商陆皂苷甲致肾细胞毒性的研究

目的:考察商陆皂苷甲Esculentoside A(EsA)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)的毒性。方法:1)MTT法测细胞活力;2)检测细胞上清液LDH、细胞内SOD及MDA;3)采用倒置显微镜及电镜观察细胞形态学;4)采用Hoechst-PI染色及流式细胞仪观察细胞凋亡的情况。结果:1)EsA对肾细胞的活力有显著的抑制作用,其IC50为149.11μg·mL-1,且存在一定的时效和量效关系;2)EsA能升高肾细胞培养上清中的LDH,使肾细胞内SOD/MDA比值有所下降;3)EsA能使肾细胞及其超微结构发生变化,出现凋亡或坏死,有一定的量效关系。结论:大于100μg·mL-1浓度的商陆皂苷甲对HK-2细胞有一定的毒性,其毒性机制与细胞氧化应激、凋亡等相关。     

基于HK-2细胞的泽泻萜类组分体外肾毒性评价及其诱导细胞凋亡作用的探究

用人肾小管上皮细胞(HK-2)评价泽泻萜类组分的肾毒性作用,同时探究其诱导HK-2细胞凋亡的作用,为存在争议的泽泻肾毒性研究提供参考。采用肾小管上皮细胞株,运用MTT比色法测定细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡,同时用Western blot检测HK-2细胞caspase-3,Bcl-2,Bcl-xl,Kim-1,clusterin,TFF-3蛋白表达水平,最后用q-PCR检测caspase-3,Bcl-2,Bcl-xl,Kim-1,clusterin,TFF-3 mRNA的表达。流式细胞仪检测结果表明,泽泻萜类组分(6.25×10-5,3.125×10-5,1.562 5×10-5g·m L-1)给药组细胞凋亡率分别为(37.48±1.76)%,(26.91±1.91)%,(25.61±2.05)%。同时,Western blot结果说明泽泻萜类组分不同剂量给药组中Bcl-2和Bcl-xl蛋白水平都有显著地降低,而caspase-3蛋白水平显著地提高。q-PCR结果与Western blot结果一致,泽泻萜类组分不同剂量给药组中Bcl-2和Bcl-xl的mRNA水平都有显著的降低,而caspase-3 mRNA水平有显著的提高。Western blot和q-PCR结果说明,泽泻萜类组分不同剂量给药组中细胞的clustrein,Kim-1和TFF-3蛋白表达和mRNA水平均有显著地提高。HK-2细胞系体外评价结果表明,泽泻萜类组分具有肾毒性作用,但是还需要进一步的研究证明,同时可诱导HK-2细胞凋亡,为泽泻肾毒性研究以及临床用药安全提供依据。     

一种基于荧光探针和HK-2细胞的中药肾毒性物质筛查方法及其应用

本研究采用荧光探针FDA标记HK-2细胞,创建了一种快速筛查肾毒性物质方法.方法学考察结果表明,所建的肾毒性体外评价模型线性度、稳定性和准确性均满足应用要求.将其用于《中国药典》收载的32种有毒中药的352个组分进行规模化普筛,发现巴豆等14种中药材的31个组分对HK-2细胞具有明显毒性,可能会引起肾毒性.其他18种中药的各组分对HK-2细胞未见明显毒性.     

醋制降低甘遂对人正常肝细胞LO2毒性研究

目的:比较甘遂醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性差异,初步探讨甘遂醋制减毒机制。方法:以人正常肝细胞LO2细胞为研究对象,采用MTT法检测甘遂醋制前后对LO2细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态;并测定细胞培养上清液和裂解上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、Na+-K+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶等酶的活力和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量。结果:与阴性对照组比较,生甘遂可明显降低LO2细胞的活性(P<0.01)与形态,并显著提高LO2细胞培养上清液中ALT,AST,LDH活力(P<0.01)、显著降低SOD活力和GSH含量(P<0.01),显著增加MDA含量(P<0.01),显著降低LO2细胞裂解上清液中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力(P<0.01);醋制后,与生甘遂各剂量组比较,醋甘遂可显著降低生甘遂对LO2细胞的增殖抑制作用(P<0.01)和形态变差的趋势,可显著降低LO2细胞培养上清液中ALT,AST,LDH活力(P<0.01)、显著增加SOD活力和GSH含量(P<0.01)、显著降低MDA含量(P<0.01)、显著提高LO2细胞裂解上清液中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力(P<0.01),且呈一定的剂量相关性。结论:醋制可降低甘遂肝毒性,其可能机制为通过降低甘遂对肝细胞膜通透性的影响及减轻氧化损伤而实现。     

醋制降低京大戟对人正常肝细胞LO2的毒性及机制研究

目的:比较京大戟醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养LO2细胞,用不同浓度的京大戟生品和醋品对其进行处理,MTT法测定各样品对LO2细胞增殖的抑制作用;Hoeehst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;AnnexinV/PI染色流式细胞术检测LO2细胞凋亡;PI染色流式细胞术分析其对细胞周期的影响;检测细胞培养液上清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,细胞裂解上清超氧化歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量.结果:与阴性对照组比较,京大戟生品各浓度组均可抑制LO2细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞S期阻滞(P＜0.05);能显著升高细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著降低细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、增加MDA含量.醋制后,与京大戟生品组比较,可显著降低细胞凋亡率、降低细胞周期阻滞,显著降低细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著升高细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、显著降低MDA含量.结论:醋制可降低京大戟对LO2细胞的毒性,其机制可能是减轻氧化损伤,从而降低细胞周期阻滞,减少细胞凋亡.     

大黄素诱导人肾上皮HK-2细胞凋亡及内质网应激的介导作用

目的 研究大黄素诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡的作用及其机制是否与内质网应激有关.方法 不同浓度大黄素处理HK-2细胞不同时间.MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、转录激活因子3(ATF3)和X盒结合蛋白1(XBP1)的基因表达,Western blotting 法检测caspase-3、GRP78、CHOP、真核生物启动因子2α (eIF2α)的蛋白表达.结果 大黄素以浓度相关方式降低HK-2细胞存活率,诱导caspase-3剪切.RT-PCR检测表明,大黄素能诱导内质网相关基因GRP78、CHOP、ATF3基因表达,Westernblottinh检测结果进一步证实大黄素能诱导GRP78、CHOP的蛋白表达.大黄素还明显诱导eIF2α磷酸化和XBP1 mRNA剪切.在大黄素给药之前给予内质网应激干扰药4-苯基丁酸和salubrinal,能增加HK-2细胞的存活率.结论 大黄素能诱导HK-2凋亡,内质网应激参与了大黄素诱导HK-2细胞凋亡的作用.     

薯蓣皂苷通过GSK3β/Nrf2/HO-1 通路改善尿酸诱导的HK-2 细胞氧化应激损伤的作用及机制研究

目的 探讨薯蓣皂苷（dioscin）对尿酸（uric acid,UA）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 将HK-2细胞分为正常组、模型组（尿酸刺激造模）、条件对照组（尿酸+DMSO）和薯蓣皂苷组（尿酸+薯蓣皂苷）。通过尿酸诱导HK-2细胞氧化应激损伤模型;采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞活性氧（ROS）水平,Real-time PCR法检测糖原合成激酶3(GSK3β)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)在mRNA水平的表达,Western Blot法检测GSK3β、磷酸化糖原合成激酶3(p-GSK3β)、Nrf2及HO-1在蛋白水平的表达。结果 经尿酸刺激后,HK-2细胞的活力明显下降,ROS水平明显升高（均P<0.001）。经薯蓣皂苷治疗后,HK-2细胞的活力增加,ROS水平明显降低（均P<0.001）。在蛋白及mRNA水平上,尿酸刺激后Nrf2和HO-1的表达均下降,薯蓣皂苷干预后Nrf2和HO-1表达均明显增加（均P<0.001）。在蛋白水平上,模型组细胞p-GSK3β/GSK...     

油茶皂苷抗肿瘤作用研究北大核心CSCD

目的：观察油茶皂苷（SQS）的体内外抗肿瘤作用。方法：采用MTT法观察SQS体外对肿瘤细胞及人肾小管上皮细胞HK-2的影响;并建立S180荷瘤小鼠模型,灌胃给予SQS,1次/d,共10 d,观察SQS对荷瘤小鼠抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数及血清TNF-α和IL-2含量的影响。结果：15.0~120.0 mg/m L SQS在体外呈浓度依赖性抑制人胃癌细胞株MGC803、人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2的增殖,3种肿瘤细胞的治疗指数（TI）分别为6.41、4.00和3.71。60.0、90.0、120.0 mg/kg SQS对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为2.53%、33.54%和41.77%;SQS中、高剂量组胸腺指数显著高于模型组（P〈0.05）;SQS高剂量组脾脏指数显著高于模型组（P〈0.05）;SQS中、高剂量组S180荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2含量显著高于模型组（P〈0.05或P〈0.01）。结论：SQS具有抗肿瘤作用,对人胃癌细胞株治疗安全性较大;能抑制S180荷瘤小鼠的肿瘤生长,增强荷瘤小鼠免疫功能,增加TNF-α和IL-2的释放可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

穿琥宁注射液对小鼠肾脏毒性作用及机制初探

目的: 观察穿琥宁注射液(CHN)对小鼠肾毒性作用以及对HK-2细胞活性的影响。方法: 50只ICR小鼠随机分为空白对照组、庆大霉素阳性对照组和CHN 150,1 000,2 000 mg·kg^-1剂量组,尾静脉推注,连续7 d,检测体重、肾脏系数、血清尿素氮、肌酐和肾脏组织病理等指标;另采用MTT法测定CHN 干预后HK-2细胞的存活率,荧光染色法(吖啶橙)观察细胞核的形态变化,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率。结果: 与空白对照组比较,阳性对照组血肌酐明显上升(P<0.05);CHN 2 000 mg·kg^-1组肾脏系数明显上升(P<0.05),血肌酐、尿素氮明显上升(P<0.05)。组织病理学检查显示,CHN 2 000 mg·kg^-1组具有肾节段性小管上皮细胞肿胀变性,甚至节段性肾小管变性坏死,伴少量矿物质沉积,部分小管扩张。此外,CHN对HK-2细胞增殖有抑制作用,在0.9~3.5 mmol·L^-1浓度和8~48 h时间内CHN对HK-2细胞增殖有抑制作用。荧光染色和Annexin V/PI流式细胞检测结果CHN干预后HK-2细胞可见细胞出现形态不规则、核染色质固缩等细胞凋亡形态学的改变,并且细胞凋亡率随着剂量增加而增大。结论: CHN对小鼠肾脏具有毒性作用,作用可能是通过诱导HK-2细胞凋亡实现。     

薯蓣皂苷致肝毒性及其机制的初步研究

薯蓣皂苷有广泛的生物学作用,具有广阔的应用前景,但是目前有关薯蓣皂苷毒理及其机制方面研究较少。该文从细胞水平上检测薯蓣皂苷(dioscin)对肝脏的毒性,同时对薯蓣皂苷作用于HepG2细胞后CYP1A在mRNA、蛋白水平的变化进行了研究,对CYP1A转录调控子芳香烃受体(AhR)的表达也进行了检测,旨在探索薯蓣皂苷的肝毒性及其可能的机制。将0.5~32 μmol·L^-1薯蓣皂苷作用于HepG2细胞12 h,利用CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤,采用倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测活性氧(ROS)的生成量;实时荧光定量PCR检测CYP1A及其转录调控子AhR mRNA的表达;Western blot 法检测CYP1A1的蛋白表达。结果显示薯蓣皂苷0.5~32 μmol·L^-1作用于HepG2细胞可以显著抑制细胞活性,与对照组相比,LDH释放量显著升高,ROS的生成量显著增大,细胞形态发生变化并坏死。 Q-PCR 检测结果显示,与对照组相比,CYP1A及芳香烃受体(AhR)mRNA表达升高;在蛋白水平上,薯蓣皂苷作用于细胞后CYP1A1蛋白表达升高,且AhR的拮抗剂白藜芦醇(Res)与薯蓣皂苷合用后能使CYP1A1的表达下调。以上实验结果表明大剂量薯蓣皂苷具有肝细胞毒作用,这可能与其能激活芳香烃受体(AhR),诱导CYP1A表达进而产生毒性作用有关。     

油茶皂苷对缺氧-复氧诱导的内皮细胞损伤及中性粒细胞黏附的影响

目的研究油茶皂苷(SQS)对缺氧-复氧诱导的内皮细胞损伤及中性粒细胞黏附的作用及可能的机制。方法建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧-复氧损伤模型,取培养细胞上清液测定LDH活性,分别测定HU-VEC存活率,中性粒细胞黏附率、线粒体丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。同法检测中性粒细胞黏附。结果缺氧-复氧可导致HUVEC损伤及中性粒细胞黏附的增加,表现为LDH活性、MDA水平及中性粒细胞黏附率显著升高,而SOD和GSH-Px活性显著下降;SQS呈浓度依赖性地对抗上述改变。结论SQS对缺氧-复氧诱导的HUVEC损伤有保护作用,其机制可能与其抗脂质过氧化和抑制白细胞黏附有关。     

五味子乙素对顺铂损伤HK-2细胞P21和Caspase-3表达的影响

目的观察五味子乙素(Sch B)对顺铂(CDDP)诱导的人类近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中P21和Caspase-3表达的影响。方法取离体培养HK-2细胞,随机分为5组:对照组细胞未经任何处理,CDDP组加入50μmol/L CDDP处理24 h,Sch B预保护组(CDDP+Sch B):分别加入终浓度为5、10、20μmol/L Sch B预处理2 h后,其余操作同CDDP组。CCK-8试剂盒检测各组细胞活性;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;倒置显微镜观察各组细胞形态;Western blotting检测各组细胞中P21和Caspase-3蛋白表达。结果与对照组相比,CDDP组细胞活性明显降低,细胞凋亡率、P21和Caspase-3蛋白表达量显著增加,细胞体积明显缩小,相互连接消失。Sch B预保护组较CDDP组细胞活性显著增加,细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量显著减少,P21蛋白表达量显著增加,细胞形态损伤明显减轻,体积略微缩小,相互间连接断裂减少。结论 Sch B对CDDP诱导的HK-2细胞损伤有保护作用,其机制可能与其上调P21和下调Caspase-3的表达有关,且其保护作用呈剂量依赖性。     

截断逆挽方含药血清对D-氨基半乳糖诱导的人正常肝细胞LO2细胞增殖影响

目的研究截断逆挽方含药血清通过调控E2F1介导的细胞增殖途径减轻D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GlaN)诱导的人正常肝细胞LO2的损伤。方法体外培养LO2细胞,以D-GlaN进行造模,将细胞分为正常组、模型组、2.5%截断逆挽方含药血清组(2.5%JDNWF)、5%截断逆挽方含药血清组(5%JDNWF)、10%截断逆挽方含药血清组(10%JDNWF)。采用Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测细胞活力;Real-time PCR检测转录因子E2F1、细胞周期蛋白E(cyclin E)、细胞周期蛋白A(cyclin A)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)、细胞分裂周期因子25A(cell division cyclin 25A,CDC25A)mRNA的表达;流式细胞术检测细胞周期;Western Blot检测分化调控因子DP1蛋白表达。结果截断逆挽方含药血清能显著促进LO2细胞进入S期(P<0.01),上调E2F1、cyclin E、cyclin A、CDK2、CDC25A mRNA的表达(P<0.01),并且能增加DP1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论截断逆挽方减轻肝细胞损伤的作用机制可能与其促进肝细胞增殖有关。     

益糖康对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨益糖康是否通过抑制肾小管上皮细胞发生上皮-间质转化(EMT)进而减轻糖尿病对肾脏的早期损伤.方法:40只SD雄性大鼠随机分成生理盐水组(1mL/100g)、益糖康组(2.10g/100g)、二甲双胍组(9.11g/100g)、二甲双胍+益糖康组(4.55g/100g二甲双胍+1.05g/100g益糖康煎剂),...     

止消通脉宁干预TGF-β_1诱导HK-2细胞增殖的研究

目的：通过观察止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖的影响,探讨治疗糖尿病肾病有效中药复方止消通脉宁在防治肾间质纤维化方面的作用。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组（TGF-β110ng/mL）、空白血清对照组（TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清）、干预1组（TGF-β110 ng/mL＋10%低剂量止消通脉宁含药血清）、干预2组（TGF-β110 ng/mL＋10%中剂量止消通脉宁含药血清）、干预3组（TGF-β110 ng/mL＋10%高剂量止消通脉宁含药血清）。倒置显微镜下观察各组细胞形态,MTT法检测细胞增殖。结果：TGF-β110 ng/mL能显著诱导人肾小管上皮细胞增殖,与空白对照组相比有显著性差异（P〈0.05）,且其作用随处理时间的延长而增强,但和止消通脉宁含药血清共同作用后,其促细胞增殖作用受到一定抑制（P〈0.05）。结论：止消通脉宁能抑制HK-2细胞增殖,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。     

细胞色素P450同工酶对马兜铃酸所致的细胞毒性的影响

目的：探讨细胞色素P450同工酶(cytochrome P450 isozymes)对马兜铃酸(aristolochic acid，AA)致肾小管上皮细胞毒性的影响。方法：采用体外培养的人类肾小管上皮细胞(HK-2细胞)，AA与α-萘黄酮(CYP450 1A1和1A2的抑制剂)、酮康唑(CYP4503A4的抑制剂)、二乙基二硫代氨基甲酸钠(CYP450 2A6和2E1的抑制剂)、奎尼丁(CYP450 2D的抑制剂)、α-硫辛酸 (NADPH，P450 还原酶的抑制剂)、磺胺苯吡唑(CYP450 2C 的抑制剂)等抑制剂在有或无CYP450存在的条件下进行体外联合用药，采用四甲基偶氮唑(MTT)法测定细胞增殖抑制率以及连续监测法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果：AA可抑制细胞增殖和促进LDH释放，在12.5～100 mg·L^-1呈剂量依赖性，随浓度的升高，细胞毒性更明显。在培养体系中加入S9可使AA的细胞毒性降低，细胞增殖抑制作用减轻，LDH释放减少(加与不加S9相比P<0.05)。在无S9存在时，酮康唑或α-萘黄酮对AA的细胞毒性无明显影响，而在S9存在的条件下，加入酮康唑或α-萘黄酮对AA的细胞毒性作用增强。其他抑制剂所形成的CYP450亚型抑制效应对AA的细胞毒性影响不明显。结论：微粒体混合酶对AA的细胞毒性有影响，能够降低AA细胞毒性，其中CYP450 3A和CYP450 1A可能是影响AA细胞毒性的主要同工酶。