解毒祛瘀滋阴方对佐剂性关节炎大鼠TNF-α的影响

目的:通过观察解毒祛瘀滋阴方对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用,进一步评价解毒祛瘀滋阴方治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的疗效。方法:观察了解毒祛瘀滋阴方对佐剂性关节炎大鼠的影响。结果:解毒祛瘀滋阴方能明显抑制大鼠佐剂性关节炎病变,解毒祛瘀滋阴方可明显下调佐剂性关节炎大鼠TNF-α的水平。     

黑骨藤中神经酰胺类化学成分

目的: 研究黑骨藤化学成分. 方法: 采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化,并通过理化常数测定和质谱、一维、二维核磁共振等波谱方法分析鉴定其化学结构. 结果: 从黑骨藤中分离鉴定了2个神经酰胺类化合物,分别为1-O-β-D-葡萄糖-(2S, 3S, 4R, 10E)-2-[(2R)-2-羟基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-3, 4-二醇(1),(2S, 3S, 4R, 10E)-2-[(2R)-2-羟基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-1, 3, 4-三醇(2). 结论: 所有化合物均首次从黑骨藤中分离得到,采用二维核磁技术确定化合物2的结构,并对其二维谱数据进行归属.     

健脾清化方对代谢综合征合并糖调节受损患者临床指标及花生四烯酸代谢物的影响

  目的：探讨健脾清化方对代谢综合征合并糖调节受损患者临床指标及花生四烯酸代谢物的影响。  方法：将60例代谢综合征合并糖调节受损患者随机分为对照组和治疗组,每组30例。对照组仅给予生活方式干预,治疗组在对照组基础上加用健脾清化方口服治疗。两组疗程均为6个月,观察腰围(WC)、体质量指数(BMI)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂(TC、TG、LDL)、颈总动脉内膜厚度(IMT)以及花生四烯酸代谢物的变化情况。  结果：①治疗前后组内比较,治疗组WC 、BMI、HbA1c、TG水平均下降(P<0.05),对照组各项指标无明显变化(P>0.05)；组间治疗后比较,治疗组WC、HbA1c较对照组明显下降(P<0.05)。②治疗前后组内比较,治疗组颈动脉内膜厚度下降(P<0.05),对照组颈动脉内膜厚度无明显变化(P>0.05)；组间治疗后比较,两组颈动脉内膜厚度差异无统计学意义(P>0.05)。③治疗前后组内比较,治疗组11-脱氢血栓烷素B₂(11-dehydroTXB₂)、11-dehydroTXB₂/6-酮前列腺素F_1a(6-ketoPGF_1a)、12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)水平均下降(P<0.05),对照组各代谢物水平无明显变化(P>0.05)；组间治疗后比较,治疗组11-dehydroTXB₂、11-dehydroTXB₂/6-ketoPGF_1a、12-HETE、9-羟十八碳二烯醇(9-HODE)、13-羟十八碳二烯醇(13-HODE)水平较对照组明显下降(P<0.05)。  结论： 健脾清化方可减轻代谢综合征合并糖调节受损患者的体质量,改善血糖代谢,延缓动脉硬化发生发展,其作用机制可能与调节花生四烯酸的不同代谢通路有关。     

咖啡因在大鼠及小鼠肝微粒体中体外代谢种属差异研究

咖啡因及其代谢产物在临床应用中具有重要作用,该文拟采用高分辨质谱系统对咖啡因经大鼠及小鼠肝微粒体代谢进行系统研究,以全面评价咖啡因体外代谢产物以及体外代谢的种属间差异。采用基于MMDF的UPLC-Q-TOF-MS/MS高分辨质谱系统,借助metabolitepolite软件,分析咖啡因经大鼠及小鼠肝微粒体代谢的产物及种属差异。研究发现咖啡因经大鼠及小鼠肝微粒体后产生除以往分析中的去甲基、氧化等产物之外,还存在甲基化、双氧化、脱水以及脱羰基新的代谢产物,并发现大鼠及小鼠体外代谢的明显差异。在小鼠体外代谢物中发现的去甲基代谢物M2(C₇H₈N₄O₂)和脱羰基代谢物M6(C₇H₁₀N₄)在大鼠体外代谢物中并为发现,但是在大鼠体外代谢中发现的M7(C₈H₁₂N₄O₅),在小鼠中并未发现。咖啡因药物在大鼠及小鼠的体外代谢存在明显种属差异,将对咖啡因进一步代谢研究及安全性评价提供重要参考价值。     

基于Th17/Treg失衡的解毒祛瘀滋阴方治疗系统性红斑狼疮作用机制研究

<正>系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,以女性多见。近年来,人们对SLE免疫学发病机制研究有了新的进展,诸多研究显示:Th17/Treg细胞免疫失衡参与了SLE异常免疫应答过程~([1-2])。解毒祛瘀滋阴方是范永升教授治疗SLE的经验方,已证实具有良好的临床疗效。本研究以Th17/Treg细胞免疫失衡为切入点,探讨解毒祛瘀滋阴方对这一免疫平衡的调控作用。     

塔中栽培荒漠肉苁蓉化学成分研究

对新疆塔中栽培荒漠肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma干燥肉质茎的化学成分进行研究。采用正相硅胶、凝胶 Sephadex LH-20,MCI,ODS以及半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,运用 NMR,MS等波谱方法以及理化性质结合文献数据对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从塔中栽培荒漠肉苁蓉干燥肉质茎85%乙醇提取物中分离得到17个化合物,其结构鉴定为salsaside B(1)、紫丁香苷(2)、去甲基紫丁香苷(3)、松柏苷(4)、(2E,6E)-3,7-dimethyl-8-hydroxyoctadien-1-O-β-D-glucoside(5)、(+)-丁香脂素(6)、2S,3S,4S-trihydroxy-pentanoic acid(7)、panaxytriol(8)、β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷(9)、草夹竹桃苷(10)、3-methyl-but-2-en-1-yl-β-D-glucopyranoside(11)、苄基葡萄糖苷(12)、4-羟基苄基-β-D-葡萄糖苷(13)、烟酰胺(14)、对羟基苯甲酸(15)、对羟基苯乙醇(16)、半乳糖醇(17)。化合物 3,6~13 为首次从该属植物中分离得到,化合物 1,4,5 为首次从该种植物中分离得到。     

解毒活血滋阴方抗炎活性有效部位的筛选

目的: 研究解毒活血滋阴方不同部位群对机体炎症的影响,并筛选有效部位。方法: 昆明种小鼠,分别采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高法、角叉菜胶致小鼠足跖肿胀法,每组10只,设正常组、模型组、吲哚美辛组(10 mg·kg^-1)及解毒活血滋阴方5个部位组(水提取部位966 mg·kg^-1,乙醚部位59 mg·kg^-1,乙酸乙酯部位188 mg·kg^-1,正丁醇部位22 mg·kg^-1,乙醇部位321 mg·kg^-1);另外Wistar大鼠分别以棉球致大鼠肉芽组织肿胀和建立佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,每组10只,设模型组、吲哚美辛组(10 mg·kg^-1)及解毒活血滋阴方5个部位组(水提取部位966 mg·kg^-1,乙醚部位59 mg·kg^-1,乙酸乙酯部位188 mg·kg^-1,正丁醇部位22 mg·kg^-1,乙醇部位321 mg·kg^-1);分别研究了解毒活血滋阴方5个不同部位群的抗急性、亚急性和慢性炎症的活性,研究对AA大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。结果: 与模型组比较,解毒活血滋阴方水提取、乙醇部位均能显著抑制小鼠耳廓肿胀、腹腔毛细血管通透性改变、角叉菜胶所致足跖肿胀及大鼠棉球肉芽肿胀,并可显著降低AA大鼠血清中IL-6,TNF-α的表达,均具有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。结论: 解毒活血滋阴方水提取、乙醇部位均具较强的抗炎活性,其中水提取部位长于慢性炎症,而乙醇部位长于急性炎症。     

从雌激素受体探讨解毒祛瘀滋阴药对SLE的治疗机制

目的观察解毒祛瘀滋阴药含药血清对雌激素受体α和β及其相关通路的调节作用,从而探讨解毒祛瘀滋阴药治疗系统性红斑狼疮(SLE)的机制。方法 CCK-8法检测研究解毒祛瘀滋阴药含药血清对MCF-7细胞增殖的影响;以FITC-Annexin V/PI双染法流式细胞术检测10%解毒祛瘀滋阴药含药血清诱导MCF-7细胞的凋亡率;Realtime-PCR法检测ERα和PI3KmRNA的表达;Western blot法检测雌激素受体相关信号通路蛋白ERα、p-ERα、ERβ、ERK、p-ERK的表达。结果 10%和15%的解毒祛瘀滋阴药含药血清与空白血清相比均能较轻的抑制MCF-7细胞的增殖(P0.01)。与空白血清相比,10%的解毒祛瘀滋阴药含药血清:使MCF-7细胞的早期凋亡较多;使ERα和PI3K的mRNA相对表达量明显降低(P0.05或P0.01);使ERα的蛋白表达和磷酸化水平降低;使ERβ的蛋白表达水平升高;使ERK的蛋白表达和磷酸化水平降低。结论下调ERα的表达和其磷酸化水平,促进ERβ的表达,下调ERK及其磷酸化进而影响MAPK/ERK信号通路也许是解毒祛瘀滋阴药治疗SLE的部分机制。     

凉血解毒方及拆方对活化T淋巴细胞致角质形成细胞增殖及分泌细胞因子的影响

目的: 观察凉血解毒方全方及拆方对活化T淋巴细胞致角质形成细胞增殖和分泌细胞因子的影响。 方法: 制备大鼠含药血清;将PDB刺激后的T淋巴细胞与Colo-16细胞共同培养,同时加入含药血清作用24 h,采用MTT法检测细胞增殖,采用ELISA法检测细胞因子TNF-α,sICAM-1和IFN-γ。 结果: 凉血解毒方对活化T淋巴细胞诱导的Colo-16细胞增殖具有明显的抑制作用,其中全方组和凉血组差异显著(P<0.01)。活化T淋巴细胞作用于Colo-16细胞24 h后,sICAM-1,TNF-α,IFN-γ均明显升高,凉血解毒全方和凉血方、解毒方可明显降低sICAM-1,TNF-α,IFN-γ,而全方组药效最为显著。 结论: 临床治疗银屑病有效中药复方凉血解毒方能够显著抑制活化T淋巴细胞介导的角质形成细胞增殖及细胞因子的分泌。     

解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮小鼠CD4~+T细胞MeCP2信号通路的影响

目的探讨解毒祛瘀滋阴方治疗系统性红斑狼疮的可能作用机制。方法 30只MRL/lpr狼疮小鼠随机分成中药组、西药组、模型组各10只,10只C57BL/6小鼠作为对照组。中药组予0.5 g/ml浓度的解毒祛瘀滋阴方水煎剂灌胃,西药组予0.5 mg/ml浓度的醋酸泼尼松片混悬液灌胃,模型组和对照组予蒸馏水灌胃,均每次0.01 ml/g,每日1次,连续干预12周。干预结束后观察小鼠皮毛、活动及浅表淋巴结等一般状态,检测小鼠血清白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平变化;HE染色染色观察肾脏病理改变;检测小鼠脾脏CD4~+T细胞甲基结合蛋白2(MeCP2)m RNA和蛋白的表达水平。结果与模型组比较,中药组小鼠肾脏病理损伤明显改善,血清IL-4、IFN-γ浓度水平降低,MeCP2 m RNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05或P0.01),且中药组MeCP2蛋白及m RNA表达水平升高较西药组明显(P0.05或P0.01)。结论解毒祛瘀滋阴方可能是通过激活MeCP2信号通路,进而抑制系统性红斑狼疮的发病。     

基于代谢组学和生物信息学的益胃饮干预胃癌前病变机制研究

目的 通过非靶向代谢组学技术结合生物通路分析（ingenuity pathway analysis，IPA）探讨益胃饮干预胃癌前病变的潜在作用机制。方法 采用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）建立胃癌前病变大鼠模型，采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）检测并表征大鼠血清代谢物，筛选模型组和益胃饮组大鼠血清中具有显著变化的代谢物，并通过IPA软件预测其潜在作用靶点与机制。结果 益胃饮可有效干预大鼠胃癌前病变进程；胃癌前病变模型大鼠血清中有23个代谢物有显著变化（P<0.05），益胃饮可显著回调其中13个代谢物趋于正常水平（P<0.05），主要涉及不饱和脂肪酸的生物合成，缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸的生物合成，鞘脂代谢，花生四烯酸代谢，类固醇激素合成等代谢途径；益胃饮干预胃癌前病变与抑制体内皮素-1（ET-1）和白介素-8（IL-8）信号途径密切相关。结论 益胃饮可通过回调花生四烯酸代谢等代谢途径和抑制ET-1、IL-8信号传导途径改善炎性环境，从而抑制胃癌前病变进程。     

热性中药附子调节机体内源性代谢产物的分子作用机制研究

目的 采用代谢组学技术观察附子Aconiti Lateralis Radix Praeparata对小鼠血清内源性代谢物的影响，寻找其相关生物标志物和可能表征附子临床治疗作用的代谢途径及相关靶点，探讨其发挥疗效的分子机制。方法 将20只雄性小鼠随机分为2组，分别ig附子水煎液和蒸馏水，小鼠给药量为15 mL/（kg·d），连续ig 4 d；采集各组血样，利用UPLC-MS/MS技术进行分析，主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）等分析方法进行数据模式识别，并根据变异权重系数（VIP）大于1和手动积分计算筛选出差异代谢物；利用差异代谢物进行通路分析；运用Cytoscape和MetScape对差异代谢物进行网络模块化分析并筛选靶标。结果 通过数据模式识别，附子组与对照组均能完全分离；共筛选出18个差异代谢物，其含量都呈上调趋势；通过通路分析，得出5条相关通路，分别为亚油酸代谢、花生四烯酸代谢、淀粉和蔗糖代谢、烟酸和烟酰胺代谢和磷酸肌醇代谢通路；网络模块化分析共得到14个模块，其中最大的2个模块是花生四烯酸代谢通路和亚油酸代谢通路；在整个网络中，花生四烯酸（59）、亚油酸（55）、烟酰胺（26）和棕榈酸（11）节点度值大于均值（8.010），涉及的通路分别为花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢和饱和脂肪酸β-氧化通路；共筛选出26个相关基因，同属于细胞色素P450（CYP450）酶系。结论 附子可能通过作用于CYP450，影响花生四烯酸代谢等途径，进而调节机体能量代谢，从而发挥临床治疗作用。     

秦艽地黄通痹汤治疗类风湿关节炎活动期湿热蕴毒证患者血清代谢组学研究

目的 探讨秦艽地黄通痹汤治疗类风湿关节炎活动期湿热蕴毒证的可能作用机制.方法 招募类风湿关节炎活动期湿热蕴毒证患者27名,予秦艽地黄通痹汤口服治疗,每日1剂,治疗12周.采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)检测技术,对类风湿关节炎活动期湿热蕴毒证患者治疗前后血清样本进行分析,再用主成分...     

基于UPC~2-Q/TOF-MS技术的果糖诱导高尿酸血症大鼠血清脂质代谢组学研究

利用脂质代谢组学技术,研究果糖诱导高尿酸血症大鼠与正常大鼠血清中脂类代谢物的变化,筛选出与高尿酸血症相关的潜在生物标记物。通过超高效合相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(UPC~2-Q/TOF-MS)技术分析高尿酸血症大鼠(模型组)和正常大鼠(对照组)血清代谢谱图,采用多元统计分析方法比较2组的代谢谱差异,筛选出差异性代谢物。结果显示,模型组和对照组的代谢谱图存在明显差异,并筛选出11个差异代谢物,利用精确质量数结合二级质谱图初步确定了花生四烯酸、棕榈酸、油酸、亚油酸等8种潜在生物标记物。该文建立了基于UPC~2-Q/TOF-MS技术进行果糖诱导高尿酸血症大鼠血清脂质代谢组学研究的方法,推测脂肪酸代谢异常可能与高尿酸血症的发病机制有关,为高尿酸血症的早期诊断和预防奠定科学基础。     

黄芪皂苷干预脾虚水湿不化证大鼠的代谢组学研究

目的研究黄芪皂苷组分干预脾虚水湿不化证大鼠血浆内源性代谢物的变化,探求黄芪皂苷组分对脾虚水湿不化证的干预作用。方法采用高效液相-飞行时间质谱仪检测大鼠血浆内源性代谢物信息,利用主成分分析和偏最小二乘判别分析研究对照组、模型组以及黄芪皂苷组之间的代谢差异,确定潜在生物标志物。结果对照组、模型组以及黄芪皂苷组代谢模式明显不同,共鉴定11个生物标志物,其通路主要涉及甘油磷脂代谢、鞘脂代谢、淀粉与蔗糖代谢和花生四烯酸代谢等。结论黄芪皂苷组分可能通过干预溶血磷脂酰胆碱导致的脂肪代谢紊乱、脂肪酸进入线粒体减少导致的能量供给不足、肠道功能失调等一系列代谢紊乱对脾虚水湿不化证起到治疗作用。     

基于GC-TOF-MS代谢组学研究黄连解毒汤对大鼠粪便代谢的影响＊

目的 通过GC-TOF-MS代谢组学探讨不同剂量的黄连解毒汤对SD大鼠粪便代谢组的影响，进而为黄连解毒汤的作用机制提供参考。方法 SD大鼠45只适应性喂养7天后，随机分为5组：黄连解毒汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、抗生素组和空白组，每组9只。中药干预组不同剂量黄连解毒汤灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；抗生素组，1 mL/次，2次/天；空白组生理盐水灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；末次给药后，禁食禁水12 h，处死并收集大鼠粪便。采用气相色谱-飞行时间质谱（Gas Chromatography Tandem Time-of Flight Mass Spectrometry，GC-TOF-MS）检测各组大鼠粪便，运用多元分析OPLS以及单变量统计学方法筛选差异代谢物，通过MetaboAnalyst平台进行代谢通路分析。结果 对于粪便中的内源性代谢物小分子，高剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：核糖、硫酸、棕榈酸、花生酸、茜素等；中剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：乌头酸、胆固醇、乳酸、棕榈油酸、茜素等；低剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：硫酸、棉子糖；氨苄西林钠影响的主要有：蛋氨酸1、麦角固醇、正亮氨酸1、棕榈酸、硫酸、乳酸等；不同剂量的黄连解毒汤和氨苄西林钠都能够影响到半乳糖代谢及硫代谢通路。结论 黄连解毒汤可改善糖尿病和心脑血管疾病相关的代谢物小分子，不同剂量的黄连解毒汤对粪便代谢的影响不同，其中中剂量的影响最为广泛。     

异绿原酸C大鼠体内代谢产物鉴定

目的 分析大鼠灌胃给予异绿原酸C（4，5-二咖啡酰奎宁酸）后粪便、尿液及血浆内存在的代谢产物并推测其在大鼠体内的代谢途径。方法 大鼠按20 mg·kg^-1一次性灌胃给予异绿原酸C后，收集不同时间（段）的粪便、尿液及血浆，采用超高效液相色谱与Q-Exactive Plus Orbitrap 高分辨质谱技术（UPLC-Q-Exactive Plus Orbitrap MS）+质谱自带的软件联合的方法分析，对生物样品进行检测，并完成鉴定其代谢产物。结果 基于总离子流色谱图和一级二级质谱提供的分子离子和碎片离子等精确信息，最终从大鼠粪便、尿液和血浆中共发现11种成分，包括1个原型和10个代谢产物，涉及的代谢途径有水解、甲基化、氧化、还原、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化等。结论 本实验建立的分析方法检测快速、结果准确、灵敏度高，符合生物基质样品分析相关要求，适用于大鼠粪便、尿液和血浆中异绿原酸C代谢产物的分析，为异绿原酸C的药效作用机制及药动学研究提供一定参考价值。     

基于脂质组学的绞股蓝总苷调血脂作用研究

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱的脂质组学技术研究绞股蓝总苷对高脂血症大鼠脂质代谢的影响。方法 采用高脂饲料制备高脂血症大鼠模型,通过血清血脂指标和肝脏组织病理学评价绞股蓝总苷的调血脂活性,应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术检测血清和肝脏的脂质代谢物,结合主成分分析、正交偏最小二乘-判别分析、火山图筛选差异脂质,明确绞股蓝总苷干预前后血清和肝脏中脂质变化。结果 绞股蓝总苷显著调节高脂血症大鼠的血脂（P<0.05、0.01）。从血清和肝脏中分别筛选了17、17个差异脂质,主要为三酰甘油、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱类。给予绞股蓝总苷干预后,筛选的差异脂质均有回调至正常的趋势。结论 绞股蓝总苷的调血脂作用确切,可能与调节三酰甘油、甘油磷脂、不饱和脂肪酸代谢有关。     

基于代谢组学研究肝宝胶囊治疗非酒精性脂肪肝大鼠的作用机制

目的从代谢组学角度探讨肝宝胶囊治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用机制。方法采用高脂饮食诱导NAFLD大鼠模型,SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和肝宝胶囊高、中、低剂量组,连续给药4周。ELISA法对大鼠血清ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(天冬氨酸氨基转移酶)、TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)、LDL?C(低密度脂蛋白胆固醇)、HDL?C(高密度脂蛋白胆固醇)生化指标进行测定,HE染色观察肝组织病理变化,利用UPLC?Q?TOF/MS技术并结合PCA(主成分分析)、PLS?DA(最小二乘法判别分析)和OPLS?DA(正交最小二乘法判别分析)等多元统计分析方法,筛选潜在差异代谢物及其代谢通路分析。结果肝宝胶囊可显著降低NAFLD大鼠血清ALT、AST、TC、TG和LDL?C水平,显著增加HDL?C水平,使NAFLD大鼠共26个差异代谢物水平发生不同程度回调,主要涉及代谢通路为甘油磷脂代谢、鞘脂代谢与花生四烯酸代谢。结论肝宝胶囊可能通过调节内源性物质代谢紊乱来发挥治疗NAFLD的作用。