左归丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度左归丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,并传代扩增,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度左归丸干预组,采用MTT比色法观察不同浓度左归丸水提液干预后BMSCs增殖的情况。结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态以长梭形为主,呈集落样生长。体外培养的BMSCs免疫组织化学鉴定显示CD44,CD29呈阳性表达,CD34呈阴性表达。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,相当于生药质量浓度2.5～4 g·L-1的左归丸水提液干预24 h后,干预组吸光度均明显增高(P<0.01),而与其他浓度相比1 g·L-1时左归丸水提液促进BMSCs增殖的作用最强。结论:所培养的大鼠骨髓基质细胞在细胞表型表达和细胞形态上具备BMSC特征。左归丸水提液在一定浓度范围内可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响。方法:全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,用流式细胞术鉴定P3代BMSCs。将地龙配制成终浓度为500、50、5、0.5 mg/m L的提取物溶液作为药物干预组,以0 mg/m L组为空白对照组,CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。通过比较OD值判断地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响,比较增殖率。结果:全骨髓贴壁法培养的P3代BMSCs表现为集落生长,经流式细胞术检测,CD90呈阳性表达,CD45呈阴性表达;CCK-8法检测结果为,剂量为0.5-50 mg/m L的药物干预组OD值较对照组显著升高;地龙浓度为5 mg/m L组OD值出现最大值,继续提高浓度OD值逐渐减小,当提取物浓度达到500 mg/m L时表现为细胞生长受到抑制。结论:培养的骨髓基质细胞在形态和表型上具备BMSCs的特性。地龙提取物在一定浓度范围内能促进BMSCs增殖。浓度为5mg/m L时促进BMSCs增殖作用最为明显,浓度为500 mg/m L时会抑制BMSCs的增殖。     

金匮肾气丸含药血清对体外兔BMSCs增殖细胞周期及凋亡的影响

目的:研究金匮肾气丸含药血清对体外兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)增殖,细胞周期及凋亡的影响。方法:使用全骨髓贴壁法分离兔BMSCs,通过MTT法检测金匮肾气丸含药血清对BMSCs活性的影响,通过流式细胞仪(Fow Cytometry FCM)检测金匮肾气丸含药血清对地塞米松(dexamethasone DEX)诱导的BMSCs的凋亡率和细胞周期的影响。结果:金匮肾气丸各组光吸收值(OD)高于空白对照组。金匮肾气丸各组与模型组比较,Go/G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例升高,凋亡率降低,并呈一定的量效依赖关系。结论:金匮肾气丸含药血清体外能够提高兔BMSCs的活性,促进G0/G1期的BMSCs向S期和G2/M期转化,促进BMSCs的增殖,降低地塞米松所致的兔BMSCs的凋亡率。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养鉴定及复方扶芳藤合剂含药血清对细胞增殖的影响

目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法,观察不同浓度的复方扶芳藤合剂大鼠含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化BMSCs,对其进行细胞形态学观察,将BMSCs进行成骨、成脂定向诱导分化,采用流式细胞仪检测其表面标志物,分析其细胞周期,进行BMSCs鉴定;采用不同浓度(20%、10%和5%)的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对大鼠BM SCs进行干预,以CCK-8法检测其吸光度值,对比各组细胞生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。BMSCs成脂、成骨诱导后,油红O染色和茜素红染色均呈阳性。第3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD44表达分别为99.645%、99.677%、0.016%、0.133%;不同浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续干预7 d后,CCK-8法检测显示:20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清组,其1~7 d的吸光度均值均高于20%浓度的空白血清组(P<0.05);10%的含药血清组的吸光度均值在3~7 d,高于10%的空白血清组(P<0.05);5%的含药血清组与5%的空白血清组比较无明显差异(P>0.05)。结论:全骨髓贴壁法分离、培养BM SCs,操作简单,方法稳定,可大量扩增BMSCs。扩增后的BMSCs具有间充质干细胞的生物学特性,具有多向分化潜能。复方扶芳藤合剂含药血清干预后的BMSCs增殖能力增强,其中20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清在本实验中为最佳干预浓度。     

益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的：探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs ）增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法（ methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显（ P 〈0．05）,第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异（ P〈0．05）,到第7天呈下降趋势。 BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大（71．39±177;4．98%）;第4、6天时,益气活血方组达最大（66．40±177;1．47%）,与其它三组比较P〈0．01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。     

淫羊藿苷对骨性关节炎家兔BMSCs增殖及软骨定向分化影响的实验研究

目的:观察淫羊藿苷(ICA)对骨性关节炎(OA)家兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖及软骨定向分化的影响。方法:选用6月龄家兔采用Hulth法复制OA动物模型,全骨髓贴壁法分离培养OA家兔BMSCs。根据ICA的不同浓度分为25p M、50p M、0.1p M、0.2p M、0.4p M、0.8p M ICA组,并设空白组,运用MTT法检测不同浓度ICA对BMSCs增殖的影响。将BMSCs分为空白组,4μM、1μM、0.25μM ICA组,经典诱导组及1μM ICA+经典诱导组,运用免疫细胞化学方法检测Ⅱ型胶原的表达,运用阿利新蓝比色法测定各组葡萄糖氨基聚糖(GAG)的含量。结果:全骨髓贴壁分离法可获得优质性较好的BMSCs,体外培养下OA家兔BMSCs软骨定向分化能力下降,而脂向分化能力增强。MTT法检测ICA对BMSCs的增殖作用,结果发现0.1p M、0.2p M、0.4p M、0.8p M ICA组的OD值较空白组高(P0.01)。4μM、1μM、0.25μM ICA组,经典诱导组及1μM ICA+经典诱导组的Ⅱ型胶原表达的阳性率、CAG含量均高于空白组(P0.05或P0.01)。结论:ICA能明显促进OA家兔BMSCs的体外增殖及软骨定向分化。     

双合汤含药血清促进BMSCs体外增殖的研究

目的观察双合汤含药血清对SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法采用全骨髓贴壁方法提取BMSCs,显微镜观察形态,流式细胞仪检测其表面标记物,计数法绘制其生长曲线,分别用低剂量、中剂量、高剂量10%双合汤含药血清代替胎牛血清(FBS)进行药物干预。结果培养的细胞以梭形为主,呈漩涡状生长;流式细胞仪检测CD34阳性率为0.96%,CD90阳性率为93.51%;生长曲线似倒S型;给药组的BMSCs增值速度比空白对照组均快,其中高剂量组增值速度最快。结论双合汤含药血清能促进BMSCs体外的增值速度,且高剂量双合汤含药血清促进BMSCs的增值速度最为明显。     

川芎嗪对骨髓间充质干细胞增殖和黏附的影响

目的:体外研究不同浓度川芎嗪对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及黏附的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,MTT法测定细胞的生长曲线;将BMSCs分成空白对照组,川芎嗪组(10、25、50、100、200μmol/L),处理6h、12h、24h、48h,观察其对细胞增殖的影响,并采用细胞黏附实验检测细胞黏附程度。结果:根据细胞生长曲线采用第3代BMSCs进行后续试验;与对照组相比,川芎嗪对细胞增殖有影响,且应剂量控制在200μmol/L以内,时间为24h比较合理(P0.05);与对照组相比,川芎嗪100μmol/L预处理24h,BMSCs黏附作用提高最显著(P0.01)。结论:P3代BMSCs的活性佳,川芎嗪能促进BMSCs的增殖并且100μmol/L预处理24h,能显著提高BMSCs的黏附作用。     

不同浓度梓醇对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化的影响

目的 观察梓醇对SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及骨向分化的影响.方法 采用机械分离及差速贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞;MTT法检测不同浓度梓醇在不同时间点(1,3,5,7,9,11 d)对大鼠BMSCs增殖情况的影响;氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度梓醇在第3天,6天,9天,12天,15天,18天,21天对细胞上清中ALP活性的影响,茜素红染色法检测不同浓度梓醇对BMSCs矿化情况的影响.结果 梓醇促BMSCs增殖的最佳浓度为1.0 mg/L;促BMSCs骨向分化的最佳浓度为2.0 mg/L.结论 梓醇具有促BMSCs增殖及骨向分化的作用.     

仙鹤草水提液对肺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的：探讨不同浓度的仙鹤草水提液对体外培养的人肺癌细胞系A549细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用不同浓度的仙鹤草水提液分别作用于体外培养的人肺癌细胞A549细胞株24、48、72h后，MTT法观察药物对肺癌A549细胞生长的抑制效应；作用于细胞48h后倒置显微镜观察细胞形态学的改变；应用AO／EB荧光染色法，观察不同浓度仙鹤草水提液对细胞凋亡的影响；Annexinv／PⅠ双染流式细胞仪检测经药物作用后A549细胞凋亡情况。结果：仙鹤草水提液可剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖，以48h的增殖抑制作用最好；通过倒置显微镜可明显观察到细胞的形态学改变；细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞，表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征性的形态学改变；流式细胞仪检测结果显示，仙鹤草水提液可明显诱导细胞凋亡。结论：仙鹤草水提液可对人肺癌细胞系A549细胞具有显著的体外增殖抑制作用，其主要作用可能与诱导细胞凋亡有关。     

针刺血清配合复方丹参注射液诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

目的:探讨针刺血清配合丹参注射液对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和诱导其向软骨细胞分化的影响。方法:20只SD大鼠电针7d,颈总动脉取血制备血清。30只4周龄SD大鼠骨髓中分离BMSCs,取第3代BMSCs分为空白对照组!针刺血清组、丹参注射液组及针药组,给予相应的诱导条件。结果:MTT显示丹参组及针药组均能促进BMSCs增殖(P<0.05),尤以针药组最为明显,而针刺组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。GAG含量及Ⅱ型胶原免疫组化均显示针药组有显著表达,且较丹参组明显,而针刺组与对照组相比不显著。结论:针刺血清配合复方丹参注射液能有效促进BMSCs增殖和诱导其向软骨细胞分化。     

左归丸对肾虚大鼠MSCs增殖的影响

目的探讨补肾益精代表方左归丸对肾虚大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法 SD雌性大鼠双侧卵巢切除增龄3月法复制肾虚模型,用左归丸给予部分模型大鼠灌胃。分离、培养正常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs。观察各组大鼠MSCs细胞形态,生长周期,P3、P5代细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶衰老细胞染色结果。结果模型组大鼠P3、P5代MSCsOD值明显低于正常组、左归丸组(P<0.05)。各组大鼠MSCs细胞周期无明显差异(P>0.05)。模型组衰老细胞阳性率最高,明显高于正常组(P<0.01),但与左归丸组间差异不明显(P>0.05)。结论去卵巢大鼠MSCs增殖能力减弱,左归丸一定程度上改善肾虚大鼠MSCs增殖能力。     

温阳补肾药对骨髓间充质干细胞促增殖的实验研究

目的：观察、比较巴戟天、鹿角胶、淫羊藿、骨碎补对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）促增殖的影响,探讨其作用机理。方法：建立SD大鼠BMSCs体外培养体系,倒置显微镜、苏木精-伊红染色进行形态学观察;流式细胞仪（FCM）进行BMSCs细胞周期分析;MTT法检测BMSCs生长曲线;4味温阳补肾药含药血清配制,确定其最佳药物浓度和最佳血清浓度对BMSCs促增殖的影响。结果：体外培养大鼠BMSCs经倒置显微镜、苏木精-伊红染色的形态学观察均符合BMSCs的形态及生长特点。高、中、低剂量的四味中药含药血清对F3BMSCs 24、48、72h的增殖效应显示,以中剂量组20%含药血清对F3BMSCs 48h后促增殖最明显,其组间比较结果为淫羊藿〉骨碎补〉鹿角胶〉巴戟天。结论：巴戟天、鹿角胶、淫羊藿、骨碎补四味温阳补肾药均有促BMSCs增殖作用。淫羊藿促BMSCs增殖效果最佳,其组间比较结果为淫羊藿〉骨碎补〉鹿角胶〉巴戟天。     

五种中药对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用

目的:观察单味中药黄芪、丹参、淫羊藿及复方右归饮药物血清和煎剂以及雪莲花药物血清及其醇提液对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用。方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌。按10倍于任用剂量进行SD大鼠灌胃,心脏采血,制备血清。取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入含药血清、煎剂及雪莲花醇提液。药物血清分为15%1、0%5、%和1%浓度,其煎剂及雪莲花醇提液浓度分为10-2、10-3、10-4、10-5,作用3天后用MTT法测定细胞活力。结果:雪莲花含药血清及其醇提液在4个浓度组均显示促进细胞增殖。结论:雪莲花具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。     

骨髓间充质干细胞与血管内皮生长因子联合移植对大鼠创伤性脑损伤修复的研究

目的探讨联合移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）和血管内皮生长因子（VEGF）对创伤性脑损伤（TBI）大鼠脑组织中脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法 SD大鼠2只,取股骨骨髓体外培养BMSCs。SD大鼠40只,随机分为单独移植BMSCs组、单独应用VEGF组、联合移植BMSCs与VEGF组及对照组,每组10只。采用改良的Feeny自由落体撞击方法建造中度创伤性脑损伤模型。造模后1周,在立体定向仪下分别将等量BMSCs、VEGF、BMSCs加VEGF及PBS液注入相应大鼠的损伤脑组织周边。养育2周后处死取脑。采用HE及尼氏染色法观察脑组织病理学变化;采用免疫组化染色,应用Image pro-Plus6.0软件测量半暗带及健侧对称部位BDNF阳性表达区域的总和累积光密度,应用SPSS 11.3软件进行统计学分析。结果除BMSCs组外,其余各组对称部位BDNF含量均较半暗带高（P〈0.05）;联合移植组半暗带的BDNF含量明显高于对照组（P〈0.05）。结论联合移植BMSCs与VEGF可有效抑制TBI大鼠半暗带中BDNF含量的降低,有利于神经功能的恢复。     

调节“脑中血海”法中药联合骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠的保护作用

目的:研究调节"脑中血海"中药脑脉I号胶囊联合骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchyrmal Stem Cells,BMSCs)移植治疗缺血再灌注模型大鼠的保护作用。方法:制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),分为模型组、脑脉I号组、BMSC移植组、移植联合治疗组,假手术组。分别于3 d、7 d、14 d观察各组大鼠脑组织含水量及脑神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表达。结果:与模型组相比,BMSC移植、脑脉1号以及二者联合治疗对大鼠脑含水量有显著改善(P<0.01),但在该指标上两者没有显著性的交互效应。与模型组相比,BMSC移植、脑脉1号以及二者联合可显著增加NSE表达(P<0.01),且两者联合使用存在交互效应,与观察时点存在交互效应(P<0.01)。结论:调节"脑中血海"的中药脑脉I号胶囊可促进BMSC移植治疗大鼠缺血再灌注损伤的作用,保护神经元,减轻脑水肿,随着疗程的延长,效果更加显著。