基于“肺与大肠相表里”研究健脾固肠方通过调节肠道免疫平衡抑制肺癌小鼠肿瘤转移的机制

目的基于“肺与大肠相表里”的中医基础理论,探讨中药健脾固肠方通过调节肠道菌群、改善肠道免疫屏障功能、调节肠道Treg/Th17细胞的平衡,抑制肺癌侵袭及转移的机制。方法采用C57BL/6雄性小鼠,右腋下接种Lewis肺癌细胞混悬液2 mL(1×10⁶/mL),建立皮下移植瘤模型。将18只造模成功小鼠随机分为3组,即荷瘤组、化疗组及中药+化疗组,每组6只。造模成功后进行干预,化疗组和中药+化疗组连续3 d腹腔注射顺铂溶液液(0.1 mg/d),荷瘤组连续3 d腹腔注射等体积的0.9%NaCl溶液。从第1天起中药+化疗组予以健脾固肠方0.6 mL/d灌胃,荷瘤组和化疗组每日给予等体积的0.9%NaCl溶液灌胃。18只小鼠于干预21 d后取材,测定3组肺癌小鼠体质量、种植瘤的瘤质量、肺转移灶个数；高通量测序法测试小鼠肠道菌群；RT-PCR实验分析小鼠小肠淋巴组织Th17和Treg细胞相关转录因子RORγt和 FoxP3表达水平。结果中药+化疗组小鼠的一般情况、体质量优于化疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。中药+化疗组抑瘤率优于化疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药+化疗组的肺转移抑制率优于化疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。与化疗组比较,中药+化疗组小鼠肠道菌群多样性指标Chao1、shannon明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。与化疗组比较,中药+化疗组小鼠肠道免疫指标FoxP3、RORγt减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中药健脾固肠方可能通过增加肺癌小鼠肠道菌群多样性、改善肠道菌群、调节肠道Th17/Treg细胞平衡,维持肠道免疫平衡,改善机体免疫,进而抑制肺癌小鼠肺癌细胞的侵袭及转移。     

活血药、益气活血药对肺癌转移过程中Th17/Treg细胞平衡及其机制影响

目的:观察苏木、苏木+黄芪对Lewis荷瘤小鼠肺癌转移过程脾Th17/Treg细胞及其平衡机制影响,为中药逆转肿瘤炎性微环境中免疫逃逸和抑制肿瘤转移机制提供实验依据。方法:复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌动物模型,观察肺转移抑制率;流式细胞术检测各组小鼠脾Th17/Treg细胞百分比动态变化;RT-PCR检测各组小鼠CD4+T淋巴细胞Foxp3、RORγtmRNA动态表达水平。结果:从各组药物抑制肺转移率看出,益气活血药苏木+黄芪优于单纯活血药苏木(P<0.05),与环磷酰胺组相似(P>0.05);除苏木黄芪组外,各荷瘤组小鼠脾Th17与Treg细胞随时间迁移呈现出上升趋势,且苏木黄芪组较其余各组有显著差异(P<0.05),Th17/Treg比值亦随时间迁移呈现出上升趋势,与正常组比较均存在比值的平衡失调;Th17与Treg细胞关键转录分子RORγt、Foxp3呈现出与Th17和Treg细胞相应的动态改变。结论:益气活血药苏木+黄芪组在抑制肿瘤形成过程中的炎性微环境优于单纯活血药苏木组和环磷酰胺组;各组药物对肿瘤转移机制均有一定的抑制作用,但益气活血药优于单纯活血药和化疗药物。     

加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症气虚证临床研究

目的:观察加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症(ITP)的疗效,探讨中药复方制剂对ITP患者Treg/Th17免疫紊乱调控的有效干预机制。方法:将符合标准的60例慢性ITP患者随机分为中药组和激素组各30例,中药组予加味归脾合剂治疗,激素组予泼尼松治疗,记录治疗前后ITP患者血清中细胞因子Treg细胞、Th17细胞以及Treg/Th17比值,Foxp3mRNA、RORγt mRNA、Foxp3/RORγt比值检测结果及外周血血小板计数。结果 :(1)血小板计数:中药组和激素组治疗后均有所上升,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Treg/Th17:中药组与激素组治疗前与正常对照组比较,Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值差异均有统计学意义(P0.05);治疗后中药组Treg细胞表达与Treg/Th17比值、Foxp3mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值检测均高于激素组,组间比较差异有统计学意义(P0.05);Th17和RORγtmRNA表达,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:加味归脾合剂可有效提升血小板计数及Treg细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、Foxp3/Ro RγT比值,其上调Treg细胞及Foxp3mRNA表达,从而改善Treg/Th17免疫功能紊乱,健脾益气统血是治疗ITP气虚证的主要机制之一。     

健脾解毒中药对Lewis肺癌小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞免疫调节的影响

目的:研究健脾解毒中药方对Lewis肺癌小鼠脾脏淋巴细胞增殖及CD4+CD25+Treg细胞的影响,探讨健脾解毒中药治疗肺癌的机理。方法:将18只C57BL/6纯系小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞0.2ml,随机分为中药组和模型组,并设6只正常鼠对照观察。造模后第5天开始给药,中药组灌服健脾解毒方0.4ml/只,模型组予生理盐水。第14天处死小鼠,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖,流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量。结果:荷瘤中药组和荷瘤模型组与正常组比较,脾淋巴细胞增殖功能均有降低,三组差别有统计学意义(P<0.05);荷瘤中药组和荷瘤模型组脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的比例明显高于正常组,三组差别有统计学意义(P<0.05)。结论:实验证实,Lewis肺癌荷瘤环境下,脾细胞的CD4+CD25+Treg细胞的数量增多,脾淋巴细胞增殖低下。健脾解毒中药可增强荷瘤鼠细胞免疫功能。     

苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞及相关调控分子的干预作用

目的:观察苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠脾CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达及相关调控分子的干预作用。方法:复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌动物模型,动态观察苏木、苏木+黄芪抑瘤率、肺转移抑制率,流式细胞术检测小鼠脾CD4+CD25+Treg表达,免疫磁珠分选小鼠脾CD4+CD25+细胞,RT-PCR检测小鼠脾CD4+CD25+细胞和瘤组织Foxp3、CTLA-4mRNA表达。结果:苏木组6d、苏木+黄芪组10d瘤重低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组20d肺转移抑制率为77.75%;15d苏木+黄芪组小鼠脾CD4+CD25+细胞表达低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组荷瘤小鼠瘤组织CTLA-4、Foxp3mRNA表达及脾CD4+CD25+分选后细胞Foxp3 mRNA表达低于荷瘤对照组(P0.05)。结论:益气活血中药组方苏木+黄芪可调节荷瘤小鼠脾Treg及相关调控分子表达,并且在淋巴组织和肿瘤微环境中都表现出作用。     

Th17/Treg细胞在健脾方防治克罗恩大鼠中的作用机制

目的:观察Th17/Treg细胞平衡在健脾方防治TNBS诱导的克罗恩大鼠中的作用机制;方法:24只清洁级雄性SD大鼠随机分为:1)正常对照组NG(n=8):从造模第2周起双蒸水灌胃,1次/d,灌胃量按1 mL/100 g,共3周;2)TNBS模型组MG(n=8):从第1周开始TNBS灌肠,灌肠剂量(m L)=体重(g)×0.003 m L/g,1次/周,造模持续共4周;3)模型+健脾方防治组JP(n=8):从造模第2周开始,在TNBS灌肠后的第2天新增中药健脾方灌胃治疗,灌胃量按1 m L/100 g,1次/d,灌胃持续3周;采用ELISA、免疫组织化学、real-time PCR等技术观察各组大鼠血液、结肠黏膜中与Th17、Treg分化和功能密切相关的IFN-γ、IL-17、RORγt、FoxP3蛋白与基因的表达差异;结果:健脾方能通过下调Th1细胞释放的IFN-γ,进而来调节Th1/Th2的平衡,同时也能通过下调Th17细胞分泌IL-17、RORγt炎性反应因子的分泌和促进Treg细胞分泌的抗炎因子FoxP3来调节Th17/Treg的平衡,进而达到防治TNBS诱导的大鼠克罗恩病的作用。结论:健脾方能够通过调节Th17/Treg细胞平衡中多个关键细胞因子和转录因子的方式,达到预防和治疗TNBS诱导的大鼠克罗恩病炎性反应程度之目的。     

肺积方对IDO诱导Lewis肺癌小鼠模型免疫逃逸的影响

目的研究肺积方对吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)诱导Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LL/2)小鼠模型免疫逃逸的影响。方法采用C57BL/6小鼠建立LL/2-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)-IDO模型48只,将小鼠按随机数字表分为模型组(灌胃生理盐水)、中药组[灌胃肺积方水煎液100mg/(g·d)]、1-甲基-D-色氨酸(1-methyl-D-tryptophan,1-MT)治疗组[灌胃1-MT混合液100mg/(kg·d)]和紫杉醇组[腹腔注射紫杉醇15mg/(kg·d)],每组12只。造模后第2日开始干预,其中24只观察小鼠生存期,余24只在造模并干预28日后采用流式细胞术检测脾脏CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例。结果与模型组比较,中药组、1-MT组生存期延长(P0.01),中药组、1-MT组、紫杉醇组Treg比例降低(P0.01)。与紫杉醇组比较,中药组、1-MT组生存期延长(P0.01),1-MT组Treg比例降低(P0.05)。结论肺积方能抑制肺癌细胞的增殖,抑制免疫逃逸,改善免疫功能,延长荷瘤小鼠生存期。     

中医复合疗法联合动脉灌注化疗对中晚期非小细胞肺癌患者临床症状及免疫功能的影响

目的观察中医复合疗法(中药汤剂+针灸)联合动脉灌注化疗对中、晚期非小细胞肺癌患者临床疗效及免疫功能影响。方法 96例中、晚期非小细胞肺癌患者随机分为A组48例(动脉灌注化疗),B组48例(A组基础上配合中药汤剂+针灸),21 d为1个治疗周期,共治疗3周期,比较2组患者治疗前后临床症状、不良反应、血清T细胞亚群及Treg、Th17表达差异。结果 2组肺癌相关症状治疗后与治疗前比较明显改善且B组优于A组(P0.05);治疗结束后不良反应A组骨髓抑制为(47.91%)、胃肠道异常反应(39.58%)、肝功能损害(33.33%)、肾功能损害(22.91%),B组分别为:37.5%、31.25%、18.75%、14.58%,B组不良反应显著低于A组,差异具有统计学意义(P0.05);治疗后2组免疫学指标(CD3、CD4、NK、Treg)较治疗前明显降低,Th17及Th17/Treg比值明显升高(P0.05),治疗后B组CD3、CD4、NK、Th17和Th17/Treg比值高于A组,CD8、Treg低于A组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论中医复合疗法(中药汤剂+针灸)联合动脉灌注化疗可有效改善中、晚期非小细胞肺癌患者临床症状,减少化疗不良反应,改善机体免疫功能。     

基于肠道微生物探讨哮喘发病的免疫机制及黄芪的干预作用

在我们人类的肠腔系统中存在着大量的微生物,这些微生物和他们的代谢产物共同参与机体的新陈代谢及免疫反应。近年来,大量的基础及临床研究证实,肠道微生物能够通过干预Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡机制来调控支气管哮喘疾病的发生与进展程度,并且可以根据肠道菌落结构的变化情况评估罹患哮喘的风险。因此利用益生菌来调节肠道菌群从而治疗哮喘的方式引起了研究者的关注,但对其作用效果存在一定分歧。研究发现,中药黄芪对于肠道菌群存在调节作用,同时又可以干预哮喘发生的免疫环节。因此,探讨中药黄芪及其有效成分在哮喘治疗中的具体机理有利于揭示"肺-肠-菌"轴的内在联系。目的在于彰显黄芪可通过调节肠道菌群恢复"肺-肠-菌"轴的功能最后起到治疗哮喘的作用。     

健脾固肠方通过提高短链脂肪酸产生菌的丰度减轻肠癌小鼠化疗后肠道炎症反应的机制探讨

目的:本文对健脾固肠方治疗化疗后肠道炎症反应进行菌群机制研究。方法:采用小鼠结肠癌原位移植瘤模型分为化疗组、化疗联合中药组,给药14 d后进行肠道HE染色并使用16s rRNA检测菌群。结果:Chiu氏6级评分发现化疗联合中药组肠道损伤更低,多样性比较发现化疗联合中药组Simpson指数更高,化疗联合中药组中的梭菌属、毛螺菌属、双歧杆菌属、变形杆菌属等菌属明显增多;代谢通路中发现菌群毒素的代谢和脂肪酸的生物合成等通路差异有统计学意义。结论:健脾固肠方可能通过提高短链脂肪酸产生菌的丰度,进而加速菌群毒素的排泄和加快脂肪酸的生物合成,最终缓解肠道炎症反应。     

中药逐水饮对小鼠Lewis肺癌胸腔积液模型积液生成及Th17免疫平衡的影响

目的观察中药逐水饮对小鼠Lewis肺癌胸腔积液模型积液生成及Th17细胞免疫平衡的影响。方法小鼠随机分为正常对照组、模型组、逐水饮组、顺铂组、逐水饮+顺铂组。采用胸腔注射Lewis肺癌单细胞悬液的方法建立小鼠Lewis肺癌胸腔积液模型。给药结束处死小鼠,记录模型小鼠恶性胸腔积液(MPE)体积、胸壁转移瘤计数、转移瘤质量,采用流式细胞术法检测MPE和外周血中Th17、Treg细胞百分比,ELISA法检测MPE和外周血中白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平。结果与模型组比较,逐水饮组、顺铂组和逐水饮+顺铂组小鼠MPE体积、胸壁转移瘤数目减少(P 0.05),转移瘤质量减轻(P 0.05),生存期延长(P 0.05),其中逐水饮+顺铂组变化更加明显(P 0.05)。与正常对照组比较,模型组外周血中Th17细胞百分比及IL-17、IL-23水平降低(P 0.05),Treg细胞百分比及TGF-β1水平升高(P 0.05);与模型组比较,逐水饮组、顺铂组和逐水饮+顺铂组小鼠MPE和外周血中Th17细胞百分比及IL-17、IL-23水平升高(P 0.05),MPE中Treg细胞百分比及TGF-β1水平降低(P 0.05);逐水饮+顺铂组小鼠MPE和外周血中Th17细胞百分比及IL-17/IL-23水平高于逐水饮组,Treg细胞百分比及TGF-β1水平低于逐水饮组,但差异无统计学意义(P 0.05);模型小鼠MPE中Th17、Treg细胞百分比均高于其外周血中Th17、Treg细胞百分比(P 0.05)。结论中药逐水饮能够抑制小鼠MPE生成,纠正Th17细胞失衡,减轻MPE微环境免疫抑制状态,增强小鼠对肿瘤的免疫作用。     

活血药、益气活血药对不同阶段Lewis肺癌转移影响的实验研究

目的揭示活血药、益气活血药在Lewis肺癌转移过程中差异的分子机制,为中药逆转免疫逃逸提供实验依据。方法观察各组小鼠肺转移抑制率;流式细胞术检测各组小鼠脾CD4^＋;T淋巴细胞Thl7/Treg细胞百分比动态变化;ELISA法检测各组小鼠CD;T淋巴细胞培养上清中白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-23（IL-23）、γ干扰素（IFN-γ）动态水平;RT—PCR检测各组小鼠CD4＋T淋巴细胞Foxp3、RORγtmRNA动态表达水平。结果从各组药物抑制肺转移率看出,益气活血药苏木加黄芪优于单纯活血药苏木（P〈0．05）,与环磷酰胺组相似（P〉0．05）;除苏木黄芪组外,各荷瘤组小鼠脾Thl7与Treg细胞随时间迁移呈现出上升趋势;Thl7与Treg细胞的效应因子IL-17、IL-23、IFN-γ以及Thl7与Treg细胞关键转录分子RORTt、Foxp3呈现出与Thl7和Treg细胞相应的动态改变。结论益气活血药苏木加黄芪组在抑制肿瘤免疫耐受的形成和肿瘤形成过程中的免疫炎症反应优于单纯活血药苏木组和环磷酰胺组;各组药物对肿瘤转移机制均有一定的抑制作用,但益气活血药优于单纯活血药和化疗药物。     

观察犀角地黄汤对血热型银屑病的影响

目的：探讨犀角地黄汤治疗血热型银屑病的临床疗效以及对Th17/Treg失衡和肠道菌群的影响。方法：将诊断为血热型中重度寻常型银屑病的60例患者随机分成两组,观察组30例,口服犀角地黄汤;对照组30例,口服阿维A胶囊。比较两组8周后PAIS评分、临床疗效、外周血Th17和Treg水平以及肠道菌群变化。结果：治疗8周后,与对照组比较,观察组皮损面积积分明显优于治疗前;观察组总有效率为90.00%,对照组为63.33%(P<0.05);观察组Treg细胞明显高于对照组,Th17细胞以及Th17/Treg比值明显低于对照组（P<0.01）。与对照组比较,观察组肠球菌明显减少,双歧杆菌和乳酸杆菌显着增加,均存在差异（P<0.01）。结论：犀角地黄汤治疗血热型银屑病可能通过调节肠道微生态平衡,回调宿主Th17/Treg平衡状态,改善全身免疫炎症反应而发挥作用。     

黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响

目的研究16k D黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响,探讨黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机理。方法采用雄性Balb/c小鼠建立牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白高、中、低剂量组,另设空白对照组;各治疗组腹腔注射药物14天,对照组与模型组注射等体积生理盐水。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例;Western blot法检测各组小鼠脾组织中维甲酸相关孤独受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)和叉头状转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达水平。结果流式检测结果显示,黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠外周血中CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞比例(P0.01),提高CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的比例(P0.01)。Western blot结果显示黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠脾组织中RORγt的表达(P0.01),提高Foxp3的表达(P0.01)。结论黄芪糖蛋白提高Foxp3的表达水平,降低RORγt的表达水平,恢复Th17/Treg细胞之间的平衡,可能是黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的机制之一。     

消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg免疫平衡的影响

目的:探讨消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg细胞免疫平衡的影响。方法:将75只C57BL/6小鼠随机分为消水方(33.5 g·kg~(-1))组、顺铂(6 mg·kg~(-1))组、消水方(27 g·kg~(-1))+顺铂(6 mg·kg~(-1))组、模型组、空白组。除空白组小鼠胸腔内注射磷酸盐缓冲液(PBS)外,其余各组小鼠均采用Lewis肺癌细胞胸腔注射建立模型,连续给药10 d后各组取10只小鼠处死,采用流式细胞技术检测外周血中Th17,Treg细胞数量;流式微球阵列法(CBA)以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-17A(IL-17A),白细胞介素-21(IL-21),白细胞介素-23(IL-23)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脾组织维甲酸相关孤核受体γt(RORγt),叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA及蛋白表达。结果:各组小鼠外周血Th17,Treg细胞数量均高于空白组(P0.05,P0.01)。其中消水方+顺铂组、消水方组较模型组能明显增加Th17细胞数量(P0.05),降低Treg细胞数量(P0.01)。消水方+顺铂组IL-6,IL-17A,IL-21含量分别较其余各组均显著升高(P0.01);消水方+顺铂组较消水方组、模型组IL-23含量升高(P0.05),TGF-β1含量降低(P0.05)。与顺铂组、模型组比较,消水方+顺铂组、消水方组可上调脾组织中RORγt mRNA表达(P0.01),下调Foxp3 mRNA表达(P0.05)。与模型组比较,消水方+顺铂组可上调脾组织RORγt蛋白表达(P0.05),下调Foxp3蛋白表达(P0.01)。结论:消水方联合顺铂可能通过上调Th17细胞水平,下调Treg细胞水平,从而纠正Th17/Treg免疫失衡,发挥抑制MPE作用。     

肺积方联合化疗对Lewis肺癌移植小鼠免疫逃逸相关细胞因子及CD_4~+ CD_(25)~+ Treg细胞的影响

目的:通过观察肺积方联合化疗对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长情况及脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞、IL-2、IL-4、IL-10、TNF-β、IFN-r变化的影响,探讨肺积方联合化疗抗肺癌免疫逃逸的作用机制,为肺积方的临床应用提供客观依据。方法:采用随机对照研究方法,将64只Lewis肺癌移植小鼠经随机分为对照组、化疗组、肺积组、综合组(肺积方联合化疗),并分别以肺积方、肺积方联合DDP、DDP药物干预,观察小鼠瘤体变化,并以ELISA法检测小鼠外周血细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、TNF-β、IFN-r变化,以流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞含量。结果:化疗组、肺积组、综合组瘤体、瘤重均小于对照组(P0.05),肺积组瘤体、瘤重大于化疗组(P0.05),综合组瘤体、瘤重均小于化疗组和肺积组(P0.01);综合组IL-2、IL-4水平明显高于其他3组(P0.05),综合组IL-10、IFN-r、TNF-β水平低于其他3组(P0.05),肺积组IL-2、IL-4、TNF-β水平与化疗组比较无差异(P0.05),肺积组IL-10、IFN-r水平高于化疗组(P0.05);对照组、化疗组、肺积组、综合组第7天脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞占CD4+T细胞比值无差异(P0.05);第14天对照组脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞占CD4+T细胞比值仍明显高于其他3组(P0.05);综合组第14天脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞占CD4+T细胞比值明显低于化疗组及肺积组(P0.01);化疗组脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞占CD4+T细胞比值低于肺积组(P0.05)。结论:肺积方联合化疗具有抗Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,此种作用与其下调CD4+ CD25+ Treg细胞含量,上调IL-2、IL-4,下调IL-10、TNF-β相关。     

紫龙金片对S180肉瘤小鼠细胞因子的调控作用

目的:探讨紫龙金片对S180肉瘤小鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法:选择10只未接种瘤细胞的小鼠定为正常组,将确定造模成功的40只荷瘤小鼠随机分为荷瘤组、紫龙金组、化疗组、紫龙金+化疗组,每组各10只。荷瘤组给予0. 2 m L蒸馏水灌胃,0. 2 m L生理盐水标准腹腔注射;紫龙金组给予紫龙金溶剂水1. 3 g·kg-1灌胃,0. 2 m L生理盐水标准腹腔注射;化疗组给予0. 2 m L蒸馏水灌胃,52 mg·kg-1环磷酰胺水溶液标准腹腔注射;紫龙金+化疗组给予紫龙金溶剂水1. 3 g·kg-1灌胃,52 mg·kg-1环磷酰胺水溶液标准腹腔注射;正常组不给药。称取各组小鼠的瘤质量,并计算抑瘤率。利用流式细胞仪检测S180肉瘤小鼠外周血中的Treg细胞及Th1、Th2、Th17所分泌的细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-6、IL-10、IL-2、IL-17A、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的含量。结果:紫龙金组、化疗组和紫龙金+化疗组抑瘤率分别为10. 24%、16. 98%、22. 10%,其中两药联用组抑瘤率最高、瘤质量最小。紫龙金片能调节S180肉瘤小鼠外周血中Treg细胞,使其与正常组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。瘤组与正常组比较,IL-2、TNF和IFN-γ水平均有所升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与正常组比较,荷瘤组IL-4、IL-6明显下降,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与荷瘤组比较,化疗组、紫龙金组及紫龙金+化疗组IL-4水平差异无统计学意义(P 0. 05);与荷瘤组比较,紫龙金组IL-6水平提高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。紫龙金及紫龙金+化疗组能降低IL-10及IL-17水平,但与正常组比较,差异无统计学意义(P0. 05)。结论:紫龙金片可通过调节肿瘤机体免疫相关细胞因子水平来促进细胞及体液的免疫应答,其抑瘤作用机制与对Th1、Th2、Th17、Treg细胞因子免疫格局的调控密切相关。     

中药肺岩宁颗粒调节晚期肺癌患者Th17/Treg失衡的作用

目的:评估肺岩宁颗粒调节非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血Th17/Treg失衡的作用及Th17/Treg在疗效评价中的意义。方法:选择我院收治的60例NSCLC患者,随机分为治疗组(n=30)和对照组(n=30),同时20例健康志愿者作为健康对照组,治疗组患者口服肺岩宁颗粒治疗,对照组口服1/10剂量的"肺岩宁颗粒"进行模拟治疗,健康对照组服用生理盐水,疗程为8周。比较两组患者近期的疗效,同时以Treg细胞、Th17细胞和Th17/Treg比值为检测指标,评价肺岩宁颗粒的治疗作用和对免疫功能的调节作用。结果:治疗组有效率和疾病控制率均高于对照组。治疗前,两组外周血Treg细胞比例、Th17细胞比例和Th17/Treg比值差异均无统计学意义(P0.05);治疗后与对照组比较,治疗组外周血Treg细胞比例明显降低(P0.01),而Th17细胞比例和Th17/Treg比值明显升高(P0.01)。此外,在经治疗后,无淋巴结转移的NSCLC患者Treg细胞比例显著低于出现淋巴结转移的NSCLC患者(P0.05),而Th17细胞比例和Th17/Treg比值高于出现淋巴结转移的NSCLC患者(P0.05)。鳞癌患者外周血中Treg细胞比例明显低于腺癌患者,而Th17细胞比例和Th17/Treg比例明显高于腺癌患者,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:肺岩宁颗粒对非小细胞肺癌具有一定的疗效,其作用机制与调节Treg细胞/Th17细胞比例失衡有关,并且对无淋巴结转移和鳞癌患者的治疗更为有效。Th17/Treg细胞检测可作为非小细胞肺癌疗效观察的重要客观指标。     

健脾解毒方对脾虚证荷瘤小鼠肠道菌群的调节作用

目的探讨健脾解毒方对脾虚荷瘤鼠移植瘤的抑制作用、对脾虚小鼠肠道菌群的调节作用及两者之间的相关性。方法 48只小鼠随机取36只,利用番泻叶水煎剂成功制备脾虚模型,剩余12只为N.S.组,再使用CT26细胞构建移植瘤模型。36只脾虚模型小鼠则随机分为脾虚组、健脾解毒方低剂量组、健脾解毒方高剂量组,每组12只。连续灌胃给药4周后脱颈椎处死各组小鼠,称取瘤重,计算抑瘤率;计算胸腺指数和脾指数;流式细胞仪检测CD4~+、CD8~+T细胞比例,ELISA法检测血清中IL-17水平;16S rRNA基因测序法检测肠道菌群多样性。结果脾虚组平均瘤重、血清IL-17水平高于N.S.组和健脾解毒方低、高剂量组,同时脾虚组胸腺指数、脾指数、外周血CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+比值低于N.S.组和健脾解毒方低、高剂量组,差异均有统计学意义(P0.01);且脾虚组小鼠肠道菌群中拟杆菌门显著增多、厚壁菌门显著减少,存在明显的菌群失调现象。与N.S.组及健脾解毒方低、高剂量组比较,脾虚组小鼠肠道中双歧杆菌及乳杆菌减少,而肠杆菌及肠球菌增多。结论健脾解毒方具有抑制脾虚荷瘤鼠皮下瘤生长、提高CD4~+/CD8~+比例、减少炎症因子IL-17分泌的作用,这些作用可能与其改善脾虚小鼠的肠道菌群失调相关。     

肝复方对原发性肝癌模型小鼠肠道菌群影响的实验研究

目的:探讨肝复方对原发性肝癌(PHC)模型小鼠肠道菌群的影响,为肝复方治疗PHC的作用机制提供实验依据。方法:于92只ICR小鼠中取32只,随机分为正常1组与模型1组,每组16只,观察PHC小鼠造模前后肠道菌群的变化。另60只随机分为正常2组、模型2组、益生菌组、肝复方组,每组15只。肝复方组给予肝复方灌胃,剂量为15.6mg/(kg·d),模型2组、正常2组分别给予等量无菌水灌胃,益生菌组给予益生菌VSL#3灌胃,剂量为6mg/(kg·d)。每天灌胃1次,灌胃剂量均为临床等效剂量,连续用药14d。观察肝复方对PHC小鼠肠道菌群的影响。结果:PHC小鼠造模后双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、肠球菌数量均多于造模前,差异有统计学意义(P0.05)。与模型2组比较,肝复方组、益生菌组所研究肠道菌群数量均下降,差异有统计学意义(P0.05);肝复方组的肠道细菌及益生菌组的乳酸杆菌、大肠埃希菌、肠球菌与正常2组比较,差异无统计学意义(P0.05);肝复方组的乳酸杆菌、大肠埃希菌、肠球菌与益生菌组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:PHC模型小鼠存在肠道菌群失衡情况,肝复方能有效调节紊乱的PHC模型小鼠的肠道菌群。