鼠尾草酸稳定性及对H_2O_2损伤神经元的保护作用

目的:评价鼠尾草酸对H2O2损伤神经元的保护作用,并检测鼠尾草酸在不同保存条件下稳定性。方法:鼠尾草酸预处理体外培养C57小鼠胎鼠神经元,加入H2O2继续培养,神经元标志性抗体Tuj1染色,显微镜观察细胞状态并采用细胞活性(CCK-8)检测神经元的活性,生化法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测神经元凋亡相关基因Caspase-3 mRNA的表达。同时,HPLC测定0~120 h不同保存条件下鼠尾草酸含量。结果:与模型组比较,20、80μmol/L浓度鼠尾草酸预处理组细胞状态好于模型组,细胞活性增强,培养液中LDH的漏出量降低,细胞内MDA的生成减少,SOD活性增强,caspase-3 mRNA表达显著下调;不同保存条件下鼠尾草酸含量随时间延长呈递差性降低。结论:鼠尾草酸对H2O2所致神经元的损伤具有保护作用,但稳定性差。     

人参皂苷Rg_1对阿尔茨海默病转基因小鼠的神经保护作用

目的探究人参皂苷Rg1对APP/PS1双转基因模型小鼠认知障碍、氧化应激损伤、炎症反应、Aβ堆积和神经细胞凋亡的改善作用。方法采用Morris水迷宫实验,对APP/PS1模型小鼠的认知功能进行评价;采用试剂盒和ELISA法对各组小鼠氧化损伤和炎症相关指标进行测定;采用HE染色和Western blotting法对各组小鼠海马组织神经元凋亡及凋亡相关蛋白进行定量分析。结果人参皂苷Rg1能够显著改善APP/PS1双转基因模型小鼠的认知功能,降低Aβ堆积及丙二醛(MDA)水平,提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性。此外,人参皂苷Rg1还可通过显著性降低APP/PS1小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平,增加IL-2水平,从而抑制神经炎症反应。HE染色显示人参皂苷Rg1能降低海马细胞的凋亡状态。人参皂苷Rg1还可以显著升高海马中Bcl-2/Bax的值,并显著降低Caspase-3、Caspase-9和Cyt-c蛋白的表达水平。结论人参皂苷Rg1能够显著改善APP/PS1模型小鼠的氧化应激状态,减轻炎症反应,抑制神经元凋亡和改善认知功能。     

竹节参总皂苷对H2 O2致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:通过建立H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤模型,观察竹节参总皂苷(SPJ)对心肌细胞的保护作用.方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常组,模型组(H2O2),SPJ低剂量组(50 mg·L-1),SPJ高剂量组(100 mg·L-1).H2O2诱导心肌细胞氧化损伤2h后SPJ孵育24 h,显微镜下观察细胞搏动频率,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶( LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛( MDA)含量.结果:SPJ(50,100 mg·L-1)可明显增加心肌细胞搏动频率,降低H2O2所致乳鼠心肌细胞LDH释放量,升高SOD,CAT,GSH-Px活性,降低MDA含量(P＜0.01或P＜0.05).结论:SPJ对H2O2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用.     

木犀草素对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的观察木犀草素(Luteolin)对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法在培养的新生大鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同浓度木犀草素(1×10-6、3×10-6、1×10-5mol/L)对乳酸脱氢酶(LDH)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响.结果与正常组比较,模型组细胞LDH活性及MDA含量升高,SOD活性下降(P＜0.01);与模型组比较,不同浓度的木犀草素可以降低细胞LDH活性及MDA含量,增加SOD活性.结论木犀草素对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用.     

丹红注射液对缺氧缺糖致乳鼠海马神经元细胞损伤的保护作用

目的:探讨丹红注射液对原代培养的海马神经元细胞因缺氧缺糖所致损伤的保护作用及其机制。方法:在体外培养新生SD乳鼠原代海马神经元细胞,并以神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化染色法对其进行鉴定。运用MTT法确定丹红注射液安全剂量,将培养的细胞随机分成6组:正常对照组、模型组、尼莫地平(200μg/m L)阳性对照组及丹红注射液低(40μL/m L)、中(80μL/m L)、高(120μL/m L)浓度组。加药并建立乳鼠海马神经元缺氧缺糖模型。观察丹红注射液对糖氧剥夺损伤乳鼠海马神经元细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,并采用流式细胞仪检测各组细胞早期凋亡率,利用试剂盒检测各组细胞Caspase-3活性,利用Hoechst33342染色观察各组细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,丹红注射液能显著减少海马细胞上清液内LDH漏出量,增强糖氧剥夺损伤海马神经元细胞内SOD与GSH-Px活性,降低MDA含量,有效减轻缺氧缺糖损伤导致的海马神经元早期细胞凋亡,抑制细胞内Caspase-3活性。结论:丹红注射液能有效抑制缺氧缺糖所致原代海马神经元凋亡,增强机体抗氧化能力,对脑缺血具有保护作用。     

甲基莲心碱对H_2O_2损伤心肌细胞的保护作用

目的:探讨甲基莲心碱(neferine)对氧化损伤的大鼠乳鼠心肌细胞的保护作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞过氧化损伤模型,将细胞分为7组,即空白对照组(control)、溶剂对照组(DMSO)、氧化损伤组(H2O2)、氧化损伤加入槲皮素对照组(quercetin+H2O2)、氧化损伤加入莲心碱低、中、高浓度组(甲基莲心碱+H2O2、甲基莲心碱-M+H2O2、甲基莲心碱-H+H2O2)。将300μmol/LH2O2作用于加入槲皮素及不同浓度甲基莲心碱预培2 h的心肌细胞,继续培养24h,以细胞毒四唑盐(MTT)比色试验,乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、丙二醛(MDA)、流式细胞凋亡率、Caspase酶活性为检测指标。结果:甲基莲心碱呈剂量依赖性降低H2O2对心肌细胞活力的影响,降低MDA、LDH量,增加细胞GSH-px活性,并显著抑制Caspase-3和9活性,减少细胞凋亡数量,各指标差异具有统计学意义(P0.01)。结论:甲基莲心碱可保护和修复过氧化氢诱导的心肌细胞的损伤,其作用可能是通过抗氧化、增加细胞GSH-px活性,进而抑制Caspase-3和9活性,减少细胞凋亡。     

藏药八味沉香散对Na2S2O4所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究八味沉香散(TBP)对连二亚硫酸钠(Na2S2O4)所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:采用SD乳鼠心肌细胞原代培养,采用Na2S2O4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,用TBP 10,30,100 mg·L-13种不同剂量预处理24 h后,检测培养液中半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)和细胞凋亡;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD),和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与模型组比较,TBP 3个剂量组明显减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤后Caspase-3和细胞凋亡(P<0.05);降低LDH,CK,AST的活性和MDA含量(P<0.05),同时能够升高SOD,GSH-Px活性(P<0.05)。结论:八味沉香散对Na2S2O4所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有明显的保护作用。     

人参皂苷Rg1对脊髓损伤SD大鼠血清MDA、SOD、IL-1β及IL-10水平的影响

目的观察人参皂苷Rg1对脊髓损伤SD大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)水平的影响,探讨人参皂苷Rg1对脊髓损伤的保护作用。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组10只。模型组和人参皂苷Rg1组采用打击法建立脊髓损伤大鼠模型。假手术组大鼠打开脊椎后进行缝合。造模后24 h,人参皂苷Rg1组给予人参皂苷Rg1溶液10 mg/kg进行腹腔注射,1次/d,连续7 d;假手术组和模型组每天注射相同体积的生理盐水。干预结束后,采用ELISA法检测3组大鼠血清MDA、SOD、IL-1β、IL-10水平。结果模型组和人参皂苷Rg1组大鼠血清MDA、IL-1β水平均明显高于假手术组(P均0. 05),SOD、IL-10水平均明显低于假手术组(P均0. 05),但人参皂苷Rg1组大鼠血清MDA、IL-1β水平均明显低于模型组(P均0. 05),SOD、IL-10水平均明显高于模型组(P均0. 05)。结论人参皂苷Rg1可能通过调节MDA、SOD、IL-1β及IL-10的表达对大鼠脊髓起到保护作用,抑制神经元细胞凋亡。     

竹节参总皂苷通过ERK/Nrf2通路对H2O2致SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用研究

目的:探讨竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用及其分子机制。方法:H2O2作用SH-SY5Y细胞建立氧化应激损伤模型,以不同浓度竹节参总皂苷(0.1、1、5、20μg/m L)预处理12 h,再加入H2O2继续培养12 h。通过MTT检测细胞活力;酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;Western blotting检测Nrf2、p-ERK、p-P38蛋白表达;Real-Time PCR检测NQO1、GCLC的mRNA表达。结果:各浓度竹节参均能显著提高H2O2所导致的细胞活力降低、提高SOD活性、降低MDA含量,并能上调Nrf2、p-ERK蛋白及NQO1、GCLC mRNA表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控ERK/Nrf2通路,从而增强抗氧化基因表达有关。     

冠心平对H_2O_2致乳大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察冠心平对过氧化氢(H2O2)所致乳鼠培养心肌细胞损伤的保护作用。方法:原代培养的新生SD乳大鼠,随机分为正常组、模型组、维拉帕米组、和冠心平3个剂量组。用比色法观察乳鼠心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,并用光镜观察心肌细胞形态学改变。结果:损伤组乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK-MB、CK和MDA含量非常显著增高,SOD活性非常显著降低(与对照组相比,P0.01),心肌细胞损伤严重;冠心平保护组与H2O2损伤组相比,LDH、CK-MB、CK和MDA明显降低,SOD活性显著升高(P0.01,P0.05),心肌细胞形态学变化减轻。结论:冠心平对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化损伤有关。     

氨基葡萄糖与铜钴镍三种金属离子的配位性能研究

目的 研究氨基葡萄糖的质子化和与Cu2 ,Co2 ,Ni2 的配位性能.方法 用pH电位滴定法测定(298±0.1)K,I=0.10 mol/LKNO3条件下氨基葡萄糖的质子化常数及与Cu2 ,Co2 ,Ni2 的二元配合物的生成常数.结果 氨基葡萄糖pKa为7.78,配合物生成常数的对数分别为Cu2 ,5.22(110),9.38(120);Co2 ,3.19(110),5.99(120);Ni2 ,3.40(110),6.31(120).结论 氨基葡萄糖与Cu2 ,Co2 ,Ni2 配位时不解离出醇羟基质子,不同金属离子配合物生成常数的大小符合Irving-William序列.     

关于PD2、PA2、PD2＇计算方法的探讨

目的：叙述近年来关于PD2、PA2、PD2’各自含义、计算方法，以阐明其研究意义。方法：通过对药理实验方法学中有关内容的阐述，以及对近10年来相关文章的对比分析和总结，得到一些对今后的药物研究有帮助的参考性知识。结论：PD2、PA2、PD2’的测定基本上是首先通过某一药物的动物或计算机虚拟实验，然后用图解法、计算方法（包括软件计算）或者二者联用的方法三种思路求得各自具体数值。     

Pim-2减轻H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤及三七皂苷R1的干预研究

目的:研究Pim-2基因在过氧化氢(H_2O_2)诱导乳鼠心肌细胞损伤中的作用及三七皂苷R1的干预效应。方法:H_2O_2干预原代培养的乳鼠心肌细胞造成细胞损伤模型,分别以三七皂苷R1和Pim-2 RNAi干预细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术测细胞凋亡,实时定量PCR法测细胞内Pim-2 mRNA水平,Western blotting法测Pim-2、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:H_2O_2上调Pim-2 mRNA及蛋白水平,抑制细胞增殖与促进凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。Pim-2基因沉默后,细胞活性降低,凋亡增加,LDH与MDA浓度增加,SOD活性降低,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白水平降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。三七皂苷R1预处理能显著增加细胞活力,抑制细胞凋亡,上调Pim-2蛋白水平,与H_2O_2组相比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Pim-2能减轻H_2O_2致心肌细胞损伤,可能与抗凋亡,抗氧化,调控凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2表达有关;三七皂苷R1抗心肌细胞损伤与Pim-2有关。     

Neuroprotective 2-(2-phenylethyl)chromones of Imperata cylindrica

Bioactivity-guided fractionation of the methanolic extract of the rhizomes of Imperata cylindrica afforded a new compound, 5-hydroxy-2-(2-phenylethyl)chromone (1), together with three known compounds, 5-hydroxy-2-[2-(2-hydroxyphenyl)ethyl]chromone (2), flidersiachromone (3), and 5-hydroxy-2-styrylchromone (4). Among these four compounds, 1 and 2 showed significant neuroprotective activity against glutamate-induced neurotoxicity in primary cultures of rat cortical cells.     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法将对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组、H_2O_2干预组、GB(50、100和200μmol/L)干预组。检测细胞存活率、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量、细胞中氧自由基(ROS)含量和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,检测NF-k B蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高;培养液中AST、CPK、LDH含量和细胞中ROS、MDA含量显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,NF-k B蛋白表达显著下调;其中GB(200μmol/L)干预组GSH-Px活性显著降低。结论 GB能够有效提高细胞存活率,改善抗氧化酶活性、降低ROS含量、降低氧化应激损伤,下调NF-k B蛋白表达、降低细胞凋亡率,提示GB对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激具有抑制作用。     

姜黄素对HepG2细胞固醇调控元件结合蛋白-2表达的影响

目的研究姜黄素对人肝癌细胞株(Human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)固醇调控元件结合蛋白-2(sterol regulatory element-binding protein-2,SREBP-2)基因表达的影响,从信号调控通路水平进一步探讨姜黄素的降胆固醇作用机理。方法分别利用蛋白免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase Chain Reactionm,PCR)技术研究姜黄素对HepG2细胞SREBP-2核片段碱性螺旋-环-螺旋蛋白(basic helix-loop-helix protein,bHLH)表达及SREBP-2 mRNA的影响。结果20 mol/L姜黄素可以促进HepG2细胞SREBP-2核片段bHLH增多,而对SREBP-2mRNA表达无影响。结论姜黄素可以通过促进HepG2细胞SREBP-2核片段bHLH的增多,上调低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDL-R)的表达,起到降低血清胆固醇的作用。     

冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤的影响

目的：观察冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤过程中NOS与ET的影响。探讨冠心平治疗冠心病的可能机制。方法：体外培养内皮细胞ECV304,用100umol/L H2O2损伤细胞,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、中、小剂量组。用血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察细胞生长情况,检测NOS与ET。结果：100umol/L H2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著提高NOS的活性;显著减少H202诱导ECV304ET的产生。结论：冠心平可降低H2O2对ECV304的损伤程度,其机理可能与其提高NOS活性,增加NO合成,并且减少ET的合成,从而调节血管舒缩功能有关。     

油茶皂苷对LO2和HK-2细胞的毒性作用研究

目的:观察油茶皂苷(SQS)对人正常肝细胞(LO2)和肾小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用,并初步探讨其毒性作用机制。方法:体外培养LO2和HK-2细胞,采用MTT法评价SQS对LO2和HK-2细胞的增殖抑制作用,观察不同浓度药物对乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响,并检测细胞裂解上清液超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果:与阴性对照组比较,各浓度的SQS均可明显抑制LO2和HK-2细胞增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性。在50.0~200.0 mg/L范围内,SQS能明显提高LO2和HK-2细胞培养上清液中LDH活力(P<0.05或P<0.01),显著降低SOD的活力和增加MDA的含量(P<0.01)。结论:SQS对LO2和HK-2细胞有一定的细胞毒性作用,其作用机制可能是通过增加对细胞膜通透性的影响及氧化损伤而实现。     

槲皮素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

槲皮素具有广泛的生理及药理活性 [1] ,因其扩张冠脉、调血脂、降低血管通透性被作为心血管药物而在临床广泛应用。已有文献报道槲皮素在体外对肿瘤的化学预防和治疗作用及其机制[2 ,3 ] 。此前 ,已对槲皮素抑制 DMBA (二甲基苯并蒽 )诱导的 SD大鼠乳腺癌的发生及增殖进行了研究并探讨机制 [4,5]。本实验采用 ER(雌激素受体 )阳性的乳腺癌细胞株 MCF- 7,初步观察槲皮素在体外对该细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响 ,为进一步探讨其作用机制及其应用于临床治疗乳腺癌提供部分依据。1　材料与方法1 .1　药物与细胞系 :Quercetin (槲皮素 ,…     

糖尿病肾病不同中医辨证分型患者中CDKN2A，CDKN2B，IGF2BP2和CDKAL1基因表达研究

目的：研究糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中CDKN2A，CDKN2B，IGF2BP2和CDKAL1基因的表达量。方法：提取血液样本中的mRNA，并以此为模板进行反转录得到cDNA，以Real-Time PCR方法测定目的基因的表达量。结果：建立了这4个基因的定量方法，测定了50例正常人和53例糖尿病肾病患者中的基因表达量。结论：本研究在糖尿病肾病不同中医辨证分型的患者中测定了4个基因的表达量水平，对这些基因的表达量与糖尿病肾病中医辨证分型的关系进行了研究，为糖尿病肾病中医的临床诊断提供了量化指标，并同时指出基因研究对于中医中药的临床诊断和治疗具有深远的意义。