青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-3表达的影响

目的观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3（MMP-3）mRNA含量的影响。方法培养人成纤维样滑膜细胞，分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组，经青藤碱干预后，用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情况，用半定量RT-PCR方法检测成纤维细胞中MMP-3mRNA的表达。结果经青藤碱干预后的人成纤维样滑膜细胞的增殖率受到显著抑制（P〈0．05），其中高剂量组的改变差异尤为显著（P〈0．01）。MMP-3的mRNA表达水平较之空白对照组有显著下降（P〈0．05），且高剂量纽的差异尤为显著（P〈0．01）。结论青藤碱可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的增殖并下调MMP-3的表达，推断这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎的一种机理。     

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞自噬的调控作用研究

目的:探讨金乌健骨方对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞自噬基因LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34表达的影响。方法:取3代RA滑膜细胞,加金乌健骨方总提物低、中、高浓度(0.06、0.6、6.0 mg/mL)及雷公藤多苷(0.03 mg/mL)干预24 h后,采用透射电镜观察细胞自噬情况,PCR检测LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34 mRNA表达水平;Western blot检测LC3、Beclin-1蛋白表达。结果:空白对照组细胞无明显自噬小体或自噬溶酶体,各给药组滑膜细胞胞浆中自噬小体和自噬溶酶体明显增多。与空白对照组比较,除金乌健骨方低浓度组外,各给药组滑膜细胞LC3、Beclin-1、VPS34 mRNA表达均显著降低,Bcl-2 mRNA表达显著升高,LC3、Beclin-1蛋白表达显著降低(P0.01)。以金乌健骨方高浓度组和雷公藤多苷组作用最明显。结论:苗药金乌健骨方能抑制RA滑膜细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、VPS34的表达,增强Bcl-2的表达水平。     

益肾蠲痹丸对类风湿性关节炎的药效学研究

目的：使用弗氏完全佐剂制作大鼠关节炎模型，评价益’肾蠲痹丸对类风湿性关节炎的药效。方法：使用弗氏完全佐剂造模后，测量益肾蠲痹丸对对侧足爪肿胀和脏器指数的影响：ELISA法检测其对血清肿瘤坏死因子Ⅱ（TNF-Ⅱ），白介素1β（IL—1β），白介素-6（IL-6）的影响；分光光度法测量总一氧化氮合酶（tNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性：并用Westernblot法检测益肾蠲痹丸对凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。结果：益肾蠲痹丸可有效抑制大鼠佐剂性关节炎所引起的足跖肿胀，且对胸腺脾脏指数无明显影响。益肾蠲痹丸可有效抑制血清中TNF-Ⅱ，IL-1β，IL-6含量：抑制血清中iNOS活性；下调Bcl-2在滑膜组织中的表达。结论：益肾蠲痹丸的抗类风湿关节炎的作用与其调节主要炎症因子，下调炎症部位Bcl-2蛋白表达有关。     

补肾调经方改善体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步提高卵母细胞质量的机制研究北大核心CSCD

目的探讨补肾调经方改善体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步提高卵母细胞质量的作用机制。方法日龄10天的雌性ICR小鼠200只,随机分为补肾组(60只)、血清对照组(60只)和空白对照组(80只)。分别处死小鼠分离窦前卵泡,加入补肾调经方大鼠含药血清、正常大鼠血清和不加大鼠血清进行细胞培养,结束培养后分别收集MⅡ期卵母细胞计算卵母细胞第一极体排出率、活细胞荧光探针观察线粒体分布、实时荧光定量PCR检测卵母细胞线粒体DNA拷贝数(mtDNA)、解偶联蛋白(UCP2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)mRNA表达;收集卵丘颗粒细胞实时荧光定量PCR检测促凋亡基因Bax、抗凋亡基因Bcl-2以及缝隙连接蛋白Cx43、Cx37 mRNA表达。结果与空白对照组和血清对照组比较,补肾组卵母细胞第一极体排出率升高(P<0.05),线粒体均匀分布于细胞质中,mtDNA、PGC-1α、UCP2 mRNA表达升高(P<0.05),与空白对照组比较,血清对照组Cx37 mRNA表达升高(P<0.05),补肾组Cx43、Bcl-2、Bcl-2/Bax mRNA表达升高(P<0.05);与血清对照组比较,补肾组Cx37 mRNA表达降低(P<0.05),Cx43、Bcl-2、Bcl-2/Bax mRNA表达升高(P<0.05)。结论补肾调经方可促进体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步,提高卵母细胞质量,其机制可能与减少颗粒细胞凋亡、改善线粒体功能有关。     

益气补肾活血方对佐剂关节炎大鼠JNK和P38MAPK的影响

目的:观察益气补肾活血方对佐剂关节炎大鼠滑膜JNK和P38MAPK的影响,探讨益气补肾活血方对类风湿关节炎的治疗机制。方法:以雷公藤多苷作为对照,采用益气补肾活血方对AA大鼠进行灌胃治疗。观测SD大鼠关节肿胀度,检测滑膜JNK和P38MAPK的磷酸化表达水平。结果:益气补肾活血方不仅能明显降低AA大鼠的关节肿胀度,又能明显降低AA大鼠滑膜JNK和P38MAPK的磷酸化表达水平。结论:益气补肾活血方能明显缓解RA的临床症状,该复方可能通过下调JNK和P38MAPK磷酸化表达水平,达到治疗RA的目的。     

苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞NF-κB p65,IKK-α及IKK-β表达的影响

目的:探讨苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞核转录因子-κB p65(NF-κB-p65),IκB激酶-α(IKK-α)及IκB激酶-β(IKK-β)表达水平的影响,并探讨其作用机制。方法:通过细胞培养,在体外构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,将3~5代细胞随机分为6组,分别是空白组、苗族药金乌健骨汤含药血清冻干粉高、中、低剂量(28.8,9.6,3.2 g·kg~(-1))组、雷公藤多苷(3 mg·kg~(-1))组和泼尼松(1.5 mg·kg~(-1))组,用各药物含药血清冻干粉对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞进行干预24 h后,观察类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的形态学改变,采用流式细胞仪检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中NF-κB p65,IKK-α及IKK-β蛋白表达水平。结果:与空白组比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡随着金乌健骨汤浓度的升高,凋亡率明显升高(P0.05),类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中IKK-α,IKK-β及NF-κB p65的表达水平明显下调(P0.05)。结论:苗药金乌健骨汤能够诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,下调NF-κB p65,IKK-α及IKK-β的表达水平。     

补肾活血方对骨关节炎模型大鼠关节滑液IL-1β及关节软骨DDR2水平的影响

目的:探讨补肾活血方对大鼠骨关节炎模型IL-1β、盘状结构域受体2(DDR2)以及MMP-1的影响。方法:采用SD大鼠造模成功后分为中药组、西药组和空白对照组分别处理。进行血清IL-1β水平以及关节液IL-1β水平的检测。采用免疫组化方法检测DDR2的表达,采用RT-PCR方法检测MMP1的基因表达。结果:关节滑液的IL-1β水平中药组与西药组没有明显差异,而两者均低于空白对照组,差异有统计学意义(P0.01)。软骨及软骨下骨DDR2表达结果显示中药组与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。中药组关节滑膜MMP1表达明显减少。结论:补肾活血方具有抑制滑膜细胞分泌IL-1β的作用,同时可以在一定程度上抑制骨关节炎信号分子DDR2。     

蠲痹历节清方对改良痛风性关节模型大鼠滑膜的TLR4，NF-κB，PPARγ的影响

目的:观察蠲痹历节清方对改良痛风性关节炎大鼠滑膜组织中Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4),核转录因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB),过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的影响,探讨蠲痹历节清方治疗急性痛风性关节炎局部组织炎症的可能作用机制。方法:将42只SD雄性大鼠,按随机数字表法选取6只为正常组,30只为造模组,造模组采用改良痛风性关节炎造模后随机分为模型组,蠲痹历节清方高、中、低剂量组(4 400,2 200,1 100 mg·kg~(-1)),依托考昔组(11 mg·kg~(-1)),吡格列酮组(20 mg·kg~(-1)),每组6只。正常组及模型组的大鼠以生理盐水灌胃20 m L·kg~(-1)。每组每只大鼠每日灌胃给药2次,连续2 d后处死大鼠,取受试右踝关节,分离出滑膜组织,分为两部分,一部分用于病理形态学观察,一部分用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TLR4,NF-κB p65,PPARγmRNA的表达水平,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,NF-κB p65,PPARγ蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组中TLR4和NF-κB mRNA和蛋白表达显著升高(P0.01),PPARγmRNA和蛋白表达升高(P0.05);与模型组比较,吡格列酮组及蠲痹历节清方高、中、低剂量组TLR4和NF-κB mRNA和蛋白的表达显著降低(P0.01),PPARγmRNA和蛋白的表达显著升高(P0.05)。结论:蠲痹历节清方可能通过上调PPARγ表达,抑制TLR4,NF-κB表达从而抑制急性痛风性关节炎局部组织炎症。     

中药薯蓣皂苷元对CIA大鼠滑膜组织VEGF及AP-I表达的影响

目的：通过观察中药薯蓣皂苷元对牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎（Collagen-Induced Arthritis,CIA）大鼠膝关节滑膜激活蛋白-1（Activator Protein-1,AP-1）,血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）的影响,探讨中药薯蓣皂苷元治疗类风湿关节炎的可能作用机制。方法：通过建立大鼠CIA模型,实验随机分空白对照组、CIA模型组、中药薯蓣皂苷元组和阳性药物对照组（雷公藤多苷组）,采用原位杂交方法检测膝关节滑膜组织AP-1（c-fos和c-jun）的表达情况,应用Real-Time PCR方法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF mRNA的表达情况。结果：CIA模型组大鼠膝关节滑膜组织c-jun、c-fos和VEGF mRNA表达明显高于空白对照组;应用中药薯蓣皂苷元及雷公藤治疗后,c-jun、c-fos和VEGF mRNA表达明显降低。结论：薯蓣皂苷元可能通过对AP-1的两个亚单位c-jun和c-fos的调节来影响滑膜组织VEGF的表达,进而抑制滑膜血管新生,从而对类风湿关节炎发挥治疗作用。     

蠲痹汤对类风湿关节炎大鼠模型细胞因子的影响

目的:观察蠲痹汤对类风湿关节炎大鼠关节炎指数(AI)、血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平的影响,探讨蠲痹汤治疗类风湿关节炎的免疫机制。方法:将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤对照组、蠲痹汤高/低剂量组,制备类风湿关节炎大鼠模型,给药组以不同剂量蠲痹汤灌胃,对照组代以生理盐水,检测AI、血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明显上升,IL-10、IL-4水平明显下降(P0.01);与模型对照组比较,蠲痹汤高、低剂量均能明显降低实验大鼠AI和血清TNF-α、IL-1β水平(P0.05或P0.01),对IL-4水平无影响(P0.05),蠲痹汤高剂量组能显著升高模型大鼠IL-10水平(P0.01)。结论:蠲痹汤对类风湿关节炎模型大鼠TNF-α等炎症因子具有干预作用,提示蠲痹汤可通过抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1的表达,促进抗炎细胞因子IL-10的分泌,从而达到治疗RA的效果。     

壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响

目的观察壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余50只采用牛Ⅱ胶原蛋白与弗氏不完全佐剂混合液诱导制作CIA模型,造模后分为模型组,甲氨蝶呤组(MTX组),壮药龙钻通痹方高、中、低剂量组(简称壮药高、中、低剂量组),每组10只。模型组灌服生理盐水,MTX组按0.27mg/100g大鼠体重灌胃MTX溶液,每周1次,灌胃4周;壮药高、中、低剂量组分别予以壮药龙钻通痹方汤剂(4.32、2.16、1.08g/mL)灌胃,每日2次,灌胃30日。HE染色观察滑膜形态变化;ELISA法定量检测干预后大鼠血清、滑膜组织匀浆液Fas/FasL的表达。结果正常组中为正常滑膜细胞,模型组中滑膜细胞增殖明显,下层脂肪细胞减少或变形,成纤维细胞增多,伴有淋巴细胞及单核细胞浸润;MTX组及壮药低、中、高剂量组较模型组明显改善。与正常组比较,模型组血清及滑膜组织Fas表达升高,血清FasL表达降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,MTX组、壮药中、高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,MTX组、壮药低、中、高剂量组血清及MTX组、壮药中、高剂量组滑膜组织FasL表达升高(P0.05,P0.01);与MTX组比较,壮药低剂量组血清及壮药低、中剂量组滑膜组织Fas表达升高,壮药高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,壮药低、中剂量组血清及滑膜组织FasL表达降低,壮药高剂量组血清及滑膜组织FasL表达升高(P0.05,P0.01)。结论调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制,减缓类风湿关节炎的病理反应可能是壮药龙钻通痹方控制与治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

补肾活血方延缓腰椎间盘退变的实验研究

目的：探讨补肾活血方对应力改变后椎间盘自身修复和延缓退变能力的影响及影响机制。方法：利用6个月龄的SD大鼠，作椎闻盘损伤模型，给与补肾活血方治疗，设阴性及阳性对照组，观察椎间盘成纤维细胞超微结构、能量代谢、Ⅰ型胶原蛋白相关基因mRNA的表达。结果：补肾活血方剂能提高SOD活力，减少MDA的生成。活化成纤维细胞，促进成纤维细胞合成胶原纤维。上调Ⅰ型胶原mRNA的表达，促进Ⅰ型胶原蛋白的合成。延缓和对抗椎间盘组织退化。结论：补肾活血方具有激活成纤维细胞合成胶原的作用，对抗和延缓椎间盘的退变。     

蠲痹历节清方抑制NLRP3炎症体抗大鼠急性痛风性关节炎机制研究

目的 观察蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NLRP3炎症体相关蛋白及白介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨蠲痹历节清方防治AGA大鼠可能存在的机制.方法 将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组,造模组造模成功后随机分成模型组、蠲痹历节清方组、依托考昔组、异甘草素组,并予相应药物干预,模型组及...     

生肌化瘀方及拆方对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达影响

目的 :观察生肌化瘀方及拆方对创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达的影响 ,探讨其促进创面修复呈皮肤修复的作用机理。方法 :采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞 ,以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照 ,分别加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清 ,运用NthernBlot分子杂交法检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA的表达。结果 :生肌方能够加强创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,高于模型组 ;化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,低于模型组 ;生肌化瘀方各剂量组Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达与正常组相比差异均无显著性。结论 :生肌化瘀方通过调控创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达使创面修复呈皮肤修复     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响

目的:观察补肾调冲方对雷公藤多苷片所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)雌性大鼠卵巢性激素水平和卵巢中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),促进凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)蛋白及mRNA表达的影响,探讨补肾调冲方的预防作用。方法:SD雌性大鼠42只,随机分为正常组,模型组,结合雌激素组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(estradiol,E_2),卵泡刺激素(follicule-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),孕酮(progesterone,P)水平。蛋白质免疫印迹(Western blot)法和逆转录-聚合酶链式方应(RT-PCR)法检测卵巢组织中Bcl-2,Bax蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH,LH含量明显升高,E_2的含量明显降低,卵巢组织中Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显降低,Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.01);补肾调冲方各给药组和结合雌激素组E_2的含量均高于模型组(P0.01),其中补肾调冲方低、中、高剂量和结合雌激素组E_2含量与正常组比较,差异无统计学意义。补肾调冲方各给药组和结合雌激素组FSH,LH的含量均低于模型组(P0.01);低、中、高剂量组和结合雌激素组FSH,LH含量与正常组比较,差异无统计学意义。各组与正常组P含量比较差异无统计学意义。补肾调冲方预防低、中、高剂量组和结合雌激素组Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显高于模型组(P0.01);Bax蛋白及mRNA的表达明显低于模型组(P0.01)。结论:补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,可以预防卵巢早衰的发生。其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,维持Bcl-2,Bax的平衡,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡的过度凋亡,改善卵巢的功能。     

壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响北大核心CSCD

目的观察壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余50只采用牛Ⅱ胶原蛋白与弗氏不完全佐剂混合液诱导制作CIA模型,造模后分为模型组,甲氨蝶呤组(MTX组),壮药龙钻通痹方高、中、低剂量组(简称壮药高、中、低剂量组),每组10只。模型组灌服生理盐水,MTX组按0.27mg/100g大鼠体重灌胃MTX溶液,每周1次,灌胃4周;壮药高、中、低剂量组分别予以壮药龙钻通痹方汤剂(4.32、2.16、1.08g/mL)灌胃,每日2次,灌胃30日。HE染色观察滑膜形态变化;ELISA法定量检测干预后大鼠血清、滑膜组织匀浆液Fas/FasL的表达。结果正常组中为正常滑膜细胞,模型组中滑膜细胞增殖明显,下层脂肪细胞减少或变形,成纤维细胞增多,伴有淋巴细胞及单核细胞浸润;MTX组及壮药低、中、高剂量组较模型组明显改善。与正常组比较,模型组血清及滑膜组织Fas表达升高,血清FasL表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,MTX组、壮药中、高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,MTX组、壮药低、中、高剂量组血清及MTX组、壮药中、高剂量组滑膜组织FasL表达升高(P<0.05,P<0.01);与MTX组比较,壮药低剂量组血清及壮药低、中剂量组滑膜组织Fas表达升高,壮药高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,壮药低、中剂量组血清及滑膜组织FasL表达降低,壮药高剂量组血清及滑膜组织FasL表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制,减缓类风湿关节炎的病理反应可能是壮药龙钻通痹方控制与治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方组(10只,简称中药组)。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/(kg·d)灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30天。给药结束后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药温化蠲痹方可能通过下调CIA大鼠滑膜VEGF水平,抑制血管翳形成而治疗CIA。     

痹祺胶囊治疗胶原诱导型关节炎大鼠的作用机制研究

目的探究痹祺胶囊对胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠中软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)表达的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为对照组,其余大鼠建立CIA模型,CIA大鼠随机分为模型组,痹祺胶囊中、高剂量(0.6、0.9g/kg)组,甲氨蝶呤(1.67mg/kg)组,连续给药4周,观察大鼠的一般情况和足肿胀变化,检测大鼠血清中COMP水平、滑膜中COMP蛋白表达、软骨中COMP mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中COMP水平、滑膜中COMP蛋白表达、软骨中COMP mRNA表达均显著升高(P<0.001);与模型组比较,各给药组大鼠血清中COMP水平、滑膜中COMP蛋白表达、软骨中COMP mRNA表达均显著降低(P<0.001)。结论痹祺胶囊可能通过下调COMP表达,抑制炎性细胞浸润、滑膜增生和关节软骨破坏,从而治疗类风湿关节炎。     

黑骨藤乙醇提取物影响人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及COX-2、PGE-2表达的研究

目的观察黑骨藤乙醇提取物(Periploca forrestii ethanol extract,PFE)对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(Rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASF)的增殖以及环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、前列腺素2(prostaglandin E2,PGE2)的表达影响。方法离体培养第4代的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,同时设立空白对照组和试验组,两组细胞均先予白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)干预刺激,试验组予不同浓度的PFE(125,250,500μg/ml)干预细胞,24h后,采用MTT法检测细胞抑制率。用RT-RCR法测定COX-2的mRNA表达。免疫蛋白印记(WB法)检测COX-2的表达量,ELISA法检测48h末,细胞培养上清中PGE2的含量,结果干预48h后,PFE对细胞抑制率呈量-效果正相关性,各剂量组的PFE对PGE2、COX-2mRNA及其蛋白的表达量有明显抑制(P0.05),结论 PFE能抑制IL-1β诱导的RASF增殖,在mRNA和蛋白两个层面均对RASF高表达的COX-2有明显抑制效果,同时对该细胞分泌的炎症效应分子PGE2也有抑制作用,这可能是黑骨藤治疗类风湿关节炎的潜在机制之一。     

健脾清肠补肾方药物血清对破骨细胞凋亡途径的影响

目的观察健脾清肠补肾方药物血清对成熟破骨细胞凋亡的影响,探讨其可能作用机制。方法通过100 ng/mL核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)和10 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)共同诱导小鼠单核细胞RAW264.7细胞株分化为破骨细胞,采用TRAP特异性染色进行鉴定。制备低、中、高剂量健脾清肠补肾方药物血清,终浓度分别为2.5%、5%、10%健脾清肠补肾方。流式细胞术检测破骨细胞凋亡率,Westernblot检测破骨细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果采用RANKL和M-CSF可成功诱导RAW264.7细胞株分化为破骨细胞。与空白对照组比较,健脾清肠补肾方各剂量组细胞凋亡率均明显升高(P0.05),破骨细胞Bcl-2蛋白表达明显下调、Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2/Bax比值明显降低,其中健脾清肠补肾方高剂量组变化最明显。结论健脾清肠补肾方药物血清可促进破骨细胞凋亡,其作用机制可能是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。