电针对血管性痴呆小鼠海马神经元HSP70表达的影响

目的：观察电针对血管性痴呆（VD）小鼠海马神经元凋亡及相关基因HSP70表达的影响。方法；以反复脑缺血再灌注法复制VD小鼠模型，电针肾俞、膈俞和百会穴，对照纽灌胃喜得镇，分别于治疗1天和7天后，以FCM法检测小鼠海马细胞凋亡率、HSB70表达。结果：术后1天，模型小鼠海马细胞凋亡率明显增高，术后7天较术后1天还高。说明海马细胞由于反复脑缺血再灌注而出现凋亡。术后1天，模型小鼠海马细胞HSP70表达明显下降，7天时则显著升高。电针和喜得镇在两个时点均可上调小鼠海马细胞HSP70的表达，降低凋亡率，但以电针作用为优。结论：电针具有抑制细胞凋亡、保护神经元的作用，可能是电针改善VD小鼠智能的作用机理之一。     

电针对血管性痴呆小鼠海马神经元HSP70表达的影响

目的:观察电针对血管性痴呆(VD)小鼠海马神经元凋亡及相关基因HSP70表达的影响。方法:以反复脑缺血再灌注法复制VD小鼠模型,电针肾俞、膈俞和百会穴,对照组灌胃喜得镇,分别于治疗1天和7天后,以FCM法检测小鼠海马细胞凋亡率、HSP70表达。结果:术后1天,模型小鼠海马细胞凋亡率明显增高,术后7天较术后1天还高。说明海马细胞由于反复脑缺血再灌注而出现凋亡。术后1天,模型小鼠海马细胞HSP70表达明显下降,7天时则显著升高。电针和喜得镇在两个时点均可上调小鼠海马细胞HSP70的表达,降低凋亡率,但以电针作用为优。结论:电针具有抑制细胞凋亡、保护神经元的作用,可能是电针改善VD小鼠智能的作用机理之一。     

电针预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究电针对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法:将SD雄性大鼠40只,SPF级,随机分为两组:造模组(30只)以及假手术组(10只)。采用线栓阻塞脑中动脉法建立脑缺血再灌注损伤模型,脑缺血再灌注损伤后,造模组大鼠随机分为模型组、电针组,每组15只。实验采用改良神经评分法(m NSS)来评价大鼠的神经功能,使用电针干预七天后,分别采用Western Blot和Real-time PCR法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达的相对含量。结果:电针干预7 d后,与模型组相比,在第5、7天电针组可显著提高大鼠神经行为功能(P0.05,P0.01)。电针干预7 d后,与模型组相比,电针组Bcl-2表达上调,Caspase-3、Bax表达下调。结论:电针可提高Bcl-2的表达、降低Caspase-3、Bax的表达,从而抑制脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞的凋亡。     

电针药氧对大鼠全脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨电针药氧对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:采用改良Pulsinelli4血管阻断全脑缺血方法,建立短暂反复全脑缺血再灌注大鼠模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、药氧组、电针药氧联合组,每组6只。电针组电针大鼠"百会""后三里",频率100Hz,强度3.5mA,每次30min,每日1次,共治疗4次;药氧组大鼠吸取药氧液;电针药氧联合组采用电针结合药氧治疗。采用免疫组化方法检测大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白阳性细胞数目、平均吸光度值。结果:模型组与假手术组比较海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白阳性细胞数目和平均吸光度值均增高(P0.05,P0.01);电针组、药氧组及电针药氧联合组与模型组比较Bcl-2蛋白阳性细胞数目和平均吸光度值增高,Bax蛋白阳性细胞数目和平均吸光度值降低(P0.01);电针药氧联合组各指标的变化较电针组和药氧组更明显(P0.01)。结论:全脑缺血后早期电针药氧可上调Bcl-2、下调Bax蛋白的表达,这可能是电针药氧治疗缺血性脑血管病的机制之一。     

大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2、Bax、FADD表达及对细胞凋亡的影响

目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、FADD表达对细胞凋亡的影响。方法20只SD大鼠随机分为假手术组（n=4）、模型组（n=16）。线栓法制备大脑中动脉闭塞模型（MCA0），TUNEL法检测神经细胞凋亡，免疫组织化学法染色检测Bcf-2、Bax、FADD蛋白。结果与假手术组比较，模型组凋亡神经细胞计数随再灌注时间的延长显著增加，再灌注后24h表达达高峰，差异有统计学意义（P〈0．01）。模型组Bcl-2、Bax、FADD蛋白表达随再灌注时间的延长，表达逐渐增强。缺血再灌注6h后Bcl-2蛋白表达达高峰；缺血再灌注24h后Bax蛋白表达达高峰；缺血再灌注72h后FADD蛋白表达达高峰，均有统计学意义（P〈0．01）。结论Bcl-2、Bax、FADD表达在脑缺血半暗带区，随再灌注时间延长，表达逐渐增强，与细胞凋亡表达规律一致。     

醒脑开窍针刺法对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织p-Akt(Ser473)表达及细胞凋亡的影响

[目的]观察醒脑开窍针刺法对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织p-Akt(Ser473)表达及细胞凋亡的影响。[方法]将78只大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组26只。按Zea Longa线栓法复制大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO/R)。电针组给予针刺内关、人中、三阴交治疗,每日2次,持续治疗3 d。采用Zausinger 6分法评价神经功能,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积,苏木精-伊红(HE)染色观察海马组织病理损伤,流式细胞技术检测海马神经细胞凋亡率,Western Blot技术检测p-Akt(Ser473)、Bcl-2、Bax蛋白表达。[结果]电针组神经功能评分明显高于模型组(P0.01),脑梗死体积明显小于模型组(P0.01),海马组织病理损伤较模型组改善;电针组海马神经细胞总凋亡率明显小于模型组(P0.05);电针组p-Akt蛋白、Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值较模型组均明显增大(P0.05,P0.01),Bax蛋白表达较模型组明显减小(P0.01)。[结论]醒脑开窍针刺法可明显改善局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经功能,减轻神经细胞凋亡,其作用可能通过激活PI3K/Akt信号通路起到脑保护效应。     

银杏叶提取物对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（EGB）对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支（LAD）30 min,再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注模型,分别以缺口末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞Bcl-2、Bax基因的蛋白表达的变化。结果缺血再灌注（IR）组心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组（P〈0.0 1）,EGB组心肌细胞凋亡明显受到抑制（P〈0.0 1）。IR组和EGB组Bax、Bcl-2、P5 3基因蛋白表达均明显增加（P〈0.01）;EGB明显促进Bcl-2基因表达,同时抑制Bax、P53基因表达（P〈0.01）,Bcl-2和Bax的比值也随之升高。结论 EGB可明显下调Bax和P53基因的蛋白表达,上调Bcl-2基因的蛋白表达,从而显著抑制心肌缺血再灌注损伤（MIRI）后心肌细胞凋亡。     

针刺“头四关穴”对脑缺血再灌注家兔Bcl-2、c-fos和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察针刺"头四关穴"对家兔局灶脑缺血再灌注损伤后凋亡相关蛋白表达的影响,探讨其对神经细胞的保护机制。方法:将家兔随机分为假手术组、模型组和针刺组,每组又随机分为1天、3天和7天3个时间点。采用大脑中动脉线栓法(MCAO)建立家兔局灶性脑缺血再灌注模型,在脑缺血2 h后进行再灌注。针刺组家兔在脑缺血6 h后采用电针"头四关穴"进行治疗,每日1次。在再灌注后1天、3天和7天分别处死取材。免疫组化法检测脑组织缺血区周围Bcl-2、c-fos和Caspase-3蛋白表达。结果:Bcl-2、c-fos和Caspase-3蛋白在假手术组表达较低,在模型组呈现出高表达,1天时表达最高;与模型组相比,针刺组各相应时间点c-fos和Caspase-3蛋白表达均明显降低,而Bcl-2蛋白表达则明显增高(P0.01)。结论:针刺"头四关穴"能上调Bcl-2蛋白表达,下调c-fos和Caspase-3蛋白表达,针刺"头四关穴"可能通过抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡途径,从而对脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

电针对局灶性脑缺血大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2 Bax caspase-3表达的影响

目的:研究电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡和相关基因表达的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型对照组、尼莫地平组、电针治疗组(左侧肩禺、外关、髀关、足三里)、非穴位对照组(左侧天泉与曲泽连线中点、曲泽与郗门中点、五里与阴胞连线中点和膝关与中都连线中点)。采用线拴法造成大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),分别于缺血后即刻、再灌注后即刻和再灌注后2h电针,共3次。末端脱氧核糖核酸介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法测定海马凋亡神经细胞,免疫组织化学方法研究海马神经细胞caspase-3、Bcl-2和Bax基因表达。结果:与假手术组比较,MCAO大鼠海马凋亡细胞明显增加,caspase-3和Bax基因表达增强,Bcl-2/Bax比值显著降低;电针能明显降低MCAO大鼠海马TUNEL、caspase、Bax和Bcl-2阳性细胞数,Bcl-2/Bax比值显著升高。结论:电针可通过抑制神经细胞凋亡途径实现对脑缺血及缺血再灌注损伤的保护作用。     

电针井穴对血管性痴呆大鼠海马CA_1区凋亡因子Bax表达的影响

目的:观察电针井穴对血管性痴呆大鼠海马CA1区凋亡因子Bax的表达的影响。方法:采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法,术后4天电针"中冲"、"涌泉"治疗,每天1次,共20天。采用免疫组化法(S-P法)检测海马CA1区凋亡因子Bax的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区可见大量Bax凋亡因子表达,电针井穴治疗后,Bax凋亡因子表达明显下降(P0.01)。结论:下调海马CA1区促凋亡基因Bax蛋白的表达可能是电针井穴抗血管性痴呆大鼠脑细胞凋亡、保护脑神经元的部分作用机制。     

白扁豆多糖对神经细胞缺氧性凋亡的保护

目的:探讨白扁豆多糖(WHBP,white hyacinth bean polysaccharide)抗神经细胞缺氧性凋亡的作用机制。方法:实验分正常对照组,凋亡诱导组,WHBP 0.5g/L组、3.5g/L组、8.0g/L组;采用Neurobasal加B27 Supplement体外培养SD胚大鼠大脑皮层神经细胞;应用MTT法、Trypan blue拒染法、DNA琼脂糖电泳法、免疫细胞化学染色等观察细胞活性和凋亡。结果:①MTT测定证明缺氧条件下WHBP 2.5g/L～3.5g/L刺激神经细胞的活性与正常对照组比较无差异(P>0.05),而与凋亡诱导组比较WHBP 0.5g/L～6.0g/L刺激神经细胞的活性均显著增高(P<0.000)。②DNA琼脂糖凝胶电泳发现WHBP 3.5g/L组与正常对照组相似未见有明显凋亡梯状条带。③免疫细胞化学发现缺氧条件下WHBP 3.5g/L刺激神经细胞的Bcl-2表达率(63.01±1.40%)高于凋亡诱导组(37.83±7.41%),且与正常对照组相近(68.07±3.17%);Bax和Caspase-3表达率(62.79±1.30%,45.75±3.44%)显著低于凋亡诱导组(72.09±3.98%,70.01±3.43%)(P<0.05～0.000),且与正常对照组相比情况不一(63.36±2.22%,33.60±4.14%)(P>0.05,P<0.01);但是Bcl-2/Bax比值(1.01±0.02)显著高于凋亡诱导组(0.52±0.08)(P<0.000),而与正常对照组相近(1.07±0.08)(P>0.05)。结论:WHBP通过减少Bax、Caspase-3的表达,相对提高Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比例阻断缺氧诱导的神经细胞凋亡和保护神经细胞。     

川芎嗪对缺氧缺血大鼠脑组织Bc1-2及Bax蛋白表达的影响

目的通过观察川芎嗪注射液对缺血缺氧性脑病脑组织神经细胞形态及凋亡相关基因Bc1-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其脑保护作用及其机制。方法将50只幼鼠分为3组,假手术组(A组)10只,模型组(B组)20只,川芎嗪注射液组(C组)20只,均于造模前腹腔注射液相应药物。应用右侧颈总动脉结扎并6%氧、94%氮混合气体处理4 h的方法制备缺氧缺血模型。3组大鼠均于脑缺氧缺血后24 h取脑组织标本检测Bc1-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡情况。结果①HE染色结果显示A组海马区神经元分布均匀,形态无异常;B组海马区神经元排列紊乱,神经元肿胀变性;C组神经元镜下改变较B组明显减轻。②尼氏染色结果显示A组的海马区细胞层次清晰;B组海马区细胞数减少,神经元排列疏松;C组较B组神经元丢失明显减轻。③A组未见Bc l-2和Bax阳性细胞数增多;B组海马区Bc1-2及Bax蛋白阳性细胞数目均增多(P0.01);与B组比较,C组海马区Bc1-2蛋白阳性细胞数目增多,Bax蛋白阳性细胞数目降低(P0.01)。结论川芎嗪注射液可通过上调缺氧缺血大鼠脑组织中的Bc1-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,从而抑制神经细胞凋亡,减轻缺氧缺血所致的脑组织损伤。     

心脑舒通胶囊对大鼠缺血再灌注脑损伤后细胞凋亡的影响

目的:探讨心脑舒通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,及其对凋亡调控因子蛋白表达的影响。方法:采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),24 h后断头取脑,免疫组织化学法测定大脑皮层中Bax,Bcl-2,Fas,Fas-L以及caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测皮层区神经细胞凋亡。结果:缺血再灌注模型组大脑皮层内Bax,Fas,Fas-L和caspase-3蛋白明显升高,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax明显降低,与假手术组比较,均有显著性差异(P<0.01)。心脑舒通胶囊能明显降低缺血侧大脑皮层内Bax蛋白表达,增加皮层内Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax;减少皮层内Fas和Fas-L蛋白表达,降低皮层内caspase-3蛋白和基因表达,显著减少凋亡的神经细胞数量,与模型组比较,有统计学意义(P<0.01)。结论:心脑舒通胶囊保护受损的脑组织,其机制可能与降低脑组织神经细胞凋亡,调节凋亡调控因子的蛋白表达有关。     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马凋亡因子及学习记忆能力的影响

目的:探讨补阳还五汤(BYHWT)对阿尔茨海默病小鼠海马组织凋亡因子及学习记忆能力的影响。方法:40只雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组(0.001 g·kg~(-1)),BYHWT高、中、低剂量组(分别为37.06,18.53,9.26 g·kg~(-1))。C57小鼠作为空白组。连续灌胃BYHWT 30 d,进行水迷宫行为学测试后,取材。用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,海马组织中凋亡因子Bcl-2明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3明显增加(P0.01)。与模型组比较,BYHWT高、中剂量组能明显改善小鼠学习记忆能力,凋亡因子Bcl-2明显增加(P0.01),Bax和Caspase-3明显减少(P0.01)。结论:补阳还五汤能够明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习记忆能力,降低海马组织中Bax和Caspase-3的表达,增加Bcl-2的表达。     

西洋参皂苷抑制缺氧性神经细胞凋亡机制的研究

目的:探讨西洋参皂苷(PQLS)抑制缺氧诱导的胚鼠大脑皮层神经细胞凋亡的作用机理。方法:正常对照组、凋亡阳性组、西洋参皂苷0.025g/L组、0.05g/L组、0.1g/L组、0.2g/L组;SD胚大鼠原代大脑皮层神经细胞体外无血清缺氧-复氧培养;应用MTT、DNA电泳、免疫细胞化学染色等方法观察西洋参皂苷的适宜剂量、DNA凋亡条带及凋亡调节蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达率。结果:①缺氧条件下PQLS在0.05～0.1g/L促进缺氧的神经细胞增殖较凋亡阳性组提高31.17%～37.65%(P﹤0.01)。②0.05～0.2g/L的PQLS使缺氧的神经细胞DNA只出现3条凋亡条带(凋亡阳性组6条带),且条带浓度也明显降低。③0.025g/L～0.1g/L PQLS显著减少缺氧的神经细胞表达Bax(67.02±1.69%～57.97±2.6%,凋亡阳性组72.19±3.97%,P<0.05～0.01)和Caspase-3(62.27±2.02%～50.34±2.65%,凋亡阳性组68.62±1.40%,P<0.05～0.01);提高缺氧的神经细胞表达Bcl-2(44.22±3.73%～63.76±2.96%,凋亡阳性组35.61±2.16%,P<0.01)和Bcl-2/Bax比值(0.69±0.11～1.11±0.04,凋亡阳性组0.56±0.11,P<0.05～0.01)。结论:西洋参皂苷通过降低缺氧的神经细胞表达Bax、Caspase-3,提高Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比例阻断缺氧诱导的神经细胞凋亡,保护缺氧的神经细胞。     

电针调节脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Bcl-2和Bax mRNA的表达

目的:探讨电针是否通过干预Bax/Bcl-2 mRNA的表达,来调控缺血再灌注大鼠大脑皮层细胞凋亡,发挥电针对脑神经元保护作用。方法:将清洁级健康雄性SD大鼠19只,按随机数字表随机分成假手术组(n=5)和用于造模动物14只,采用改良Longa线栓大脑中动脉法制作局灶性脑缺血再灌注模型。在成功制作出脑缺血再灌注模型并作神经缺损综合评分为2分以上后随机分为模型组、电针组,每组各7只。取电针组大鼠"百会"及"大椎"穴,采用疏密波刺激30min,电流强度1～3mA,频率20Hz/80Hz,疏、密波交替时间各为1.5s。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测大鼠大脑皮层组织Bcl-2和Bax mRNA的表达。结果:与假手术组相比,模型组Bcl-2、Bax mRNA表达均显著升高,而Bcl-2/Bax比值显著下降;与模型组相比,电针组Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达虽无统计学差异,但Bcl-2/Bax比值显著上升,形成以Bcl-2占优势的Bcl-2/Bax二聚体。结论:电针可以通过调控内源性凋亡途径,抑制Bax的促凋亡作用,降低缺血再灌注区的细胞凋亡,促进细胞的存活,这可能是电针拮抗局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡,保护脑神经元的分子生物学机制之一。     

黄精多糖对新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的影响

目的:探讨黄精多糖对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护作用.方法:采用"Neurobasal加B27 Supplement"体外培养新生大鼠大脑皮层神经细胞,使用Hoechst 33342荧光染色、免疫细胞化学染色观察黄精多糖对缺氧复氧性神经细胞凋亡的保护作用.结果:缺氧前加入500μg/ml～1.5mg/ml的黄精多糖能显著地降低缺氧复氧培养诱导的神经细胞凋亡率,增加缺氧的神经细胞Bcl-2蛋白的表达,减少Bax蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax比值.而缺氧12h后加入黄精多糖则无明显的抗凋亡作用.结论:缺氧前加入黄精多糖可以通过上调缺氧神经细胞Bcl-2表达、下调Bax表达和提高Bcl-2/Bax的比值以避免缺氧的神经细胞凋亡.     

复方红景天对大鼠缺血性脑损伤后海马组织细胞凋亡的影响

[目的]探讨复方红景天对大鼠缺血性脑损伤后海马组织细胞凋亡的影响。[方法]80只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平(阳性对照)组与复方红景天高、低剂量组,线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型。复制模型前7 d灌胃给药,1次/日,连续10 d。测定大鼠行为学指标及脑梗死比例;分离海马组织,TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫印迹技术检测Bax、Bcl-2蛋白表达情况。[结果]与假手术组相比,模型组大鼠横木行走实验评分升高,前肢握力下降,脑梗死比例增大(P0.01);凋亡阳性细胞明显增多,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P0.01)。与模型组比较,复方红景天高、低剂量组均能降低大鼠横木行走实验评分、增加前肢握力,降低脑梗死的比例(P0.05);降低大鼠海马组织神经细胞凋亡率,降低促凋亡蛋白Bax的表达,升高抑凋亡蛋白Bcl-2的表达(P0.05)。[结论]复方红景天通过抑制海马组织神经细胞的凋亡,发挥对缺血性脑损伤的保护作用,相关机制与抑制线粒体凋亡途径有关。     

针刺对戊四氮致痫大鼠抗癫痫机制的研究

目的:探讨针刺对戊四氮(PTZ)致痫大鼠抗癫痫的作用机制。方法:将实验大鼠分为NS组、PTZ组和针刺组,造模后观察各组大鼠癫痫发作的行为学表现,采用免疫组化法检测大脑皮质及海马caspase-3在36 h和72 h时间点免疫反应性,采用半定量RT-PCR法检测海马bcl-2、bax蛋白表达。结果:针刺组大鼠癫痫发作较PTZ组减轻;在36 h时间点,PTZ组大鼠大脑皮质及海马caspase-3免疫反应性、海马bax mRNA的表达高于NS组(P<0.05),针刺治疗可拮抗其高表达(P<0.05),Bcl-2与Bax蛋白的表达水平呈负相关,在72 h时间点各组之间差异更为明显。结论:PTZ致痫诱导大鼠海马神经元凋亡,针刺PTZ致痫大鼠百会、大椎穴可减轻癫痫发作程度,可能通过抑制凋亡途径进而对神经元发挥神经保护产生抗癫痫效应。