当归补血汤含药血清对血管紧张素II诱导的 心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的: 探讨当归补血汤含药血清对血管紧张素II (Ang II) 诱导的心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法: 应用血清药理学方法制备含药血清。体外培养心肌细胞,收集对数期细胞分为4组:空白对照组、AngⅡ(10^-7mol·L^-1)组、缬沙坦(10^-6mol·L^-1)组、10%当归补血汤含药血清(0.84 g·L^-1)组,共同作用48 h后,用MTT 法测定细胞活性、单细胞电泳法检测细胞DNA损伤情况、激光共聚焦检测线粒体膜电位,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白p53,Caspase-3表达变化。结果:与空白对照组相比,Ang II组心肌细胞活力(A)(0.159±0.024)、线粒体膜电位(170.19±16.15)Δψ_m明显降低(P<0.05),并且心肌细胞DNA损伤,p53(0.497±0.029)、Caspase-3(0.509±0.041)蛋白表达显著升高(P<0.05);与Ang II组相比,当归补血汤含药血清组心肌细胞活性(A)(0.197±0.035)、线粒体膜电位(242.39±18.27)Δψ_m明显升高(P<0.05),心肌细胞DNA损伤、p53(0.387±0.020),Caspase-3(0.385±0.029)蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论: 当归补血汤可抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体通路有关。     

肿节风复方含药血清对肝癌HepG2细胞增殖、端粒酶及凋亡的影响

目的： 观察肿节风复方含药血清对人肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响。 方法： 实验设阴性对照组（NS）、5-氟尿嘧啶（5-FU）组（0.025 g·kg^-1）和肿节风复方低、中、高剂量组（2.5,5,10 g·kg^-1）,灌服于大鼠后,提取含药血清。取上述含药血清分别作用于HepG2细胞24,48,72 h;MTT法测定细胞增殖抑制率;ELISA法测定端粒酶活性;荧光显微法及流式细胞术（Annexin V-FITC/PI法）检测肿节风复方含药血清对HepG2细胞凋亡的影响。 结果： 与对照组比较,肿节风复方含药血清低、中、高剂量组均能抑制HepG2细胞的增殖（高剂量组抑制率最高达42.5%）,呈现与时间-剂量依赖趋势;肿节风中、高剂量组能有效抑制HepG2细胞端粒酶活性,与对照组比较P < 0.05;肿节风复方含药血清具有诱导HepG2细胞凋亡的作用,与对照组比较P < 0.05,其中中剂量组作用24,48,72 h细胞凋亡率分别为（14.2±0.9）%,（30.6±1.0）%,（61.6±1.5）%。 结论： 肿节风复方含药血清能抑制HepG2细胞增殖、端粒酶活性,诱导HepG2细胞凋亡。     

环磷酰胺联合柿叶乙酸乙酯部位对H22小鼠瘤组织抗氧化能力及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

目的: 通过研究环磷酰胺(CTX)联合柿叶乙酸乙酯部位(PE)对H22荷瘤小鼠瘤组织的抗氧化作用和对瘤组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达的影响,探讨两药联合应用的效果。 方法: 昆明种小鼠,取H22荷瘤鼠腹水接种于昆明种小鼠右前肢腋窝皮下,建立H22荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组,CTX组(0.1 g ·kg^-1),CTX联合PE高、中、低剂量组(2,1,0.5 g ·kg^-1),连续ig给药10 d,处死小鼠后计算抑瘤率,采用金氏q值法判断两者合用的效果,检测瘤组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)含量,采用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白表达情况。 结果: 与模型组比较,各给药组抑瘤率明显升高,SOD水平和Bax蛋白表达均明显升高,MDA水平和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);CTX联合PE各剂量组的抑瘤率均高于CTX组,0.85<q<1.15,两药合用作用相加;与CTX组比较,联合用药各剂量组SOD水平和Bax蛋白表达均升高,MDA水平,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax均降低(P<0.05,P<0.01)。 结论: CTX联合PE能使抑瘤作用相加,其机制可能与两药合用能明显增强H22小鼠机体抗氧化能力,下调Bcl-2蛋白及上调Bax 蛋白的表达有关。     

蓝萼香茶菜总二萜预处理对兔心肌缺血/再灌注时 心肌细胞凋亡的影响

目的: 探讨蓝萼香茶菜总二萜预处理对兔心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法: 健康日本大耳白兔24只,分4组,A:假手术组;B:缺血/再灌注(I/R)组;C:复方丹参滴丸(DS)对照组;D:蓝萼香茶菜总二萜(TD)组。术前7 d A,B组灌胃蒸馏水5 mL·kg^-1·d^-1,C组灌胃DS 37.8 mg·kg^-1·d^-1,D组灌胃TD 4.76 mg·kg^-1·d^-1。末次给药1 h后,结扎左冠状动脉前降支(LAD)制作兔在体心肌I/R模型。光镜和电镜观察各组心肌细胞结构变化。原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组化法测定心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)的表达。结果: C组和D组心肌细胞凋亡指数(AI)分别为10.93%和9.87%,与B组(18.40%)相比,AI均明显下降(P<0.05),但C组和D组无明显差异。免疫组化分析Bcl-2的吸光度(A),C组为41.03,D组为52.09,均明显高于B组(29.47),有显著性差异(P<0.05)。而与B组相比,C组和D组Bax的A明显下降(P<0.05),且C组和D组Bcl-2和Bax无明显差异。与假手术组相比,B组光镜和电镜下结构损伤程度明显高于C组和D组。结论: TD能减轻兔心肌缺血/再灌注损伤时心肌细胞凋亡,提示该药对心肌有保护作用。     

人参多糖介导Wnt/β-catenin信号转导诱导人鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡

目的: 观察人参多糖(ginseng polysaccharide, GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖和凋亡的影响以及可能的机制探讨. 方法: CCK8法观察人参多糖对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响.取对数生长期的CNE-2细胞,用不同质量浓度人参多糖(GPS)0,0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1分别作用48 h后,流式细胞术检测其对CNE-2细胞凋亡的诱导作用;Hoechst-33258染色和电镜观察细胞的形态改变.Real-time PCR检测细胞β-catenin mRNA的表达.采用免疫荧光染色检测细胞中β-catenin,TCF4蛋白定位及表达量的变化.Western blot检测细胞中β-catenin,Bcl-2,Bax蛋白的变化. 结果: CCK8法测得人参多糖能明显抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈剂量、时间依赖性,GPS处理细胞48 h的IC₅₀为0.39 g·L^-1;质量浓度分别为0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1的GPS作用人鼻咽癌CNE-2细胞48 h后细胞凋亡率分别为(5.69±0.29)%,(10.3±0.63)%,(15.4±0.74)%,(35.7±1.86)%,与对照组(2.08±0.11)%比较均有显著性差异(P<0.05);Hoechst-33258染色结果显示细胞凋亡特征.电镜下可见0.4 g·L^-1GPS诱导48 h后可使CNE-2细胞出现凋亡小体.Real-time PCR显示β-catenin mRNA表达明显降低.激光共聚焦结果显示人参多糖作用48 h后β-catenin和TCF4在胞核中表达明显减少,β-catenin表达区域由胞核向胞膜转移.Western blot结果显示经浓度梯度增加的人参多糖作用CNE-2细胞48 h后,β-catenin和抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;而促凋亡蛋白Bax表达上调(P<0.05). 结论: 人参多糖可明显抑制CNE-2细胞增殖促进细胞凋亡.Wnt/β-catenin信号通路的受阻可能是GPS诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的一个重要机制.     

补肾养血方对卵巢早衰小鼠凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的：探讨补肾养血方对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠卵巢凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法：以小鼠透明带3（Zp3）为抗原,皮下多点注射免疫 BALB/c雌性小鼠,14 d后强化免疫,建立免疫性卵巢早衰模型。设补肾养血方低、中、高剂量（5.1,10.2,20.4 g·kg^-1）进行治疗,以补佳乐（戊酸雌二醇0.6 mg·kg^-1）为阳性对照,于造模后15 d开始灌胃给药1次/d,连续6周（每1周休息1 d）。放射免疫法检测小鼠血清激素水平,Western法检测卵巢组织 Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白表达增加,（P<0.05）,模型组小鼠卵巢Bcl-2/Bax下降（P<0.01）,提示模型组卵泡Bcl-2蛋白的低表达、Bax蛋白的高表达可能加速了卵泡的凋亡,导致卵巢早衰;与模型组相比,补肾养血方高、中、低剂量组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,卵巢Bax蛋白的表达均减少（P<0.05）,Bcl-2/Bax明显降低（P<0.05）。结论：卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,补肾养血方可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

红豆杉提取物对乳腺癌T47D细胞生长与凋亡的影响

目的: 探讨红豆杉提取物对乳腺癌T47D细胞生长与凋亡的影响。 方法: 以乳腺癌T47D细胞为研究对象,实验设空白组、不同质量浓度红豆杉提取物组(200,100,50,25 mg ·L^-1)和阿霉素组(3 μmol ·L^-1),各给药组处理乳腺癌T47D细胞24 h,MTT法检测T47D细胞增殖,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性,Hoest33342荧光染色检测细胞凋亡,Western blot法检测T47D细胞凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达。 结果: 与空白组比较,红豆杉提取物明显抑制乳腺癌T47D细胞的增殖,增加LDH及Caspase-3活性,诱导细胞凋亡及上调促凋亡蛋白Bax的水平,下调抗凋亡蛋白Bcl-2水平,均具有明显的统计学差异(P<0.05,P<0.01),且具有浓度依赖性。 结论: 红豆杉提取物对乳腺癌细胞T47D增殖具有直接抑制作用,并且具有浓度依赖性,其作用机制与促进细胞凋亡有关。     

百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经元凋亡的影响

目的: 探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动、海马神经元凋亡及凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法: 将SD大鼠随机分为6组,即空白对照、抑郁模型、氟西汀、百事乐胶囊高、中、低(2.88,1.44,0.72 g·kg^-1)剂量组,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立抑郁模型,造模同时ig给药,连续21 d,测定各组大鼠体重变化,Open-field、1%蔗糖偏食度测定大鼠行为学变化,TUNEL染色测定海马神经元凋亡变化,免疫组化检测海马Bcl-2,Bax的表达。结果: 与正常组比较,模型组体重增加、水平及垂直活动次数、蔗糖偏食度明显下降(P<0.01),凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数明显增加 (P<0.01);Bcl-2表达下降(P<0.01),Bax表达上升(P<0.01)。百事乐胶囊高剂量在第14、21天提升模型大鼠体重(P<0.01),中剂量在第21天升高模型大鼠体重(P<0.05);高、中剂量能提升模型大鼠水平或垂直活动次数(P<0.01 或P<0.05);高、中剂量能提高模型大鼠蔗糖偏食度,降低CA1,CA3区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数(P<0.01或P<0.05),且高剂量能降低模型大鼠DG区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数,升高海马CA3区Bcl-2并降低Bax的表达(P<0.05)。结论: 百事乐胶囊能通过减少海马神经元的凋亡而达到抗抑郁的作用。     

对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2，Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的 研究对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 选择人肝癌SMMC-7721细胞,常规培养及传代,对叶百部总生物碱设置添加干预的质量浓度为50,75,112,167,250 mg·L^-1,另设置仅添加10%胎牛血清作为空白组。采用噻唑蓝（MTT）比色法和细胞克隆实验观察细胞增殖的作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测3种凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3的表达。结果 对叶百部总生物碱可抑制SMMC-7721细胞增殖,与空白组比较,细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）,作用24,48,72 h的50%细胞抑制浓度（IC₅₀）分别为（173.36±8.75）,（112.14±16.50）,（96.41±2.60） mg·L^-1,细胞集落形成抑制率显著升高（P<0.01）,存在浓度依赖性。与空白组比较,对叶百部总生物碱可促进细胞凋亡,SMMC-7721细胞凋亡数目和凋亡率显著增加（P<0.01）,在荧光正置显微镜下可观察到典型细胞凋亡形态,如亮蓝色细胞核染色,细胞质浓缩和细胞核固缩等。与空白组比较,抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调（P<0.01）;与空白组比较,对叶百部总生物碱75,112,167,250 mg·L^-1促凋亡蛋白Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱有很好的抑制SMMC-7721细胞增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达和促进Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中PMN-MDSCs凋亡的影响

目的 观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞（PMN-MDSCs）凋亡的影响。方法 制备半夏泻心汤含药肠吸收液,以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型,采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法筛选0.63 g·mL^-1复溶液制备而成的0~100%半夏泻心汤含药肠吸收液的最佳干预浓度及时间,分为空白组、模型组、奥沙利铂组（10 mg·L^-1）及半夏泻心汤组（26%、18%、10%含药肠吸收液）,采用CCK-8法检测PMN-MDSCs的增殖,流式细胞术检测PMN-MDSCs的凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PMN-MDSCs胃癌微环境凋亡相关蛋白,B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平。结果 作用24、48 h,与空白组比较,5%、50%、75%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率均有升高（（P<0.05,P<0.01）,作用72 h,除50%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率低于48 h（P<0.01）,其余浓度各自抑制率差异无统计学意义,且48 h半数抑制浓度（IC₅₀）为18.40%,说明18%半夏泻心汤含药肠吸收液在48 h为最佳干预浓度及时间。与空白组比较,模型组PMN-MDSCs的存活率明显升高（P<0.05）,凋亡率明显下降（P<0.05）;与模型组比较,半夏泻心汤组PMN-MDSCs存活率均明显降低（P<0.05）,凋亡率明显升高（P<0.05）,以半夏泻心汤组（26%含药肠吸收液）最为明显（P<0.05）。与空白组比较,模型组PMN-MDSCs促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显降低（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升（P<0.05）。与模型组比较,奥沙利铂组、半夏泻心汤组PMN-MDSCs Caspase-3蛋白表达升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）,奥沙利铂组、半夏泻心汤组（10%含药肠吸收液）Bax蛋白表达升高（P<0.05）。结论 半夏泻心汤含药肠吸收液能通过调控胃癌微环境PMN-MDSCs凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达,诱导PMN-MDSCs凋亡。     

苦参碱抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖作用研究

目的: 观察苦参碱对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。 方法: 取对数生长期SK-N-SH细胞,用磺酰罗丹明B（SRB）法检测苦参碱（0.5,1.0,2.0 g·L^-1）作用24,48,72 h后 SK-N-SH细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blot 检测半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-9和Caspase-3蛋白的表达。 结果: 苦参碱对 SK-N-SH细胞增殖具有明显抑制作用,且表现出剂量和时间依赖性。0.5,1.0,2.0 g·L^-1苦参碱作用24,48,72 h后SK-N-SH细胞的抑制率分别为（19.06±3.17）%,（30.18±3.02）%,（38.55±6.12）%;（45.12±4.02）%,（60.45±5.51）%,（71.38±7.91）%;（58.91±4.36）%,（73.44±8.17）%,（88.37±4.57）%。流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为（2.45±0.49）%,（12.56±2.21）%,（19.44±4.32）%,（30.12±3.35）%,与对照组比较,苦参碱组的凋亡率均显著性增高（P<0.001）;细胞周期结果显示苦参碱作用SK-N-SH细胞48 h后G₀/G₁期细胞明显增多（P<0.01）,S期细胞明显减少（P<0.01）。苦参碱可显著上调Caspase-9和Caspase-3蛋白表达（P<0.01,P<0.01）。 结论: 苦参碱对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖具有抑制作用,这种作用与其阻滞细胞周期和激活Caspase-9和Caspase-3表达进而诱导产生细胞凋亡有关。     

黄芩素对中波紫外线诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响

目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响。方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT),取对数生长期的细胞,随机分为空白组、模型组和黄芩素组,并用30 mJ·cm~(-2)的UVB照射模型组和黄芩素组,建立光老化模型。噻唑蓝(MTT)比色法筛选黄芩素的有效安全浓度,并测定黄芩素对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及Caspase-9蛋白表达水平。结果:筛选出1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素为最佳有效安全浓度。与空白组比较,模型组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01)。结论:黄芩素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控Bcl-2家族中抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,降低凋亡相关细胞因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡。     

抗纤灵药物血清对人肝癌细胞（HepG2）的体外生长抑制作用

目的研究抗纤灵的抑癌作用及分子机制.方法运用血清药理学及免疫组织化学等方法,观察抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用及对P21WAF1/CIP1蛋白表达的影响.结果含抗纤灵血清18,9,3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率(%)分别为63.63±5.08,55.09士4.09,48.08士4.08,细胞毒活性(%)分别为48.06士4.08,38.09士5.01,25.00±4.13,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清组比较,差异有显著性或无显著性.含抗纤灵血清18,9,3 g/kg各组HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组(P＜0.01).结论抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机制与该方提高HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达有关.     

四君子汤含药血清调控hTERT，TRF1，Tankyrase表达及对UCAC的影响

目的:应用四君子汤含药血清干预肠癌SW480细胞,观察人端粒酶逆转录酶(hTERT),端粒结合因子1(TRF1),端锚聚合酶(Tankyrase)mRNA及蛋白的表达变化,探讨其防治溃疡性结肠癌相关癌变(UCAC)的可能机制。方法:体外培养肠癌SW480细胞,分别予空白胎牛血清、四君子汤含药血清、美沙拉嗪含药血清干预,将经过干预后的SW480细胞,采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测肠癌SW480细胞中hTERT,TRF1及Tankyrase mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白血清组比较,四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组和美沙拉嗪含药血清组均能降低hTERT,TRF1,Tankyrase mRNA表达(P0.05);与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤(4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组明显降低hTERT,TRF1 mRNA表达(P0.05),四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组Tankyrase mRNA表达明显升高(P0.05)。与空白血清组比较,四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组和美沙拉嗪含药血清组hTERT,TRF1蛋白表达均降低(P0.05),美沙拉嗪含药血清组Tankyrase蛋白表达降低(P0.05);四君子汤含药血清组Tankyrase蛋白表达呈下降趋势,但无统计学差异;与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤(8.64 g·kg-1)含药血清组hTERT蛋白表达明显降低(P0.05),四君子汤(4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组TRF1蛋白表达明显降低(P0.05),四君子汤(2.16 g·kg-1)含药血清组Tankyrase蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:四君子汤含药血清可能通过下调hTERT,TRF1,Tankyrase表达,抑制癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,达到防治UCAC的作用。     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。     

苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L~(-1))能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖。作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L~(-1),Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P0.05)。结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关。     

复方苯妥英钠凝胶剂对创面修复和细菌感染的影响

目的:观察复方苯妥英钠凝胶剂对实验性创面修复及细菌感染的影响.方法:建立小鼠皮肤切割伤模型,用复方苯妥英钠凝胶剂低、高剂量(4.25,4.55 g·kg-1)于创面涂药,连续12d,分别于3,6,8,10,12 d观察小鼠皮肤创面的收缩率;建立大鼠皮肤切割伴金黄色葡萄球菌感染模型,用复方苯妥英钠凝胶剂低、高剂量(1.70,1.82 g·kg-1)于创面涂药,连续12 d,观察大鼠皮肤创面的愈合率,同时对愈合组织进行病理学组织学检查.结果:3,6,8,10,12 d,复方苯妥英钠凝胶剂低、高剂量组小鼠创面收缩率分别为(20.16 ±5.78)％,(40.02 ±9.79)％,(71.04±7.27)％,(96.14±2.53)％,(99.44±1.30)％,(28.50±4.77)％,(55.66±8.39)％,(79.67±5.11)％,(96.14±2.53)％,(100.00±0.00)％,明显高于凝胶基质组(16.77±4.79)％,(29.95±5.63)％,(50.69±4.19)％,(67.47±5.13)％,(82.48±4.40)％(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01;P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01);复方苯妥英钠凝胶剂低、高剂量组大鼠皮肤创面的愈合率分别为(29.45±5.11)％,(50.17±4.29)％,(72.48±5.05)％,(87.44±4.11)％,(96.66±3.75)％;(33.71±3.43)％,(58.67±5.59)％,(81.86 ±4.15)％,(95.92±2.39)％,(100.00±0.00)％明显高于凝胶基质组(20.71±3.58)％,(40.42±3.89)％,(58.53±6.21)％,(74.71±9.23)％,(86.47±7.15)％(均P＜0.01).结论:复方苯妥英钠凝胶剂能促进实验性细菌感染创面的愈合.     

在体皮肤微透析分析制川乌-白芍配伍对芍药苷局部药代动力学的影响

目的:考察制川乌对白芍中芍药苷经皮转运的影响,从经皮转运角度研究制川乌-白芍配伍协同增效作用机制。方法:以昆明种清洁级小鼠为实验对象,分别经皮给予白芍凝胶、制川乌-白芍凝胶和白芍-氮酮凝胶,采用皮肤微透析取样技术,建立HPLC测定透析液中芍药苷的浓度,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液(14∶86),检测波长230 nm;利用DAS 2.0软件计算局部药动学参数,采用扫描电镜考察药物对小鼠皮肤角质层的影响。结果:白芍凝胶组的药时曲线下面积(AUC_(0-t)),平均滞留时间(MRT_(0-t)),半衰期(t_(1/2)),达峰时间(T_(max))和药峰浓度(C_(max))分别为(3.28±1.01)mg·L~(-1)·h,(3.95±0.32)h,(0.92±0.44)h,(2.00±0)h和(0.72±0.24)mg·L~(-1);白芍-制川乌凝胶组MRT_(0-t),AUC_(0-t),t_(1/2),T_(max)和C_(max)分别为(3.35±0.08)h,(10.64±1.24)mg·L~(-1)·h,(1.32±0.67)h,(1.00±0)h和(3.06±0.38)mg·L~(-1),白芍-氮酮凝胶组AUC_(0-t),MRT_(0-t),t_(1/2),T_(max),C_(max)分别为(59.82±13.51)mg·L~(-1)·h,(3.67±0.08)h,(0.89±0.16)h,(2.67±0.29)h和(13.24±4.14)mg·L~(-1)。与白芍凝胶组比较,制川乌-白芍凝胶组AUC_(0-t)和C_(max)均显著增大,T_(max)明显缩短。扫描电镜观察结果表明制川乌作用皮肤后,角质层细胞间隙明显增加,且与氮酮对皮肤的作用类似。结论:制川乌-白芍配伍能显著提高芍药苷的透皮吸收,达到配伍"增效"的目的,这可能与制川乌降低角质层的屏障作用有关。     

甘草苷对中波紫外线诱导人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的:研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的影响。方法:以不同浓度的甘草苷作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝(MTT)比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 m J·cm-2的UVB作用于Ha Ca T细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基(ROS)含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测光老化Ha Ca T细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)mRNA表达水平;蛋白免疫印记法(Western blot)检测光老化Ha Ca T细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量。结果:筛选出甘草苷的最佳有效安全浓度为1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01),细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高(P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高(P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高(P0.01)。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P0.05,P0.01);Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡。     

疣毒净诱导H8细胞凋亡作用机制

目的:观察疣毒净制剂对人宫颈永生化细胞H8细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法:以转染HPV16基因后稳定传代的人宫颈永生化细胞株H8细胞为研究对象;经1,2,3,4,5 g·L~(-1)疣毒净干预H8细胞24,48,72 h,同时设立空白组,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖抑制作用;荧光显微镜下观察1,2,3,4,5 g·L~(-1)疣毒净干预24 h后,经Hoechst 33342染色的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测1,2,3,4,5 g·L~(-1)疣毒净干预24 h后,经Annexin V/碘化丙啶(PI)双染后细胞早期凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测1,2,3,4,5 g·L~(-1)疣毒净干预24 h后H8细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)蛋白表达情况。结果:与空白组比较,2,3,4,5 g·L~(-1)疣毒净对H8细胞的生长抑制呈明显的浓度-时间依赖效应(P0.05);经Hoechst 33342染色后,荧光显微镜下可见1,2,3,4,5 g·L~(-1)疣毒净给药后细胞均出现明显的核染色质浓缩,3,4,5 g·L~(-1)疣毒净干预下圆形亮蓝色凋亡小体逐渐增多;流式细胞仪检测到1,2,3 g·L~(-1)疣毒净干预24 h后细胞的早期凋亡率分别为(23.73±5.72)%,(63.9±3.59)%,(71.53±1.59)%,与空白组(6.53±0.85)%比较早期凋亡率显著升高(P0.01);与空白组比较,疣毒净组凋亡执行蛋白Caspase-3及其底物PARP蛋白均明显下调(P0.05),呈浓度下调趋势,二者下调的趋势一致。结论:疣毒净能明显抑制宫颈永生化细胞H8细胞增殖,诱导早期凋亡,可能是通过激活Caspase-3-PARP途径来执行的。