左归丸拆方通过调节β2-AR介导的OPG/RANKL信号通路提高去卵巢大鼠骨密度

目的:探讨左归丸及其拆方治疗绝经后骨质疏松症(PMOP)的作用机制。方法:去卵巢法建立骨质疏松症模型,将40只SD大鼠平均随机分为假手术组,模型组(0. 1 mL·kg~(-1)·d~(-1)),17β-雌二醇组(50μg·kg~(-1)·d~(-1))和左归丸补阳药低、高剂量(0. 55,1. 1 g·kg~(-1)·d~(-1))组。灌胃给药12周后,显微CT(μ-CT)检测右侧远端股骨骨密度(BMD)及显微结构;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠股骨形态学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽(β-CTX)和骨特异性碱性磷酸酶(BALP)浓度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑β2-肾上腺素能受体(β2AR),胫骨平台骨保护素(OPG)和核转录因子-κB受体激活因子配体(RANKL)蛋白及mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠BMD显著下降(P0. 01),骨组织形态破坏;血清BALP含量降低,β-CTX含量升高(P0. 01);下丘脑β2AR,胫骨RANKL mRNA及蛋白表达量升高(P0. 05,P0. 01),胫骨OPG mRNA及蛋白表达量降低(P0. 05,P0. 01)。治疗后,与模型组比较,各用药组大鼠BMD升高(P0. 01),骨组织形态改善;血清BALP含量升高,β-CTX含量降低(P0. 01);下丘脑β2AR,胫骨RANKL mRNA及蛋白表达降低(P0. 05,P0. 01),胫骨平台OPG mRNA和蛋白表达升高(P0. 05,P0. 01)。结论:左归丸拆方中补阳药能通过调节β2AR介导的OPG/RANKL信号通路提高去卵巢大鼠骨密度,"阳中求阴"配伍特点是左归丸治疗PMOP的关键之一。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠β2AR/β-arrestin2信号通路的影响

目的:探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)信号通路的影响,以及血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中IL-17表达的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为7组,即正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量(40,20,10 g·kg~(-1)·d~(-1))组、消咳喘组(5 g·kg~(-1)·d~(-1))、二陈汤组(5 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。以烟熏与脂多糖(LPS)气管滴注并用的方法制备大鼠COPD大鼠模型。造模成功后,治疗组分别灌胃给药,正常及模型组则灌等量的生理盐水。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-17(IL-17)的含量;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测β_2AR的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织β_2AR的蛋白表达;采用免疫组化检测肺组织β_2AR,β-arrestin2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肺组织中β_2AR的蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组比较,肺组织中β_2AR的蛋白表达显著增加(P0.01),其中二陈汤加味中剂量组与其他各组均有差异(P0.05)。与正常组比较,模型组β_2AR mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组、二陈汤组中β_2AR的mRNA表达均显著升高(P0.01)。其中二陈汤加味中剂量组与其他各给药组比较升高显著(P0.01)。与正常组比较,模型组血清中IL-17含量显著升高(P0.01),与模型组比较,各给药组血清中IL-17的含量均受到一定程度的抑制,其中二陈汤加味中剂量组受到的抑制程度尤为明显(P0.05)。结论:二陈汤加味可能通过升高β_2AR,β-arrestin2的表达,并以此降低IL-17的含量,来对抗COPD大鼠的炎症反应,并改善肺功能。     

三七皂苷对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:研究三七皂苷(PNS)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的大鼠肾小管细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用,并从沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/TGF-β_1/Smad通路分析其可能机制。方法:在DMEM培养基中,用10%胎牛血清培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常组,TGF-β_1组(5μg·L~(-1)),白藜芦醇组(50 mg·L~(-1)),SIRT1阻断剂EX527组(10μmol·L~(-1)),PNS组(100 mg·L~(-1)),EX527+PNS组(EX527 10μmol·L~(-1),PNS 100 mg·L~(-1)),48 h后收集细胞;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测SIRT1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏附蛋白(E-cadherin),TGF-β_1,Smad3,Smad4 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1,α-SMA,E-cadherin,TGF-β_1蛋白表达。结果:与正常组比较,TGF-β_1组α-SMA mRNA及蛋白表达明显增多(P 0. 05),E-cadherin表达显著减少(P 0. 01);与TGF-β_1组比较,PNS,白藜芦醇组,E-cadherin mRNA及蛋白表达均显著增加(P 0. 01),α-SMA表达显著减少(P 0. 01),EMT发生被抑制,同时,SIRT1表达显著增加(P 0. 01),TGF-β_1,Smad3,Smad4表达显著降低(P 0. 01)。在SIRT1阻断剂EX527的干预下,PNS则不能发挥明显抑制作用。结论:PNS可以阻止TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞EMT的发生,其机制可能是通过激活SIRT1进而抑制TGF-β_1/Smad通路实现的。     

基于β2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路的清肠化湿颗粒防治溃疡性结肠炎的作用机制

目的:观察清肠化湿颗粒对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠及人结肠癌上皮细胞株HT-29炎症模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的干预作用。方法:取8只大鼠作为空白组,其余大鼠采用三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)灌肠法复制UC大鼠模型;待模型建立成功后,随机分为模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP,1.0 g·kg~(-1))组,清肠化湿颗粒低、中、高剂量(2.8,5.5,11.0 g·kg~(-1))组,每组8只,灌胃给药10 d,每日1次;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定UC大鼠结肠组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),MMP-2,MMP-9,胰岛素样生长因子-1(IGF-1),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO),一氧化氮(NO),一氧化氮合成酶(iNOS),谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px);免疫组化法检测模型大鼠结肠黏膜β_2AR,β-arrestin2,NF-κB定位表达;采用肿瘤坏死因子与脂多糖诱导HT-29细胞炎症模型;噻唑蓝(MTT)比色法检测清肠化湿颗粒对细胞增殖的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中β_2AR,β-arrestin2,NF-κB蛋白表达量。结果:造模后,模型组大鼠较空白组大鼠结肠黏膜的结肠损伤分数明显升高;与模型组比较,3个剂量的清肠化湿颗粒给药组结肠黏膜损伤明显下降(P0.05,P0.01),大鼠结肠组织IGF-1,SOD,GSH-Px含量与β_2AR,β-arrestin2表达明显上升,MIF,MMP-2,MMP-9,MDA,MPO,NO,iNOS含量及NF-κB表达明显下降(P0.05,P0.01)。结论:清肠化湿颗粒可缓解UC氧化应激反应及肠道炎症,其作用与激活β_2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路有关。     

抗纤灵方对肾纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除所致肾纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其分子作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组(n=10),假手术组(n=10),5/6肾切除肾纤维化造模组(n=30)。将造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组。氯沙坦钾组、抗纤灵方组每日分别给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg-1)及抗纤灵方(21 g·kg-1)灌胃治疗,其余组都用等体积的生理盐水。持续8周灌胃后处死,检测各组大鼠血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(24 h-Pro);苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学改变;马松(Masson)染色观察肾脏纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肾脏转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad2,Smad3,Smad7蛋白和mRNA在肾脏组织中的表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠的SCr,BUN,24 h-Pro上升,纤维化面积和肾脏损伤评分增加,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白表达升高,Smad7 mRNA与蛋白表达显著下降(P 0. 01)。与模型组相比,氯沙坦钾组、抗纤灵方组可减少纤维化面积,降低肾脏损伤评分,SCr,BUN,24 h-Pro,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白的表达水平,Smad7mRNA与蛋白表达显著上调(P 0. 01),但低于正常组与假手术组的水平。结论:中药抗纤灵方可通过抑制TGF-β_1/Smad通路来延缓肾纤维化。     

二陈汤加味对COPD大鼠转化生长因子-β1，组蛋白去乙酰化酶2基因表达的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及其受体(TGF-βRII)基因表达,外周血单个核细胞(PBMCs)中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因表达及活性的影响。方法:采用烟熏加脂多糖方法制备COPD大鼠模型。随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组(20,10,5 g·kg~(-1))。正常组、模型组灌胃生理盐水(10 g·kg~(-1)),二陈汤加味高、中、低剂量组分别灌胃,连续14 d。荧光酶联免疫法测定PBMCs中HDAC2活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定肺组织匀浆中TGF-β_1及PBMCs中HDAC2含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肺组织匀浆中TGF-β_1mRNA及PBMCs中HDAC2 mRNA表达;免疫组化检测TGF-β_1与TGF-βRⅡ蛋白在肺组织的原位表达,光镜观察组织结构。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织匀浆中TGF-β_1含量升高(P0.05);肺组织中TGF-β_1mRNA,TGF-β_1与TGF-βRⅡ蛋白表达均显著增强(P0.01);模型组大鼠PBMCs中HDAC2 mRNA表达、含量及其活性均明显减低(P0.05,P0.01),差异均有统计学意义。与模型组比较,二陈汤加味高、中剂量组肺组织匀浆中TGF-β_1mRNA表达(P0.01)和TGF-β_1蛋白含量均显著降低(P0.05,P0.01),免疫组化检测肺组织中TGF-β_1与TGF-βRⅡ蛋白表达均显著弱于模型组(P0.01),PBMCs中HDAC2 mRNA表达、含量及其活性均升高(P0.05,P0.01),肺组织结构明显改善。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能与增强PBMCs中HDAC2基因表达,提高HDAC2活性,抑制TGF-β_1及其受体基因的表达有关。     

枳术丸对脾虚证慢传输型便秘小鼠肠道运动及PLC-γ1/PLC-γ2信号通路的影响

目的:探讨枳术丸对脾虚证慢传输型便秘(STC)小鼠肠道传导功能的干预作用,及对小鼠结肠组织磷脂酶C-γ_1(PLC-γ_1)/磷脂酶C-γ_2(PLC-γ_2)信号通路表达的影响。方法:将无特定病原体(SPF)健康小鼠随机分为正常组与造模组。采用番泻叶灌胃造成脾虚状态,然后控制饮食饮水的方法造成脾虚便秘的小鼠模型,造模完成后将模型组小鼠随机分为模型组、枳术丸组、莫沙必利组,枳术丸组按9. 0 g·kg~(-1)·d~(-1)给药,莫沙必利组按2. 5 mg·kg~(-1)·d~(-1)给药,模型组和正常组给予等剂量的蒸馏水,连续给药7 d,治疗完成后用印度墨水在结肠中推进的长度计算小鼠肠道推进率;用D-木糖试剂盒测定小鼠血清D-木糖含量;用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织病理改变;采用免疫组化法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠结肠组织PLC-γ_1,PLC-γ_2蛋白的表达水平;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测PLC-γ_1,PLC-γ_2mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肠道推进率及血清D-木糖值均显著降低(P 0. 01),HE染色观察结肠黏膜明显充血、水肿,结肠组织PLC-γ_1,PLC-γ_2蛋白与mRNA表达水平均显著减少(P 0. 01);与模型组比较,枳术丸组和莫沙必利组小鼠肠道推进率及血清D-木糖含量均显著增加(P 0. 01),HE染色观察结肠黏膜充血、水肿及炎症细胞浸润改善,PLC-γ_1,PLC-γ_2蛋白与mRNA表达水平均显著升高(P 0. 01)。结论:枳术丸可有效促进脾虚便秘小鼠的肠道运动,改善便秘症状,其相关的作用机制可能与提高脾虚便秘小鼠结肠组织中PLC-γ_1与PLC-γ_2的表达有关。     

淫羊藿-女贞子配伍对糖皮质激素性骨质疏松大鼠TGF-β1/Smads通路的影响

目的:观察淫羊藿-女贞子煎剂及其有效成分提取物配伍对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads通路相关蛋白的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:雄性SPF级SD大鼠49只,随机分为正常组,模型组,淫羊藿-女贞子提取物高、低剂量组(200,100 mg·kg~(-1)),淫羊藿-女贞子水煎剂高、低剂量组(7,3.5 g·kg~(-1))和钙尔奇组(0.277 3 g·kg~(-1))。除正常组外,大鼠两大腿内侧交替肌肉注射地塞米松(1 mg·kg~(-1))造模,每周2次。8周后,观察大鼠体重变化,取大鼠股骨,称量其湿重、干重以及煅烧后的灰重,计算股骨湿重、干重、灰重和体积的比值,采用免疫荧光法检测大鼠股骨TGF-β_1,磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3),Smad4,Smad7蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠体重和骨量均降低(P0.01),骨组织TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达显著降低(P0.01),Smad7蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组体重和骨量均显著增加,各淫羊藿-女贞子煎剂及提取物组大鼠股骨TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),Smad7蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:淫羊藿-女贞子通过上调TGF-β_1/Smads通路中TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达,下调Smad7蛋白表达,增强成骨细胞功能,减少GIOP大鼠骨量丢失。     

黄精丸对阿尔茨海默病大鼠大脑的抗氧化作用及Aβ1-42，APP蛋白表达的影响

目的:探讨黄精丸药方(Huangjingwan,HW)对阿尔茨海默病(AD)大鼠大脑的抗氧化作用及β-淀粉样多肽1-42(Aβ_(1-42)),淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法:SD大鼠随机分成正常组,假手术组,AD模型组,HW低、中、高剂量组(相当药丸剂量1,3,9 g·kg~(-1)·d~(-1)组)。给大鼠腹腔注射1. 25%D-半乳糖液(120 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续6周)后,再右侧脑室一次性注射Aβ_(1-42)10μg,制作大鼠AD模型;造模2周后各药物组大鼠灌胃相应剂量试验药物,假手术组及AD模型组大鼠灌胃给生理盐水1 m L,每天1次。灌胃持续8周。采用跳台实验评价各大鼠的学习记忆能力;体质量10%的负荷游泳实验测试各大鼠的体能耐力变化;比色法检测各大鼠大脑组织超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽还原酶(GR),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)抗氧化酶系活性,谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)含量变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各大鼠大脑组织白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Aβ_(1-42)与APP蛋白含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各大鼠大脑APP蛋白表达变化。结果:与正常组比较,AD模型组大鼠表现出明显的痴呆状态,少动易呆卧,学习反应时间延长,学习记忆错误次数显著增多,体能衰减明显,大脑内抗氧化酶(SOD,GR,GSH-Px)活性及抗炎因子GSH水平显著降低,炎症因子MDA,IL-1β,TNF-α水平显著升高,Aβ_(1-42)蛋白含量显著升高,APP蛋白含量显著下降(P 0. 01)。与AD模型组比较,HW低、中、高剂量均可改善AD大鼠的痴呆症状,提高学习记忆成绩,改善机体虚弱、提高体能,升高大脑内SOD,GR,GSH-Px活性及抗炎因子GSH水平,降低MDA,IL-1β,TNF-α水平,并能降低大脑内Aβ_(1-42)及升高APP蛋白水平(P 0. 05,P 0. 01);且1～9 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量范围内的HW,随剂量增加,药效作用越明显。结论:HW有防治AD的功能,这一作用与HW可以增强脑内抗氧化系统功能、降低神经炎症反应、降低氧化应激引发的Aβ_(1-42)沉积、维持APP蛋白表达水平等有关。     

葛根散对酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织结构NOS活力及α-SMA,Cx43,TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨中药解酒方葛根散对酒精性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎平滑肌组织结构一氧化氮合酶(NOS)活力及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),缝隙连接蛋白基因43(Cx43),转化生长因子-β1(TGF-β1) m RNA和蛋白表达的影响,为临床应用葛根散治疗酒精性ED提供实验依据。方法:将SD大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、葛根散低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg~(-1));除正常组外,其他各组按照15 m L·kg~(-1)·d~(-1)给予乙醇干预30 min后给药。比色法检测酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织NOS活力;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织α-SMA,Cx43,TGF-β_1mRNA及蛋白表达的情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠阴茎平滑肌组织NOS活力,α-SMA,Cx43 m RNA及蛋白表达量显著下降(P 0. 05),TGF-β1m RNA及蛋白表达量显著上升(P 0. 05)。与模型组比较,葛根散低、中、高剂量组均可显著上调酒精性ED大鼠阴茎组织结构NOS活力及Cx43 m RNA及蛋白表达量(P 0. 05),同时可显著下调TGF-β_1mRNA及蛋白表达量(P 0. 05),葛根散中、高剂量组均可显著上调酒精性ED大鼠阴茎组织α-SMA m RNA及蛋白表达量(P 0. 05)。结论:葛根散对酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织结构有明显的保护作用,其具体机制可能与调节NOS活力及α-SMA,Cx43,TGF-β_1mRNA及蛋白表达量有关。     

酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺大鼠学习记忆及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨酸枣仁汤改善睡眠剥夺诱导学习记忆障碍的作用机制。方法:将实验大鼠随机分为正常组、模型组、褪黑素组(2. 5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和酸枣仁汤组(12. 96 g·kg~(-1)·d~(-1)),除正常组外,其他各组构建慢性睡眠剥夺模型。各组连续给药28 d后,采用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆力,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测大鼠海马中TLR4,NF-κB p65及核转录因子抑制蛋白α(IκBα)的m RNA表达水平,采用免疫组化(IHC)检测大鼠海马中TLR4,IκBα,p-IκBα和NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间明显增加(P 0. 01),而穿越平台次数和目标象限时间显著减少(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间减少(P 0. 05,P 0. 01),而穿越平台次数和目标象限时间增加(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠血清中TNF-α,IL-1β,IL-6表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠血清中TNF-α,IL-1β,IL-6表达水平下降(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠海马中TLR4,NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平升高(P 0. 01),而IκBαm RNA及蛋白表达水平下降(P 0. 01)。与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠海马中TLR4,NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平降低(P 0. 05,P 0. 01),而IκBαm RNA及蛋白表达水平升高(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠海马中p-IκBα的蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠海马中IκBα的蛋白表达水平升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:酸枣仁汤具有改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的作用,其机制可能与其抑制海马中TLR4/NF-κB信号通路相关。     

黄芩苷对扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β1-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路的影响

目的:探讨黄芩苷对阿霉素(ADR)诱导扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β_1肾上腺素受体(β_1-AR)/蛋白激酶A(PKA)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路的影响。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常组、模型组、黄芩苷低、中、高剂量组及卡维地洛组;模型组给予ADR 2 mg·kg~(-1)腹腔注射,黄芩苷组及卡维地洛组在模型组基础上分别给予黄芩苷(25,50,100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),卡维地洛10 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,正常组给予等体积0.9%NaCl腹腔注射,1次/周,共3次;7周末各组大鼠行心脏超声检测心室变化及心功能指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-pro BNP),人基裂解素(human stromelysin-2,ST2)含量;采用原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色观察各组大鼠心室肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现心室重构明显及心功能减弱(P0.05),血清NT-proBNP,ST2含量增多(P0.05),心室肌细胞凋亡数量增加(P0.05),心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达增多;与模型组比较,黄芩苷及卡维地洛组大鼠心室重构及心功能改善(P0.05),血清NT-pro BNP,ST2含量降低(P0.05),心室肌凋亡数量减少(P0.05),心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达减少(P0.05)。结论:黄芩苷可有效改善ADR诱导的扩张型心肌病大鼠心室重构,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制心室肌细胞β-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路表达有关。     

肝乐颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的调控作用

目的:明确肝乐颗粒对转化生长因子(TGF)-β_1/Smad信号通路的干预作用,探讨其防治肝纤维化的分子学机制。方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,肝乐颗粒(1.5,3.0,6.0 g·kg~(-1))和秋水仙碱(1.0×10~(-4)g·kg~(-1))。采用50%四氯化碳每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型。造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应剂量的肝乐颗粒和秋水仙碱,每天1次,连续6周。末次给药8 h后,处置大鼠,取固定部位肝脏组织,苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测肝组织中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ),Smad2,TGF-β_1或TGF-βI型受体(TβRⅠ)蛋白的表达,实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测肝组织中CollagenⅠ,Smad2,TGF-β_1mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化损伤程度,肝组织中CollagenⅠ,TGF-β_1,Smad2,TβRⅠ蛋白及mRNA的表达明显增加(P0.01);与模型组比较,肝乐颗粒中、高剂量组不仅可减轻肝组织病理损伤程度,减少胶原沉积,还可显著降低CollagenⅠ,TGF-β_1,Smad2,TβRⅠ蛋白及mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:肝乐颗粒对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与调控TGF-β_1/Smad信号通路,从而抑制HSC活化,减少细胞外基质过度沉积有关。     

黄芪甲苷通过调控FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路抑制去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的:通过调控转录因子叉头框蛋白O3a(FoxO3a)/分泌型糖蛋白2(Wnt2)/β-连环蛋白(β-catenin)通路评价黄芪甲苷对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并探讨其作用机制。方法:雌性SD大鼠随机均分6组,分别为假手术组,模型组,阳性药组(尼尔雌醇,1.5 mg·kg-1),黄芪甲苷低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1),每组8只。通过摘除大鼠双侧卵巢复制绝经后大鼠骨质疏松模型。术后6周,灌胃给药,每日1次,连续8周。酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测大鼠骨钙素(bone gla protein,BGP),降钙素(calcitonin,CT),骨保护素(osteoprotegerin,OPG),核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL),丙二醛(malondialdehyde,MDA),过氧化氢酶(catalase,CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,双能X射线骨密度检测仪分别测定股骨和腰椎的骨密度值(bone mineral density,BMD),采用三点弯曲法测量胫骨生物力学指标,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠股骨组织中β-catenin,FoxO3a,Wnt2,p66~(shc),p-p66~(shc)蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪甲苷组CT和OPG水平显著升高,BGP和RANKL水平则显著降低(P0.05,P0.01);黄芪甲苷显著升高腰椎、股骨的BMD和胫骨的最大载荷及最大应力(P0.05,P0.01);同时,黄芪甲苷显著降低MDA水平(P0.05),升高CAT,SOD和GSH-Px水平(P0.05,P0.01)。Western blot显示,黄芪甲苷显著降低p-p66~(shc)/p66~(shc)水平(P0.05);升高β-catenin和Wnt2蛋白表达水平(P0.05,P0.01),抑制FoxO3a蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪甲苷能够有效缓解氧化应激介导的去卵巢大鼠的骨质疏松,该作用可能与其调节FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路有关。     

补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1(TGF-β1)/骨形成蛋白-4(BMP-4)诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:应用TGF-β1/BMP-4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖。细胞分为正常组(10%正常大鼠血清),诱导增殖组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4的10%正常大鼠血清),4%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,6%正常大鼠血清及4%补肺益肾大鼠血清),6%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,4%正常大鼠血清及6%补肺益肾大鼠血清)及8%补肺益肾方含药血清组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,2%正常大鼠血清及8%补肺益肾大鼠血清)。24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,Brd U)法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1),结缔组织生长因子(CTGF),分化抑制因子-1(ID-1)和ID-2 mRNA的表达。结果:TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加(P0.05),补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8%浓度显著抑制细胞增殖(P0.01)。TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达(P0.05),8%补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导的p-Smad2/3表达(P0.05)。TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加(P0.01),8%补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达(P0.05)。结论:补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径。     

人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用

目的:从心肌纤维化程度及心肌组织中胶原蛋白Ⅰ型(CollagenⅠ),胶原蛋白Ⅲ型(CollagenⅢ)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白表达,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用。方法:建立链脲佐菌素(STZ)联合高脂饲料诱导糖尿病小鼠模型,另设正常组,糖尿病小鼠按照随机数字表法分为模型组,GNC低、高剂量组(0. 819,1. 638 g·kg~(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg~(-1))。各组均灌胃给药,正常组给与等剂量的去离子水,1次/d,连续9周。胶原纤维染色(Masson三色染色法)观察小鼠心肌间质纤维化程度,并用Image-pro plus 6. 0分析软件计算胶原密度比值;免疫组化检测小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ及TGF-β_1蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心肌组织内CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1的蛋白表达电泳及灰度值水平。结果:Masson实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大、变形,心肌间质尤其是在微血管周围,有大量蓝染的胶原纤维沉积,相互连接交织成网状(P 0. 01);与模型组比较,GNC低、高剂量组和二甲双胍组小鼠心肌细胞排列紊乱明显改善,心肌间质蓝染的胶原纤维也较模型组明显减少(P 0. 05)。免疫组化和Western blot结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1阳性表达,蛋白表达含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,各给药组蛋白阳性表达均降低,蛋白表达含量趋于正常(P 0. 05,P 0. 01)。结论:STZ联合高脂饲料能够诱导糖尿病小鼠心肌纤维化,诱导CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1蛋白高表达。人参-三七-川芎提取物可通过调节CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1蛋白表达,改善糖尿病小鼠心肌纤维化。     

当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的:研究当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad信号通路的调控作用,探讨其对DN大鼠的作用及产生该作用可能的机制。方法:采用一次性大剂量(60 mg·kg-1)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立DN大鼠模型。将DN大鼠随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及当归-红芪超滤膜提取物低、中、高剂量组,之后开始灌胃给药,每天1次,8周后测空腹血糖(FBG),尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),24 h尿蛋白;光镜观察肾组织结构变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量;免疫组化法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平明显升高,ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量明显升高,肾组织病理结构异常较为明显,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,当归-红芪超滤膜提取物各组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平(P0.05);ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量降低(P0.05),肾组织病理结构异常得到改善,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达减少(P0.05,P0.01),TGF-β_1,Smad2/3 mRNA表达减少(P0.05,P0.01)。结论:当归-红芪超滤膜提取物可改善DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与其抑制TGF-β_1/Smad信号通路有关。     

杜仲多糖对肝纤维化模型大鼠Ⅰ，Ⅲ型胶原蛋白，MMP-1，TIMP-1及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨杜仲多糖治疗肝纤维化(HF)作用,并探讨其相关的作用机制。方法:将60只健康SD大鼠随机分成2组,正常组(10只)和肝纤维化造模组(50只)。造模组采用40%四氯化碳(CCl4)腹腔注射制备HF动物模型,造模成功后将其随机分为5个组,分别为模型组,杜仲多糖高、中、低剂量组及秋水仙碱组每组10只。秋水仙碱组(1.0×10-4g·kg~(-1)),杜仲多糖高、中、低剂量组(0.14,0.07,0.035 g·kg~(-1))分别连续灌胃给药8周后收集样本,测定法大鼠体质量及计算肝脏系数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6),高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1),脂多糖(LPS),肝组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分析各组大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1,TIMP-1及转化生长因子-β_1(TGF-β_1)mRNA表达情况。结果:与正常组比较,CCl_4能显著降低实验大鼠体质量(P0.01),提高肝脏系数(P0.01);杜仲多糖能显著增加HF模型的体质量(P0.01),显著降低HF模型肝脏系数(P0.01);ELISA检测表明,杜仲多糖能显著降低肝纤维化大鼠血清IL-6,HMGB1及LPS含量(P0.01);RT-PCR检测结果显示,杜仲多糖及秋水仙碱能显著降低HF肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,TIMP-1及TGF-β_1mRNA含量(P0.05),明显提高MMP-1含量(P0.05,P0.01),且呈量效关系。结论:杜仲多糖具有显著的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与抑制降低HF肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,TIMP-1及TGF-β_1mRNA表达有关。     

复方苦参注射液对放射性肺损伤的肺保护作用

目的:观察复方苦参注射液对放射性肺损伤模型模型小鼠转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad3蛋白(Smad3),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:使用美国XStrahl小动物精准放疗辐照研究平台(SARRP),实施单次20 Gy双侧肺野照射建立放射性肺损伤小鼠模型,将32只小鼠随机分为正常组、模型组、复方苦参注射液组(5 g·kg~(-1)),地塞米松注射液组(0.5 mg·kg~(-1))。正常组和模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,连续腹腔注射4周。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理;免疫组化(IHC)检测小鼠肺组织E-钙粘蛋白(E-cadheren),波形蛋白(Vimentin)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测组小鼠肺组织中TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测组小鼠肺组织中TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin通道蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺系数显著升高(P0.01),且小鼠肺脏出现炎症细胞浸润,肺间质水肿、充血,肺泡结构破坏,部分肺泡萎缩。与模型组比较,复方苦参注射液组小鼠肺脏炎症细胞浸润及肺间质病变减轻,小鼠肺组织E-cadheren的水平显著升高(P0.01),小鼠肺组织Vimentin的水平显著降低(P0.01),TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin表达水平显著降低(P0.01)。与地塞米松注射液组比较,复方苦参注射液小鼠肺部病理形态学改变相仿,E-cadheren,Vimentin,TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin表达水平未见明显差异。结论:复方苦参注射液能够改善放射性肺损伤模型小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制上皮间质转化(EMT)相关的TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin mRNA及通道蛋白表达,进而促进E-cadheren表达、抑制Vimentin蛋白表达,最终抑制EMT的发生有关。     

柿叶黄酮对糖尿病肾病大鼠血糖值及肾组织中TGF-β1和MMP-9的影响

目的:观察柿叶黄酮对大鼠糖尿病肾组织中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,并探讨其作用机制。方法:50只SD大鼠ip链脲佐菌素(STZ)溶液120 mg·kg~(-1),对大鼠进行糖尿病大鼠模型造模。随机将造模成功大鼠分为模型组,氨基胍组(0.1 g·kg~(-1)·d~(-1)),柿叶黄酮高、中、低剂量组(400,200,100 mg·kg~(-1)),每组10只大鼠,另设正常组大鼠10只。氨基胍组、柿叶黄酮组ig给药(1次/天),连续给药12周,期间给予模型组和正常组等体积生理盐水。给药前及给药期间每隔3周测大鼠24 h尿蛋白含量及空腹血糖(FBG),末次给药2 h后处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏病理学变化,采用生化仪测定肾组织匀浆中丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),糖基化终产物(AGEs)及果糖胺(FTS)水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肾脏组织中TGF-β_1和MMP-9的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组中大鼠24 h尿蛋白含量及FBG含量持续增高,肾组织中MDA,AGEs,FTS含量升高明显,SOD水平明显下降(P0.05,P0.01);与模型组比较,柿叶黄酮各剂量组明显降低24 h尿蛋白含量及FBG含量及肾组织中MDA,AGEs,FTS含量,明显升高SOD水平(P0.05,P0.01),明显下调肾脏组织中TGF-β_1和上调MMP-9的蛋白水平(P0.05),其中柿叶黄酮高剂量组作用较为明显。结论:柿叶黄酮对糖尿病肾病大鼠有一定保护作用,其机制与柿叶黄酮的降糖、降脂、降低氧化应激水平及非酶糖基化的作用以及抑制TGF-β_1和MMP-9蛋白相关。