冠心病血瘀证相关基因研究

目的:筛查冠心病血瘀证病证结合相关基因。方法:区组选择符合诊断标准的冠心病血瘀证、冠心病非血瘀证、非冠心病血瘀证患者和正常健康者共40例,运用外周血mRNA差异显示获得差异条带、反向Northern法阳性验证、克隆测序,并进行生物信息学分析。结果:得到了28条真实差异基因片段序列,于NCBI human genomic数据库中比对分析,获得了与人类基因100％同源的3条（b13、49b、23b）,99％同源的2条（b12、36a）,98％同源（25b、57d）2条。其中的b13为淋巴细胞活化信号分子家族成员1,表达于T、B细胞表面,参与多系统的炎症反应,促进Th2类细胞因子的分泌,在冠心病血瘀证组呈高表达。23b系BCL2相关转录因子1,参与凋亡调控基因BCL2的转录过程,明显表达于冠心病血瘀证组。结论:差异基因中b13、 23b从不同途径,导致或参与了脂代谢、血液高粘高聚高凝状态的形成,并通过分泌炎性细胞因子,调控细胞凋亡,参与了内皮损伤和动脉硬化的形成。与冠心痛血瘀证的病理改变密切相关。     

冠心病血瘀证相关基因研究

目的：筛查冠心病血瘀证病证结合相关基因。方法：区组选择符合诊断标准的冠心病血瘀证、冠心病非血瘀证、非冠心病血瘀证患者和正常健康者共40例，运用外周血mRNA差异显示获得差异条带、反向Northern法阳性验证、克隆测序，并进行生物信息学分析。结果：得到了28条真实差异基因片段序列，于NCBI human genomic数据库中比对分析，获得了与人类基因100％同源的3条(b13、49b、23b)，99％同源的2条(b12、36a)，98％同源(25b、57d)2条。其中的b13为淋巴细胞活化信号分子家族成员1，表达于T、B细胞表面，参与多系统的炎症反应，促进Th2类细胞因子的分泌，在冠心病血瘀证组呈高表达。23b系BCL2相关转录因子1，参与凋亡调控基因BCL2的转录过程，明显表达于冠心病血瘀证组。结论：差异基因中b13、23b从不同途径，导致或参与了脂代谢、血液高粘高聚高凝状态的形成，并通过分泌炎性细胞因子，调控细胞凋亡，参与了内皮损伤和动脉硬化的形成。与冠心病血瘀证的病理改变密切相关。     

冠心病血瘀证遗传相关的差异基因筛选及其功能路径分析

目的 探讨冠心病(coronary heart disease,CHD)血瘀证遗传相关的差异基因功能及目标通路。方法 以家系CHD血瘀证者(A组)及家系CHD非血瘀证者(B组)、家系非CHD血瘀证者(C组)、家系健康人(D组)、非家系CHD血瘀证者(E组)、非家系健康人(F组)为研究对象,应用基因芯片技术比较A组与B、C、D、E组,以及D组与F组的差异基因表达谱;通过基因本体论(gene ontology,GO)分析阐释差异基因的分子功能;通过BioCarta及KEGG网站寻找差异基因所在通路,应用超几何分布统计学方法分析筛选出有意义的目标通路,并用实时荧光定量RT PCR对差异基因进行验证。结果 (1)通过对基因芯片数据的筛选(差异倍数≥3),发现家系CHD血瘀证差异基因表达主要涉及趋化因子、白介素细胞因子、补体系统、基质金属蛋白酶系、成纤维细胞生长因子、内皮细胞黏附因子等。(2)通过相关差异基因(P<0.05)GO分析,找到与CHD血瘀证相关的差异基因的分子功能。(3)经过BioCarta及KEGG通路分析,发现家系CHD血瘀证与遗传相关的差异基因中差异有统计学意义(P<0.05)的目标通路主要涉及到炎症、斑块形成、内皮损伤等方面。经实时荧光定量RT-PCR反应验证了基因芯片准确可靠。结论 CHD血瘀证遗传相关的差异基因与炎症、斑块形成及血管内皮损伤密切相关。     

家系冠心病血瘀证差异基因的研究分析

目的探讨冠心病血瘀证家系差异基因的功能及目标通路。方法应用Affymetrix公司的Human Genome U133 Plus2.0芯片检测家系冠心病血瘀证组(A组)、家系冠心病非血瘀证组(B组)、家系非冠心病血瘀证组(C组)、家系健康人组(D组)的基因表达谱,通过基因本体论(Gene Ontology,GO)分析基因功能;通过Biocarta及KEGG通路找到每一个差异基因所在通路。结果家系冠心病血瘀证差异基因主要以炎症因子为主。当P0.05时研究发现,家系冠心病血瘀证的差异基因表达主要涉及到如下几类基因系的表达改变;1趋化因子;2白介素细胞因子;3基质金属蛋白酶MMPs系;4成纤维细胞生长因子。结论家系冠心病血瘀证相关差异基因,主要涉及到炎症、斑块形成、内皮损伤方面。     

高通量测序筛选冠心病血瘀证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络

目的:筛选冠心病血瘀证相关差异表达非编码RNA(lncRNA),微小RNA(microRNA,miRNA),信使RNA(mRNA),构建基因间调控网络,从转录组层面研究冠心病血瘀证物质基础和病理机制。方法:使用高通量测序技术,分别检测冠心病血瘀证、冠心病非血瘀证和正常(各5例)lncRNA,miRNA和mRNA表达情况,通过交联分析筛选冠心病血瘀证相关的差异基因表达谱。对获得的差异基因进行功能通路分析,根据基因间Pearson相关分析和star Base靶基因预测平台,构建基因间调控网络,通过网络拓扑分析,筛选其中的关键基因。在另一匹配队列中(每组各15例)对基因调控网络中的关键节点进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR)验证。结果:39个lncRNA,229个miRNA和221个mRNA与冠心病血瘀证密切相关。功能与通路分析结果显示,冠心病血瘀证差异表达基因主要与免疫和炎症相关。共有9个lncRNA(均为下调),31个mRNA(11个上调,20个下调)和24个miRNA(14个上调,10个下调)构成共调控网络,包括76个基因间调控关系。CTA-384D8.35,CTB-114C7.4,RP11-567M16.6和hsa-miR-3158-3p是冠心病血瘀证基因调控网络中的关键节点。Real-time PCR结果验证了上述结果。结论:冠心病血瘀证存在lncRNA-miRNA-mRNA差异表达基因谱,其与免疫和炎症密切相关;差异表达基因间存在相互调控关系,并可依此构建冠心病血瘀证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络。对冠心病血瘀证的物质基础进行深度挖掘,可为从转录组层面开展中医证型相关研究提供了一定的科学基础。     

冠心病血瘀证基因表达谱的遗传异质性研究

目的探讨遗传因素在冠心病血瘀证基因表达谱的影响。方法通过Affymetrix human U133 Plus 2.0芯片检测冠心病血瘀证的基因表达谱,以FC筛选家系冠心病血瘀证和非家系冠心病血瘀证患者的差异基因表达谱,比较二者的差别,并进行GO和pathway的分析。结果若以FC2或FC0.5筛选,家系冠心病血瘀证的差异基因探针占95.88%(1815/1893),非家系冠心病血瘀证为96.31%(2035/2113);以FC3或FC1/3筛选,家系冠心病血瘀证为94.89%(650/685),非家系冠心病血瘀证为95.38%(723/758)。两组人群的异质性表达基因探针中有173个差异探针是相同的,只是表达的方向存在差异,即up或down的相反性。这些差异表达基因在GO和pathway中的分布近似,更说明了二者的差异所在。结论家系冠心病血瘀证的基因表达谱与非家系冠心病血瘀证的基因表达谱存在着明显差异。     

冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态的初步研究

目的 探讨冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化的情况.方法 以家系冠心病血瘀证患者14例为观察对象,家系健康人7例为对照,采用表达谱芯片检测冠心病血瘀证差异表达基因.再收集冠心病血瘀证患者16例和健康人7例,选择其中2个差异基因进行启动子区甲基化特异性PCR(MS-PCR)研究,初步分析冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态.结果 表达谱芯片结果通过倍数变化值(FC)＞3或FC＜1/3、Call=P筛选,共获取差异表达基因26个,选择KLF5和LRP12基因进行MS-PCR,冠心病血瘀证与健康人各启动子甲基化率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 冠心病血瘀证差异基因KLF5和LRP12的启动子甲基化状态和健康人比较无明显区别.     

不稳定型心绞痛气虚血瘀证患者外泌体MicroRNA差异表达

目的 分析冠心病不稳定型心绞痛（UA）气虚血瘀证患者血清外泌体中MicroRNA(miRNA)的差异表达。方法 收集115例UA患者（气虚血瘀证患者59例、非气虚血瘀证患者56例）和36名健康志愿者的外周血液，提取上清中的外泌体。采用高通量测序方法，检测9例气虚血瘀证、9例非气虚血瘀证UA患者以及6名健康志愿者血清外泌体中miRNA，分析他们之间差异表达的miRNA检测结果，确定目标miRNA。再采用qRT-PCR检测方法对未作高通量测试的97例UA患者（50例气虚血瘀证、47例非气虚血瘀证）及30名健康志愿者进行验证。结果 （1）经过高通量测序后分析发现，与健康志愿者比较，miR-125b(P=0.032)、miR-10b(P=0.038)在UA患者血清外泌体中呈高表达。与UA非气虚血瘀证患者比较，miR-125b(P=0.028)、miR-10b(P=0.043)在气虚血瘀证患者血清外泌体中呈高表达。确定miR-125b、miR-10b为本研究的血清外泌体中目标miRNA。（2）对目标miRNA进行qRT-PCR检测验证发现，UA患者血清外泌体中miR-125b、miR-10b表达...     

冠心病稳定型心绞痛血瘀证患者tPAI-1、sICAM-1及MMP-9的表达变化

目的探讨冠心病稳定型心绞痛患者血瘀证组织纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂-1（tPAI-1）、可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达变化及其相互关系。方法采用液相芯片分析系统同步检测206例经冠状动脉造影证实的稳定型心绞痛（SAP）患者血瘀证、非血瘀证及28例健康对照者血清tPAI-1、sICAM-1和MMP-9表达程度,并比较三者之间及其与冠脉病变程度的相关性。结果患者血瘀证、非血瘀证血清tPAI-1、sICAM-1和MMP-9表达均较对照组显著升高,血瘀证组高于非血瘀证组;血瘀证与tPAI-1、sICAM-1和MMP-9具有相关性,后三者之间具有相关性。结论 SAP患者具有一定程度炎性反应和高凝状态,血瘀证患者表现更为明显,可能为冠心病SAP患者中的高危人群。结合相关蛋白质指标可能提高危险分层的敏感性和特异性。     

冠心病血瘀证转录组学研究——病证结合生物标志物研究思路与方法

中医证候的生物学基础研究是影响中医学发展与创新的重大科学问题,证候相关生物标志物及中药干预调控网络的研究对于在证候标准规范的基础上进一步提高诊断效能和临床疗效具有重要意义。因此,在前期冠心病证候标准规范研究的基础上,本项目组以冠心病心绞痛血瘀证为切入点,从分子生物水平对证候进行了深入研究。第一,通过采集累计312例患者外周血基因信息,运用差异显示法、实时定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR),斑点杂交法,高通量芯片,测序等方法,确立了冠心病血瘀证长链非编码核糖核酸-微小核糖核酸-信使核糖核酸(long noncoding ribonucleic acid-micro ribonucleic acid-messenger ribonucleic acid,lncRNA-miRNA-mRNA)3个层面的潜在生物标志物。第二,在前期筛选出的差异基因的基础上,运用生物信息学分析结合细胞功能学验证的方法,构建了冠心病血瘀证基因miRNAmRNA以及lncRNA-miRNA-mRNA 2个水平的调控网络。第三,基于血瘀证差异基因及调控网络,通过累计202例活血化瘀中药干预冠心病心绞痛血瘀证患者的随机对照试验,治疗前后共计400余人次的基因检测,以及活血化瘀中药处理相关细胞模型的体外实验,从基因-蛋白-功能3个层面研究中药作用机制,从分子水平揭示了活血化瘀中药干预冠心病血瘀证的基因调控网络机制。本研究将相关的分子生物学技术及生物信息学方法引入证候的生物学基础研究,建立了一套证候相关生物标志物的研究方法,为证候实质的研究提供了新思路。     

肝病血瘀证临床病理学特点和肝功能变化

肝脏病理组织学检查提示血瘀证组的碎屑坏死,桥形坏死,界板破坏,嗜酸性变等组织学改变明显高于非瘀血证组(P<0.01)。且肝功能的损害与血瘀证呈正相关。     

高敏C反应蛋白与不稳定型心绞痛中医证型相关性研究

目的探讨高敏C反应蛋白(hs-CRP)与不稳定型心绞痛(UAP)中医证型的关系以及hs-CRP与UAP临床危险度的关系。方法选择符合诊断的UAP患者101例,按冠心病中医辨证标准及血瘀证辨证标准进行分型,同时对UAP进行临床危险度分层。结果UAP患者血浆hs-CRP水平较正常对照组明显升高,并随着临床危险度的增加而升高。各中医证型组血浆hs-CRP水平均升高,其中痰热血瘀证组和痰浊血瘀证组显著高于气滞血瘀证组,阴虚血瘀证组显著高于气虚血瘀组和气滞血瘀证组,气滞血瘀证组与气虚血瘀组间无明显差异,痰热血瘀证组、痰浊血瘀证组和阴虚血瘀证组间相比无显著差异。结论UAP的发生与炎症反应有密切相关,血浆hs-CRP水平可反映冠状动脉斑块是否稳定,说明hs-CRP对UAP临床诊断有参考价值,可估计其病情程度,对预测预后有帮助。UAP中医分型与血hs-CRP存在相关性,hs-CRP作为UAP中医辨证及临床危险度分层判定指标有临床价值。     

2型糖尿病心血瘀证病证结合模型大鼠心血管指标病理改变的观察

目的：观察2型糖尿病心血瘀证病证结合大鼠模型的心血管指标的病理改变。方法：采用高脂高热量饲料喂养并结合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射的方法制备实验性2型糖尿病大鼠模型,在此模型基础上再予强的松龙和肾上腺素注射制备2型糖尿病心血瘀证大鼠模型。结果：与其它各组比较,2型糖尿病心血瘀证模型大鼠的心脏湿重与体重的比值显著性增高（P〈0.01）、心电图ST段下移幅度显著性增大（P〈0.01或P〈0.05）、主动脉与心肌形态学均有不同程度的病理改变。结论：2型糖尿病心血瘀证大鼠模型具有心血管病理的改变。     

冠心病介入术后再狭窄辨证分型的研究

本文提出,瘀血是导致冠心病介入术后再狭窄的基本病理因素,活血化瘀是贯穿本病的基本治疗原则.根据气、血、津液相关的理论,实证多从肝郁血瘀、痰瘀交阻论治,虚证则有气虚血瘀、阳虚血瘀之分.临床上灵活应用理气活血法、化痰祛瘀法、益气活血法、温阳活血等法,可取得较满意疗效.     

冠心病与血清尿酸相关性的临床研究进展

通过血清尿酸的生物学特性及病理生理的研究,发现冠心病与血清尿酸关系密切。     

Characteristics of clinical pathology and changes of liver function in blood stasis syndrome in liver diseases]

The experimental study on 30 patients of the Blood Stasis Syndrome of liver diseases was discussed in this paper. Two characteristics were found. One was the pathological feature which manifested as follows: (1) Diagnosis: the Blood Stasis Syndrome of liver disease was mainly diagnosed in the chronic active hepatitis and the early stage of cirrhosis of liver, while that of non-Blood Stasis was mainly observed in the chronic persistent hepatitis (P less than 0.01); (2) Pathological change: The histological changes such as piecemeal necrosis, bridging necrosis, the destruction of limiting plate, eosinophilic change, etc. It was more obvious in the Blood Stasis group than that with non-Blood Stasis Syndrome (P less than 0.01), (3) The manifestation of Blood Stasis Syndrome was not in parallel with the severity of the liver disease. The another characteristic was the changes of liver function, which expressed more markedly in the Blood Stasis group with higher level of SGPT, lower ratio of A/G and increased globulin, they were more obvious than that in non-Blood Stasis group (P less than 0.01).     

促甲状腺激素与冠心病心气虚证的相关研究

目的探讨促甲状腺激素(TSH)与冠心病心气虚证的相关关系。方法对60例冠心病患者和20例正常人均用放射免疫分析技术检测血浆中TSH的变化。结果冠心病心气虚证组与非心气虚证组及正常组比较,血浆TSH无显著差异(P>0.05)。非心气虚组和正常对照组比较,血浆TSH亦无显著差异(P>0.05)。结论TSH与冠心病心气虚证之间具有相关性。     

冠心病中医证型与血液流变学相关性探讨

通过对65例冠心病患者的血液流变学指标检测,探讨冠心病中医证型与血液流变学改变的相关性。65例冠心病患者均表现有血液呈明显黏、凝、聚状态,与正常组有显著差异;其中心血瘀阻组与痰阻心脉组最重,阴寒凝滞组次之,气滞心胸组较轻。提示冠心病的发病机理不仅仅在于“血瘀”,更重要在于“痰瘀互结”。     

麝香保心丸与日本救心丹防治冠心病心绞痛的临床观察

目的：探讨 中药复方麝香保 心丸 防治 冠心病 心绞 痛的 临床 疗效, 并与 同类 药日 本救 心丹 进行 对比观察分析。 方法：６０ 例 确诊为 冠心 病 心绞 痛患 者, 随机、双 盲分 为麝 香 保心 组和 日 本救 心组 。分别给予麝香 保心丸、日本 救心丹各 ２ 丸,每 日３ 次, 口服。结果 ：经４ 周 治疗,两 药均可显 著缓解 患者的临床症状 ;降低 心绞 痛 的发 作频 率; 硝酸 甘油 的日 耗 量以 及心 率; 改 善心 肌 的缺 血 状况 ;提 高心脏的收缩 功能;无明显毒副 作用。结论：麝香 保心丸 和日本 救心丹 两药能 有效 地防治 冠心 病心绞痛。因麝 香保心丸在价格 上具有一定优 势,更适合于临床 长期应用