ACE2基因通过调控Nrf2/HO-1通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探讨血管紧张素转化酶2(ACE2)对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞HK-2氧化应激、炎症、凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。 方法 将ACE2慢病毒转染HK-2细胞,按照实验需要分为常氧组(Control组)、缺氧复氧模型组(H/R组)、缺氧复氧转染阴性对照慢病毒组(H/R-NC组)和缺氧复氧转染ACE2慢病毒组(H/R-ACE2组)。细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力;RT-PCR及ELISA法检测炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平;比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表达水平;Western blotting法检测胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、Nrf2、HO-1的蛋白水平。采用Nrf2抑制剂ML385以及HO-1抑制剂SnPPIX抑制Nrf2/HO-1通路,Western blotting法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平变化,比色法检测SOD和MDA表达变化。 结果 与Control组相比,H/R组细胞活力降低(t=7.58,P<0.001),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均增加(t_MDA=11.08,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=5.82,P_PCR-IL6<0.001;t_PCR-TNF-α=7.69,P_PCR-TNF-α<0.001;t_PCR-IL-1β=4.80,P_PCR-IL-1β=0.001;t_ELISA-IL-6=34.11,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=14.12,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=9.63,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=2.73,P_Caspase-3=0.026;t_Bax=27.75,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平下降(t_SOD=7.74,P_SOD<0.001;t_Bcl-2=75.49,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=11.41,P_ACE2<0.001)。与H/R组相比,H/R-ACE2组细胞活力增加(t=3.61,P=0.002),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均下降(t_MDA=6.15,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=3.34,P_PCR-IL-6=0.006;t_PCR-TNF-α=3.65,P_PCR-TNF-α=0.007;t_PCR-IL-1β=4.06,P_PCR-IL-1β=0.004;t_ELISA-IL-6=14.62,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=10.42,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=8.65,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=3.74,P_Caspase-3=0.006;t_Bax=30.52,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平增加(t_SOD=3.58,P_SOD=0.007;t_Bcl-2=63.86,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=58.72,P_ACE2<0.001),Nrf2/HO-1信号通路被激活蛋白水平增加(t_Nrf2=44.55,P_Nrf2<0.001;t_HO-1=14.19,P_HO-1<0.001)。然而ML385和SnPPIX处理会抑制ACE2基因过表达在H/R中HK-2细胞的保护作用(F_Bax=11.02,P_Bax=0.003;F_Bcl-2=21.48,P_Bcl-2<0.001;F_Caspase-3=20.80,P_Caspase-3<0.001;F_SOD=133.49,P_SOD<0.001;F_MDA=14.06,P_MDA=0.001)。 结论 ACE2在HK-2细胞缺氧复氧损伤中具有抑制氧化应激、调节炎症、改善凋亡的作用,Nrf2/HO-1信号通路发挥重要作用。     

在微量白蛋白尿前后应用氯沙坦治疗糖尿病肾病的实验研究

目的：观察在微量白蛋白尿发生前后应用氯沙坦对糖尿病肾病的治疗作用及其机制。方法：单侧肾切除的链脲佐菌素（STZ）糖尿病大鼠，随机分为糖尿病对照组、氯沙坦治疗1组和氯沙坦治疗2组。观测肾脏形态学及肾功能变化，并采用荧光实时定量RT-PCR检测肾脏转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI—1）等细胞因子的表达情况。结果：糖尿病对照组大鼠尿微量白蛋白（UAER）持续上升；血肌酐（Scr）、肾脏肥大指数（KW／BW）、肾小球平均体积（MGV）、系膜面积比（FMA）以及肾脏TGF-β1、CTGF、PAI-1和纤维连接蛋白（FN）的mRNA表达均明显升高，而肌酐清除率（Ccr）已开始下降。氯沙坦治疗1组和2组以上指标均明显改善，且两组之间无显著差异。结论：氯沙坦可通过下调肾脏细胞因子基因表达，起到保护肾脏作用，但在微量白蛋白尿出现之前进行干预的效果并不比之后更好。     

流式细胞仪交叉配型对移植肾1年存活率的影响

目的：探讨流式细胞仪交叉配型（flow cytometry crossmatch, FCXM）对移植肾一年存活率的影响。方法:应用χ2检验比较FCXM阳性与阴性组间1年移植肾死亡有无差异。以“移植后1年肾脏的存活状况(是/否)”为应变量，以移植后早期排斥反应（移植后1月内发生）、血管性排斥反应、移植肾功能延迟（移植后1周内需做血液透析）、FCXM、群体抗原反应抗体(PRA)、 HLA A,B配型、HLA DR配型、供者类型（尸肾/活体供肾）、既往移植次数、免疫抑制药物的使用、血清巨细胞病毒状态、冷缺血时间、供者和受者年龄等可疑影响因素为自变量建立Logistic回归模型，探讨流式细胞仪交叉配型对移植肾1年存活有无影响。结果:258例患者平均随访时间为25个月（12～60个月），期间30例移植肾死亡，其中23例发生在移植后1年内。 χ2检验显示，FCXM阳性与阴性组间1年移植肾死亡无统计学差异（P=0.157?0）。 Logistic 回归显示，对移植肾1年死亡有影响的因素包括移植肾功能延迟（OR=8.00, P=0.001?4），供者类型为尸肾（OR=9.30, P=0.001?7）和血管排斥反应（OR=5.05, P=0.021?9）。FCXM的结果不会影响移植肾一年存活率（OR=1.60, P=0.534?6）。结论: FCXM对移植肾1年后存活尚无肯定的影响。     

糖尿病大鼠肾脏组织中氧化应激的实验研究

目的探讨糖尿病大鼠肾脏组织中氧化应激水平在糖尿病肾病中的作用。方法采用STZ诱导糖尿病模型鼠。36只大鼠随机分为正常对照组，糖尿病Ⅰ组(给予鱼精蛋白锌胰岛素2～4U／2d)，糖尿病Ⅱ组(每日给予鱼精蛋白锌胰岛素9～12U／kg体重)。喂养至12w，测定各组血糖，血中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮、肌酐、糖化血红蛋白(HbAlc)水平，尿肌酐水平和24h尿蛋白含量。运用比色法测定肾脏皮质中抗氧化酶的活性，包括总超氧化物歧化酶(TSOD)、铜锌超氧化物歧化酶(Cu—Zn SOD)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)，以及丙二醛(MDA)的含量。结果糖尿病Ⅱ组与正常对照组间各指标无显著性差异。糖尿病Ⅰ组与Ⅱ组或正常对照组比较，血糖、TC、TG、HbAlc明显升高；抗氧化酶中，TSOD、Cu—Zn SOD、CAT活性明显下降，GSH—Px活性则升高，Mn SOD活性在各组中无显著性差异；MDA水平明显升高。尿蛋白含量在糖尿病Ⅰ组较其他两组明显升高，而肌酐清除率则明显下降。结论糖尿病可以引起大鼠肾脏氧化应激水平的升高，在糖尿病肾病发病机制中起重要作用。     

高糖对人肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体家族表达的影响

目的研究高糖作用下人肾小球系膜细胞(HMC)中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)家族的表达及转录活性的变化,探讨PPAR介导的信号转导途径在糖尿病性肾病发生发展中的作用。方法使用3层滤网法分离HMC,3～7代细胞用于实验。HMC分为正常对照组(5mmol.L-1葡萄糖,NG)、渗透浓度对照组(5mmo.lL-1葡萄糖+25mmol.L-1甘露醇,MG)和高糖组(30mmol.L-1葡萄糖,HG)。mRNA水平及蛋白水平的检测分别采用实时定量PCR和蛋白印迹法。结果NG组HMC中PPARα,PPARγ及PPARδ mRNA均有表达,PPARγ蛋白亦有表达。MG组上述mRNA表达无明显变化。高糖刺激后,PPARα mRNA表达明显高于MG组,PPARγ和PPARδmRNA表达减少,PPARγ蛋白表达亦明显降低,PPARγ激活的基因adipophilin的表达亦减少。结论高糖能上调PPARα基因的表达,抑制PPARγ和PPARδ基因表达,并降低PPARγ的转录活性,提示高糖可能通过PPAR介导的信号转导途径在糖尿病性肾病的发生发展中发挥重要作用。     

灸腰阳光穴治疗腰椎间盘突出症疗效对照研究

腰椎间盘突出症是引起腰腿痛的常见原因之一.在正常人群中的发病率约为15.2%,发病时严重影响患者的生活和工作.目前主要的治疗方法分为两大类:手术治疗和非手术治疗保守治疗.手术治疗虽可快速缓解症状,但因其有创伤,又有一定的风险性,所以更多的患者仍选择非手术治疗.非手术治疗方法众多,各有特点.我们运用灸腰阳光穴配合推拿、仰卧旋转整复法治疗腰椎间盘突出症35例,临床疗效显著,现报告如下.     

针刺配合吞咽训练治疗脑中风后吞咽障碍临床观察

目的:探讨针刺配合吞咽训练对脑中风后吞咽障碍的疗效。方法:将64例患者随机分成2组,对照组33例给予吞咽训练,包括温度刺激、吞咽器官基础训练和进食训练;治疗组31例进行针刺治疗和吞咽训练。1d1次,每周6次,2周为1个疗程,2个疗程后评定疗效。采用饮水实验、临床疗效评价对患者进行评估。结果:2组治疗后饮水试验评分及临床疗效比较均有显著性差异(P<0.01),治疗组优于对照组。结论:针刺配合吞咽训练对脑中风后吞咽障碍疗效显著。     

电针对兔激素性股骨头坏死局部组织血流量的影响

背景：激素所致的股骨头坏死是医源性疾病，增加局部坏死组织血流量可否有效改善这一问题。目的：观察电针治疗对股骨头局部组织血流量的影响，以了解针刺对激素性股骨头坏死的作用机制。设计：以实验动物为研究对象的随机对照研究。单位：一所中医学院的中西医结合系。材料：实验于2002—05／2003—06在安徽中医学院中西医结合临床医院动物实验室完成，新西兰大白兔30只．清洁级，雌雄各半，随机分为空白对照组、模型组和电针治疗组。方法：采用兔激素性股骨头坏死模型．电针治疗组用安徽中医学院针灸经络研究所研制生产的PCF-88A型程控电针治疗仪作用于环跳、髀关两穴，模型组、空白对照组不予治疗。主要观察指标：针刺后即刻及治疗2周后坏死局部组织血流量曲线。结果：针刺后局部组织即时血流量电针治疗组(0．50&;#177;0．08)mL／(g&;#183;min)与空白对照组(8．63&;#177;0.83)mL／(g&;#183;min)、模型组(4．30&;#177;0.89)mL／(g&;#183;min)比较显著减少．差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。治疗2周后电针治疗组局部组织血流量(6．19&;#177;0.61)mL／(g&;#183;min)明显升高．与空白对照组(8．33&;#177;0．65)mL／(g&;#183;min)、模型组（4．44&;#177;0．72)mL／(g&;#183;min)比较．差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：电针治疗改善激素性股骨头坏死局部血供的是非即时的．其机制可能与神经-内分泌-免疫网络调节有关。     

电针对兔激素性股骨头坏死局部组织血流量的影响

背景激素所致的股骨头坏死是医源性疾病,增加局部坏死组织血流量可否有效改善这一问题.目的观察电针治疗对股骨头局部组织血流量的影响,以了解针刺对激素性股骨头坏死的作用机制.设计以实验动物为研究对象的随机对照研究.单位一所中医学院的中西医结合系.材料实验于2002-05/2003-06在安徽中医学院中西医结合临床医院动物实验室完成,新西兰大白兔30只,清洁级,雌雄各半,随机分为空白对照组、模型组和电针治疗组.方法采用兔激素性股骨头坏死模型,电针治疗组用安徽中医学院针灸经络研究所研制生产的PCE-88A型程控电针治疗仪作用于环跳、髀关两穴,模型组、空白对照组不予治疗.主要观察指标针刺后即刻及治疗2周后坏死局部组织血流量曲线.结果针刺后局部组织即时血流量电针治疗组(0.50±0.08)mL/(g·min)与空白对照组(8.63±0.83)mL/(g·min)、模型组(4.30±0.89)mL/(g·min)比较显著减少,差异有非常显著性意义(P＜0.01).治疗2周后电针治疗组局部组织血流量(6.19±0.61)mL/(g·min)明显升高,与空白对照组(8.33±0.65)mL/(g·min)、模型组(4.44±0.72)mL/(g·min)比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论电针治疗改善激素性股骨头坏死局部血供的是非即时的,其机制可能与神经-内分泌-免疫网络调节有关.