丹参注射液通过干扰肿瘤细胞与血小板相互作用抑制SKOV3细胞体外增殖

目的 观察丹参注射液对肿瘤细胞与血小板相互作用诱导的卵巢癌细胞增殖的抑制作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法和集落形成法,观察血小板对SKOV3体外生长的诱导作用及丹参注射液（12,24,48 g·L^-1）的抑制作用;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血小板-肿瘤细胞相互作用系统及血小板上清液中转化生长因子-β₁（TGF-β₁）含量,并观察丹参注射液对TGF-β₁分泌的影响;采用微量板法和ELISA观察肿瘤细胞培养上清液对血小板聚集和分泌的影响,并检测丹参注射液的抑制作用;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察丹参注射液对血小板核转录因子-κB（NF-κB）信号转导通路的影响及单独用丹参注射液的影响。结果 与空白组比较,血小板诱导组吸光度A₅₇₀显著升高（P<0.01）;血小板＋丹参注射液组A₅₇₀则较血小板诱导组显著降低（P<0.01）,且与丹参注射液组比较,经血小板诱导的同剂量丹参注射液组细胞增殖抑制率更显著（P<0.01）。与空白组比较,血小板诱导组集落数明显增加（P<0.05）;血小板＋丹参注射液的集落数则明显低于血小板诱导组（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,血小板诱导组上清液中TGF-β₁含量显著升高（P<0.01）;血小板＋丹参注射液组TGF-β₁含量显著降低（P<0.01）;与丹参注射液（24 g·L^-1）组比较,经血小板诱导的同剂量丹参注射液组抑制率更高（P<0.01）。与空白组比较,经丹参注射液处理的血小板上清中TGF-β₁明显减少（P<0.05,P<0.01）;经丹参注射液处理的SKOV3上清中TGF-β₁的含量差异无统计学意义。与空白组比较,SKOV3细胞上清液诱导组的血小板聚集、血栓素A₂（TXB₂）和5-羟色胺（5-HT）分泌显著升高（P<0.01）,细胞上清液诱导+丹参注射液组上述指标均显著降低（P<0.01）,且与丹参注射液（24 g·L^-1）组比较,经细胞上清液诱导的同剂量丹参注射液组抑制率更高（P<0.01）。与空白组比较,血小板诱导组的磷酸化TGF-β激活激酶1（p-TAK1）,p-NF-κB表达显著升高,p-NF-κB抑制蛋白（p-IκB）表达显著降低（P<0.01）;血小板+丹参注射液组p-TAK1,p-NF-κB表达均显著降低,p-IκB表达显著升高（P<0.01）。结论 丹参注射液可通过抑制血小板与肿瘤细胞相互作用从而对SKOV3细胞增殖产生的影响,其作用机制可能与抑制血小板分泌TGF-β₁有关。     

丹参注射液抑制血小板诱导的乳腺癌细胞体外转移作用

目的 观察丹参注射液对血小板（PLT）诱导的乳腺癌细胞体外转移作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法观察丹参注射液对MDA-MB-231细胞体外生长的影响;采用Oris^TM体外迁移试剂盒检测丹参注射液（终质量浓度分别为4、8、16 g·L^-1）对PLT（1.5×10¹⁰个/L）诱导的乳腺癌细胞体外迁移的影响;采用Transwell小室法检测丹参注射液对PLT诱导的细胞侵袭的影响;采用细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测丹参注射液对PLT诱导的上皮间质转化（EMT）关键性转录因子Slug、Snail蛋白表达的影响;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测丹参注射液（终质量浓度为4、8、16、32、64 g·L^-1）对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）分泌的影响;采用Western blot观察丹参注射液对PLT诱导MDA-MB-231细胞Podoplain（PDPN）蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,丹参注射液组（32、64 g·L^-1）细胞的吸光度A₅₇₀均明显降低（P<0.05,P<0.01）;丹参注射液组（4、8、16 g·L^-1）A₅₇₀差异无统计学意义。与空白组比较,PLT组迁移、侵袭细胞数明显增加,丹参注射液各组则可明显抑制PLT诱导的细胞迁移和侵袭。与空白组比较,PLT组细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显降低,丹参注射液可明显逆转PLT的这一作用。与空白组比较,PLT组Slug、Snail蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,丹参注射液则明显逆转PLT诱导的Snail蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;PLT组TGF-β₁含量显著升高（P<0.01）,丹参注射液组（16、32、64 g·L^-1）可明显降低PLT诱导的TGF-β₁分泌（P<0.05,P<0.01）,其余丹参注射液组对TGF-β₁分泌无明显影响;PLT组细胞PDPN蛋白表达显著升高（P<0.01）,丹参注射液可显著抑制PLT诱导的PDPN表达升高（P<0.01）。结论 丹参注射液可抑制PLT诱导的乳腺癌细胞的迁移、侵袭和EMT作用,其机制可能是通过下调乳腺癌细胞PDPN表达、干扰PLT与肿瘤细胞之间直接作用与PLT分泌TGF-β₁作用无关。     

蚊母草提取物通过抑制Runx2活性抗乳腺癌破骨性骨转移作用

目的 研究蚊母草提取物（EVP）的抗乳腺癌破骨性骨转移作用。方法 采用左心室注射肿瘤细胞法建立裸鼠骨转移模型,通过巢式聚合酶链式反应（PCR）检测裸鼠骨髓组织中人细胞角蛋白-19（Ck-19）基因表达量确定肿瘤细胞的骨转移程度及EVP的抑制作用;采用多核细胞计数法及组织蛋白酶K（Cathepsin K）分泌量检测法,确定小鼠破骨细胞前体骨髓巨噬细胞（BMMs）的活性,并观察EVP（40、80、160 g·L^-1）的抑制作用;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察EVP对BMMs细胞内核转录因子-κB受体活化因子（RANK）、Runt相关转录因子2（Runx2）、磷酸化Runx2（p-Runx2）及其下游蛋白基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响;采用明胶酶谱法检测EVP对基质金属蛋白酶（MMPs）水解明胶活性的影响。结果 与空白组比较,裸鼠给予EVP 5.5、11、22 g·kg^-1,其骨髓组织中人Ck-19水平明显降低（P<0.05）,提示EVP具有抗骨转移作用;体外实验显示,与空白组比较,可溶性核转录因子-κB受体活化因子配基（sRANKL）可诱导BMMs分化为多核细胞（P<0.05）,EVP（40、80、160 g·L^-1）可显著抑制上述sRANKL诱导的多核细胞形成（P<0.01）。与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs的Cathepsin K分泌（P<0.01）;与sRANKL组比较,EVP组Cathepsin K分泌量明显下调（P<0.05）。Western blot显示,与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs细胞RANK表达（P<0.01）;与sRANKL组比较,EVP组（40、160 g·L^-1）BMMs细胞表达RANK蛋白明显降低（P<0.05）。与空白组比较,sRANKL可明显增加BMMs细胞p-Runx2和MMP-9表达（P<0.05）;与sRANKL组比较,EVP组（40、160 g·L^-1）BMMs细胞表达的p-Runx2和MMP-9蛋白明显降低（P<0.05）。明胶酶谱显示,与空白组比较,sRANKL可明显增加pro-MMP-9、pro-MMP-2及64 kDa MMP-2水平（P<0.05）;与sRANKL组比较,EVP组pro-MMP-9、64 kDa MMP-2水平明显降低（P<0.05）,且160 g·L^-1EVP处理可明显降低pro-MMP-2水平（P<0.05）。结论 蚊母草提取物可抑制肿瘤细胞诱导的破骨性骨转移,抑制骨形成相关转录因子Runx2活化,进而干扰RANK/RANKL信号转导从而抑制破骨细胞活化可能是其作用机制之一。     

蚊母草提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外运动能力的影响

目的 研究蚊母草提取物(Extracts from Veronica peregrina L.,EVP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外运动能力的影响。方法 采用MTT法检测EVP 40、80、160、320、640 g·L^-1生药浓度(相当于提取物浓度0.168、0.336、0.672、1.344、2.688 mg·mL^-1)对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖的影响,计算各EVP处理组的细胞相对存活率。将MDA-MB-231细胞分为空白组、阳性对照组(BB-94组,终浓度为20 nmol·L^-1)、EVP不同浓度组(终质量浓度为生药40、80、160 g·L^-1的EVP)。采用AP48 Chamber system和OrisTM细胞侵袭试剂盒分别检测EVP对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外迁移和侵袭能力的影响;鬼笔环肽(Phalloidin)染色法观察MDA-MB-231细胞骨架F-actin排列情况;Western Blot法检测细胞Runx2、磷酸化Runx2(p-Runx2)及基...