补肾益智方对由A_β片段神经毒性诱导NG108-15细胞老年性痴呆模型神经递质释放影响的研究

目的:观察补肾益智方对由Aβ片段神经毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆(AD)模型神经递质释放的影响.方法:利用免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法,观察补肾益智方含药血清处理Aβ片段神经毒性诱导的NG108-15细胞后的胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性、突触素蛋白(synapsin)水平及功能性突触形成率.结果:补肾益智方含药血清组ChAT活性和突触素蛋白水平高于正常对照血清组;含药血清能调节递质释放能力和提高功能性突触形成.结论:补肾益智方具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应,表明该方能拮抗AD的病理发展,并通过提高神经递质释放能力发挥对AD的治疗作用.     

补肾益智方对AD细胞模型影响的研究

目的 :观察补肾益智方对由Aβ片段毒性诱导的NG1 0 8- 1 5细胞老年性痴呆 (AD)模型的影响。方法 :利用细胞计数、MTT及流式细胞仪测定等方法观察补肾益智方含药血清处理由Aβ片段毒性诱导的NG1 0 8- 1 5细胞存活率、形态学及细胞周期的改变。结果 :补肾益智方含药血清能增加Aβ片段毒性诱导的NG1 0 8- 1 5细胞存活率和细胞突起 ;细胞增殖周期分析显示 ,含药血清能增加S期细胞数。结论 :补肾益智方具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应 ,表明该方通过拮抗AD的病理发展而发挥对AD的治疗作用     

补肾益智方对AD细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响

目的：观察补肾益智方含药血清对AD（Alzheimer's Disease)细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响。方法：在神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交的NG108－15细胞培养液中加入预先老化4d的Aβ25－35片段共同孵育,建立AD细胞模型。分别加入正常老年大鼠血清、补肾益智方高剂量含药血清和补肾益智方低剂量含药血清培养48h后;应用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度（Ca^2 )的变化情况;荧光显微镜观察细胞骨架的重组情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡细胞。结果：与正常大鼠血清加Aβ25－35组比较,高剂量补肾方含药血清组、低剂量补肾方含药血清细胞内Ca^2 浓度的相对荧光值明显降低（P＜0．01）,而他们间两两比较则差异显著（P＞0．05）。正常大鼠血清加Aβ25－35的NG108－15细胞组可以看到,细胞骨架严重解聚并向边缘扩散,细胞形态变性,还有细胞死亡现象;而高、低剂量补肾方含药血清组细胞骨架呈现微弱解聚现象,细胞形态正常,无变性和死亡现象。与正常大鼠血清加Aβ25－35组比较,高、低剂量补肾方含药血清组NG108－15细胞凋亡率明显减少（P＜0．01）。结论：补肾益智方含药血清可以抑制细胞Ca^2 内流,平衡控制细胞内Ca^2 浓度;对Aβ引起NG108－15细胞骨架解聚、细胞变性等有保护作用,能部分保护Aβ25－35诱导的细胞凋亡。     

补肾益智方拆方含药血清保护Aβ25-35损伤NG108-15细胞的研究

目的；研究中药补肾益智方拆方亚组的含药血清对AD细胞模型生长、分化等方面的影响。探讨该方药物的配伍规律。方法：将补肾益智方拆分为补肾组、益气养血组和去冰片组（即补肾组＋益气养血组）等3个亚组，连同原方组共4组对大鼠灌胃给药分离药物血清，在含各组血清的培养液中，加入Aβ25－35，观察NG108－15细胞的生长状态、细胞增殖数、存活率，突起率及突起平均长度。结果：与AD细胞模型组相比，补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制Aβ25－35对细胞的损伤作用，但各组情况有所不同。各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组＞补肾益智方组＞补肾组＞益气养血组。结论：补肾药酸伍益气养血药可增强对Aβ25－35损伤NG108－15细胞的保护作用，其中以补肾药的作用为主，方中冰片的功效有待进一步研究。     

补肾益智方含药血清保护Aβ25—35—3损伤PCI2细胞的实验研究

目的：探讨补肾益智方含药血清对由Aβ25-35-3诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤（PCI2）老年性痴呆（AD）细胞模型的保护作用。方法：建立PCI2细胞培养方法，用倒置显微镜进行形态学观察，利用WST-8法检测细胞活力以及荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位等方法，观察补肾益智方含药血清对AD细胞模型的影响。结果：补肾益智方5％含药血清对AD细胞模型的保护作用优于5％正常血清，差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论：补肾益智方含药血清能在一定程度上减少Aβ25-35-3对PCI2细胞的神经毒性作用。     

补肾益智方含药血清对AD细胞模型保护作用的实验研究

目的:通过利用血清药理学方法观察补肾益智方对由Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型的影响,并评价其在研究中药药效学中的作用价值。方法:利用细胞计数、MTT方法确立Aβ25-35片段在建立细胞模型时的浓度及筛选含药血清作用的最佳浓度,分别观察5％、10％、20％正常大鼠(Rat)血清和补肾益智方含药血清培养液及不同浓度(0umol/L、5umol/L、10umol/L)Aβ25～35片段处理老年性痴呆细胞模型后的细胞存活率。结果:以上两种血清5％浓度组的细胞存活率均明显高于10％及20％浓度组(P<0.001.P<0.0001),10％与20％浓度组之间则差异无显著性意义;在5％血清浓度条件下,无Aβ及5μMAβ25-35浓度 组,含药Rat血清组细胞存活率均高于正常Rat血清组,差异有显著性意义(P<0.05)。在10μMAβ25-35浓度时两组组间差异无显著性意义。结论:选用5umol/L Aβ5-35及5％血清浓度条件时,建立NG108-15细胞老年性痴呆模型较为合适;补肾益智方含药血清能使该细胞模型细胞死亡率降低,表明该方能有效地保护Aβ片段对细胞的神经毒性作用。     

补肾益智方含药血清保护Aβ_(25-35)-3损伤PC12细胞的实验研究

目的:探讨补肾益智方含药血清对由Aβ25-35-3诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)老年性痴呆(AD)细胞模型的保护作用。方法:建立PC12细胞培养方法,用倒置显微镜进行形态学观察,利用WST-8法检测细胞活力以及荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位等方法,观察补肾益智方含药血清对AD细胞模型的影响。结果:补肾益智方5%含药血清对AD细胞模型的保护作用优于5%正常血清,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:补肾益智方含药血清能在一定程度上减少Aβ25-35-3对PC12细胞的神经毒性作用。     

补肾化痰益智法对AD细胞模型APP mRNA表达的影响

目的：本研究在成功建立AD体外模型基础上,探讨补肾化痰益智法治疗AD的作用机制。方法：运用Aβ1-42作用于PC-12细胞,制作AD神经元细胞模型,并用补肾化痰益智方含药血清进行干预,以吲哚美辛为对照。镜下观察细胞形态,MTT法检测PC-12细胞存活率,观察补肾化痰益智方对神经元细胞保护作用。RT-PCR法检测APP mRNA的表达,观察补肾化痰益智方抗Aβ神经毒性作用。结果：2.5 mmol·L-1聚集态Aβ1-42使细胞活力明显下降;RT-PCR法对APP mRNA表达进行半定量分析发现,经Aβ1-42诱导各组APP mRNA表达上调,补肾化痰益智法可明显降低其表达（P〈0.01）。结论：补肾化痰益智法对神经细胞具有较好的保护作用,能够抑制APP mRNA的表达,降低毒性作用。     

补肾益智方拆方含药血清保护Aβ25-35损伤NG108-15细胞的研究

目的 :研究中药补肾益智方拆方亚组的含药血清对AD细胞模型生长、分化等方面的影响 ,探讨该方药物的配伍规律。方法 :将补肾益智方拆分为补肾组、益气养血组和去冰片组 (即补肾组 益气养血组 )等 3个亚组 ,连同原方组共 4组对大鼠灌胃给药分离药物血清。在含各组血清的培养液中 ,加入Aβ2 5 35 ,观察NG10 8 15细胞的生长状态、细胞增殖数、存活率 ,突起率及突起平均长度。结果 :与AD细胞模型组相比 ,补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制Aβ2 5 35对细胞的损伤作用 ,但各组情况有所不同。各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组 >补肾益智方组 >补肾组 >益气养血组。结论 :补肾药配伍益气养血药可增强对Aβ2 5 35损伤NG10 8 15细胞的保护作用 ,其中以补肾药的作用为主 ,方中冰片的功效有待进一步研究。     

补肾化痰益智法对AD细胞模型APPmRNA表达的影响

目的:本研究在成功建立AD体外模型基础上,探讨补肾化痰益智法治疗AD的作用机制。方法:运用Aβ1-42作用于PC-12细胞,制作AD神经元细胞模型,并用补肾化痰益智方含药血清进行干预,以吲哚美辛为对照。镜下观察细胞形态,MTT法检测PC-12细胞存活率,观察补肾化痰益智方对神经元细胞保护作用。RT-PCR法检测APP mRNA的表达,观察补肾化痰益智方抗Aβ神经毒性作用。结果:2.5 mmol·L-1聚集态Aβ1-42使细胞活力明显下降;RT-PCR法对APP mRNA表达进行半定量分析发现,经Aβ1-42诱导各组APP mRNA表达上调,补肾化痰益智法可明显降低其表达(P<0.01)。结论:补肾化痰益智法对神经细胞具有较好的保护作用,能够抑制APP mRNA的表达,降低毒性作用。     

三七总皂苷对Alzheimer''''s病大鼠模型大脑胆碱能神经病理损害的保护作用

目的:观察三七总皂苷(PNS)对老年性痴呆(AD)大鼠模型大脑胆碱能神经病理损害的保护作用.方法:以d-半乳糖腹腔注射致亚急性损伤合并鹅膏蕈氨酸(IBA)损毁双侧大脑Meynert基底核建立AD大鼠动物模型,利用免疫组织化学方法检测大脑切片胆碱乙酰基转移酶(ChAT)免疫反应活性及阳性神经元数量及形态学改变.结果:PNS能明显减轻由d-半乳糖损害和鹅膏蕈氨酸损毁导致的大脑胆碱能神经元数量减少和ChAT水平降低.结论:PNS对AD大鼠模型大脑胆碱能神经的病理损害具有保护作用.     

寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

  目的：探讨寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的调节作用。  方法：体外分离培养人早孕滋养层细胞,采用高、中、低剂量寿胎丸含药血清进行干预,以空白血清、地屈孕酮含药血清为对照。采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)及Transwell 侵袭移动实验测定滋养层细胞的增殖活性、周期分布及侵袭迁移能力。  结果：与空白组比较,滋养层细胞经寿胎丸含药血清干预后,细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,S期细胞比例增高,G2/M期细胞比例降低(P<0.05)。与寿胎丸低剂量组比较,寿胎丸中、高剂量组滋养层细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,细胞周期分布变化更加明显(P<0.05)。  结论：寿胎丸含药血清可促进人早孕滋养层细胞的增殖活性及侵袭迁移能力,减少细胞凋亡。     

氧化损伤类阿尔茨海默病大鼠模型的建立及调心方的作用

目的：建立一种简便、经济、实用的氧化损伤类阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)大鼠模型,探讨调心方对该模型大鼠空间学习记忆能力和β-淀粉样蛋白质(β-amyloid protein,Aβ)沉积的影响。方法：采用二羟延胡索酸(DHF)加三氯化铁-二磷酸腺苷(FeCl3-ADP)左侧脑室注射的方法,建立氧化损伤型类AD大鼠模型;Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力;免疫组化法观察大脑皮层Aβ沉积及调心方的作用。结果：与对照组比较,模型鼠空间学习记忆能力显著下降,皮层Aβ广泛沉积,皮层Aβ阳性细胞数和免疫组化着色平均光密度显著增高;调心方对模型鼠上述指标变化有明显的改善作用。结论：氧化损伤模型既能较好地表达AD的临床特征(近期记忆损害),又能部分反应AD的病理变化(Aβ沉积),是一经济实用的氧化损伤类AD大鼠模型;调心方具有改善氧化损伤类AD大鼠空间学习记忆障碍、降低Aβ沉积的作用。     

脑灵汤对Alzheimer病模型大鼠行为学及海马胆碱能神经系统的影响

目的观察脑灵汤对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力,以及对海马部位乙酰胆碱酯酶(AChE)和胆碱乙酰基转移酶(ChAT)的影响。方法D-半乳糖腹腔注射联合三氯化铝(AlCl3)皮下注射诱导建立大鼠AD模型,造模前后进行Y-电迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力,药物干预后检测各组大鼠学习记忆能力、海马区AChE及ChAT活力。结果治疗30 d后脑灵汤组学习记忆成绩比西药组及模型组显著提高(P均<0.05),海马区AChE活力较模型组及西药组显著降低(P均<0.01),ChAT活力较模型组及西药组显著升高(P均<0.01)。结论脑灵汤能降低大鼠海马组织区乙酰胆碱酯酶活力,升高胆碱乙酰基转移酶活力,改善脑内胆碱能系统的功能,从而提高AD模型大鼠学习记忆能力。     

参葵汤对卵巢癌患者新鲜实体瘤细胞及细胞株Tyk-nu细胞增殖的影响

目的:研究参葵汤对卵巢癌细胞增殖的影响.方法:应用中药血清药理学方法制备含参葵汤大鼠血清,应用氚(3H)掺入法观测含药血清对卵巢癌新鲜实体瘤细胞增殖的影响,应用流式细胞仪、细胞活力测定、细胞生长曲线测定、细胞集落形成率测定的方法检测了含药血清对卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞增殖的影响.结果:3H掺入法检测结果显示,含药血清可抑制卵巢癌新鲜实体瘤细胞的增殖,抑制率随含药血清浓度的增高而增高;流式细胞仪、细胞活力、细胞生长曲线、细胞集落形成率测定结果显示,含药血清可抑制卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞增殖,抑制率随含药血清浓度的增高而增高.结论:含参葵汤大鼠血清可抑制卵巢癌新鲜实体瘤细胞及卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞的增殖.     

嗅三针对老年痴呆大鼠学习记忆功能及海马胆碱乙酰化酶、乙酰胆碱酯酶活性的影响

目的:探讨嗅三针对老年痴呆大鼠学习记忆功能影响的作用机制。方法:成年SD雄性大鼠随机分为正常对照组、阿尔茨海默病(AD,又称老年痴呆)模型组、嗅球损毁电针组、单纯AD电针组,每组10只。Aβ1-40注射法造大鼠AD模型,电凝法损毁嗅球。嗅三针为两侧"迎香"穴及"印堂"穴,电针10 min,每日1次,5次为1个疗程,共进行8个疗程。Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,比色法检测大鼠海马区胆碱乙酰化酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性。结果:定位航行试验显示,平均逃避潜伏期比较,AD模型组明显长于正常对照组(P<0.01),单纯AD电针组明显短于AD模型组和嗅球损毁电针组(P<0.01),嗅球损毁电针组与AD模型组之差异无统计学意义(P>0.05)。空间探索试验显示,原平台象限跨越相应平台的次数比较,AD模型组明显少于正常对照组(P<0.01),单纯AD电针组明显多于AD模型组和嗅球损毁电针组(P<0.01),AD模型组与嗅球损毁电针组之差异无统计学意义(P>0.05)。海马ChAT、AChE活性比较,AD模型组低于正常对照组(P<0.05),单纯AD电针组高于AD模型组和嗅球损毁电针组(P<0.05),AD模型组与嗅球损毁电针组之差异无统计学意义(P>0.05)。结论:嗅三针能够显著增强痴呆大鼠学习记忆功能,并且能提高海马ChAT和AChE活性,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性。     

复方脑益康对AD大鼠脑组织ChAT表达的影响

目的:观察中药复方脑益康对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠脑组织胆碱乙酰基转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)表达的影响。方法:采用大鼠双侧Meynert核(nucleus basalis of Meynert,NBM)注射鹅膏蕈氨酸(ibotenic acid,IBO)建立AD动物模型,灌胃给药28 d后,应用免疫组织化学染色和Western-blot印迹分析观察ChAT在AD大鼠额叶皮层的表达。结果:脑益康改善脑组织ChAT阳性神经元的形态及数量、增加ChAT蛋白的表达。结论:脑益康通过促进ChAT蛋白合成,增加乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)的合成,从而保护中枢胆碱能神经元。     

复方苁蓉益智胶囊治疗阿尔茨海默病作用机制的网络药理学研究

目的利用网络药理学技术研究复方苁蓉益智胶囊(CCYC)治疗阿尔茨海默病(AD)的潜在作用机制。方法利用TCMSP、BATMAN-TCM数据库、TCMID数据库、化学专业数据库查找复方苁蓉益智胶囊中5味中药的化学成分并进行活性成分筛选;利用SwissTargetPrediction数据库获取活性成分的作用靶点,搜索GeneCards数据库、OMIM数据库、TTD数据库结合文献查找获取阿尔茨海默病的疾病靶点。取活性成分靶点和阿尔茨海默病疾病靶点的交集,得到复方苁蓉益智胶囊治疗阿尔茨海默病的潜在靶点。利用String数据库构建蛋白质-蛋白质互作网络。采用Metascape平台进行靶点GO富集分析和KEGG富集分析,通过Cytoscape3.7.1软件构建"单味药-关键成分-靶点-通路"网络并进行分析。结果肉苁蓉含有最多的关键成分,荷叶有最多的潜在靶点。APP、MAPK1、MAPK3、ESR2、ESR1、EGFR、DRD2、ACHE可能是复方苁蓉益智胶囊治疗阿尔茨海默病的重要靶点,涉及的主要通路和过程主要包括神经递质受体活性、神经递质水平调控、多巴胺能突触、胆碱能突触等。结论肉苁蓉和荷叶在复方苁蓉益智胶囊复方中占主要地位,复方苁蓉益智胶囊治疗阿尔茨海默病的机制可能是减少Aβ的产生及tau蛋白形成、调节雌激素受体及表皮生长因子受体、调控多巴胺能及胆碱能系统。     

当归含药血清对阿尔兹海默病细胞模型损伤的保护作用

目的:观察当归含药血清对Aβ25-35与H2O2分别诱导的阿尔兹海默病(AD)细胞模型的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35与H2O2分别诱导PC12细胞损伤,以不同浓度当归含药血清对抗干预,以MTT比色法观测当归含药血清对两种AD细胞模型增殖的保护作用,以比色法检测当归含药血清对AD细胞模型培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响,分析当归治疗AD机制。结果:10%当归含药血清对损伤的PC12细胞的存活率有明显提高作用,可显著降低细胞模型培养液中LDH活力、MDA含量,提高T-SOD活力(P<0.05)。讨论:当归含药血清对H2O2及Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制与当归阿魏酸提高细胞抗氧化能力有关。