丹参注射液抑制血小板诱导的乳腺癌细胞体外转移作用

目的 观察丹参注射液对血小板（PLT）诱导的乳腺癌细胞体外转移作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法观察丹参注射液对MDA-MB-231细胞体外生长的影响;采用Oris^TM体外迁移试剂盒检测丹参注射液（终质量浓度分别为4、8、16 g·L^-1）对PLT（1.5×10¹⁰个/L）诱导的乳腺癌细胞体外迁移的影响;采用Transwell小室法检测丹参注射液对PLT诱导的细胞侵袭的影响;采用细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测丹参注射液对PLT诱导的上皮间质转化（EMT）关键性转录因子Slug、Snail蛋白表达的影响;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测丹参注射液（终质量浓度为4、8、16、32、64 g·L^-1）对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）分泌的影响;采用Western blot观察丹参注射液对PLT诱导MDA-MB-231细胞Podoplain（PDPN）蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,丹参注射液组（32、64 g·L^-1）细胞的吸光度A₅₇₀均明显降低（P<0.05,P<0.01）;丹参注射液组（4、8、16 g·L^-1）A₅₇₀差异无统计学意义。与空白组比较,PLT组迁移、侵袭细胞数明显增加,丹参注射液各组则可明显抑制PLT诱导的细胞迁移和侵袭。与空白组比较,PLT组细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显降低,丹参注射液可明显逆转PLT的这一作用。与空白组比较,PLT组Slug、Snail蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,丹参注射液则明显逆转PLT诱导的Snail蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;PLT组TGF-β₁含量显著升高（P<0.01）,丹参注射液组（16、32、64 g·L^-1）可明显降低PLT诱导的TGF-β₁分泌（P<0.05,P<0.01）,其余丹参注射液组对TGF-β₁分泌无明显影响;PLT组细胞PDPN蛋白表达显著升高（P<0.01）,丹参注射液可显著抑制PLT诱导的PDPN表达升高（P<0.01）。结论 丹参注射液可抑制PLT诱导的乳腺癌细胞的迁移、侵袭和EMT作用,其机制可能是通过下调乳腺癌细胞PDPN表达、干扰PLT与肿瘤细胞之间直接作用与PLT分泌TGF-β₁作用无关。     

基于“方证对应”理论探讨主动脉弓缩窄致心力衰竭大鼠模型的中医证型与代谢标志物

目的 观察3种中药注射液对主动脉弓缩窄（TAC）致心力衰竭大鼠模型的疗效差异，基于“方证对应”理论探讨模型的中医证型，从代谢角度揭示方证的生物学基础。方法 对大鼠进行TAC术，造模成功将其后分为模型组、丹红注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参麦注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参附注射液组（6.0 mL·kg^-1）和曲美他嗪组（10 mg·kg^-1），另设立假手术组作对照。药物干预15 d后，对各组进行超声心动图、血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）与心肌组织病理染色检测，对比疗效以遴选有效注射液；运用比色法检测有效注射液干预后的血清糖脂代谢指标，利用超高效液相色谱-质谱法观察心肌组织代谢产物与关联代谢通路。结果 与假手术组比较，模型组左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（FS）显著下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）和NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）。与模型组比较，丹红注射液组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDd、LVIDs、NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）；参附注射液组的NT-proBNP水平明显下降（P<0.05）；参麦注射液组的LVIDd明显上升（P<0.05），NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）；曲美他嗪组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDs和NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。丹红注射液组与曲美他嗪组的血清葡萄糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平明显回调（P<0.05，P<0.01）；丹红注射液组的9种心肌产物回调，涉及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，乙醛酸和二羧酸酯代谢，甘油磷脂代谢；曲美他嗪组的10种心肌产物回调，涉及甘油磷脂代谢。结论 丹红注射液对TAC致心力衰竭模型的疗效显著且优于参附注射液与参麦注射液，推测该模型与心血瘀阻证密切关联；丹红注射液干预模型的生物学机制涉及调节糖脂代谢、氨基酸代谢、丁酸代谢紊乱。     

丹参注射液通过干扰肿瘤细胞与血小板相互作用抑制SKOV3细胞体外增殖

目的 观察丹参注射液对肿瘤细胞与血小板相互作用诱导的卵巢癌细胞增殖的抑制作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法和集落形成法,观察血小板对SKOV3体外生长的诱导作用及丹参注射液（12,24,48 g·L^-1）的抑制作用;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血小板-肿瘤细胞相互作用系统及血小板上清液中转化生长因子-β₁（TGF-β₁）含量,并观察丹参注射液对TGF-β₁分泌的影响;采用微量板法和ELISA观察肿瘤细胞培养上清液对血小板聚集和分泌的影响,并检测丹参注射液的抑制作用;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察丹参注射液对血小板核转录因子-κB（NF-κB）信号转导通路的影响及单独用丹参注射液的影响。结果 与空白组比较,血小板诱导组吸光度A₅₇₀显著升高（P<0.01）;血小板＋丹参注射液组A₅₇₀则较血小板诱导组显著降低（P<0.01）,且与丹参注射液组比较,经血小板诱导的同剂量丹参注射液组细胞增殖抑制率更显著（P<0.01）。与空白组比较,血小板诱导组集落数明显增加（P<0.05）;血小板＋丹参注射液的集落数则明显低于血小板诱导组（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,血小板诱导组上清液中TGF-β₁含量显著升高（P<0.01）;血小板＋丹参注射液组TGF-β₁含量显著降低（P<0.01）;与丹参注射液（24 g·L^-1）组比较,经血小板诱导的同剂量丹参注射液组抑制率更高（P<0.01）。与空白组比较,经丹参注射液处理的血小板上清中TGF-β₁明显减少（P<0.05,P<0.01）;经丹参注射液处理的SKOV3上清中TGF-β₁的含量差异无统计学意义。与空白组比较,SKOV3细胞上清液诱导组的血小板聚集、血栓素A₂（TXB₂）和5-羟色胺（5-HT）分泌显著升高（P<0.01）,细胞上清液诱导+丹参注射液组上述指标均显著降低（P<0.01）,且与丹参注射液（24 g·L^-1）组比较,经细胞上清液诱导的同剂量丹参注射液组抑制率更高（P<0.01）。与空白组比较,血小板诱导组的磷酸化TGF-β激活激酶1（p-TAK1）,p-NF-κB表达显著升高,p-NF-κB抑制蛋白（p-IκB）表达显著降低（P<0.01）;血小板+丹参注射液组p-TAK1,p-NF-κB表达均显著降低,p-IκB表达显著升高（P<0.01）。结论 丹参注射液可通过抑制血小板与肿瘤细胞相互作用从而对SKOV3细胞增殖产生的影响,其作用机制可能与抑制血小板分泌TGF-β₁有关。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨加味黄芪甘草汤对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的 探究加味黄芪甘草汤冻干粉对人非小细胞肺癌细胞A549、PC9增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响及可能的机制。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测1.0,2.0,4.0,8.0,12.0 g·L^-1加味黄芪甘草汤冻干粉对非小细胞肺癌细胞增殖的影响;将A549、PC9细胞分为空白组和加味黄芪甘草汤低、中、高组（2.0,4.0,8.0 g·L^-1）;平板克隆检测加味黄芪甘草汤对细胞克隆能力的影响;Hoechst 33342染色检测加味黄芪甘草汤对细胞凋亡的影响;划痕实验和Transwell小室实验分别检测其迁移与侵袭能力;微球体形成实验观察加味黄芪甘草汤对肿瘤细胞成球能力的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测多能干细胞维持基因八聚体转录因子（Oct-4）、人性别决定区y框蛋白2（Sox2）、同源盒转录因子（Nanog）的mRNA表达水平,评估肿瘤干细胞活性;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白（Bad）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,活化与非活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3、Caspase-3）,E-钙黏连蛋白（E-cadherin）,N型钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）,基质金属蛋白酶-2（MMP-2）,β-连环蛋白（β-catenin）,c-核蛋白类基因（c-Myc）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）,锌指转录因子（Slug）蛋白表达水平。结果 与空白组比较,A549、PC9细胞经1.0,2.0,4.0,8.0,12.0 g·L^-1加味黄芪甘草汤冻干粉处理24 、48 h,细胞增殖能力均被明显抑制,并呈浓度与时间依赖性（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞的克隆能力（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤高组均能诱导A549、PC9细胞凋亡（P<0.01）;加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞侵袭、迁移能力（P<0.05,P<0.01）;经加味黄芪甘草汤低、中、高组处理后,A549细胞的微球体体积明显缩小,A549、PC9细胞Oct-4、Sox2和Nanog mRNA表达量均降低（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P<0.05,P<0.01）,上调促凋亡蛋白Bad、Bax及cleaved Caspase-3/Caspase-3的表达（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞MMP-2、N-cadherin及Vimentin的表达（P<0.05,P< 0.01）,上调E-cadherin的表达（P<0.05,P<0.01）;加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞β-catenin、c-Myc、Cyclin D₁及Slug表达（P<0.01）。结论 加味黄芪甘草汤可抑制人非小细胞肺癌A549、PC9细胞的增殖、侵袭、迁移、肿瘤干细胞活性及上皮间质转化,并能诱导凋亡,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

热毒宁注射液抗甲型H1N1流感病毒作用机制研究

目的 研究热毒宁注射液体内抗甲型H1N1流感病毒的作用及其机制。方法 采用甲型H1N1流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠制备肺炎模型,观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠平均存活时间、存活率、肺指数、病毒载量及细胞因子的影响。结果 与模型组比较,热毒宁注射液显著提高病毒感染小鼠的存活率、延长小鼠平均存活时间（P＜0.05、0.01）;显著降低病毒感染小鼠肺指数、肺组织病毒载量（P＜0.05、0.01）;提高肺组织γ干扰素（IFN-γ）水平,降低白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结论 热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高IFN-γ水平,降低IL-6、TNF-α水平有关。     

参白解毒方抑制HCT116细胞增殖的药效及机制

目的 探讨参白解毒方（SBJDF）抑制结直肠癌（CRC）细胞HCT116增殖的药效及机制。方法 利用参白解毒方（0、0.25、0.5、1、2、4 g·L^-1）处理HCT116细胞48 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测参白解毒方对HCT116细胞活力的影响，分别设置空白组、参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组，倒置显微镜观察参白解毒方对HCT116细胞形态的影响，克隆形成实验观察参白解毒方对HCT116细胞增殖能力的影响，JC-1探针检测参白解毒方对HCT116细胞线粒体膜电位（Δψm）的影响，流式细胞仪检测HCT116细胞周期分布和细胞凋亡率，蛋白免疫印迹法（Western blot）分析参白解毒方对细胞周期，抗凋亡以及核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的影响。结果 参白解毒方有效抑制HCT116细胞活力，引起细胞形态改变，呈浓度依赖性；与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组克隆形成率均明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组诱导HCT116细胞发生G₀/G₁期阻滞（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组周期蛋白D₁（CyclinD₁）表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组细胞周期蛋白A₂（CyclinA₂），周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（4 g·L^-1）组周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）表达显著下降（P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组课诱导HCT116细胞凋亡，并下调抗凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达（P<0.05，P<0.01），降低HCT116细胞线粒体膜电位；与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组可下调NF-κB信号通路相关蛋白IκB激酶α（IKKα）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化p65蛋白（p-p65）的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 参白解毒方有效抑制HCT116细胞增殖，其机制可能通过抑制HCT116细胞NF-κB信号通路的激活，引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡。     

参芎葡萄糖注射液对不同阶段急性缺血性脑卒中患者疗效及安全性的影响※

目的 研究参芎葡萄糖注射液对不同阶段急性缺血性脑卒中患者疗效及不良事件的差异。方法 将120例中度急性缺血性脑卒中患者随机分为治疗组和对照组,各60例,每组均包含30例急性早期（病程6~72 h）患者和30例急性中期（病程3~7 d）患者。对照组接受常规基础治疗,治疗组在对照组的基础上加用参芎葡萄糖注射液治疗,共治疗2 w。观察两组不同阶段治疗前后的NIHSS评分、mRS评分、颅脑影像学变化,对比其疗效及不良事件发生率。结果 治疗组的急性早期组、急性中期组的总有效率比较无统计学差异（P>0.05）,但均显著高于同期对照组（P<0.05）;治疗组的急性早期组的不良事件发生率显著高于治疗组的急性中期组及对照组（P<0.05）。结论 对于不同阶段的中度急性缺血性脑卒中患者,参芎葡萄糖注射液均能提高总有效率,但急性早期（6~72 h）比急性中期（3~7 d）开始治疗的不良事件发生率高。     

香丹注射液和清开灵注射液联合用药对急性炎症血栓模型大鼠脏器的保护作用

目的 基于血栓变化、炎性指标、脏器功能和病理改变等考察香丹注射液（Xiangdan injection,XDI）和清开灵注射液（Qingkailing injection, QKLI）联合用药在炎症血栓动物模型的治疗上是否具有协同增效作用。方法 100只雄性SD大鼠,根据体质量随机分为正常组,炎症血栓模型组,XDI组（2.5,5 mL·kg^-1）,QKLI组（5,10 mL·kg^-1）,XDI+QKLI组［（2.5+5） mL·kg^-1,（2.5+10） mL·kg^-1,（5+5） mL·kg^-1,（5+10） mL·kg^-1,每组10只大鼠。各组均腹腔注射给与相应注射液,每天1次,共4 d,正常组和模型组注射生理盐水。给药第2天,除正常组外,其余各组大鼠均造模,即先采用25 mg·kg^-1角叉菜胶腹腔注射入大鼠体内,16 h后大鼠再尾静脉注射50 μg·kg^-1脂多糖（LPS）。注射LPS 24 h后,各组大鼠测定肝脏指数、肾脏指数,测定血小板（PLT）数量,测量血栓长度,全自动生化分析仪测定各项肝肾功能天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,丙氨酸氨基转移酶（ALT）,碱性磷酸酶（ALP）,肌酐（Crea）及尿素氮（BUN）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎性因子白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,苏木素-伊红（HE）染色观察心、肝、肺、肾脏组织病理学变化,以及观察脏器病变分级情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠PLT数量显著下降,大鼠尾部血栓长度显著增加,肝脏指数显著升高,肝肾功能ALT,ALP,BUN含量明显升高,IL-6和TNF-α含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,肝、肺、肾脏组织出现明显病理损伤（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,XDI 5 mL·kg^-1组明显降低大鼠血清ALT和ALP含量（P<0.05,P<0.01）,QKLI 5,10 mL·kg^-1组大鼠血清ALT,ALP和TNF-α含量明显下降（P<0.05,P<0.01）,XDI 5 mL·kg^-1和QKLI 10 mL·kg^-1单独用药均对LPS引起的肺脏病变损伤有明显减轻作用（P<0.05）;XDI和QKLI合用后,明显降低大鼠的ALT,AST,ALP和TNF-α含量,尤其是XDI和QKLI合用（5+10） mL·kg^-1组效果最为明显（P<0.05,P<0.01）,并且大鼠尾部血栓长度明显缩短（P<0.05）,肺脏病变程度也减轻（P<0.05）。与部分相同剂量XDI或QKLI单用组比较,两药合用后,大鼠血清ALT,BUN,TNF-α含量和肝脏指数都明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 XDI和QKLI单独用药对炎症血栓模型大鼠的脏器功能和器质损害及炎症反应有一定改善作用和抑制作用。两者合用后相对其单独用药,对于减少静脉血栓长度,改善肝肾功能,降低炎性因子,保护肺、肝、肾等脏器结构都有一定协同增效作用。     

哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

目的 研究哈蟆油蛋白酶解物（ORPH）对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。方法 复合酶解法制备ORPH,以400 mmol·L^-1乙醇建立L-02肝细胞损伤模型,细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,JC-1/Hochest染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化,研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制。结果 CCK-8法结果表明400 mmol·L^-1乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤;与空白组比较,模型组L-02细胞活力显著下降（P<0.01）,细胞处于G₀/G₁期的细胞占比显著升高（P<0.01）,细胞总凋亡率显著升高（P<0.01）,线粒体膜电位下降;B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）,细胞色素C（Cyt C）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）凋亡相关蛋白的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）明显上调（P<0.05,P<0.01）,且焦亡蛋白Caspase-1,白细胞介素-1β（IL-1β）表达明显增强（P<0.05）,Bcl-2显著下降（P<0.01）;与模型组比较,ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善（P<0.05,P<0.01）,细胞总凋亡率显著下降（P<0.01）,线粒体膜电位升高,呈剂量相关性;Bax,Cyt C,Caspase-3蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势（P<0.05,P<0.01）。结论 ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤,改善恢复线粒体膜电位,降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达,并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达,从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激,对酒精性肝损伤起到治疗作用。     

对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡、PI3K/Akt和JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 探讨对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）和c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶（JNK/p38 MAPK）信号通路的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,设置空白组和不同质量浓度（100、150、200、250、300 mg·L^-1）对叶百部总生物碱组。利用噻唑蓝（MTT）比色法、平板克隆实验观察对叶百部总生物碱对A549细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）/碘化丙锭（PI）双染法观察细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）和Bcl-2表达及PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达。结果 与空白组比较,对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞增殖抑制率显著增高（P<0.01）;对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞克隆抑制率显著升高,细胞克隆形成率显著降低（P<0.01）。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞出现染色质凝聚,荧光反应加强等典型的细胞凋亡特征。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2蛋白表达（P<0.01）;对叶百部总生物碱对PI3K、Akt、JNK、p38 MAPK总蛋白表达无明显影响,对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显下调PI3K、Akt磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;明显上调p38 MAPK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;对叶百部总生物碱（200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调JNK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱可抑制人肺癌A549细胞的增殖,并能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。     

芹菜素通过PI3K/Akt和MAPK信号通路诱导人大肠癌CL187细胞凋亡

目的 观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法 选择人大肠癌CL187细胞，利用芹菜素（0、30、45、60 mg·L^-1）进行干预后，采用噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用；Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芹菜素对CL187细胞胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）观察芹菜素对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中Akt、磷酸化（p）-Akt及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果 与空白组比较，芹菜素组细胞存活率显著降低，细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）；与空白组比较，芹菜素组细胞克隆数和克隆形成率显著降低，克隆形成抑制率显著升高（P<0.01）；不同浓度芹菜素干预CL187细胞48 h，与空白组比较，在荧光显微镜下可观察到细胞核固缩，染色质凝聚，细胞荧光反应增强等典型的细胞凋亡特征；与空白组比较，芹菜素组（45、60 mg·L^-1）抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），芹菜素组促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组促凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）促凋亡蛋白Bax蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组（60 mg·L^-1）Akt蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组JNK、p-JNK蛋白表达明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（60 mg·L^-1） p38 MAPK蛋白表达明显上调（P<0.05），芹菜素组p-p38 MAPK蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组p-Akt/Akt明显降低（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-ERK1/2/ERK1/2显著降低（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-JNK/JNK明显升高（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-p38 MAPK/p38 MAPK显著升高（P<0.05，P<0.01）。结论 芹菜素可抑制大肠癌CL187细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和调控MAPK信号通路相关蛋白的表达有关。     

温经汤对子宫内膜异位症患者异位内膜间质细胞HIF-1α表达及线粒体功能的调控作用

目的 从调控低氧应激及线粒体功能角度探讨温经汤防治子宫内膜异位症（EMT）的作用机制。方法 采用消化法原代培养EMT患者异位子宫内膜间质细胞（ESCs），实验设正常（Control）组、5%空白血清（5% KBXQ）组、10%空白血清（10% KBXQ）组、5%温经汤血清（5% WJTXQ）组、10%温经汤血清（10% WJTXQ）组。噻唑蓝（MTT）比色法检测不同组ESCs增殖情况，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA及蛋白表达，透射电镜观察ESCs线粒体超微结构，高内涵分析（HCS）法多参数同时检测细胞线粒体功能［线粒体膜电位，线粒体膜电位（MMP）和细胞色素C（Cyt C）表达］及细胞凋亡情况（细胞膜通透性、细胞核荧光强度、细胞核大小及细胞数量），流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），Bcl-2和剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达。结果 与Control组比较，5% KBXQ和10% KBXQ组细胞活力显著增加（P<0.01）；HIF-1α mRNA及蛋白表达水平无明显变化；透射电镜观察可见线粒体嵴明显，线粒体内外膜清晰；HCS多通道荧光染色显示，MMP及Cyt C表达、细胞膜通透性无显著变化，细胞核呈现均匀淡染；细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2值均无明显变化。与Control组及相应体积分数KBXQ组比较，5% WJTXQ及10% WJTXQ组细胞活力显著下降（P<0.01）；HIF-1α mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；线粒体超微结构破坏，部分线粒体肿胀，嵴模糊；MMP显著降低，Cyt C释放量明显增加（P<0.05，P<0.01）；细胞膜通透性显著增加（P<0.01），并可观察到核固缩、核内DNA凝集、细胞数量下降等凋亡特征（P<0.05，P<0.01）；流式细胞术结果显示，细胞凋亡率显著升高（P<0.01），与HCS分析结果一致；且cleaved Caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2值明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 温经汤能够下调异位ESCs中HIF-1α表达而改善低氧应激，抑制细胞增殖，降低线粒体生物活性，诱导细胞凋亡，这可能是其防治EMT的作用机制。     

千金子制霜前后提取物对人胚肾细胞HEK293的体外毒性作用

目的 比较千金子制霜前后提取物对正常人胚肾细胞HEK293的影响,探究千金子制霜减毒的作用机制。方法 采用HEK293细胞为体外模型,随机分为对照组,千金子生品低、中、高质量浓度（100、200、400 μg·mL^–1）组和千金子霜品低、中、高质量浓度（100、200、400 μg·mL^–1）组。细胞体外培养后,分别给予等体积的无血清培养液和千金子生品、霜品提取物溶液,各组均设置3个复孔。采用CCK-8法评价细胞存活率,利用倒置显微镜观察细胞数量及形态变化;碘化丙啶（PI）染色法和Annexin V-FITC/PI双重染色法检测细胞周期和凋亡情况;试剂盒法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽（GSH）、肌酐（Cr）和细胞裂解液中尿素氮（BUN）水平。结果 与对照组比较,千金子生品各质量浓度组HEK293细胞存活率降低,细胞形态异常,细胞数量减少,G₀/G₁、G₁/G₂期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显增加,细胞凋亡率升高（P<0.01）,LDH、BUN、Cr水平升高（P<0.05,P<0.01）,GSH水平降低（P<0.01）;与千金子生品组比较,千金子霜品相应质量浓度可显著增加HEK293细胞存活率（P<0.01）,改善细胞形态,增加G₀/G₁期、G₁/G₂期细胞比例,降低S期细胞比例,同时能明显降低LDH、BUN、Cr水平（P<0.05,P<0.01）,提高GSH水平（P<0.01）。结论 千金子制霜后可能通过减轻细胞周期阻滞和细胞氧化损伤改善肾细胞功能、减少细胞凋亡,从而降低体外肾毒性。     

清开灵注射液辅助治疗小儿脓毒症毒热证的临床疗效

目的 评价清开灵注射液辅助治疗小儿脓毒症毒热证的临床疗效和抗炎、抗凝及心脏损伤保护作用研究。方法 按随机数字表法将80例患儿分为对照组和观察组各40例。两组均给予液体复苏、抗感染、抗炎、抗凝、血管活性药物及重要器官功能保护等综合治疗措施。观察组采用清开灵注射液，每次5~10 mL，稀释后静脉滴注，1次/d。两组疗程均为5 d。进行治疗前后儿童年龄适应性序贯器官衰竭评分（qSOFA），小儿危重症评分（PCIS）和急性生理及慢性健康评分Ⅱ（APACHEⅡ）；检测治疗前后降钙素原（PCT），血清淀粉样蛋白A（SAA），肝素结合蛋白（HBP），肿瘤坏死因子-α（TNF-α），超敏C反应蛋白（hs-CRP），白细胞介素-6（IL-6），IL-10，N末端脑钠肽前体（NT-proBNP），高敏心肌肌钙蛋白T（hs-cTnT）水平，心肌肌钙蛋I（cTnI），肌酸激酶同工酶（CK-MB），D-二聚体（D-D），纤维蛋白原（FIB）和抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）水平。结果 治疗后观察组APACHEⅡ和qSOFA评分均低于对照组（P<0.05），PCIS评分高于对照组（P<0.05）；观察组PCT，SAA，HBP，TNF-α，hs-CRP和IL-6水平均低于对照组（P<0.01），IL-10水平高于对照组（P<0.01）；观察组NT-proBNP，hs-cTnT，cTnI和CK-MB水平均低于对照组（P<0.01）；观察组D-D，FIB水平均低于对照组（P<0.01），AT-Ⅲ活性高于对照组（P<0.01）。结论 清开灵注射液辅助用于脓毒症毒热证患儿，可起到抗炎、抗凝、减轻感染和心肌损伤等作用，从而起到减轻病情程度，改善预后的效果。     

加味四君子汤通过调控Fibulin-5，p-Akt表达抗脑缺血大鼠神经细胞失巢凋亡机制

目的 探讨加味四君子汤对大鼠脑缺血再灌注（I/R）损伤后缺血侧海马区脑组织纤维蛋白-5（Fibulin-5）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达及对神经细胞失巢凋亡的影响。方法 将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组（3.2 mg·kg^-1）,加味四君子汤高、中、低剂量组（19.08,9.54,4.77 g·kg^-1）。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,7 d后处死大鼠,处死前进行神经功能缺损评分,采用苏木素-伊红（HE）染色进行组织病理学观察,原位末端标记法（TUNEL）染色检测神经细胞凋亡指数,免疫组化法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺血侧海马区脑组织Fibulin-5及p-Akt蛋白表达情况。结果 神经功能缺损评分结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高（P<0.01）;与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠神经功能缺损评分均明显降低（P<0.05,P<0.01）。免疫组化结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠Fibulin-5,p-Akt蛋白表达,神经细胞凋亡指数均明显增高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠Fibulin-5,p-Akt蛋白表达均明显增加（P<0.05,P<0.01）,神经细胞凋亡指数均明显降低（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果显示,与假手术组比较,模型组Fibulin-5,p-Akt蛋白相对表达显著下调（P<0.01）;与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组Fibulin-5,p-Akt蛋白表达均明显上升（P<0.05,P<0.01）。结论 加味四君子汤可能通过稳定神经元细胞外基质（ECM）Fibulin-5,从而增加了ECM对细胞的黏附作用,促进p-Akt蛋白的表达,从而抑制神经细胞凋亡,保护脑缺血损伤。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨乌梅丸含药血清对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的 观察乌梅丸含药血清对人胰腺癌SW1990细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法 制备乌梅丸含药血清,体外培养胰腺癌细胞株SW1990,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法筛选乌梅丸含药血清最佳作用时间用于后续实验;将SW1990细胞分为空白组和乌梅丸低、中、高组（含药血清2%、4%、8%）,利用平板克隆实验、细胞划痕实验和细胞侵袭实验分别检测其克隆形成、迁移和侵袭能力;流式细胞术检测乌梅丸含药血清对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测SW1990细胞中凋亡相关蛋白,B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,细胞色素C（Cyt C）,活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）、cleaved Caspase-9,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路中PI3K,磷酸化（p）-PI3K,Akt,磷酸化（p）-Akt蛋白表达水平。结果 与空白组比较,作用72 h,乌梅丸低、中、高组吸光度A显著降低（P<0.01）,与乌梅丸低组比较,乌梅丸中、高组A均显著降低（P<0.01）,与乌梅丸中组比较,乌梅丸高组A显著降低（P<0.01）,说明乌梅丸作用72 h可呈剂量依赖性抑制SW1990细胞增殖能力,药物最佳作用时间为72 h;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组SW1990细胞侵袭能力显著减弱（P<0.01）,且呈浓度依赖性;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组细胞克隆形成能力、迁移能力均有下降（P<0.05,P<0.01）,且呈浓度依赖性;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组细胞的总凋亡率显著升高（P<0.01）,乌梅丸诱导凋亡作用随给药剂量增加而增强;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.01）,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9,Cyt C,Bax蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）,且呈现出一定的量效关系;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组p-PI3K,p-Akt蛋白表达均有减少（P<0.05,P<0.01）,且随着剂量的增加,蛋白表达逐渐降低,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt明显降低（P<0.05,P<0.01）,且随着剂量的增加,比值逐渐降低。结论 乌梅丸能明显抑制胰腺癌SW1990细胞的恶性生物学行为,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,下调PI3K/Akt通路中的蛋白磷酸化水平有关。     

当归芍药散含药血清调控UPP途径对Aβ1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制

目的 探讨当归芍药散（DSS）含药血清对β淀粉样蛋白（Aβ）_1-40损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的保护作用及对泛素-蛋白酶体途径（UPP）的调控作用机制。方法 采用Aβ_1-40干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、DSS含药血清高、中、低剂量组（10%、5%、2.5%）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞Aβ和磷酸化（p）-Tau蛋白含量,免疫荧光细胞化学（ICC）标记UPP重要靶点泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）和UCHL3蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Ub、E3、26S、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白的表达。结果 根据CCK-8实验结果,筛选5 μmol·L^-1、48 h为PC12细胞损伤最佳造模条件。与空白组比较,模型组细胞存活率降低（P<0.05）、凋亡率升高（P<0.05）,Aβ及p-Tau表达升高（P<0.05）,Ub蛋白及mRNA表达升高,26S、E3、UCHL1+3蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）。与模型组比较,DSS中剂量组细胞存活率升高（P<0.05）;DSS各剂量组细胞凋亡率下降（P<0.05）;DSS各剂量组Aβ含量降低（P<0.05）,DSS高、中剂量组p-Tau 含量降低（P<0.05）;DSS各剂量组Ub mRNA表达降低（P<0.05）,DSS各剂量组26S mRNA表达升高（P<0.05）,DSS中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（P<0.05）,DSS高、中剂量组E3和UCHL 3mRNA表达升高（P<0.05）;DSS各剂量组Ub蛋白表达降低,DSS高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高,以DSS中剂量效果最佳。结论 DSS含药血清可提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、清除Aβ和p-Tau蛋白沉积,对Aβ_1-40损伤PC12细胞有保护作用,其作用可能是通过调控UPP降低Ub表达及升高26S、E3、UCHL1及UCHL3表达来发挥。     

半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中PMN-MDSCs凋亡的影响

目的 观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞（PMN-MDSCs）凋亡的影响。方法 制备半夏泻心汤含药肠吸收液,以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型,采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法筛选0.63 g·mL^-1复溶液制备而成的0~100%半夏泻心汤含药肠吸收液的最佳干预浓度及时间,分为空白组、模型组、奥沙利铂组（10 mg·L^-1）及半夏泻心汤组（26%、18%、10%含药肠吸收液）,采用CCK-8法检测PMN-MDSCs的增殖,流式细胞术检测PMN-MDSCs的凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PMN-MDSCs胃癌微环境凋亡相关蛋白,B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平。结果 作用24、48 h,与空白组比较,5%、50%、75%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率均有升高（（P<0.05,P<0.01）,作用72 h,除50%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率低于48 h（P<0.01）,其余浓度各自抑制率差异无统计学意义,且48 h半数抑制浓度（IC₅₀）为18.40%,说明18%半夏泻心汤含药肠吸收液在48 h为最佳干预浓度及时间。与空白组比较,模型组PMN-MDSCs的存活率明显升高（P<0.05）,凋亡率明显下降（P<0.05）;与模型组比较,半夏泻心汤组PMN-MDSCs存活率均明显降低（P<0.05）,凋亡率明显升高（P<0.05）,以半夏泻心汤组（26%含药肠吸收液）最为明显（P<0.05）。与空白组比较,模型组PMN-MDSCs促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显降低（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升（P<0.05）。与模型组比较,奥沙利铂组、半夏泻心汤组PMN-MDSCs Caspase-3蛋白表达升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）,奥沙利铂组、半夏泻心汤组（10%含药肠吸收液）Bax蛋白表达升高（P<0.05）。结论 半夏泻心汤含药肠吸收液能通过调控胃癌微环境PMN-MDSCs凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达,诱导PMN-MDSCs凋亡。     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨当归-川芎含药血清对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究当归-川芎含药血清（Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum,ASRCRS）对过氧化氢（H₂O₂）诱导高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12细胞）氧化损伤的保护作用及其分子机制。方法 采用H₂O₂体外诱导PC12细胞氧化损伤,并以终体积分数为15%的ASRCRS低、中、高剂量组进行干预。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率;荧光倒置显微镜观察细胞形态;试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）,丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力及活性氧（ROS）分布水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子E₂相关因子2（Nrf2）,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）,血红素加氧酶-1（HO-1）,SOD1蛋白的表达水平。结果 选择300 μmol·L^-1 H₂O₂刺激24 h作为氧化损伤造模的条件。与正常组比较,H₂O₂模型组细胞形态异常,细胞存活率显著降低（P<0.01）;LDH,MDA含量升高（P<0.01）,SOD活力降低,ROS在细胞内分布增加;Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平均明显下调（P<0.05,P<0.01）,Keap1蛋白表达水平明显上调（P<0.01）。与模型组比较,ASRCRS不同剂量组均能改善细胞形态,提高细胞存活率,抑制细胞凋亡;显著提高SOD酶活力（P<0.01）,抑制LDH的释放（P<0.01）和ROS的生成,降低MDA含量（P<0.01）;明显上调Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）,显著下调Keap1蛋白表达水平（P<0.01）。结论 当归-川芎含药血清可能是通过上调Nrf2的蛋白表达,激活Nrf2/抗氧化反应元件（ARE）信号通路,增强细胞抗氧化损伤能力,抑制细胞凋亡,从而发挥保护H₂O₂损伤的PC12细胞的作用。     

热毒宁注射液抗A16型柯萨奇病毒的研究

目的 研究热毒宁注射液对A16型柯萨奇病毒（CoxA16）感染Vero细胞及乳鼠模型的抗病毒作用。方法 采用75 TCID₅₀和50 TCID₅₀ CoxA16感染Vero细胞,建立细胞模型;5日龄ICR乳鼠ip感染1×10⁶ TCID₅₀ CoxA16,建立动物模型。观察热毒宁注射液对CoxA16感染Vero细胞病变的影响,体内实验观察热毒宁注射液对病毒感染乳鼠死亡率、生存时间、体质量变化率、临床症状评分的影响。结果 在Vero细胞模型上,热毒宁注射液（生药5.0 mg/mL）显著抑制75 TCID₅₀和50 TCID₅₀ CoxA16引起的细胞病变;在5日龄ICR乳鼠模型上,热毒宁注射液明显缓解CoxA16导致的乳鼠死亡,延长乳鼠生存时间和恢复乳鼠生长抑制;同时热毒宁注射液缓解病毒感染导致的临床症状。结论 热毒宁注射液在体内外均有抗CoxA16作用,为其临床用于治疗手足口病提供依据。