扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响

目的:研究扶正消积胶囊在体外对人肺癌细胞A549增殖抑制及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测扶正消积胶囊对A549细胞增殖的影响,应用流式细胞仪检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡的影响,应用Western bolt检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:与空白组比较,扶正消积胶囊作用A549细胞24h后,能显著抑制A549细胞的增殖,且这种抑制成浓度依赖关系。Annexin-V/PI双染法结果显示扶正消积胶囊能诱导A549细胞的凋亡,且呈现浓度依赖关系。Western bolt结果显示,扶正消积胶囊能上调Bax表达,下调Bcl-2表达,激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性。结论 :扶正消积胶囊能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase家族蛋白酶活性以及上调Bax、下调Bcl-2表达而实现的。     

姜黄素联合顺铂对肺癌A549细胞Bcl-2及Caspase-3表达的影响

目的探讨姜黄素联合顺铂对肺癌A549细胞Bcl-2及caspase-3表达的影响。方法选用肺癌A549细胞分为对照组、姜黄素组、顺铂组、联合用药组,分别采用相应药物进行处理。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA表达水平,Western blot法检测细胞Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平。结果 (1)与对照组比较,其余各组24 h、48 h、72 h肺癌A549细胞增殖抑制率较高,且联合用药组高于姜黄素组、顺铂组,差异有统计学意义(P0.05)。(2)与对照组比较,其余各组肺癌A549细胞凋亡率较高,且联合用药组高于姜黄素组、顺铂组(P0.05);姜黄素组存在G2/M期细胞阻滞,顺铂组及联合用药组存在S期细胞阻滞。(3)与对照组比较,其余各组肺癌A549细胞Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达水平较低,其中联合用药组顺铂组姜黄素组(P0.05)。(4)与对照组比较,其余各组肺癌A549细胞caspase-3 mRNA及caspase-3蛋白表达水平较高,其中联合用药组顺铂组姜黄素组(P0.05)。结论姜黄素联合顺铂能够抑制肺癌A549细胞Bcl-2表达、促进caspase-3表达,以抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡。     

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

丁香活性组分抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

筛选丁香活性组分(active fraction from clove, AFC)对人结肠癌细胞敏感的细胞株,研究AFC对其增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR(phosphoinositide 3-kinase/Akt/mechanistic target of rapamycin pathway)信号通路的影响,揭示AFC诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制。实验采用CCK-8法检测不同浓度的AFC的细胞毒作用;采用Hoechst 33258荧光染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测AFC诱导细胞凋亡的发生;Western blot法检测AFC单独或AFC联合IGF-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ)作用于细胞后,凋亡相关蛋白caspase-3,caspase-9,PARP(poly ADP-ribose polymerase)以及PI3K/Akt/mTOR信号通路PI3K,p-PI3K,Akt, p-Akt, mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。结果显示,AFC抑制作用最明显的是人结肠癌HCT116细胞,最佳作用时间为48 h; AFC处理HCT116细胞后,剂量依赖性地出现典型的细胞凋亡特征,如核染色质浓缩、核碎裂、凋亡小体的出现等;Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,与对照组比较,50,100μg·mL~(-1) AFC组诱导HCT116细胞凋亡率显著上升(P0.001);凋亡相关蛋白caspase-9,cleaved caspase-3,cleaved PARP均被AFC以浓度依赖方式激活,cleaved caspase-3/procaspase-3,cleaved PARP/PARP,caspase-9/β-actin在100μg·mL~(-1) AFC组与对照组间比较,差异均有统计学意义(P0.001);p-PI3K,p-Akt, p-mTOR蛋白相对表达量呈浓度依赖性的递减,而Akt, mTOR在各组间无明显变化,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt, p-mTOR/mTOR在50,100μg·mL~(-1) AFC组与对照组间比较,差异均有统计学意义(P0.01)。联合IGF-Ⅰ,削弱了AFC抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的作用,p-Akt/Akt, p-mTOR/mTOR在AFC组和AFC+IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P0.05);联合IGF-Ⅰ,AFC诱导的cleaved caspase-3,cleaved PARP蛋白表达减弱,cleaved caspase-3/procaspase-3,cleaved PARP/PARP在AFC组和AFC+IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P0.01)。综上,AFC浓度相关性地激活caspase级联反应诱导人结肠癌HCT116细胞发生凋亡,凋亡发生与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制有关。     

金复康口服液诱导肺癌细胞A549凋亡的机制

目的:研究金复康口服液(JFK)诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法:取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549,随机分为空白组和药物组,采用溴化四甲基偶氮(MTT)比色法,考察不同质量浓度JFK(0.3,1.5,3,7.5,15,30 g·L~(-1))对A549细胞体外增殖能力的影响。通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响,利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)考察JFK对裂解DNA修复酶(cleaved PARP),活化型半胱天冬酶-3(actived Caspase-3),Wnt/β-联蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,实验中设置空白组和药物组,药物组为A549细胞加入15,30 g·L~(-1)JFK,分别干预24 h,30 min。结果:JFK在1.5~30 g·L~(-1)呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖(P0.01)。JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15~30 g·L~(-1),其中JFK 30 g·L~(-1)时抑制A549细胞的平板克隆最显著(P0.01)。与空白组比较,JFK 15~30 g·L~(-1)可提高AnnexinⅤ和PI双阳细胞率,诱导A549细胞凋亡(P0.05),且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达,并抑制β-catenin和cyclin D1在蛋白水平的表达(P0.05,P0.01)。JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平(P0.05),同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平(P0.05)。结论:金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡,部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路,抑制β-catenin和cyclin D1,同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达。     

麦门冬汤加减联合顺铂对A549细胞化疗增敏的作用机制

目的:通过体外实验观察麦门冬汤加减(modified Maimendong Tang)联合顺铂(cisplatin)对人肺腺癌A549细胞增殖,凋亡及侵袭转移能力及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的蛋白表达量的影响,探讨麦门冬汤加减方化疗增敏的作用并研究其相关机制。方法:分别用麦门冬汤加减(15 g·L-1),顺铂(9 mg·L-1),联合药物干预肺腺癌A549细胞,实验分为空白组、麦门冬汤加减组、顺铂组、麦门冬汤加减+顺铂组。利用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同质量浓度(0,5,10,15,20,25 g·L-1)麦门冬汤加减和不同质量浓度(0,3,6,9,12,15 mg·L-1)顺铂干预A549细胞24,48,72 h后的增殖能力,检测各组A549细胞的增殖能力;流式细胞术分析各组的凋亡程度及周期的变化;划痕实验和transwell小室实验检测各组的侵袭转移能力;蛋白免疫印迹法检测各组Caspase-3,EGFR蛋白表达的变化情况。结果:与空白组比较,麦门冬汤加减,顺铂干预A549细胞后呈浓度依赖性、时间依赖性抑制细胞的增殖(P0.05);各药物组均能抑制A549细胞增殖能力,减弱划痕愈合能力,减少穿过transwell小室的细胞,促进细胞凋亡,下调Caspase-3,EGFR蛋白表达(P0.05)。与单独给药组比较,麦门冬汤加减与顺铂联合应用后更能明显抑制肺腺癌A549细胞增殖能力和更能诱导A549细胞的凋亡,G0/G1期的细胞增多更明显,S期的细胞明显减少(P0.05);联合用药后,细胞划痕愈合能力明显减弱,穿过transwell小室的细胞明显减少,Caspase-3,EGFR的蛋白表达量下降更明显(P0.05)。结论:麦门冬汤加减与顺铂合用后抑制肺癌细胞A549增殖及侵袭转移能力,诱导细胞凋亡,两者存在协同增敏作用,其相关机制可能与下调Caspase-3,EGFR的蛋白表达相关。     

莪术醇联合5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨莪术醇(curcumol)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌Lo Vo细胞增殖和凋亡作用的影响,以及药物处理后,Lo Vo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)表达量的变化情况。方法:莪术醇(50 mg·L-1)单独或联合5-Fu(2 mg·L-1)作用大肠癌Lo Vo细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组药物对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞术分析各组对细胞凋亡作用的影响,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中,增殖和凋亡相关蛋白PCNA,Bcl-2蛋白表达的变化情况。结果:与空白组比较,莪术醇,5-Fu单独给药以及联合用药,均可以有效抑制大肠癌Lo Vo细胞的增殖,促进细胞凋亡(P0.05),同时可以降低PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P0.05);与单独给药组比较,联合用药后,凋亡的促进作用更为明显(P0.05)。与空白组比较,各药物组可以更有效的抑制PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:莪术醇联合5-氟尿嘧啶能有效抑制人大肠癌Lo Vo细胞的增殖和凋亡,与单独用药组比较,联合用药可以使癌细胞的敏感性增强,极大程度的促进人大肠癌Lo Vo细胞凋亡,且这些机制可能与下调PCNA,Bcl-2蛋白表达有关。     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

白英生物碱通过激活FAS途径诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究

目的 探讨白英生物碱(STA)诱导人肺癌A549细胞凋亡及其对Fas途径相关基因表达的影响.方法 采用STA处理体外培养的A549细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Fas、FasL、Cleaved caspase-8和Cleaved caspase-3蛋白表达.结果 STA能抑制A549细胞增殖,STA各组细胞抑制率显著升高且呈剂量依赖性,与正常对照组比较差异有统计学意义(P ＜0.01);STA各组细胞凋亡率明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.01);Caspase-8/Caspase-3抑制剂能抑制STA诱导细胞凋亡,与同剂量STA组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);STA各组细胞Fas、FasL、Cleaved caspase-8和Cleaved caspase -3表达显著上升,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 Fas介导的死亡受体途径参与STA诱导肺癌A549细胞凋亡.     

丹参酮ⅡA通过Fas/FasL途径抑制海水诱导的人肺泡上皮细胞凋亡

目的研究海水对人肺泡上皮A549细胞凋亡的影响,探讨海水诱导A549细胞凋亡的机制及丹参酮ⅡA的保护作用。方法实验分为空白对照组、海水浸泡组和丹参酮ⅡA干预(25μg/m L)组,以40%海水浸泡A549细胞6 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,利用流式细胞术检测凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分析Fas L、Fas和cleaved caspase-8蛋白表达。结果与对照组相比,在海水作用下A549细胞凋亡率明显增加(P<0.01),同时Fas L、Fas和cleaved caspase-8蛋白表达也显著上调,加入丹参酮ⅡA后,细胞凋亡明显减少(P<0.01),Fas L、Fas和cleaved caspase-8蛋白表达相应下调。结论海水可导致人肺泡上皮A549细胞凋亡,其诱导凋亡的机制与Fas/Fas L介导的死亡受体信号途径有关,丹参酮ⅡA可通过此途径抑制海水诱导的A549细胞凋亡。     

消岩汤剂拆方配伍对肺腺癌A549细胞survivin和caspase-3表达的影响

目的 探讨消岩汤及其各拆方组分对人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响及其机制.方法 将消岩汤按照功效进行拆方,分为清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组.以CCK-8法检测各拆方对A549细胞的最有效抑制浓度,采用Western blotting法测定Survivin、Caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测survivin与caspase-3基因表达.结果 消岩汤及其各拆方组分均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分具有诱导A549细胞凋亡的作用,其机制与下调survivin基因和蛋白表达有关,对caspase-3基因和蛋白表达影响不显著.结论 消岩汤及其各拆方组分体外均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分可通过下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡,清热解毒组方中药是其抗肿瘤作用主要组分.     

益肺逐积方诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制

目的:通过体外实验观察益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性、细胞凋亡以及表皮生长因子受体(EGFR),G蛋白偶联受体30(GPR30)蛋白表达的影响,探讨中药复方益肺逐积方抑制肺癌细胞活性,诱导肺癌细胞凋亡的作用机制。方法:将人肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,益肺逐积方高、低质量浓度组分别加入2,1.5 g·L~(-1)益肺逐积方培养液,5-氟尿密啶(5-FU)组加入2.5 g·L~(-1)5-FU培养液,溶剂组加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液,分别作用24,48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性的影响;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色观察益肺逐积方作用不同时间后人肺腺癌A549细胞的凋亡形态学变化;流式细胞术(FCM)测定益肺逐积方作用下人肺腺癌A549细胞的凋亡率;利用倒置显微镜观察益肺逐积方作用24,48 h后A549细胞的形态学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定人肺腺癌A549凋亡细胞EGFR,GPR30蛋白的表达。结果:与溶剂组比较,1.5,2 g·L~(-1)益肺逐积方均能抑制人肺腺癌A549细胞活性(P0.05),诱导A549细胞发生不同程度的凋亡形态学改变;流式细胞术检测显示,益肺逐积方作用24,48 h后,可使人肺腺癌A549细胞其发生晚期凋亡(P0.05);Western blot结果显示,益肺逐积方可以不同程度地下调人肺腺癌A549细胞GPR30,EGFR蛋白的表达(P0.05)。结论:益肺逐积方可抑制人肺腺癌A549细胞活性、诱导其发生晚期凋亡,并使其发生凋亡形态学改变,这可能与下调EGFR,GPR30蛋白表达有关。     

荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其机制初探

 目的 探讨荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用并对其作用机制进行研究。方法 MTT比色法检测荷包牡丹碱在不同浓度及不同时间对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用。利用TUNEL法探讨荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡效果;流式细胞术（FMC）测定荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞周期的分布;比色法测定荷包牡丹碱对半胱天冬酶（caspase）-3蛋白活性的影响。结果 荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞具有明显的凋亡效应;荷包牡丹碱与A549肿瘤细胞作用后,发生S期阻滞（P<0.05);荷包牡丹碱促使caspase-3蛋白活化(P<0.05)。结论 荷包牡丹碱能有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长,使细胞周期阻滞在S期,进一步诱导其凋亡,并使caspase-3蛋白活化。caspase-3蛋白的激活可能在荷包牡丹碱诱导A549细胞凋亡过程中起重要作用。     

Anti‐lung Cancer Effects of Polyphyllin VI and VII Potentially Correlate with Apoptosis In Vitro and In Vivo

Polyphyllin VI (PVI) and polyphyllin VII (PVII) derived from Paris polyphylla possess anti‐cancer activities. However, the mechanisms for the anti‐lung cancer effects of PVI and PVII remain poorly understood. In this study, PVI and PVII exhibited inhibitory effects on the proliferation of A549 and NCI‐H1299 cells. PVI and PVII induced G2/M cell cycle arrest and triggered apoptosis. PVI and PVII upregulated the tumor suppressor protein p53 and downregulated cyclin B1. The two treatments significantly increased the expression levels of death receptor 3, death receptor 5, Fas, cleaved PARP, and cleaved caspase‐3. Furthermore, PVI and PVII significantly inhibited the growth of A549 cells in vivo. The tumor inhibitory rates of PVI were 25.74%, 34.62%, and 40.43% at 2, 3, and 4 mg/kg, respectively, and those of PVII were 25.63%, 41.71%, and 40.41% at 1, 2, and 3 mg/kg, respectively. Finally, PVI and PVII regulated the expression of proteins related to the apoptotic pathway in A549 xenografts. In summary, PVI and PVII exhibited strong inhibitory effects on lung cancer cell growth in vitro and in vivo by inducing G2/M cell cycle arrest and triggering apoptosis. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

桔梗皂苷D通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路抑制细胞凋亡保护急性肺损伤的机制研究＊

目的 探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护机制。方法 35只雄性SPF级SD大鼠，随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、桔梗皂苷D给药组和地塞米松组，每组7只。除假手术组和桔梗皂苷D对照组外，其余各组采用脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型。造模24 h后，牺牲大鼠并称体重及两肺重量，计算肺指数；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡并计算凋亡指数（Apoptosis Index，AI）；透射电镜下观察大鼠肺组织超微结构的改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3），多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）蛋白及活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved Caspase-3），Cleaved PARP1的表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠肺指数显著升高（P < 0.01），肺组织细胞凋亡指数（AI）显著升高（P < 0.01），肺组织Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著下调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著升高（P < 0.01）；透射电镜下可见到凋亡小体，影响并改变了肺组织细胞超微结构；与模型组比较，桔梗皂苷D给药组及地塞米松组肺指数明显降低（P < 0.01），肺组织AI明显降低（P < 0.01），肺组织中Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著上调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著降低（P < 0.01）；透射电镜下，桔梗皂苷D给药组和地塞米松组肺组织细胞超微结构状态较好。结论 桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤具有保护作用，其作用机制与抑制Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路，减轻肺组织细胞凋亡密切相关。     

傣百解提取物对人肺癌A549裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨傣百解乙酸乙酯提取物(ethyl acetate fraction,EFA)诱导人肺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用及作用机制。方法:建立人肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组,EFA高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg-1)组,环磷酰胺组和消癌平组,每组6只。给药3周后剥离瘤组织,比较各组肿瘤质量,计算抑制率;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测各组移植瘤组织中的细胞凋亡情况;免疫组化法(immunhistochemical staining,IHC)检测瘤组织中p53,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与模型组比较,EFA高、中、低剂量组对肿瘤组织具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01)。TUNEL法检测结果显示EFA给药处理后,与模型组比较,肿瘤细胞凋亡明显增多。免疫组化结果显示,与模型组比较,各给药组移植瘤p53和Bax蛋白表达明显升高,而Bcl-2表达降低。结论:EFA对人肺癌A549裸鼠移植瘤具有明显的抑制作用,其机制可能与上调p53和Bax蛋白的表达,降低Bcl-2蛋白的表达,诱导肺癌细胞凋亡相关。     

补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响

目的:探讨补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为补肾疏肝方低、高剂量组(15,30 g·kg-1),顺铂组(8 g·kg-1),低剂量联合顺铂组(联合低剂量组),高剂量联合顺铂组(联合高剂量组),正常组,顺铂组ip给予相应药物,补肾疏肝方ig给予相应药物,正常组给予等体积的生理盐水,制备大鼠含药血清;分别配制10%含补肾疏肝方低、高剂量、顺铂、低剂量联合顺铂、高剂量联合顺铂,分别与肺癌A549细胞共同培养,CCK8法检测补肾疏肝方含药血清对A549增殖的影响;流式细胞术检测含药血清对A549细胞周期的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响;荧光定量PCR检测含药血清对相关m RNA表达的影响;流式细胞术检测含药血清对CD133蛋白表达的影响。结果:补肾疏肝方以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,与顺铂联合有协同增效作用,24,48,72 h高剂量联合顺铂组的抑制率分别为45.39%,54.76%及59.94%;与正常组比较,补肾疏肝方、联合、顺铂含药血清可促进A549细胞凋亡,随着浓度增加,G2/M期细胞的百分比明显增加,明显下调CD133,SOX-2,OCT-4 m RNA的表达,明显降低CD133蛋白表达量,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方可抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,与顺铂联合可下调CD133,SOX-2,OCT-4等干性因子的表达。     

The extract of Hibiscus syriacus inducing apoptosis by activating p53 and AIF in human lung cancer cells

Natural products including plants, microorganisms and marine life provide rich resources for anticancer drug discovery. The root bark of Hibiscus syriacus has been used as an antipyretic, anthelmintic and antifungal agent in Asia. The antiproliferative effects of H. syriacus on human lung cancer cells were evaluated with bio-assays. The apoptotic activity was detected by Hoechst 33342 DNA staining and annexin V staining. The expression of caspases, p53, apoptosis induced factor (AIF), Bcl-2 and Bax were evaluated with Western blotting. The in vivo anticancer activity was evaluated using A549-xenograft model. The acetone extract of H. syriacus (HS-AE) exhibited a better cytotoxic effect on lung cancer cells than its methanol extract (HS-ME) or water extract (HS-WE). The IC(50) values of HS-AE on A549 (adenocarcinoma), H209 (squamous cell carcinoma) or H661 (large cell carcinoma) lung cancer cells ranged from 14 to 22 microg/ml after 48 hours of treatment. After 48 hours of exposure, HS-AE (15 microg/ml) induced A549 cell apoptosis to 48 +/- 3.6% of the control. Using Western blotting, HS-AE appears to suppress the expression of p53 and AIF. The results of the in vivo study showed that HS-AE suppresses growth in A549 subcutaneous xenograft tumors. These results indicate that HS-AE exerts significant and dose-dependent antiproliferative effects on cancer cells in vitro and in vivo, which prompts us to further evaluate and elucidate the bioactive component(s) of H. syriacus.