肝气郁结证动物模型的建立及HPA轴相关激素的初步研究

[目的]建立并验证“肝气郁结证”大鼠模型,在此基础上研究“肝气郁结证”下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴相关激素的改变.[方法]20只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组.采用慢性应激+孤养方法制备“肝气郁结证”大鼠模型,通过行为学观察、蔗糖水偏嗜实验、开野实验评价模型.运用酶联免疫吸附试验( ELISA)技术对两组大鼠血清进行HPA轴相关激素分析.[结果]肝气郁结模型大鼠表现为躲避、活动减少、大便松散、皮色失去光泽,造模第2周开始生长较对照组缓慢,摄食量减少(P＜0.05);28 d造模后,水平得分、垂直得分较正常组均明显降低(P＜0.01,P＜0.05),血清皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的含量明显升高(P＜0.01).[结论]从病因学、行为学和症状表现上成功构建了肝郁证大鼠模型,并进一步证实模型大鼠呈HPA轴亢进状态,有助于阐释肝郁证病理改变的本质.     

电针对慢性应激模型大鼠行为学及HPA轴相关激素的影响

目的 :探讨电针对慢性应激模型大鼠行为学的影响和对下丘脑 垂体 肾上腺轴 (HPA轴 )的调节作用。方法 :采用 7种不同的应激方式交替作用于SD大鼠 2 1d ,制成慢性应激模型 ,用韩氏电针仪 ,以 2Hz频率 ,0 .6mA电流强度 ,电针“百会”和“印堂”穴 ,每天 1次 ,每次 2 0min ,共2 1d。通过开野实验及糖水实验进行大鼠行为学检测 ,运用放射免疫法 (RIA)检测下丘脑CRF、垂体ACTH、肾上腺CORT的含量 ,并与空白组、模型组、百优解组及束缚组做比较。结果 :与空白组相比 ,模型组及模型束缚组开野实验的水平运动次数和垂直运动次数明显减少 ,糖水的摄入量明显减少 ,垂体ACTH、肾上腺CORT的含量明显升高 ,而电针组和百优解组可明显增加开野实验的垂直运动次数及糖水的摄入量 ,并可降低垂体ACTH、肾上腺CORT的分泌。结论 :慢性应激引起大鼠的活动性降低 ,探究行为减少和HPA轴亢进 ,电针可能通过调整垂体ACTH、肾上腺CORT的过度分泌 ,从而纠正HPA轴亢进 ,进而改善慢性应激大鼠的行为学表现。     

电针对慢性疲劳大鼠模型下丘脑—垂体—肾上腺轴激素水平的影响

目的：观察电针对慢性疲劳大鼠模型下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA-axis）激素水平的影响,探讨电针（EA）治疗慢性疲劳综合征（CFS）的作用机理。方法：设正常组、模型组、电针组,模型组与电针组采用强制性冷水游泳的方法制作CFS大鼠模型,电针组在造模的同时在百会、足三里穴给予电针治疗。通过行为学检测对模型进行判定;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质醇（CORT）的含量;采用放射免疫分析法测定大鼠血清下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）含量。结果：①电针对慢性疲劳大鼠行为学的影响：模型组大鼠行为出现改变,产生了心理和躯体的疲劳状态,基本符合或类似于CFS的临床表现。电针对疲劳大鼠模型的心理和躯体疲劳状态有显著良性调节作用。②电针对慢性疲劳大鼠HPA轴的影响：模型组大鼠HPA轴功能出现异常,血清ACTH、CORT和CRH含量明显上升;电针能明显降低血清ACTH、CORT和CRH的浓度,使HPA轴功能恢复正常。结论：①CFS与应激关系密切,采用强制性冷水游泳制作的慢性疲劳大鼠模型与CFS的发病机制和临床表现基本相符。②电针治疗CFS的机制可能与其对HPA轴功能的调节有关。电针可调节血清ACTH、CORT和CRH的浓度,在3个层次对HPA轴的激素进行调节,以纠正CFS异常的HPA轴功能,达到治疗CFS的目的。     

“心脑同调”法电针对焦虑大鼠行为学及血清相关因子的影响

目的:观察“心脑同调”法电针对焦虑模型大鼠行为学及血清心房利钠肽(ANP)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质酮(CORT)含量的影响,探讨针刺治疗焦虑障碍的效应及部分作用机制。方法:32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和假针组,每组8只,制备焦虑大鼠模型。15 d后,采用高架十字迷宫实验与自发活动开场实验测试大鼠行为学变化,酶联免疫吸附试验法检测血清ANP、CRH、CORT的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠进入开臂次数百分比(OE%)、开臂停留时间百分比(OT%)明显降低(均P<0.01),水平得分、垂直得分明显下降(均P<0.05),血清ANP、CRH、CORT含量显著升高(均P<0.01);与模型组比较,电针组OE%、OT%值明显升高(均P<0.01),水平得分、垂直得分明显升高(均P<0.05),血清ANP、CRH、CORT含量显著降低(均P<0.01)。结论:焦虑模型大鼠血清中ANP、CRH、CORT含量异常可能是导致其发病的机制之一;“心脑同调”法电针可能通过调节三者之间的紊乱状态而达到对焦虑障碍的治疗作用。     

白芍提取物对嗅球损毁抑郁模型大鼠 行为学及下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的:研究白芍提取物对嗅球损毁抑郁模型大鼠行为学及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的影响。方法:将嗅球损毁大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药氟西汀2.5 mg.kg-1组以及白芍提取物70,35,17.5 mg.kg-1组,采用敞箱法、跳台法观察嗅球损毁大鼠的行为变化,同时用放免法分析白芍提取物对嗅球损毁大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放素(CRH)、垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)和血清皮质酮(CORT)含量的影响。结果:大鼠嗅球损毁后敞箱行为出现明显变化,水平运动和垂直运动显著增加,白芍提取物中、高剂量组可显著降低大鼠水平运动和垂直运动的得分;跳台试验中,造模后大鼠训练期和测试期的错误次数显著增加,白芍提取物中、高剂量组能显著降低嗅球损毁大鼠训练期和测试期的触电次数;嗅球损毁大鼠下丘脑CRH,垂体ACTH,血清CORT含量明显增加,白芍提取物中、高剂量组能显著降低嗅球损毁大鼠CRH,ACTH,CORT的含量。结论:白芍提取物能明显改善嗅球损毁大鼠的行为活动,并且对嗅球损毁大鼠亢进的HPA轴功能的调整作用是白芍提取物治疗抑郁症的机制之一。     

柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠海马调节HPA轴功能的影响

目的:研究柴胡疏肝散对慢性应激模型大鼠海马调节HPA轴功能的影响。方法:采用慢性不可预见性刺激制造慢性应激大鼠模型,分别用Western bolt法和Elisa法检测各组大鼠海马MR和GR及下丘脑CRH蛋白的表达,检测血浆ACTH和血清CORT含量。结果:治疗组大鼠海马GR蛋白表达明显增高,下丘脑CRH蛋白表达及血浆ACTH和血清CORT的含量明显降低。结论:柴胡疏肝散能够抑制慢性应激所致的大鼠HPA轴功能的亢进,其机制可能与调节大鼠海马GR蛋白表达、进而发挥对HPA轴功能的抑制作用有关。     

电针疗法对围绝经期抑郁症模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴及β-内啡肽的影响

目的:研究电针疗法对围绝经期抑郁症大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)及β-内啡肽的影响,探究电针疗法对围绝经期抑郁症模型大鼠的作用机制。方法:SPF级SD雌性大鼠60只,随机分为空白组、模型组、假手术组、西药组和电针组,采用双侧卵巢切除和慢性不可预见刺激结合建立围绝经期抑郁症大鼠模型。电针组采用电针刺激"百会"、双侧"肾俞"、双侧"三阴交"。连续治疗28 d,观察大鼠动情周期、糖水偏嗜实验结果,运用酶联免疫吸附法(Elisa法),测定CRH、ACTH、CORT、β-EP的含量。结果:治疗后与模型组相比,电针组及西药组糖水消耗率升高(P0.05),电针组、西药组及假手术组血清中CRH、ACTH、CORT含量低于模型组(P0.05);电针组、西药组及假手术组β-EP含量高于模型组(P0.05)。结论:电针疗法可以通过调节围绝经期抑郁症模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)以及β-EP含量,缓解围绝经期抑郁症症状起防治作用。     

穴位埋线对慢性制动应激大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的:探讨穴位埋线对慢性制动应激模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)的调节作用。方法:采用制动应激方式作用于SD大鼠21天,制成慢性应激模型,在“百会”、“内关”、“三阴交”、“太冲”穴进行穴位埋线,每5天1次,共埋线4次。运用放射免疫法(RIA)检测血清Cor和血浆CRH的含量,并与对照组、模型组做比较。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清Cor和血浆CRH含量明显高于正常组(P<0.05);穴位埋线组血清中Cor和血浆CRH含量明显低于模型组(P<0.01),与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:慢性应激引起大鼠HPA轴亢进,穴位埋线可能通过调整Cor和CRH的过度分泌,从而纠正HPA轴亢进,进而防治慢性应激引起神经内分泌紊乱。     

四逆散对慢性应激大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴作用的实验研究

目的研究调和肝脾之四逆散对慢性应激大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）的影响。方法实验设正常组、模型1组、模型2组、四逆散组。除正常组外其余各组用电刺激法制备慢性应激动物模型,并给予相应的处理。观察大鼠行为学指标的变化,测定血浆皮质酮（CORT）、下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）和血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）的含量,同时检测大鼠下丘脑CRH mRNA和垂体ACTH mRNA含量变化。结果四逆散能改善大鼠行为表现,降低大鼠血浆ACTH、下丘脑CRH、血浆CORT的含量及下丘脑CRH mRNA和垂体ACTH mRNA的过度表达。结论四逆散可有效调整慢性应激大鼠HPA轴的异常。     

电针对慢性束缚应激抑郁模型大鼠不同时段血清ACTH、CORT表达的影响

目的:观察电针对慢性束缚应激(CRS)抑郁模型大鼠干预期及恢复期血清促肾上腺皮质激素(ACTH)和肾上腺皮质酮(CORT)表达的影响,探究电针抗抑郁效应及其可能机制。方法:将60只5周龄SD大鼠平均随机分为对照组、模型组和电针组。除对照组外,其余大鼠均采用慢性束缚应激结合孤养处理;电针组选取"百会""印堂"穴在每日应激之前1h进行电针干预20 min,1次/d,共28 d。在实验day7、day28、day35(末次干预结束后第7天)采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测3组大鼠血清ACTH与CORT激素表达水平。结果:ELISA结果显示,实验day7,3组之间血清ACTH和CORT表达水平差异无统计学意义。与对照组比较,模型组血清ACTH及CORT表达在实验day28和day35显著增加(P0.01;P0.01;P0.01;P0.01);与模型组比较,电针组血清ACTH及CORT表达在实验day28和day35显著降低(P0.05;P0.05;P0.01;P0.01),电针对慢性束缚应激诱导的大鼠血清ACTH及CORT高表达水平表现出逆转效应。结论:慢性束缚应激诱导的大鼠表现为应激状态下的下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能亢进,其血清ACTH和CORT呈高水平表达。电针干预可显著逆转这种效应,说明电针可对亢进的HPA轴进行调控。在停止干预后的第7天,电针组血清ACTH、CORT表达水平仍显著低于模型组,说明电针干预可对亢进的HPA轴进行持续且有效的调控,这可能是电针抗抑郁的长效机制之一。     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB表达水平的影响

目的 通过研究PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB基因的表达,探讨PMS肝气郁证的微观发病机制及中药经前舒颗粒的作用靶点.方法 束缚法制备PMS肝气郁证模型大鼠,用经前舒颗粒干预治疗,运用半定量RT-PCR和Western Blotting方法检测正常组、模型组、给药组大鼠下丘脑区MAOA、MAOB mRNA及其蛋白表达水平;通过单因素方差分析及LSD法统计数据.结果 与正常组相比,PMS肝气郁证模型组大鼠MAOA mRNA在下丘脑表达显著升高(P<0.05),蛋白表达极显著升高(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与模型组相比,MAOA mRNA在下丘脑表达降低(P<0.05),蛋白表达显著降低(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与正常组相比,MAOA、MAOB mRNA及蛋白在大鼠下丘脑中表达均无统计学差异(P>0.05).结论 模型组大鼠与正常组大鼠相比,下丘脑MAOA基因表达升高,通过经前舒颗粒干预后,恢复正常.说明MAOA基因与PMS肝气郁证相关,并且可能是经前舒颗粒治疗该证的作用机制之一.     

逍遥散对肝郁证大鼠脑内神经递质的影响

目的:探索逍遥散对肝郁证大鼠中枢神经递质的作用。方法:利用中医证候模型,研究逍遥散对脑内神经递质的作用。结果:肝郁证模型组大鼠脑内NE与DA水平与对照组比较下降明显(P<0.05);肝郁证模型加逍遥散组大鼠脑内NE与DA水平与对照组比较无显著性(P>0.05);结论:肝郁证大鼠脑内NE与DA水平明显降低,逍遥散舒肝解郁,有增加肝郁证大鼠脑内NE、DA神经递质的作用。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证 大鼠海马和下丘脑5-羟色胺转运体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠海马、下丘脑5-羟色胺转运体(5-HTT)表达的影响,从分子水平探讨经前舒颗粒的作用机制。方法:雌性SD大鼠随机分为正常对照组、肝郁模型组、经前舒颗粒给药组(10 g.kg-1)和氟西汀给药组(0.002 5 g.kg-1),束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,给药组大鼠ig给药5 d后,旷场实验、糖水偏好实验对模型进行评价,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术分别检测大鼠海马和下丘脑5-HTT的mRNA及蛋白的表达。结果:与肝郁模型组相比经前舒和氟西汀给药组大鼠糖水偏好指数及旷场实验得分均显著升高(P<0.05,P<0.01);经前舒和氟西汀给药均能显著上调海马和下丘脑中5-HTT的mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),两给药组间无显著性差异。结论:经前舒颗粒的作用机制可能是通过调节海马、下丘脑中5-HTT的表达而发挥作用。     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证大鼠下丘脑ERα,ERβ分布与表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑不同核团雌激素受体(ER)α,ERβ蛋白分布及表达的影响,研究经前舒颗粒治疗该病症的中枢作用机制.方法:将30只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型给药组,每组10只.采用慢性束缚应激造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型.造模同时,模型给药组按10 g·kg-1剂量ig给药.造模结束后,通过免疫组织化学技术ABC法检测各组大鼠雌激素受体α,β在下丘脑中的定位分布并分析其积分吸光度(IA);HPLC检测各组大鼠下丘脑中5-羟色按(5-HT)含量.结果:3组大鼠雌激素受体ERα,ERβ主要分布在下丘脑的腹内侧区(VMH)核团,分布区域无差异.模型组VMH区ERα,ERβIA分别为163605±27284和147318±24924与正常组IA(130156±32579,105430±28641)相比显著升高(P ＜0.05,P＜0.01);给药组ERα,ERβIA为122020±21 287和77482±31112,与模型组相比显著降低(P＜0.01,P＜0.01).模型组大鼠下丘脑5-HT含量(454.51 ±65.18)μg·L-1与正常组(144.47±42.20) μg· L-1相比显著升高(P＜0.01),给药组(234.11±14.38)μg·L-1与模型组相比5-HT含量显著下降(P＜0.01).结论:下丘脑VMH区ERα,ERβ蛋白表达升高可能是PMS肝气郁证发病的中枢机制之一.经前舒颗粒可有效改善这种状态,提示下丘脑ERα,ERβ可能是该药治疗PMS肝气郁证的部分作用靶点.     

克郁舒神颗粒对实验性恶劣心境肝气郁结证 大鼠海马BDNF的影响

目的:研究克郁舒神颗粒对实验性恶劣心境肝气郁结证大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法:选择60只雄性Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、克郁舒神颗粒高、中、低(1.50,0.75,0.375 g.kg-1)剂量组和氟西汀组,每组10只。采用慢性不可预见的温和性应激和孤养方法制备实验性恶劣心境肝气郁结证大鼠模型。应用免疫组织化学法检测大鼠海马BDNF蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠大脑海马BDNF阳性神经元细胞明显减少,克郁舒神颗粒中、低剂量可以提高BDNF阳性神经元的面积比,优于高剂量组及氟西汀组(P<0.01);中、低剂量组之间差异无统计学意义。结论:脑组织海马区BDNF含量降低是导致恶劣心境发生的机制之一,克郁舒神颗粒能提高海马BDNF的含量,且疗效优于氟西汀。     

疏香灸法治疗便秘型肠易激综合征20例临床观察

目的:观察疏香灸法治疗便秘型肠易激综合征(肝郁气滞型)的临床疗效.方法:将40例便秘型肠易激综合征(肝郁气滞型)随机分为治疗组和对照组各20例.治疗组使用疏香灸治疗,对照组使用莫沙必利片治疗.两组均治疗4周,观察对比两组的临床疗效.结果:总有效率治疗组为90.0%,对照组为45.0%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:疏香灸治疗便秘型肠易激综合征(肝郁气滞型)具有良好疗效,且操作简单.     

丹芩消郁合剂结合刺络拔罐法治疗肝郁湿热型痤疮35例

目的:观察丹芩消郁合剂结合刺络拔罐法治疗肝郁湿热型痤疮的临床疗效。方法:选择肝郁湿热型中度痤疮患者70例,随机分为治疗组和对照组,每组各35例。治疗组口服丹芩消郁合剂结合刺络拔罐治疗,对照组口服丹参酮胶囊治疗。观察两组患者的临床疗效,比较两组患者治疗前后中医证候积分变化情况。结果:治疗组有效率为94.29%,对照组有效率为88.57%,两组患者有效率比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗组愈显率为74.29%,对照组愈显率为51.43%,两组患者愈显率比较,差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后两组患者中医证候积分较治疗前显著降低,且治疗组低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:丹芩消郁合剂结合刺络拔罐法治疗肝郁湿热型痤疮,可有效改善患者的临床症状。     

肝郁型黄褐斑小鼠模型的建立及其与现有模型的比较研究

目的：建立并验证肝郁型黄褐斑小鼠模型，并与现有其他模型进行比较。方法：注射黄体酮同时，进行慢性束缚和紫外线局部照射。结果：黄体酮＋紫外线＋束缚复合法造模较其他方法更能导致皮肤丙二醛（MDA）升高和超氧化物歧化酶（SOD）降低以及皮肤黑色素细胞的增加，并且具有肝郁证的行动学表现。结论：黄体酮＋紫外线＋束缚法建立的肝郁型黄褐斑小鼠多因素模型获得成功。     

两种PMS肝气逆证大鼠模型造模方法的效果比对分析

目的：本文主要研究PMS肝气逆证标准化大鼠模型的造模方法。方法：分别采用情志刺激为主择时分段刺激造模法和情志刺激为主连续刺激造模法,制备PMS肝气逆证大鼠模型,选择氟西汀分散片和白香丹胶囊进行药物干预。通过对2种造模方法所得关键行为学指标结果进行比对分析,筛选出最佳造模条件。结果：①择时分段刺激造模法可以诱导大鼠的焦虑样行为,并且在非接受期减弱、接受期加强,大鼠的各行为学指标间发生明显的同步改变,给予临床PMS 肝气逆证有效药物能够改善这一现象;与正常组相比,造模组的各项行为学指标具有统计学差异。②连续刺激造模法也可诱导大鼠的焦虑样行为,但给予药物干预后没有改善;在各项焦虑样行为指标中,仅进入开放臂时间百分比在接受期和非接受期存在明显变化;虽然与接受期相比,模型组大鼠非接受期进入开放臂次数和百分比下降、旷场实验总分提高,但其结果没有统计学差异。结论：情志刺激为主的择时分段刺激造模法,诱导出的PMS肝气逆证大鼠模型,更为契合PMS 肝气逆证患者临床表现。     

越鞠丸加味治疗冠心病心绞痛30例临床观察

目的:观察越鞠丸加味治疗肝郁气滞型冠心病心绞痛的临床疗效。方法:随机将60例肝郁气滞型冠心病心绞痛患者分为治疗组和对照组各30例,对照组采用消心痛治疗,治疗组采用越鞠丸加味治疗,主要观察两组治疗后心绞痛疗效、心电图疗效以及两组治疗前后中医证候积分变化情况和硝酸甘油的减少量。结果:治疗组在心绞痛和心电图疗效方面与对照组比较,P>0.05;在中医证候改善、硝酸甘油减少量方面也明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:越鞠丸加味治疗本病疗效满意。