南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制。方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用;生长曲线法观察其抑制A549细胞的时间-效应曲线;流式细胞仪检测其对A549细胞周期及凋亡的影响;倒置显微镜及电镜观察其对A549细胞形态的影响。结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用;其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞,诱导细胞凋亡。结论:南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用。     

南方红豆杉水提物联合顺铂对人肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究南方红豆杉水提物联合顺铂对肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制。方法:将A549细胞分为不同浓度顺铂组、不同浓度南方红豆杉水提物组及空白组,用CCK-8法检测药物作用48 h后对细胞存活率的影响。根据上述结果,再将A549细胞分为低浓度顺铂联合不同浓度南方红豆杉水提物组、低浓度顺铂组、空白对照组,用CCK-8法检测药物作用48 h后对细胞存活率的影响,用RT-PCR检测细胞内Bcl-2、Bax、Survivin基因表达变化。结果:南方红豆杉水提物可增加顺铂对A549细胞的抑制作用,且随着药物浓度的增加,其抑制作用逐步增强;顺铂联和红豆杉通过下调Bcl-2,Survivin,并上调Bax的表达,而促进细胞发生凋亡,具有抗肿瘤作用。结论:南方红豆杉水提物联合顺铂能抑制A549细胞生长,其机制可能为凋亡相关基因Bcl-2,Survivin的降低,促凋亡基因Bax的增高有关。     

南方红豆杉水提物对肿瘤细胞增殖抑制作用的研究

目的研究南方红豆杉水提物对人胃腺癌细胞株SGC-7901和人乳腺癌株MCF-7增殖的抑制作用和机制。方法采用二苯基四氮唑溴盐比色法（MTT法）检测南方红豆杉水提物和紫杉醇对SGC-7901和MCF-7细胞增殖的抑制作用;光镜观察其对2种细胞形态的影响;流式细胞仪检测其对2种细胞凋亡的影响。结果南方红豆杉水提物对肿瘤细胞的增殖有抑制作用;其抑制作用机制为诱导细胞凋亡。结论南方红豆杉水提物对肿瘤细胞的增殖有抑制作用。     

益气除痰方调控JNK/SAPK信号通路干预A549细胞的试验研究

目的:研究益气除痰方含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及对JNK、p-JNK等表达的影响。方法:采用MTT法检测益气除痰方含药血清对A549细胞增殖的影响,流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染色法)测定细胞凋亡率,Western blotting检测JNK和p-JNK的蛋白表达。结果:MTT结果显示益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的时间-浓度依赖性;流式细胞术结果显示益气除痰方含药血清可诱导A549细胞凋亡;Western blotting结果显示益气除痰方含药血清干预A549细胞后可减少p-JNK的蛋白表达,但对JNK蛋白表达无明显影响。结论:益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路有关。     

基于线粒体凋亡通路探讨仙鹤草促HepG_2细胞凋亡的机制

目的:研究仙鹤草水提物对人肝癌HepG_2细胞增殖、凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:MTT法检测仙鹤草不同浓度(1、0.75、0.5、0.25 mg/mL)及不同作用时间(24、48、72 h)对HepG_2的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Realtime-PCR和Western blotting检测线粒体凋亡信号通路中Bax、Caspase-3表达情况。结果:仙鹤草水提物对HepG_2的增殖具有显著抑制作用,并呈浓度及时间依赖性(P0.05);同时其能显著促进HepG_2凋亡。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示仙鹤草水提物1、0.75、0.5 mg/mL可显著上调HepG_2细胞Bax、Caspase-3 mRNA与蛋白表达(P0.01)。结论:仙鹤草水提物能显著抑制HepG_2增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过上调线粒体凋亡通路中的Bax、Caspase-3表达从而诱导细胞凋亡。     

黄芪水提物抑制PI3K/Akt通路预防肺癌发生的作用及机制研究

目的探讨黄芪水提物对肺癌的抑制作用及相关机制。方法采用MTT实验、Ed U实验以及划痕实验检测黄芪水提物对肺癌A549和H1299细胞的活性、增殖能力和迁移能力的影响,采用流式细胞仪考察黄芪水提物对肺癌细胞周期的影响,通过Western blotting实验检测PI3K/Akt通路相关蛋白表达,通过苯并芘诱导的小鼠肺癌模型观察黄芪水提物对体内肺癌的影响。结果 MTT实验结果表明,黄芪水提物作用于A549和H1299细胞48 h后,细胞的生长活性被抑制;Ed U实验结果表明,黄芪水提物能够显著抑制A549和H1299细胞的增殖能力;对细胞周期考察的实验结果表明,黄芪水提物能够将A549和H1299细胞周期阻滞在S期;划痕实验结果表明,黄芪水提物作用于A549和H1299细胞24 h和48 h后,能够显著抑制细胞的迁移能力;Western blotting实验结果表明,黄芪水提物能够下调A549和H1299细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(p-PDK1)和磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平;体内实验结果表明,黄芪水提物能够显著抑制小鼠肺部肿瘤数量及大小。结论黄芪水提物能够抑制肺癌,该机制可能与PI3K/Akt信号通路受阻有关。     

南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的实验研究

目的 探讨南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞的凋亡作用及其分子机制。     

基于线粒体凋亡通路探讨仙鹤草促HepG_2凋亡的机制研究

目的:研究仙鹤草水提物对人肝癌HepG_2细胞增殖、凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:MTT法检测仙鹤草不同浓度(1、0.75、0.5、0.25 mg/mL)及不同作用时间(24、48、72 h)对HepG_2的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Realtime-PCR和Western blotting检测线粒体凋亡信号通路中Bax、Caspase-3表达情况。结果:仙鹤草水提物对HepG_2的增殖具有显著抑制作用,并呈浓度及时间依赖性(P0.05);同时其能显著促进HepG_2凋亡。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示仙鹤草水提物1、0.75、0.5 mg/mL可显著上调HepG_2细胞Bax、Caspase-3 mRNA与蛋白表达(P0.01)。结论:仙鹤草水提物能显著抑制HepG_2增殖,促进其凋亡,可通过上调线粒体凋亡通路中的Bax、Caspase-3表达从而诱导细胞凋亡。仙鹤草可能通过该通路实现抗肿瘤作用。     

麦门冬汤诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用及其机制

目的:研究麦门冬汤对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测麦门冬汤(0.25、2.5、25g/L)作用24、48、72h后人肺腺癌A549细胞(2×104个/m L)活性;吖啶橙(AO)/EB双荧光染色观察麦门冬汤各剂量作用48h后A549细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析麦门冬汤作用48h后A549细胞凋亡率;Western Blot检测麦门冬汤对凋亡相关蛋白表皮生长因子受体(EGFR)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响。结果:各剂量麦门冬汤能够抑制A549细胞活性,诱导其发生凋亡形态学改变,且A549细胞凋亡率与麦门冬汤剂量呈正相关(P<0.01);Western Blot检测表明低、中剂量麦门冬汤可使EGFR、STAT3表达下降。结论:麦门冬汤可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与下调EGFR、STAT3蛋白表达相关。     

麻黄附子细辛汤联合紫杉醇诱导A549/T细胞凋亡的研究

目的:研究麻黄附子细辛汤的大鼠含药血清配伍紫杉醇对人肺腺癌紫杉醇耐药株A549/T的影响,探索其诱导耐药肺癌细胞凋亡的机制。方法:采用MTT法检测各组对A549/T细胞的影响;以Hoechst33342/PI双标记荧光染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测各组细胞Caspase-9蛋白的表达。结果:8g/kg、4g/kg、2g/kg麻黄附子细辛汤大鼠含药血清联合紫杉醇均能抑制A549/T细胞的增殖,促进A549/T细胞凋亡和Caspase-9蛋白表达。结论:麻黄附子细辛汤大鼠含药血清能促进紫杉醇体外抑瘤作用,其机制可能与上调细胞凋亡相关因子Caspase-9有关。     

The extract of Hibiscus syriacus inducing apoptosis by activating p53 and AIF in human lung cancer cells

Natural products including plants, microorganisms and marine life provide rich resources for anticancer drug discovery. The root bark of Hibiscus syriacus has been used as an antipyretic, anthelmintic and antifungal agent in Asia. The antiproliferative effects of H. syriacus on human lung cancer cells were evaluated with bio-assays. The apoptotic activity was detected by Hoechst 33342 DNA staining and annexin V staining. The expression of caspases, p53, apoptosis induced factor (AIF), Bcl-2 and Bax were evaluated with Western blotting. The in vivo anticancer activity was evaluated using A549-xenograft model. The acetone extract of H. syriacus (HS-AE) exhibited a better cytotoxic effect on lung cancer cells than its methanol extract (HS-ME) or water extract (HS-WE). The IC(50) values of HS-AE on A549 (adenocarcinoma), H209 (squamous cell carcinoma) or H661 (large cell carcinoma) lung cancer cells ranged from 14 to 22 microg/ml after 48 hours of treatment. After 48 hours of exposure, HS-AE (15 microg/ml) induced A549 cell apoptosis to 48 +/- 3.6% of the control. Using Western blotting, HS-AE appears to suppress the expression of p53 and AIF. The results of the in vivo study showed that HS-AE suppresses growth in A549 subcutaneous xenograft tumors. These results indicate that HS-AE exerts significant and dose-dependent antiproliferative effects on cancer cells in vitro and in vivo, which prompts us to further evaluate and elucidate the bioactive component(s) of H. syriacus.     

莪术醇对肺癌A549细胞凋亡诱导因子、 聚ADP核糖聚合酶及Caspase-3表达的影响

目的:观察莪术醇干预后,体外培养A549细胞凋亡诱导因子(apoptosis induce factor,AIF)和聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的表达情况,探讨莪术醇对非半胱天冬酶(caspase)依赖细胞凋亡的分子机制。方法:以不同质量浓度的莪术醇(12.5,25,50,100 mg.L-1)及阴性组处理肺癌细胞,药物作用48 h后提取各组蛋白;采用Westernblotting法分别检测各组AIF,PARP,caspase-3蛋白表达,并进行统计学分析。结果:经莪术醇处理后,阴性组的A549细胞的PARP相对蛋白表达量为0.545 3,AIF的相对蛋白表达量为0.358 6,而100 mg.L-1加药组的相对蛋白表达量分别为1.661 3和2.212 4,蛋白表达均随药物浓度的增加而增多,药物组与阴性组相比差异极显著(P<0.01),而caspase-3的前体(32×103)表达受药物影响较小,其激活体(17×103)基本不表达。结论:莪术醇可能主要是通过上调PARP蛋白的表达,进而将AIF转位到细胞核而引起凋亡的非依赖caspase途径来介导肺癌A549细胞的凋亡。     

中药升陷汤抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭转移作用研究

目的:本研究旨在体外筛选出升陷汤抑制人肺癌A549细胞侵袭转移的有效萃取部位,并对其分子机制进行探讨。方法:通过MTT法和形态观察筛选出升陷汤抑制A549细胞增殖的有效萃取部位。Annexin V/PI双染法检测升陷汤正丁醇提取物对A549细胞的凋亡诱导作用。划痕实验和Transwell小室检测生陷汤提取物对A549细胞侵袭、转移的影响;Western blot检测侵袭转移相关信号通路分子表达的变化。结果:20-400μg/mL正丁醇萃取部位作用于A549细胞48、72h后可明显抑制其增长,且与凋亡相关。20-80μg/mL升陷汤作用于A549细胞24h后可明显抑制其侵袭和转移;正丁醇萃取部位可明显降低p-ERK和基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达(P<0.01)。结论:升陷汤正丁醇萃取部位能显著抑制A549细胞的增殖和侵袭转移。     

血三七醋酸乙酯提取物促进肺癌细胞凋亡的调控机制研究

目的研究血三七Polygonum amplexicaule var. sinense醋酸乙酯提取物(EAEP)对人肺癌A549和H1299细胞凋亡的影响及其机制。方法通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒及流式细胞术检测EAEP对A549和H1299细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westernblotting法检测EAEP对A549和H1299细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果 EAEP能显著促进A549和H1299细胞凋亡;显著提高促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA表达水平,降低抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达水平;显著提高Bax蛋白表达水平,降低Bcl-2蛋白表达水平。结论 EAEP能通过促进Bax的表达和抑制Bcl-2的表达诱导肺癌细胞凋亡。     

木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

猕猴桃水提物诱导二相酶产生及抗氧化的机制研究

目的:本实验以人胃腺癌细胞株SGC-7901为模型,用猕猴桃水提物含药血清进行干预,探讨猕猴桃水提物诱导二相酶产生及抗氧化的机制.方法:取正常SD大鼠随机分为猕猴桃水提物高、中、低剂量组(用猕猴桃水提物溶液46.8,31.2,15.6 g·kg-1 ig)和正常对照组(ig给予生理盐水).连续14 d,每天ig 2次,于末次给药1h,腹主动脉取血制备猕猴桃水提物含药血清.取对数生长期的SGC-7901细胞,在不同时间段分别给予相应的含药血清进行干预.用免疫组化法检测SGC -7901细胞内活化状态的核因子相关因子2(Nrf2)的细胞定位;RT-PCR法检测猕猴桃水提物高剂量组含药血清对SGC-7901细胞内二相酶mRNA水平的影响.结果:免疫组化法染色观察结果显示与正常对照组相比,猕猴桃水提物含药血清低、中、高剂量组均可提高Nrf2细胞核内的表达水平,颜色从浅黄色变为棕黄色.经积分统计学分析差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01).RT-PCR检测结果显示与正常对照组相比较,猕猴桃水提物可明显诱导二相酶谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因的表达(P＜0.05),且诱导谷胱甘肽-S-转移酶(GST) -P1和GST-T1基因表达作用差异有高度显著性(P＜0.01),但对二相酶GST-M1和醌氧化还原酶(NQ01)基因水平影响不大.结论:猕猴桃水提物可促使Nrf2进入核内,导致二相酶的表达增加,具有诱导细胞解毒抗氧化作用.     

消岩汤剂拆方配伍对肺腺癌A549细胞survivin和caspase-3表达的影响

目的 探讨消岩汤及其各拆方组分对人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响及其机制.方法 将消岩汤按照功效进行拆方,分为清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组.以CCK-8法检测各拆方对A549细胞的最有效抑制浓度,采用Western blotting法测定Survivin、Caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测survivin与caspase-3基因表达.结果 消岩汤及其各拆方组分均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分具有诱导A549细胞凋亡的作用,其机制与下调survivin基因和蛋白表达有关,对caspase-3基因和蛋白表达影响不显著.结论 消岩汤及其各拆方组分体外均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分可通过下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡,清热解毒组方中药是其抗肿瘤作用主要组分.     

二陈汤对肺癌A549细胞中黏附分子-1和p38表达的影响

目的研究二陈汤对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的肺癌A549细胞中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和p38表达的影响。方法实验分为空白对照组、二陈汤对照组、TNF-α诱导组、二陈汤干预组、p38阻滞组,并给予相应干预。采用TNF-α诱导肺癌A549细胞产生ICAM-1高表达,以二陈汤含药血清处理ICAM-1高表达的肺癌A549细胞,采用Western blot免疫印迹法测定p38蛋白表达,以PCR法测定ICAM-1 mRNA水平,对二陈汤处理前后的ICAM-1表达水平及p38蛋白表达进行分析。结果二陈汤干预组肺癌A549细胞中血清ICAM-1表达及p38活性与TNF-α诱导组比较显著降低（P〈0.01）。结论在体外实验中,二陈汤有可能通过抑制p38的活性而实现对ICAM-1表达的调控,这可能为二陈汤控制肺癌转移的机制之一。