密蒙花方对缺氧状态下脐静脉内皮细胞增殖及HIF-1α表达的影响

目的研究密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial,HUVEC）增殖及缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α）表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖的影响,应用免疫细胞化学法检测密蒙花方对缺氧状态下细胞中HIF-1α表达的影响。结果在缺氧状态下,HUVEC增殖明显且细胞中HIF-1α表达增高（P〈0.01）,密蒙花方能有效的抑制细胞增殖及HIF-1α表达,并呈浓度依赖关系。结论密蒙花方可能通过抑制HIF-1α的表达而抑制血管内皮细胞的增殖,从而对新生血管的形成起到一定的抑制作用。     

复方苦参胶囊对宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察复方苦参胶囊对体外培养宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法宫颈癌细胞经药物处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的复方苦参胶囊处理宫颈癌Hela细胞24,48,72 h后,均呈现出显著的细胞增殖抑制作用,抑制作用具有时间依赖性和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术结果显示不同浓度的复方苦参胶囊处理宫颈癌Hela细胞48 h后可显著增加宫颈癌细胞凋亡率,差异有统计学意义(P<0.01),并可增加G1期比例同时降低S期细胞比例,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论复方苦参胶囊可抑制体外培养宫颈癌细胞增殖并诱导其凋亡,该作用可能是通过抑制S期细胞比例,将细胞周期阻滞在G1期实现的。     

癌痛消颗粒影响大鼠移植性肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨癌痛消颗粒对实验大鼠肝癌细胞的影响。方法:采用Walker-256瘤株进行SD大鼠的移植型肝癌的造模,造模结束后药物治疗,最后处死动物取标本,检测细胞周期及细胞凋亡。结果:癌痛消颗粒组的肝细胞主要停留在细胞周期的G0/G1期,在S期的细胞明显减少,与模型组相比,差异均有非常显著性意义(P<0.01);癌痛消组细胞凋亡率明显提高,与模型组、正常组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:癌痛消颗粒能使肝癌细胞周期停留在G0/G1期,阻止其进入S期;显著提高癌细胞凋亡率,促使癌细胞凋亡。     

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞的作用及机理研究

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞（Human Umbilical Vascular Endothelial Cell，HUVEC）增殖的抑制作用。方法体外培养HUVEC，采用二氯化钴（Cocl2）建立细胞化学缺氧模型，采用WST-8法观察密蒙花方对缺氧状态下HUVEC的作用。并进一步采用流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）蛋白表达的影响。结果①在Cocl2所诱导的化学缺氧下，HUVEC增殖明显。密蒙花方可抑制缺氧状态下HUVEC的增殖，并呈剂量一效应关系；②密蒙花方对HUVEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，低、中、高不同浓度的密蒙花方作用24h后，其PCNA蛋白表达率分别为（62．377±3．200）％，（43．707±3．195）％、（27．621±3．622）％与缺氧组（90．600±3．694）％比较差异有统计学意义（P〈0．01）；随着密蒙花方浓度升高，PCNA蛋白表达率下降，呈剂量-效应关系（P〈0．01）。结论上述结果提示，密蒙花方有抑制新生血管发生的作用，有望成为防治增殖性糖尿病视网膜病变的有效药物。     

冰茶栓对星形胶质细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:应用血清药理学观察冰茶栓(BCS)对体外培养星形胶质细胞(Astrocyte AST)增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:原代培养SD乳鼠大脑皮层AST,将纯化后的细胞经免疫细胞化学鉴定后,随机分为药物组(高、中、低剂量)和对照组,加入相应血清共培养48h后,MTT比色法观察AST的增殖情况,流式细胞仪检测AST的凋亡率和细胞周期的变化。结果:MTT结果显示,冰茶栓高、中剂量组较空白血清组细胞数量明显减少(P<0.01,P<0.05),低剂量组与空白血清组比较无显著差异;流式细胞仪检测结果显示,冰茶栓组细胞凋亡比例较对照组明显增加(P<0.01);冰茶栓组G1期细胞比例较对照组明显提高(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例较对照组明显降低(P<0.01)。结论:冰茶栓对体外培养的星形胶质细胞增殖具有明显的抑制作用,并可诱导其凋亡,抑制其由G1期向S期和G2/M期的转化。     

护肾固精方对大鼠系膜细胞增殖周期的影响

目的探讨中药复方护肾固精方对大鼠系膜细胞(MC)生物学行为的影响。方法采用体外培养大鼠MC和血清药理学方法,分为护肾固精方血清组、脂多糖(LPS)病理组及正常对照组,将不同浓度的作用物加入MC共同培养,培养后的MC制成单细胞悬液,经流式细胞仪检测后,计算出细胞周期中的G0/G1期、S期、G2/M期各时期的百分比及S期抑制百分比、细胞PI。结果不同浓度的作用物对MC增殖周期有不同影响。LPS血清能明显刺激MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比减以及S期细胞增加;细胞的S期抑制百分比明显下降,而细胞的PI则显著增高;中、高浓度的中药血清明显抑制MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比增加及S期细胞减以,细胞的S期抑制百分比明显增加,而细胞的PI则显著降低。并且使大量MC阻滞在G0/G1期,能诱导MC发生凋亡。结论护肾固精方治疗系膜增殖性肾炎等肾小球疾病的作用机理之一,可能与抑制MC增殖和促其细胞凋亡有关。     

白花蛇舌草对人喉癌细胞凋亡及增殖的影响

[目的]研究中药白花蛇舌草(Hedyotis diffusa HD)对人喉癌Hep-2细胞凋亡、周期及增殖的影响,以探讨其在喉癌肿瘤治疗方面的作用机制。[方法]分别用不同浓度的HD作用于体外培养的Hep-2细胞,MTT法检测药物对细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。[结果]HD浓度为80mg/mL时,MTT 48h和72h细胞抑制率分别为43.80%和55.00%,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);细胞周期结果显示随着药物浓度增加和作用时间延长,G0/G1期细胞减少,S期细胞显著性增加,细胞阻滞在S期;细胞早期凋亡率明显增加,48h和72h凋亡率分别为7.10%和19.47%,与对照组1.49%和2.75%比较结果有显著性差异(P<0.01)。[结论]HD浓度为80mg/mL时对体外培养的Hep-2细胞具有明显增殖抑制作用,使细胞阻滞在S期,并诱导细胞发生凋亡。     

EGF和TGF-α影响大鼠舌背黏膜上皮细胞周期和凋亡的比较研究

目的:探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α(TGF-α)影响舌苔形成的细胞生物学机制。方法:DispaseⅡ和胰蛋白酶处理分离舌背黏膜上皮细胞,利用含血清培养基模拟舌背黏膜上皮细胞损伤修复环境,不同浓度EGF和TGF-α作用后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:与空白对照组相比,随时间推移,EGF和TGF-α能够促进细胞增殖活性,但无剂量依赖性。EGF能够诱导和解除S期和G1/G0期阻滞,TGF-α主要通过诱导和解除S期阻滞,调控细胞周期和凋亡。EGF和TGF-α的差异表现为高浓度(10μg/L)对S期细胞比例影响差异显著(P<0.05),而低浓度(1μg/L)对G2/M期细胞比例影响差异显著(P<0.05)。结论:EGF和TGF-α具有相同细胞表面受体,对大鼠舌背黏膜上皮细胞周期和凋亡影响不同,提示它们在舌苔形成中的功能不同。     

密蒙花方对高糖状态下视网膜Mtiller细胞增殖的影响

目的从离体细胞研究层面,研究中药密蒙花方对高糖状态下视网膜Mfiller细胞损伤的保护作用。方法（1）采用大鼠视网膜Mfiller细胞在30mmol／L高糖下进行体外培养,模拟高糖环境,再分别给予20％含密蒙花方血清（以下均称合药血清）干预12h,24h、36h,观察密蒙花方含药血清对大鼠视网膜Mtiller细胞增殖的影响。（2）采用流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI双色染色法观察密蒙花方对高糖状态下视网膜Mtiller细胞凋亡的影响。结果（1）高糖组较正常组吸光度（OD）值增高;含药血清组与高糖组相比,0D值明显降低,各合药血清组间比较,随着时间的延长,OD值逐渐降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。（2）高糖组较正常组细胞早期凋亡比例减少,活细胞比例增高,各含药血清组与高糖组相比,细胞早期凋亡比例增高,活细胞比例减少（P〈0．05）。密蒙花方通过诱导早期高糖状态下视网膜Mtiller细胞的早期凋亡,抑制细胞反应性增生,从而起到防护高糖状态下视网膜神经细胞损伤的作用。结论密蒙花方可以抑制早期高糖状态下视网膜Mfiller细胞的增殖。     

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的：观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素（32,16,8,4,2μg/mL）体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果：①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用（P〈0.01）,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论：蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。     

鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响

目的观察鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响,探讨鹿茸多肽抑制肿瘤细胞的增殖及调节细胞周期作用的机制。方法在体外传代的培养人胶质瘤细胞(U251)细胞株中加入不同浓度(50、100、200、400、800μg/mL)的鹿茸多肽,诱导培养48 h,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法检测鹿茸多肽对肿瘤细胞增殖情况,计算抑制率;流式细胞术(FCM)分析鹿茸多肽,诱导培养肿瘤细胞48 h后,细胞周期变化情况。结果形态学观察表明,与对照组相比,随着药物剂量的增加,实验组细胞密度逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,细胞体积逐渐缩小,细胞内颗粒逐渐增多。MTT法检测结果表明,鹿茸多肽对肿瘤细胞的增殖抑制作用明显,细胞生长抑制率随着剂量增加抑制率逐渐增加,呈现出良好的剂量依赖性。FCM检测表明,肿瘤细胞G0/G1期与S期所占百分比逐渐减少,G2/M期阻滞。48 h均出现凋亡峰,及凋亡细胞群。结论鹿茸多肽对体外培养的人胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,并具有量效关系。可使肿瘤细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,继而引起的细胞周期阻滞和诱导其凋亡。     

白头翁汤对人肺腺癌细胞增殖及周期调控的影响

目的观察白头翁汤对人肺腺癌细胞增殖及周期阻滞、促凋亡的影响,初步探讨其抗癌作用机制。方法以人肺腺癌细胞株A549、H1975细胞为研究对象,不同浓度白头翁汤干预后,运用CCK8法检测A549、H1975细胞增殖,细胞克隆形成实验观察A549、H1975细胞克隆形成,流式细胞术检测A549细胞周期,Western blot检测A549细胞周期相关蛋白CDK1、CyclinB1和细胞凋亡相关蛋白Caspase 8、9、3及PARP、Bcl2的表达。结果与对照组比较,不同浓度白头翁汤均能抑制A549、H1975细胞增殖和细胞克隆形成,不同浓度白头翁汤G2/M期细胞比例明显增加,且将A549肺腺癌细胞周期阻滞在G2/M期,0.2mg/mL白头翁汤均明显降低CDK1、CyclinB1和Caspase8、9、3及PARP、Bcl2蛋白的表达。结论白头翁汤有促进人肺腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与其降低细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。     

密蒙花方对链脲佐菌素性糖尿病大鼠视网膜病理形态的影响

目的探讨密蒙花方对链脲佐菌素性糖尿病大鼠视网膜病理形态的影响。方法选用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠作为动物模型,以羟苯磺酸钙胶囊(昊畅)作为阳性对照药。密蒙花方煎剂分为低、中、高3种不同浓度。糖尿病大鼠成模后分别以前述不同药物灌胃4个月。进行以下几方面的研究:①STZ性DM大鼠一般状况观察:饮食、尿量、体质量变化等。②HE染色观察STZ性DM大鼠视网膜病理形态学变化。③免疫组织化学法检测STZ性DM大鼠视网膜ICAM-1、E-selectin蛋白表达情况。结果①一般状况:STZ诱导的DM大鼠高血糖状态持久稳定,表现为明显的"三多一少"典型症状。密蒙花方中剂量组体质量高于DM模型组,具有统计学意义(P<0.05)。②DM模型组视网膜各层出现典型的病理学改变,密蒙花方中剂量组视网膜病理学改变较DM模型组减轻。③DM模型组大鼠视网膜ICAM-1、E-selectin表达较正常组明显增多(P<0.01);昊畅组及各密蒙花方组ICAM-1、E-selectin表达均较模型组有不同程度的减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。与昊畅组比较,密蒙花方中剂量组ICAM-1、E-selectin表达降低,差异具有统计学意义。结论 STZ诱导的DM大鼠是一种相对简单易行、可靠的模型制备方法。密蒙花方中剂量能在一定程度上减轻STZ性DM大鼠视网膜及视网膜毛细血管的病理改变。密蒙花方改善大鼠视网膜及视网膜毛细血管病理改变的作用与减少视网膜ICAM-1、E-selectin表达有关。     

附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 凋亡及细胞周期的影响

目的：观察附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901 的增殖以及凋亡的影响。方法：运用MTT 法,测定经附子生物碱处理后体外培养SGC-7901 细胞的增殖活性。分别采用Annexin-V/PI 双染法、流式细胞仪检测附子生物碱对细胞凋亡周期的影响。结果：淤附子生物碱分别作用人胃癌细胞株SGC-7901 24 h、48 h、72 h 后的IC50 为0.231 8±0.002 2、0.160 1±0.022 7、0.103 1±0.023 1 mg·mL-1,与空白对照组比较有显著性差异（P<0.01）。于当附子生物碱浓度达到0.8 mg·mL-1 时出现明显的凋亡,凋亡率为（59.38±5.05）%。盂流式细胞仪检测发现,与空白对照组相比,给药组处于S 期细胞的比例显著增多,并且G0/G1 期前出现凋亡亚二倍体峰。结论：附子生物碱体外对人胃癌细胞SGC-7901 具有增殖抑制作用,并促进其凋亡,还可使SGC-7901 细胞阻滞于S 期。