合成冰片影响血脑屏障开放促槲皮素脑吸收的研究

目的:观察冰片对正常小鼠血脑屏障(blood brain barrier,BBB)开放性的影响及其促进槲皮素脑组织吸收的作用,为芳香开窍药的促BBB开放作用应用于脑部疾病的治疗提供依据。方法:小鼠随机分为单用槲皮素给药组、冰片加槲皮素组、P-糖蛋白抑制剂加槲皮素给药组、5-羟色胺抑制剂加槲皮素给药组等,空白组为对照,各组小鼠分别灌胃给予相应的药物3天后,断头取血和脑组织;采用高效液相色谱法测定小鼠血浆及脑组织中槲皮素含量。结果:与单用槲皮素给药组(50 mg/kg)相比较,冰片(200mg/kg)加槲皮素组(50 mg/kg)、P-糖蛋白抑制剂(56mg/kg)加槲皮素给药组(50 mg/kg)的脑组织槲皮素含量均显著升高(P<0.05),而5-羟色胺抑制剂(25mg/kg)加槲皮素给药组(50 mg/kg)的脑组织槲皮素含量显著下降(P<0.05);与单用槲皮素给药组(50 mg/kg)相比较,冰片(200mg/kg)加槲皮素组(50 mg/kg)、P-糖蛋白抑制剂(56mg/kg)加槲皮素给药组(50 mg/kg)槲的血浆药物浓度均显著下降(P<0.05)。结论:冰片对小鼠生理状态下的血脑屏障具有一定的开放效应,可能是该类药物通过影响P-糖蛋白与5-羟色胺的含量使血脑屏障细胞膜通透性增加从而促进药物吸收,其促血脑屏障开放的机制可能为芳香走窜、引药上行功效的药理基础之一。     

益脑康胶囊对脑梗死大鼠溶栓后血脑屏障的保护作用及对ZO-1蛋白表达的影响

目的:观察益脑康胶囊(YC)配伍对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活剂rt-PA溶栓后血脑屏障通透性及紧密连接的附着蛋白(ZO-1)蛋白表达的影响.方法:将SD大鼠随机等分为假手术组、溶栓组、益脑康胶囊低剂量组(1 g·kg-1)、益脑康胶囊高剂量组(3 g·kg-1),连续口服3d.建立大鼠自体血栓栓塞大脑中动脉闭塞模型,采用分光光度计法及Western blot法分别检测大鼠脑组织伊文思蓝含量及ZO-1蛋白的表达.结果:与假手术组相比,各组脑内EB含量均显著增高,ZO-1蛋白水平明显降低;与溶栓组相比,YC低剂量组脑内EB含量差异不显著,高剂量组脑内EB含量显著下降,高、低剂量组ZO-1蛋白表达水平均显著增加;与YC低剂量组相比,高剂量组脑内EB含量显著下降,ZO-1蛋白表达水平显著增加.结论:益脑康胶囊可以减轻溶栓后血脑屏障破坏,可能与其上调ZO-1蛋白的表达有关.     

穴位注射“冰片液”对血脑屏障通透性的影响

目的 :探讨“冰片液”穴位注射对SD大鼠血脑屏障通透性的影响 ,为临床提高某些中枢神经治疗药疗效提供实验依据。方法 :采用“哑门”穴位注射自制“冰片液” ,观察不同浓度“冰片液”穴位注射对伊文斯蓝 (Even’sBlue,EB)透过血脑屏障的作用 ,并与电针刺激组比较。结果 :“冰片液”穴位注射和电针刺激均可促进EB透过血脑屏障 (P <0 0 0 1 ,P <0 0 5) ,穴位注射“冰片液”高、低剂量组均优于电针组 (P <0 0 5) ,但“冰片液”高、低剂量组间无明显差异 (P >0 0 5)。结论 :“冰片液”穴位注射是促血脑屏障开放的一种有效方法 ,其作用优于电针刺激。     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血后脑水肿的影响

目的观察蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑出血后脑含水量、血脑屏障超微结构、血脑屏障通透性的影响。方法将195只大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊高、中、低剂量组,各组又分为12 h、48 h、72 h三个亚组,采用自体尾部血注入法制备脑出血大鼠模型,采用干湿重法检测脑含水量,伊文思蓝法对各组进行血脑屏障通透性检测,电子显微镜下观察血脑屏障超微结构的变化。结果与模型组比较,ZL低、中、高剂量组脑含水量均明显降低,差异具有统计学意义,低剂量组12h(P0.05),其余各时间点各药物组(P0.01);ZL低、中、高剂量组大鼠脑组织EB含量均有明显降低,差异具有统计学意义(P0.01)。ZL各剂量组之间比较,以高剂量组为对照,低、中剂量组在12h、48h及72h具有显著性差异(P0.01)。电镜超微结构观察发现血管周围水肿程度较为轻微,血脑屏障的结构得到明显改善。结论蛭龙活血通瘀胶囊能够明显减轻脑出血大鼠脑水肿,保护血脑屏障组织结构,避免其通透性破坏,改善血脑屏障功能,该作用存在一定的量效关系,ZL高剂量组作用最为明显。     

芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障通透性的影响

目的观察4味芳香开窍药(冰片、麝香、苏合香、安息香)及其不同提取部位对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法结扎小鼠双侧颈总动脉30min再灌注1h后,小鼠尾静脉注射伊文思蓝(Evans blue,EB)250mg.kg-1,采用甲酰胺浸泡,荧光法测定小鼠脑组织中EB含量以评价药物对缺血再灌注损伤小鼠BBB通透性的影响。结果冰片全药(200 mg.kg-1)、麝香全药与麝香石油醚提取部位(66.6 mg.kg-1)能显著性降低脑缺血再灌注损伤模型小鼠脑组织中EB含量;苏合香生药(1.33 2 g.kg-1)、安息香生药与石油醚提取部位(1 g.kg-1)有降低EB含量的趋势。结论麝香、冰片能对抗不完全缺血再灌注损伤模型小鼠血脑屏障通透性的异常增高,表现出对病理状态下血脑屏障功能的保护作用。苏合香与安息香的作用强度弱于麝香、冰片。该类药物对病理状态下血脑屏障功能的保护效应是其用于治疗缺血性脑病的药理学基础之一。实验结果亦提示药物的脂溶性部位可能是其作用于脑组织的物质基础。     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠血脑屏障结构和功能的影响

目的:观察蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑出血后血脑屏障通透性及血脑屏障超微结构的影响。方法:将120只大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊高、中、低剂量组(简称ZL高、中、低剂量组),各组有分为12小时、48小时、72小时三个亚组,采用自体尾部血注入法制备脑出血大鼠模型,采用伊文思蓝法对各组进行血脑屏障通透性检测,电子显微镜下观察血脑屏障超微结构的变化。结果:与模型组比较,ZL低、中、高剂量组大鼠脑组织EB含量均有明显降低,差异具有统计学意义(P0.01)。ZL各剂量组之间比较,以高剂量组为对照,低、中剂量组在12小时、48小时及72小时具有显著性差异(P0.01)。电镜超微结构观察发现血管周围水肿程度较为轻微,血脑屏障的结构得到明显改善。结论:蛭龙活血通瘀胶囊能够明显改善脑出血大鼠血脑屏障的通透性,保护血脑屏障的组织结构避免血脑屏障受到破坏,该作用存在一定的量效关系,ZL高剂量组作用最为明显。     

青藤碱对脑缺血再灌注损伤大鼠前列腺素E2含量和血脑屏障通透性的影响

目的探讨青藤碱(Sin)对缺血再灌注损伤大鼠前列腺素E2(PGE2)含量和血脑屏障通透性的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Sin低剂量治疗组和Sin高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Sin低(30mg/kg)、高剂量(60mg/kg)治疗组于术前30min分别给予大鼠腹腔注射。用放免法检测缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质PGE2含量、脑含水量和伊文斯蓝(EB)含量变化。结果与假手术组比较,缺血再灌注组额顶部皮质PGE2含量明显升高;与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组PGE2含量明显降低,高、低剂量组之间差异有统计学意义。与假手术组比较,缺血再灌注组脑含水量和EB含量明显升高;与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组脑含水量和EB含量明显降低,高、低剂量组之间差异有统计学意义。结论Sin对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与减少再灌注损伤后PGE2含量、减轻血脑屏障通透性有关。     

石菖蒲对血脑屏障超微结构及通透性的影响

目的:研究石菖蒲对大鼠血脑屏障超微结构及通透性的影响,证实其"醒脑开窍"之药理作用.方法:用电镜观察大鼠大脑皮层血脑屏障的超微结构在给药前后的变化,测定伊文思蓝(EB)的含量,并采用HPLC测定石菖蒲对中枢神经系统药苯妥英钠在脑内的蓄积程度的影响.结果:石菖蒲可以影响大鼠血脑屏障的超微结构,使内皮细胞之间的紧密连接松弛;同时,增加伊文思蓝透过血脑屏障的含量,促进中枢神经系统药苯妥英钠在脑内的蓄积,即增加血脑屏障的通透性.结论:说明石菖蒲能够提高血脑屏障通透性,具有醒脑开窍的药理作用.     

麝香黄芪复方滴丸对体外缺血缺氧血脑屏障通透性及相关调节蛋白的影响

目的探究麝香黄芪复方滴丸调控体外缺血缺氧性血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)模型的作用机制。方法利用大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvessel endothelial cells,BMEC)与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型及缺血缺氧BBB模型。随机分为正常对照组、模型组、麝香黄芪复方滴丸高剂量组(500μg/mL)、中剂量组(100μg/mL)、低剂量组(10μg/mL)及依达拉奉对照组。通过跨内膜电阻(TEER)、辣根过氧化物酶法(HRP)检测BBB通透性变化情况。Western Blot法检测紧密连接(tight junction,TJ)相关蛋白闭合蛋白-5(Claudin-5)、连接黏附分子-A(junctional adhesion molecule,JAM-A)、跨膜蛋白的咬合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(zonula Occludens,ZO-1)表达水平。结果TEER及HRP实验显示,与正常对照组相比,模型组血脑屏障通透性增加(P<0.05);麝香黄芪复方滴丸高、中、低剂量组和依达拉奉组1 d、2 d、3 d各组通透性明显降低(P<0.05);WB结果显示,模型组Claudin-5、JAM-A、Occludin、ZO-1蛋白表达较正常组显著降低(P<0.05);麝香黄芪复方滴丸高、中剂量组较模型组Claudin-5、JAM-A、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论麝香黄芪复方滴丸能降低缺血缺氧性BBB模型的通透性,其作用机制与调控紧密连接蛋白而达到修复BBB的作用有关。     

冰片联合灯盏花素对缺氧/复氧损伤血脑屏障通透性的影响

目的观察冰片联合灯盏花素对缺氧/复氧下血脑屏障(BBB)通透性的影响,探讨其保护BBB的作用机制。方法培养原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC),在缺氧培养箱中缺氧2 h,再复氧24 h,建立单层BMEC体外BBB模型。实验分为正常对照组、模型组、冰片组、灯盏花素组、冰片+灯盏花素组,各给药组给予相应药物干预,检测各组跨内皮细胞电阻(TEER)值和辣根过氧化物酶(HRP)的通透性,ELISA、Western blot检测BMEC中紧密连接蛋白ZO-1及Claudin-5蛋白表达。结果缺氧/复氧损伤导致TEER值降低,HRP通透率增加,ZO-1及Claudin-5蛋白表达降低;冰片联合灯盏花素可明显改善上述损伤。结论冰片联合灯盏花素对缺氧/复氧下BBB的损伤具有保护作用,其机制可能与上调ZO-1、Claudin-5蛋白表达有关。     

The mechanism of the opening of the blood–brain barrier by borneol: A pharmacodynamics and pharmacokinetics combination study

Ethnopharmacological relevance

Borneol is widely used in traditional Chinese medicine to facilitate the distribution of central nervous system (CNS) drugs in brain due to its ability to open blood–brain barrier (BBB), however, the underlying mechanism is still unclear. In this study, the effect of borneol on different brain regions were investigated to explore the mechanism.

Materials and methods

After oral administration of borneol (0.1, 0.2 g/kg) for seven consecutive days, SD rats were injected with Rh123 (1.0 mg/kg). The concentrations of Rh123 were detected in four brain regions of cortex, hippocampus, hypothalamus and striatum by a small animal vivo imaging system and a fluorescence microplate reader respectively. The ultrastructures of BBB were examined. Moreover, the expressions of the four transporters of ATP-binding cassette (ABC) family, multidrug resistance 1a (Mdr1a), multidrug resistance 1b (Mdr1b), multidrug resistance protein 1 (Mrp1), Mrp4, Mrp5 and breast cancer resistance protein (Bcrp) in the four brain regions were analyzed. Finally, the deliveries of borneol in the plasma and the four brain regions were examined by a pharmacokinetics study.

Results

Administration of 0.2 g/kg borneol produced loose structure in the tight junction and void structure between the endothelial cell and mesangial cell. Borneol at 0.1 g/kg and 0.2 g/kg increased the delivery of Rh123 in hippocampus and hypothalamus obviously. Permeability index followed a similar trend. Protein expression assays showed that borneol decreased the expression of Mdr1 and Mrp1 in hippocampus and hypothalamus. Further RT-PCR study showed that borneol decreased the expressions of both Mdr1a and Mdr1b in hippocampus and hypothalamus. The pharmacokinetics study demonstrated that the delivery of borneol in cortex was the most and that in striatum the least, with the deliveries of borneol in hippocampus and hypothalamus in between.

Conclusions

Borneol showed tissue specific BBB-opening effect, which was associated with its regulation of the ultrastructure of brain tissues and the expressions of Mdr1a, Mdr1b and Mrp1. The present study indicated that borneol should be used in concert with drugs targeting hippocampus or hypothalamus to exert its synergistic effect to the maximum.     

不同剂量冰片对栀子苷在大鼠脑内浓度的影响

目的研究大鼠ig不同剂量冰片后对栀子苷在大鼠脑内浓度的影响。方法大鼠ig给予冰片0.05、0.1、0.2、0.4 g/kg15 min后,尾iv栀子苷300 mg/kg,于栀子苷给药后0.5、1、5、10、15、30、45、60、90 min采血、取脑,HPLC法测定血样和脑组织样本中栀子苷的量,采用3P97软件计算栀子苷在血浆和脑组织中的药动学参数,计算栀子苷在血浆和脑组织中的相对生物利用度和脑靶相关参数。结果栀子苷在血浆和脑组织分布符合二室开放模型,经冰片处理后可提高栀子苷在脑组织中的Cmax和AUC,延长MRT,缩短tmax,其中冰片0.2 g/kg剂量对栀子苷的影响最显著。结论大鼠ig冰片后iv栀子苷,冰片可提高栀子苷入脑量和入脑速度,以冰片0.2 g/kg剂量对栀子苷的影响最显著。     

电针抗抑郁研究的模型探讨

目的:探讨电针抗抑郁研究适宜模型的选择。方法:选用药物实验方法,观察去甲肾上腺素毒性实验小鼠的死亡率、5 羟色胺酸甩头实验小鼠甩头次数。用改变环境条件的方法,观察悬尾实验小鼠悬尾的不动时间和通过慢性应激模型观察开野实验大鼠的活动性及检测糖水实验糖水的摄入量。结果:与空白对照组相比,电针不能降低去甲肾上腺素毒性实验小鼠的死亡率,不能减少5 羟色胺酸甩头实验小鼠的甩头次数;但能减少悬尾实验小鼠悬尾的不动时间;慢性应激模型中,与模型组及模型束缚组相比,电针组和百优解组可明显增加开野实验的垂直运动次数及糖水的摄入量。结论:针刺对抑郁症的实验研究应选择改变环境条件诱发的抑郁动物模型进行,药物诱发的抑郁模型可能是不适宜的。     

威灵仙总皂甙的抗肿瘤作用

威灵仙总皂甙(CCS)对体外培养的艾氏腹水瘤(EAC)、肉瘤S_(180)腹水型(S_(180A))和肝癌腹水型(HepA)细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别为242μg/ml、193μg/ml和130μg/ml。CCS0.25g/kg、0.5g/kg和1g/kg剂量对小鼠移植性肉瘤S_(180)的瘤重抑制率分别为4O.3％、55.1％和53.0％。但CCS(0.2 g/kg、0.4g/kg和0.8g/kg)对荷瘤小鼠S_(180A)的生存期没有明显影响。     

七星镇痛膏镇痛抗炎作用研究

目的观察七星镇痛膏的镇痛抗炎作用。方法采用醋酸建立小鼠疼痛扭体模型及小鼠热板法,观察七星镇痛膏的镇痛作用;采用二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和右旋糖酐所致大鼠足跖肿胀形成模型,观察七星镇痛膏的抗炎作用。结果七星镇痛膏剂量在0.4,0.2 g.kg-1对醋酸所致小鼠扭体次数的抑制率分别64.24%,24.24%;热板法证实七星镇痛膏在给药1 h后能明显提高小鼠的痛阈值(P<0.05),痛阈值提高率为33.81%,16.67%;七星镇痛膏剂量在0.4,0.2 g.kg-1时,对二甲苯所致小鼠耳部炎症的抑制率分别为71.01%,70.04%;在给药后0.5~4 h对右旋糖酐所致大鼠足跖肿胀具有明显抑制作用(P<0.01)。结论七星镇痛膏对疼痛和炎症具有较显著的镇痛及抗炎作用。     

冰片和熊去氧胆酸对黄芩苷角膜透过性的影响

目的 研究冰片、熊去氧胆酸对黄芩苷离体角膜透过率的影响,探讨其在眼用制剂中的应用.方法 采用离体角膜渗透技术考察不同质量浓度的冰片、熊去氧胆酸对黄芩苷角膜透过率的影响.结果 0.2 mg/mL的冰片使黄芩苷表观渗透系数(Papp)增加了1.36倍,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);0.3、0.4、0.5、0.7 mg/mL的冰片使黄芩苷Papp分别增加了1.35、1.43、1.51、3.47倍,0.2、0.3、0.4、0.5、0.7 mg/mL的熊去氧胆酸使黄芩苷Papp分别增加了1.19、2.25、1.24、0.35、0.68倍,与对照组相比均具有非常显著性差异(P＜0.01).结论 0.2、0.3、0.4、0.5、0.7 mg/mL的冰片、熊去氧胆酸能够显著增大黄芩苷的Papp,且对角膜无刺激性.     

中药冰片在动物体内转化为樟脑的研究

目的:给小鼠等动物灌服冰片后,对冰片在其体内转化为樟脑的情况进行初步的定性研究.方法:将天然冰片、冰片(合成龙脑)和异龙脑配成混悬液后,给小鼠灌服,30min后处死小鼠,取肝脏和血浆,经过(肝脏匀浆、)萃取、离心等处理后,取上清液注入GC-MS进行定性分析;给小鼠、大鼠、家兔灌服天然冰片后,在不同时间点取样,经处理后对樟脑进行分析.结果:GC-MS法可很好的分离和定性龙脑、异龙脑和樟脑等成分;小鼠灌服天然冰片、冰片(合成龙脑)和异龙脑后30min,小鼠体内均检测到樟脑色谱峰;灌服天然冰片后在不同动物体内樟脑的含量基本都随着时间的延长而呈一定规律性的变化.结论:冰片(天然冰片、冰片(合成龙脑))和异龙脑在小鼠、大鼠、家兔体内有转化为樟脑的趋势,动物体内的樟脑含量随时间而呈规律性变化.     

电针对重型颅脑损伤昏迷患者促醒作用的临床观察

目的:观察电针对重型颅脑损伤昏迷患者的促醒作用。方法:90例重型颅脑外伤患者随机分为对照组、电针组及纳络酮组,各30例。对照组予常规西医治疗;纳络酮组在常规西医治疗基础上加静脉滴注纳络酮;电针组在常规西医治疗基础上加用电针治疗,针刺百会、水沟、风府透哑门、合谷和涌泉,疏密波,频率1Hz/50Hz,强度1～4mA。各组治疗均每天1次,共治疗14d。观察各组患者在治疗前后及治疗结束后1个月的格拉斯哥昏迷评分(GCS)变化,比较各组患者在治疗结束后1个月格拉斯哥预后分级(GOS)及清醒率。结果:各组患者治疗后的GCS评分较治疗前均明显改善(P<0.05),且治疗结束1个月的GCS评分较治疗结束时继续提高(P<0.05)。纳络酮组及电针组在治疗结束及结束后1个月的GCS评分及GOS分级都明显优于对照组(均P<0.05),电针组与纳络酮组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗结束后1个月,电针组及纳络酮组清醒率均优于对照组(P<0.05),电针组与纳络酮组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:早期电针干预可提高重型颅脑损伤患者的GCS评分、GOS分级及清醒率,促进神经功能的恢复,对重型颅脑损伤昏迷患者具有促醒及改善预后的作用。