白茅内生菌Chaetomium globosum的化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对白茅内生菌Chaetomium globosum固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,获得9个化合物。利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对的方法,将上述化合物分别鉴定为chaetoglobosin F(1),chaetoglobosin F_ex(2),chaetoglobosin E(3),cytoglobosin A(4),penochalasin C(5),isochaetoglobosin D(6),N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylalaninate(7),尿嘧啶(8),5-甲基尿嘧啶(9),其中化合物 7 为首次从毛壳菌中分离得到。采用MTT法测定化合物的体外细胞毒活性,结果显示,化合物 1,3,4,5 对人宫颈癌细胞株HeLa具有明显的抑制活性,IC₅₀分别为99.43,23.77,97.92,86.25 μmol·L^-1,而阳性对照药顺铂的IC₅₀为24.33 μmol·L^-1。     

喘平方对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β1及TNF-α的影响

目的: 探讨喘平方防治支气管哮喘的作用机制。 方法: 取白化豚鼠60只,随机分为正常组、模型组、麻黄组(0.20 g·kg^-1)、洋金花组(0.07 g·kg^-1)、喘平方组(0.32 g·kg^-1)、地塞米松组(7.5×10^-4 mg·kg^-1),通过对豚鼠ip卵蛋白致敏并雾化吸入激发,建立实验性哮喘豚鼠模型;治疗组自注射第14天起每天ig给药1次,连续7 d,正常组及模型组给予生理盐水。观察豚鼠的一般情况,豚鼠肺泡灌洗液中免疫球蛋白E(IgE),转化生长因子β₁(TGF-β₁),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化,肺组织病理情况。 结果: 各组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α分别为:正常组IgE(68.25±5.92) mg·L^-1,TGF-β₁(78.72±10.92)ng·L^-1,TNF-α(388.02±55.61) ng·L^-1;模型组IgE(137.28±14.38) mg·L^-1,TGF-β₁(172.39±14.04)ng·L^-1,TNF-α(752.76±51.25)ng·L^-1;喘平方组IgE(76.35±6.22) mg·L^-1,TGF-β₁(115.76±9.17)ng·L^-1,TNF-α(569.32±39.7) ng·L^-1;哮喘组及喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均高于正常组(P<0.05);喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均低于哮喘组(P<0.05)。 结论: 喘平方能够通过下调豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量,可降低气道高反应性、减轻气道炎症症状、控制或延缓气道纤维化进程。     

小槐花提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的: 评价小槐花Desmodium caudatum (Thunb.)DC.提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。方法: 通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对小槐花提取物进行活性筛选。结果: 小槐花提取物均有较好的α-葡萄糖酶抑制作用,其中以乙酸乙酯部位(DCEA) 和石油醚部位(DCPE) 活性较好(IC₅₀=9.79,39.2 mg·L^-1),其次为正丁醇部位 (DCBU) (IC₅₀=625.1 mg·L^-1),抑制活性均远远大于阳性对照阿卡波糖 (IC₅₀=1 103.01 mg·L^-1)。DCBU对α-葡萄糖苷酶抑制活性呈显浓度依赖性;DCPE和DCEA对α-葡萄糖苷酶抑制活性对浓度的变化较灵敏,随浓度的增加而急剧上升。结论: 小槐花石油醚部位和乙酸乙酯部位对α-葡萄糖苷酶活性抑制非常显著,具有开发治疗糖尿病降血糖药物的价值。     

培养基类型、植物生长物质浓度对王枣子愈伤组织诱导和继代的影响＊

目的 优化王枣子愈伤组织的诱导和探究疏松愈伤组织的继代条件，为王枣子悬浮细胞培养奠定初步基础。方法 以王枣子无菌苗幼叶为外植体，采用单因素试验研究不同培养基类型对愈伤组织诱导的影响；采用L₉(3² )正交试验设计，研究2，4-D、KT不同浓度配比对王枣子疏松愈伤组织的增殖培养的影响。结果 愈伤组织的诱导率在MS、1/2MS和B₅培养基上呈上升趋势。MS的出愈时间最晚，1/2MS的出愈时间次之；在B₅培养基上出愈时间最早，且愈伤组织的质地和生长状态较好。正交试验的结果显示，愈伤组织的在B₅培养基上添加2，4-D 2.5 mg·L^-1 +KT 1.0 mg·L^-1增殖倍数最小为19.78倍，添加2，4-D 1.5 mg·L^-1 +KT 0.2 mg·L^-1 达到最大增殖倍数27.34倍；王枣子疏松愈伤组织增殖试验中2，4-D(P<0.01)的影响效应比KT(P=0.091)大。结论 B₅培养基是最佳的王枣子愈伤组织诱导培养基，B₅培养基中添加2，4-D 1.5 mg·L^-1 +KT 0.5 mg·L^-1 为疏松愈伤组织增殖的最佳配比。     

六月青一种木脂素苷的体外抗氧化活性

目的: 研究六月青一种木脂素苷(6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol的抗氧化活性。 方法: 采用酶标仪微量法和紫外-可见光分光光度法,以维生素C为阳性对照,分别测定(6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol对1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH ·)自由基、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O^-₂·)的清除能力。 结果: (6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol对DPPH·(半数清除率IC₅₀ 8.11 mg·L^-1),·OH(IC₅₀ 21.61 mg·L^-1)和O^-₂·(IC₅₀ 10.30 mg·L^-1)均具有清除作用,且呈明显的量效关系。 结论: (6R,7S,8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy] lyoniresinol在体外有明显的抗氧化作用。     

HPLC 测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中 8 种组分的含量

  目的 建立高效液相色谱法同时测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中氢氯噻嗪、维生素 B₆ 、维生素 B₁ 、硫酸胍生、地巴唑、氯氮、磷酸氯喹和盐酸异丙嗪等 8 种组分含量的方法。 方法 提取溶剂为甲醇 - 水 (50 ∶ 50) ，色谱柱为 Ultimate XB-C₁₈(4.6 mm × 150 mm ， 5 μm) ，流动相为甲醇 -5 mmol·L^-1 庚烷磺酸钠溶液 - 冰醋酸 (55 ∶ 45 ∶ 0.25), 检测波长为 284 nm 。 结果 线性范围分别为氢氯噻嗪 30.2~151.0 mg·L^-1 (<>r=0.999 8) ；维生素 B₆10.2 ～ 51.0 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) ；维生素 B₁ 10.1~50.5 mg·L^-1 (<>r=0.999 9) ；硫酸胍生 12.1~60.5 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) ；地巴唑 99.8~499.0 mg·L^-1 (<>r=0.999 2) ；氯氮 20.1~100.5 mg·L^-1 (<>r= 1.000 0) ；磷酸氯喹 24.88~124.4 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) ；盐酸异丙嗪 30.3~151.5 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) 。平均回收率 (<>n=9) 分别为氢氯噻嗪 101.2%(RSD=1.4%) ，维生素 B₆102.2%(RSD=0.9%) ，维生素 B₁100.5% (RSD=1.5%) ，硫酸胍生 101.6%(RSD=1.5%) ，地巴唑 101.8% (RSD=1.1%) ，氯氮 99.3% (RSD= 1.3%) ，磷酸氯喹 101.5%(RSD=1.6%) ，盐酸异丙嗪 101.7 % (RSD=1.7%) 。 结论 本法简便快速，准确可靠，适于该复方制剂中 8 种组分的同时测定。     

链霉菌CPCC 202950的化学成分研究

采用大孔树脂、MCI树脂、闪式反相C₁₈柱色谱以及反相HPLC等多种色谱技术和方法,从链霉菌CPCC 202950的发酵液中分离得到11个化合物,借助理化性质和波谱学数据分析,鉴定其结构为1H-pyrrole-2-carboxamide(1), 5'-deoxy-5'-methylthioinosine(2), vanillamide(3), trans-3-methylthioacrylamide(4), 1,2,3,4-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxylic acid(5), 环(L-脯氨酸-L-酪氨酸)(6), N-[2-(4-hydroxyphenyl)]ethylacetamide(7), 苯甲酰胺(8), cyclo(L-leucyl-trans-4-hydroxy-L-proline)(9), 环(苯丙氨酸-甘氨酸)(10), 色氨酸(11)。其中化合物1和2为新的天然产物;化合物 1~11 对HIV-1蛋白酶均没有明显的抑制作用(IC₅₀ > 10 μmol·L^-1)。     

壮腰健肾丸对肾虚多尿大鼠膀胱组织中P2X1与P2X3mRNA表达的影响

为了探讨壮腰健肾丸的缩尿作用及机制,该实验采用皮下注射150 mg·kg^-1剂量的D-半乳糖诱导亚急性衰老模型,并将其分为模型组、缩泉丸组(1.17 g·kg^-1·d^-1)、壮腰健肾丸高、中、低剂量组(2.39,1.20,0.60 g·kg^-1·d^-1),另取正常动物设为空白组,连续给药8周。选用代谢笼法测量大鼠24 h尿量及水负荷5 h尿量;采用全自动生化仪检测尿中Na⁺,Cl^-,K⁺浓度;应用ELISA法测定血清中醛固酮(aldosterone,ALD)、抗利尿激素(antidiuretic hormone,ADH)的含量;采用RT-PCR检测大鼠膀胱组织中P2X₁与P2X₃ mRNA表达量的变化情况。结果显示壮腰健肾丸高、中剂量组对肾虚多尿大鼠24 h尿量及水负荷后5 h内尿量均显著下调(P<0.05,P<0.01);对尿中Na⁺和Cl^-浓度均显著降低(P<0.01);血浆中ALD,ADH含量显著性升高(P<0.05,P<0.01);膀胱组织中P2X₁与P2X₃ mRNA表达量显著下调(P<0.01);壮腰健肾丸低剂量组尿中Na⁺和Cl^-浓度均显著降低(P<0.01)。结果说明壮腰健肾丸可能是通过下调肾虚多尿大鼠膀胱组织中P2X₁与P2X₃ mRNA表达量从而发挥缩尿的作用。     

天葵子各提取部位体外抗氧化活性及成分研究

目的: 研究天葵子各提取部位体外抗氧化活性以及主要成分。 方法: 将天葵子醇提物依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取,分别得到乙酸乙酯层(TK-Y) 正丁醇层(TK-Z) 和水层(TK-S),其中水层通过醇沉法得到水层多糖(TK-D),并以维生素C(VC) 为对照,通过Fenton法和邻苯三酚法测定天葵子各部位和水层中的多糖对羟基自由基(·OH) 和超氧自由基(O₂^- ·) 的清除能力,研究天葵子的抗氧化活性,并以此为导向分离主要活性成分。 结果: 天葵子抗氧化活性顺序为TK-D> TK-S> TK-Z> TK-Y,其中TK-D对超氧自由基的清除率与浓度呈正相关(Y=54.94X+27.15, R²=0.998 3),IC₅₀为0.42 g ·L^-1;从正丁醇中分离得到5个化合物,分别鉴定为紫草氰苷(1),东方唐松草苷(2),格列风内酯(3),β-谷甾醇(4),胡萝卜苷(5)。 结论: 首次证实了天葵子提取物中水层和正丁醇层是其抗氧化活性部位,其中水层中的抗氧化活性物质为多糖,化合物紫草氰苷,东方唐松草苷,格列风内酯是天葵子的主要化学成分。     

补骨脂抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶和抗菌活性成分研究

从补骨脂中分离得到12个化合物,分别为异补骨脂素(1),补骨脂素(2),8-甲氧基补骨脂素(3),补骨脂定(4),补骨脂宁(5),补骨脂甲素(6),大豆苷元(7),补骨脂乙素(8),补骨脂二氢黄酮甲醚(9),新补骨脂素异黄酮(10),大豆苷(11)和紫云英苷(12)。采用体外清除DPPH和ABTS自由基以及α-葡萄糖苷酶抑制活性对化合物1~4,6,7,11,12抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性进行筛选,利用K-B法筛选化合物5,8~10的抗菌活性。结果显示,补骨脂定具有清除DPPH自由基的能力(IC₅₀ 43.85 mg·L^-1);补骨脂定,补骨脂甲素,大豆苷,大豆苷元和紫云英苷具有清除ABTS自由基的能力 (IC₅₀分别为1.32,4.97,10.47,34.22,31.27 mg·L^-1);补骨脂定,补骨脂甲素和大豆苷元显示出强的α-葡萄糖苷酶抑制活性 (IC₅₀分别为40.74,45.73,49.44 mg·L^-1);补骨脂乙素和新补骨脂异黄酮均有明显的抑制SA,MRSA,ESBLs-SA的作用 (MIC分别为0.781 3,1.562 5,0.781 25 μg·disc^-1和6.25,6.25,6.25 μg·disc^-1)。     

丹参总酚酸与三七总皂苷合用4种丹酚酸成分在大鼠体内的药动学

 目的 建立丹参总酚酸与三七总皂苷合用(5∶1)灌胃给药后大鼠血浆中原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B含量的测定方法，并对其进行药动学研究。方法 采用HPLC-UV方法测定，色谱柱：Zorbax SB-C₁₈ column (4.6 mm×250 mm, 5 μm)，流速：1 mL·min^-1，柱温：30 ℃，检测波长：280 nm，以乙腈和体积分数为0.026%的磷酸水溶液梯度洗脱，血浆样品以体积分数为10%的盐酸酸化，而后用乙酸乙酯萃取2次，并根据测定结果求算药动学参数。结果 4种成分的日内与日间RSD均小于15%，提取回收率均大于70%，线性关系良好。原儿茶醛在10.0 min 达峰，ρ_max为6.466 mg·L^-1，AUC_0-∞值为82.1 mg·min·L^-1，迷迭香酸在11.7 min达峰，ρ_max为10.50 mg·L^-1，AUC_0-∞值为564.8 mg·min·L^-1，紫草酸在20.8 min达峰，ρ_max为5.950 mg·L^-1，AUC_0-∞值为1 123 mg·min·L^-1，丹酚酸B在8.3 min达峰，ρ_max为48.12 mg·L^-1，AUC_0-∞值为4 026 mg·min·L^-1。结论 该法适用于原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B的血药浓度测定与药动学研究。     

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系。方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响。结果:N₆液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L^-1、接种量60-80g·L^-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA0.2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1有利于黄酮合成,而附加BA0.5mg·L^-1+NAA3mg·L^-1则对生长有利。结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成。     

三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护机制. 方法: MTT法检测细胞存活率;PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中Bax,Bcl-2的表达;ELISA法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的酶活性. 结果: 6.25,12.5,25,50,100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡均有一定保护作用,并呈剂量依赖关系;PI/Annexin V双染流式细胞术检测结果表明Aβ_1-42可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可显著降低细胞凋亡率.Western blot结果显示,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;ELISA分析显示不同剂量的三七皂苷R₁可抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞caspase-3和caspase-9的激活,但对caspase-8的激活没有影响. 结论: 三七皂苷R₁通过抑制线粒体相关的凋亡通路激活,减少Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.     

喇叭唇石斛组织培养的研究

目的 :筛选喇叭唇石斛快速繁殖体系的适宜培养基及培养条件。方法 :对基本培养基、光照条件、激素、天然提取物浓度等进行比较研究。进行叶绿素含量、可溶性蛋白含量测定。结果 :N₆培养基是种胚萌发成苗适宜培养基 ,而 1/2 MS +NAA 0.5mg·L^-1易于原球茎膨大增殖。先暗培养 20d再光照培养有利于胚的萌发及苗的生长。 1/ 2MS +NAA 0～ 0 .5mg·L^-1有利于原球茎大量增殖 ,N₆+6 BA 2 .0mg·L^-1+NAA 0 .5mg·L^-1+10 %马铃薯汁是原球茎分化的适宜培养基 ,添加激素和马铃薯汁促进叶绿素和可溶性蛋白含量上升。N₆+NAA 0 .5mg·L^-1+10 %香蕉汁生根壮苗最适宜。结论 :无机盐浓度、氮源形态、光照条件对胚萌发生长影响较大 ;氮源形态对原球茎增殖有影响 ;叶绿素含量、可溶性蛋白含量能反映组培苗的生长状态 ,可作为筛选培养基参考指标。     

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法：建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法，将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组，并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导平滑肌细胞增殖的作用，用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果：升麻苷(50，100，200 mg·L^-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50，100，200 mg·L^-1)均能明显抑制TNF-α引起的平滑肌细胞增殖，与TNF-α组相比有极显著差异(P<0.01)。升麻苷(50，100，200 mg·L^-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50，100，200 mg·L^-1)均使G₁/G₀期细胞比例增加，S期、G₂/M期细胞比例减少，与TNF-α组相比差异极显著(P<0.01)。结论：升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。     

三七皂苷通过抑制自噬减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨三七皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）抗转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的肾小管上皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养NRK-52E肾小管上皮细胞,分为空白组、TGF-β₁组、TGF-β₁+12.5 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+25 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+50 mg·L^-1 PNS组,PNS干预48 h,收集细胞及上清,采用倒置显微镜观察细胞形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白、自噬相关蛋白表达;流式液相多重蛋白定量技术检测炎症因子含量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导后细胞呈梭形改变且呈明显的EMT表现,即E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显下调（P<0.05）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达明显上调（P<0.05）,PNS处理后,大部分细胞形态趋向正常并逆转EMT的发生。同时,与空白组比较,TGF-β₁组肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显升高,IL-10水平下降,凋亡率增加（P<0.05）,PNS作用后,TNF-α水平下降,IL-10水平升高,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。并且TGF-β₁能明显上调肾小管上皮细胞自噬相关蛋白Beclin1和自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）的表达（P<0.05,P<0.01）,而PNS抑制其表达。结论 PNS对TGF-β₁诱导的肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制自噬来减轻炎症和凋亡,进而抵抗TGF-β₁诱导的损伤。     

外源性表皮生长因子对马兜铃酸-Ⅰ所致细胞增殖抑制作用的影响

目的：探讨加入外源性表皮生长因子(EGF)能否改善马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)引起的细胞增殖抑制作用。方法：以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象，在正常培养组(对照组)、AA-Ⅰ(10 mg·L^-1)刺激组(AA组)和不同时机加入EGF处理组之间比较各项指标变化;用倒置显微镜对细胞形态进行观察；台盼蓝染色后细胞计数法观察细胞增殖反应；流式细胞仪分析细胞周期变化情况。结果：与对照组相比，AA-Ⅰ对细胞的毒性作用呈浓度和时间依赖性增强，AA-Ⅰ(10 mg·L^-1)刺激24，48 h后对存活细胞的细胞周期分析可见G₀/G₁期细胞比例分别减少31.4%和87.4%，而G₂/M期细胞比例逐渐增高达对照的1.32倍和3.73倍(均P<0.05)。EGF(20 μg·L^-1)刺激24 h后细胞数达对照组的1.36倍(P<0.05)，细胞周期中G₀/G₁期细胞比例减少9.7%，S和G₂/M期细胞比例分别增高2.9%和6.7%，表明EGF具有促进细胞周期的作用。与AA-Ⅰ组相比，无论预先(preEGF)、同时(EGF)或刺激后(postEGF)加入EGF，AA-Ⅰ所致的细胞增殖抑制现象并没有得到改善，也未能明显改善其导致的细胞周期异常。结论：AA-Ⅰ(10 mg·L^-1)能够显著抑制损伤后存活HK-2细胞的增殖，使细胞周期阻滞于G₂/M期；外源性EGF(20 μg·L^-1)能够明显促进正常细胞增殖，但不同时机加入EGF均不能改善AA-Ⅰ所致的细胞增殖抑制作用。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨小金丹对巨噬细胞极化的调控作用及机制

目的 探讨小金丹提取物（XJD）对巨噬细胞极化的调控作用及作用机制。方法 以脂多糖（LPS）、白细胞介素-4（IL-4）刺激RAW264.7细胞诱导M1型和M2型极化。采用细胞增殖活性检测（CCK-8）法检测10~80 mg·L^-1对RAW264.7细胞增殖活性的影响;采用Griess法检测一氧化氮（NO）的释放;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞因子白细胞介素-6（IL-6）释放;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测M1型和M2型巨噬细胞标志物的mRNA表达;采用流式细胞分析法检测CD206表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路关键蛋白的活化。结果 10~80 mg·L^-1 XJD对0.5 mg·L^-1 LPS和20 μg·L^-1 IL-4诱导的RAW264.7细胞增殖未见明显影响。与空白组比较,LPS诱导组M1型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括显著增加NO、IL-6释放（P<0.01）,明显上调M1型基因白细胞介素-1β（IL-1β）、一氧化氮合酶（iNOS）、前列腺素氧化环化酶-2（COX-2）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达（P<0.01）。同LPS诱导组比较,20~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著抑制NO、IL-6的释放（P<0.01）;10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性下调M1型基因IL-1β、iNOS、COX-2和TNF-α mRNA表达（P<0.01）。与空白组比较,IL-4诱导组M2型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括CD206⁺巨噬细胞比例显著升高（P<0.01）,显著上调M2型基因精氨酸-1（Arg-1）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-13（IL-13）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）mRNA表达（P<0.01）。同IL-4诱导组比较,10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著降低CD206⁺ M2型巨噬细胞比例（P<0.01）;显著下调Arg-1、IL-10、IL-13和TGF-β₁ mRNA表达（P<0.01）。Western blot结果显示,与空白组比较,LPS和IL-4诱导组磷脂酰肌醇3-激酶p110（PI3K-p110）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达均显著上调（P<0.01）;同LPS或IL-4诱导组比较,XJD能明显降低PI3K p110蛋白表达和p-Akt水平（P<0.05,P<0.01）。结论 小金丹提取物能抑制LPS和IL-4诱导RAW264.7细胞的M1型极化和M2型极化,机制与降低PI3K/Akt通路的活化水平有关。     

大黄灵仙方调控TAK1与TRAF6相互作用及共定位对胆管细胞炎症反应的影响

目的 观察大黄灵仙方（DHLX）对大鼠胆管上皮细胞的修复作用,探讨其作用机制是否通过调节转化生长因子-β（TGF-β）激活激酶1（TAK1）与肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的相互结合,调控核转录因子-κB（NF-κB）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路活化而发挥作用。方法 将20只SD大鼠随机分为正常组和DHLX组,分别予生理盐水及DHLX（320 mg·kg^-1·d^-1）灌胃8 d,制备正常血清及含DHLX血清;从正常SD大鼠中提取胆管上皮细胞,取胆管上皮细胞分为9组：正常组、模型组（20 mg·L^-1）、脂多糖（LPS）+DHLX组（20 mg·L^-1+10%含药血清）、LPS+PDTC组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1）、LPS+SB203580组（20 mg·L^-1+0.5 μmol·L^-1）、LPS+PDTC+SB203580组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+0.5 μmol·L^-1）、LPS+PDTC+DHLX组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+10%含药血清）、LPS+SB203580+DHLX组（20 mg·L^-1+0.5 μmol·L^-1+10%含药血清）、LPS+PDTC+SB203580+DHLX组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+0.5 μmol·L^-1+10%含药血清）;显微镜下观察药物干预后各组细胞的形态学变化,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中白细胞介素（IL）-1β与IL-6的表达量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中TAK1与TRAF6蛋白表达水平,免疫共沉淀技术检测TAK1与TRAF6的相互作用,激光共聚焦显微镜观察TAK1与TRAF6在细胞中的分布及共定位情况。结果 LPS作用后,细胞突触减少,胞体变圆变小,用药后各组细胞形态趋向正常;与正常组比较,模型组IL-1β和IL-6表达量明显上升（P<0.05）,TAK1表达量降低而TRAF6的表达量升高（P<0.05）,TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量呈降低趋势;与模型组比较,LPS+DHLX组IL-1β和IL-6表达量明显降低（P<0.05）,TAK1表达量升高而TRAF6表达量降低（P<0.05）,TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量显著增加（P<0.01）,两蛋白共定位于细胞质中;与LPS+DHLX组比较,其余各组IL-1β和IL-6表达量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,通路阻滞剂干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显降低（P<0.05）,通路阻滞剂联合DHLX干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显增加（P<0.05）,两蛋白在细胞质中存在共定位但不明显。结论 在LPS诱导的胆管细胞炎症反应中,TAK1与TRAF6相互结合呈减弱趋势,大黄灵仙方可逆转此现象,其作用机制可能与促进TAK1与TARF6的相互结合从而抑制NF-κB/MAPK信号通路活化有关。     

蚓激酶对活化血小板[Ca2+]i、JNK1和P-选择素表达的影响

 目的 研究蚓激酶(lumbrokinase, LK对大鼠血小板内钙离子浓度（intracellular calcium concentration, [Ca²⁺]_i、c-Jun氨基末端激酶-1 (c-Jun N-terminal kinase-1, JNK1以及人血小板P-选择素(P-selection, Ps表达水平的影响,阐明LK抗血小板活化的部分机制。方法 用荧光分光光度计测定LK对大鼠血小板活化过程中胞浆[Ca²⁺]_i的影响;免疫蛋白印记方法检测LK对大鼠血小板JNK1磷酸化水平的影响;流式细胞仪测定LK对人血小板活化过程中Ps表达水平的影响。结果 LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板[Ca²⁺]_i分别为（425.49±37.4 nmol·L^-1和（509.65±35.67 nmol·L^-1,与诱导组血小板[Ca²⁺]_i （555.59±39.71 nmol·L^-1相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板JNK1磷酸化水平分别为（0.60±0.069和（0.79±0.048,与诱导组血小板JNK1磷酸化水平（0.87±0.037相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1人血小板Ps水平为（42.99±2.69和（44.72±2.09,与诱导组（49.99±3.81相比显著降低（P<0.01,P<0.05。结论 体外实验表明LK能够抑制大鼠血小板胞浆[Ca²⁺]_i升高和JNK1的磷酸化,同时也能抑制人血小板Ps的表达水平的升高,从而起到抗血小板活化作用。