改善患者细胞免疫功能,这可能是肺岩宁方抑制肿瘤生长以及抗侵袭转移的作用机制之一。     

中药复方对免疫性疾病中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞是机体内主要发挥免疫耐受作用的T细胞功能群,通过细胞间直接接触、分泌抑制性细胞因子等多种途径发挥作用。近年来国内外研究发现:中药复方对系统性红斑狼疮、复发性流产、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、支气管哮喘、免疫性血小板减少性紫癜、肿瘤及慢性乙型肝炎等免疫相关性疾病中的CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞有明显的影响,通过其表达的上调、下调或功能的抑制、激活,从而影响疾病的发生、发展和转归。     

利胆扶正颗粒对恶性阻塞性黄疸患者外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞水平的影响

目的:探讨恶性阻塞性黄疸患者术后给予利胆扶正颗粒治疗对外周血CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T-Lymphocytes,Treg)的调节作用及意义。方法:30例恶性阻塞性黄疸一般治疗组,30例恶性阻塞黄疸中药治疗组,30例良性阻塞性黄疸组和30例健康对照组。在胆道梗阻解除后采用流式细胞术对外周血Treg数量进行检测,观察Treg数量与CD4+和CD8+T细胞的关系。结果:(1)与健康对照者比较,阻塞性黄疸患者(包括良性、恶性患者)Treg水平显著上升(均P<0.05);恶性阻塞性黄疸患者Treg水平较良性为高(P<0.05);(2)恶性阻塞性黄疸中药治疗组与一般治疗组比较Treg水平有所下降(P<0.05),CD4+和CD8+T细胞水平有所上升(P<0.05)。结论:恶性阻塞性黄疸患者外周血Treg数量明显升高,存在免疫调节紊乱。利胆扶正颗粒对机体细胞免疫有重要的辅助作用,具有一定的免疫调节作用。     

肺部感染患者CD4~+CD25~+调节性T细胞及免疫球蛋白改变的临床观察

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在肺部感染患者免疫机制中的作用。方法:20例肺部感染患者(肺部感染组),用流式细胞仪检测血CD4+、CD4+CD25+,计算CD4+CD25+/CD4+比值,同时测定免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)含量并与30例健康人(健康对照组)比较。结果:肺部感染组CD4+CD25+调节T细胞数量及比例均显著高于健康对照组(P<0.01),肺部感染组IgA含量显著少于健康对照组(P<0.05)。结论:CD4+CD25+调节T细胞数量及比例升高,可能与肺部感染患者免疫功能紊乱有关。     

升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞的影响

目的:探讨升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜患者外周血CD+4CD+25Treg细胞计数和分泌因子水平的影响。方法:选取医院收治的免疫性血小板减少性紫癜患者66例,以随机数字法分为两组;对照组常规泼尼松治疗,观察组在对照组的基础上服用升血小板胶囊,对比临床疗效;并分别于治疗前后抽取患者空腹静脉血,以流式细胞法测定CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数,以ELISA试剂盒测定IL-10及TGF-β1血清含量。结果:两组患者的总有效率无显著差异,但观察组的整体临床疗效和显效率均显著高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数比和血清IL-10、TGF-β1血清含量无显著差异(P>0.05);治疗后,两组患者各项指标均有不等程度的升高,且观察组显著高于对照组(P<0.05)。结论:CD+4CD25调节性T细胞数量减少或功能缺陷可能参与了免疫性血小板减少性紫癜的发病进程,升血小板胶囊可能能够通过该环节发挥治疗作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响

目的:探讨CD4+CD2+5调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响。方法:选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测BALB/c小鼠脾细胞悬液CD4+T细胞中CD28分子的表达水平及凋亡细胞的数量。结果:在注射STZ第2周和4周,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的CD28水平未见明显变化;凋亡细胞的数量在注射STZ第2周明显升高(P<0.05),第4周进一步明显升高(P<0.01)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能通过抑制CD28共刺激抑制BALB/c小鼠CD4+T细胞活化,从而影响细胞免疫功能。诱导免疫细胞凋亡可能是CD4+CD2+5调节性T细胞发挥抑制作用的又一表现形式。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞与肿瘤免疫治疗的新进展

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞(CD_4~+CD_(25)~+ regulatory T cells, CD_4~+CD_(25)~+ Tregs)可抑制机体对肿瘤的免疫应答,导致不利于肿瘤患者的对肿瘤的免疫耐受.以降低CD_4~+CD_(25)~+Tregs作用,增强对肿瘤的免疫应答为新策略的肿瘤免疫治疗探索已有初步进展.方法 包括去除CD_4~+CD_(25)~+Tregs、单克隆抗体、蛋白分子转移、阻断Tregs的迁移和分化、逆转Tregs的分化、阻断Tregs的功能、疫/瘤苗、将Tregs调控与其他治疗模式相组合、提升抑制效应细胞的阈值.     

rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响。方法:化疗后出现Ⅱ°骨髓抑制的患者,给予皮下注射rhG-CSF150g,连续3d,用药前及用药后第3天用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞组成的变化。结果:流式细胞术分析发现,用药前CD4+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(52.96±8.45)%,用药后为(54.15±7.55)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD8+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(36.96±9.62)%,用药后为(34.56±8.32)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD4+CD25+T淋巴细胞占外周血CD4+T淋巴细胞比例为(4.56±1.32)%,用药后为(6.94±1.72)%,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞在CD3+T淋巴细胞中的百分比无明显影响;但增加了CD4+CD25+T淋巴细胞在CD4+T淋巴细胞中的百分比。     

Beneficial therapeutic effect of Chinese herbal Bushen formula on CHB patients with mildly elevated alanine aminotransferase by down-regulating CD4+CD25+T cells

Ethnopharmacological relevance

To investigate the clinical effects of the Bushen formula on chronic hepatitis B (CHB) patients with mildly elevated alanine aminotransferase (ALT) (1–2 times ULN) and its relevant immune mechanism.

Materials and methods

Fifty CHB patients were enrolled, and they were categorized into two groups according to infection state, including CHB carrier group(24 patients) and mildly elevated ALT (1–2 times ULN) group (26 patients), and 12 healthy volunteers were collected as normal control group. In addition, patients with mildly elevated ALT were taking the Bushen formula for 6 months. Biochemical assessment, viral load quantitation and HBV markers were examined at the Department of Clinical Laboratory, Shanghai Shuguang Hospital. Peripheral blood mononuclear cells were separated from patients and healthy volunteers. T cells were separated from healthy blood, and Hepatitis B core antigen (HBcAg) was added to the culture media. The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression levels of IFN-γ and IL-4 were examined by flow cytometry and the expression level of FoxP3 was examined by real-time PCR and flow cytometry. The Chinese medicine symptom complex score was calculated.

Results

The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in two CHB patient groups were higher than that in the normal control group, and the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in the CHB carrier group were highest. The experiment in vitro showed that both the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 were elevated by HBcAg in CD4+T cells separated from normal peripheral blood. In patients with mildly elevated ALT, the serum ALT level was significantly decreased from 81.77±18.24 U/L to 64.92±20.60 U/L and the serum HBV DNA level was significantly decreased from 6.54±0.95 (log) to 5.15±2.22 (log), and symptom scores were significantly decreased from 6.19±3.99 to 2.77±1.66 after administration of the Bushen formula. In addition, we found that the frequency of CD4+CD25+T cells correlated negatively with the expression level of IFN-γ in CD4+T cells from CHB patients with mildly elevated ALT, and the percentage of CD4+CD25+T cells was decreased from 11.07±4.30% to 8.70±3.49% and the expression level of IFN-γ in CD4+T cells was increased from 13.98±3.25% to 15.85±3.43% after administration of the Bushen formula.

Conclusion

In CHB patients, the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 in peripheral blood were increased, which can be repeated in HBcAg-stimulated healthy CD4+T cells. The Bushen formula has positive effects on CHB patients with mildly elevated ALT (1–2 times ULN) by reducing serum ALT and HBV DNA levels, which is relevant with the decreasing of the percentage of CD4+CD25+T cells and the increasing of the expression level of IFN-γ in CD4+T cells.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞与妊娠期高血压病子痫前期发生关系的探讨

目的:观察具有免疫抑制作用的CD4+CD25+T细胞的数量以及相关因素雌激素与妊娠期高血压病子痫前期发生的关系。方法:流式细胞技术分析,测定CD4+CD25+T细胞的数量,放射免疫测定血清雌激素。结果:妊娠期高血压病子痫前期患者,其CD4+CD25+T细胞的数量减少,且血雌三醇水平有不同程度的降低。结论:①CD4+CD25+T细胞数量的改变在妊娠期高血压病的发病机制中起重要的作用。②雌激素能帮助维持免疫耐受。     

3种不同中医证型艾滋病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达

目的:观察不同中医证型艾滋病患者CD4+CD2+5调节性T细胞(以下简称CD4+CD2+5 T细胞)的表达水平,探讨不同证型艾滋病免疫负调节能力。方法:根据艾滋病患者的症状、体征、舌象、脉象,按照中医辨证论治思路,分为肺肾不足、气虚血瘀、脾肾亏虚3种证型,设正常对照组30名,收集病例97例,观察不同证型艾滋病患者及正常对照组外周血CD4+CD2+5 T细胞的表达水平。结果:正常对照组、脾肾亏虚、肺肾不足、气虚血瘀各组患者CD4+CD2+5 T细胞的表达水平有统计学差异(P<0.001),脾肾亏虚型CD4+CD2+5 T细胞的表达水平最高,依次分别为肺肾不足型、气虚血瘀型。结论:不同证型艾滋病患者从病变初期的脾肾亏虚组,中期肺肾不足组,到疾病后期气虚血瘀组,CD4+CD2+5 T细胞的表达水平逐渐降低。     

全蝎蜈蚣对CIA大鼠外周血CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg细胞的调节

目的:观察全蝎蜈蚣对胶原免疫性关节炎(Collagen-Induced Arthritis,CIA)大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的调节作用。方法:Wistar大鼠60只,随机分成6组,分别为正常对照组、模型对照组、全蝎蜈蚣高(0.4 g/kg)、中(0.2 g/kg)、低剂量(0.1 g/kg)组和Ⅱ型胶原蛋白(60μg/kg)治疗组(CⅡ组),二型胶原蛋白诱导大鼠关节炎,并采用流式细胞术检测大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及酶联免疫吸附试验检测血清中IL-2表达水平。结果:与模型组比较,全蝎蜈蚣高、低剂量组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞水平显著升高,且中、低剂量组血清IL-2水平显著下降。结论:全蝎蜈蚣治疗关节炎大鼠可能是通过上调外周CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞表达水平以恢复或重建免疫耐受而实现的。     

CD_4~+CD_(29)~+T细胞在湿热型溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的:探讨CD4+CD2+9T细胞在湿热型溃疡性结肠炎中的表达及意义。方法:按照年龄及性别构成无统计学差异的原则,将临床观察对象入选分为正常组(n=32)、单纯湿热组(n=18)、非湿热型UC组(n=29)及湿热型UC组(n=16)共4组;将40只SD大鼠随机分为健康组(n=10)、单纯湿热组(n=10)、非湿热型UC组(n=10)及湿热型UC组(n=10)共4组,采用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法造出大鼠湿热型模型,再结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法制作湿热型UC模型,非湿热型UC组单独用TNBS法。使用流式细胞分析仪检测以上各组患者和大鼠外周血CD4+CD2+9T细胞所占的百分比。结果:单纯湿热组、非湿热型UC组和湿热型UC组患者和大鼠外周血中CD4+CD2+9T细胞的表达均显著升高(P<0.05),其中以湿热型UC组表达最高。结论:CD4+CD2+9T细胞在湿热型UC患者和大鼠中表达显著升高,可能参与了湿热型UC的发病。     

双氢青蒿素对AA大鼠外周血T淋巴细胞的调节作用

目的:探讨双氢青蒿素对佐剂性关节炎(AA)大鼠外周血T细胞的调节作用.方法:采用佐剂性关节炎动物模型,将体重160～ 180 g的SD大鼠随机设为6组:正常对照组、模型对照组、甲氨蝶呤对照组(1mg·kg-1)、双氢青蒿素高、中、低剂量(11.2,5.6,2.8 mg·kg-1)组,造模2周后灌胃给药,连续给药28 d,并采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群、酶联免疫法检测血清白介素-4 (IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的水平.结果:相较于正常组,模型组外周血CD4+T,CD4+ T/ CD8+T和血清IFN-γ水平显著升高(P＜0.01),血清IL-4水平显著降低(P＜0.01),CD3+T,CD8+T则无明显变化;高、中剂量双氢青蒿素组CD4+T所占百分比分别是(34.81±3.80)％,(34.92±5.14)％,CD4+ T/ CD8+T分别是2.21±0.43,2.27±0.48,与模型组相比显著降低(P＜0.05,P＜0.01);双氢青蒿素高、中、低剂量组血清INF-γ水平分别是(15.90±2.05),(16.27 ±2.11),( 18.15±2.15) ng·L-1,与模型组相比显著降低(P＜0.01);IL-4水平分别是(40.21±4.89),(40.04±4.56),(34.81±4.02)ng·L-1,与模型组相比显著升高(P＜0.01),其调节作用在2.8 ～5.6 mg·kg-1范围呈剂量依赖性(P＜0.05).结论:双氢青蒿素能有效改善AA大鼠T细胞功能紊乱状况,为其应用于类风湿关节炎治疗奠定实验基础.     

淫羊霍苷对哮喘患者IFN-γ表达的影响

目的研究淫羊霍苷对哮喘患者IFN-γ表达的影响。方法分离25例哮喘患者的外周静脉血CD4+CD25+T调节细胞,采用RT-PCR和Westerblot法研究不同浓度(3.13,6.25,12.5,25μg/L)的淫羊霍苷对CD4+CD25+T细胞IFN-γ表达的影响。结果随着淫羊霍苷浓度的增加,CD4+CD25+T调节细胞IFN-γ表达增加。结论淫羊霍苷对哮喘患者IFN-γ表达呈现明显的量效关系,提示淫羊霍苷可能通过影响IFN-γ表达来影响哮喘的发生。