山核桃叶总黄酮对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:研究山核桃叶总黄酮对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:体外培养大鼠H9C2心肌细胞,用不同浓度氯化钴并优化不同缺氧及复氧时间建立缺氧复氧损伤模型。缺氧复氧前加入终浓度为2.5、5、10μg/m L的山核桃叶总黄酮预处理,通过检测细胞上清液中LDH释放量,细胞内MDA含量和SOD活性;并采用MTS检测缺氧复氧损伤后细胞的成活率以及Hoechst-PI双染和流式细胞术观察细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹检测细胞内HIF-1α蛋白表达,来考察山核桃叶总黄酮保护心肌细胞缺氧复氧损伤的作用。结果:利用1 200μmol/L氯化钴缺氧18 h,复氧2 h可建立缺氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,山核桃叶总黄酮能降低H9C2细胞缺氧复氧损伤后LDH释放量及细胞内MDA含量,提高SOD活性,减少细胞凋亡,并使细胞HIF-1α蛋白表达恢复正常水平。结论:山核桃叶总黄酮对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化、增强细胞清除自由基能力、减少脂质过氧化物产生及抑制细胞凋亡有关。     

山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响

目的:观察山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响,探讨其抗心肌细胞凋亡的作用机制。方法:将原代培养3 d的心肌细胞采用液体石蜡封闭法建立缺氧/复氧模型,分为正常组、缺氧/复氧模型组(缺氧2 h/复氧1 h)及药物干预组(缺氧/复氧前24 h及缺氧同时给予山茱萸总苷预处理),药物浓度分别为0.1、1.0、10 g/L.。电镜下观察各组心肌细胞线粒体的形态。结果:与正常对照组比较,模型组心肌细胞线粒体肿胀、膜破裂、嵴溶解融合或有电子致密颗粒沉积,给予山茱萸总苷干预后,中、高剂量组心肌细胞超微结构损伤程度明显改善,肌纤维排列基本整齐规则、线粒体完整、嵴清晰及未见空泡形成,低剂量组与模型组差异不明显。结论:山茱萸总苷可以抑制缺氧/复氧损伤对乳鼠心肌细胞超微结构的破坏,保护线粒体,可能是通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路去实现对心肌细胞的保护作用。     

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞凋亡的影响

目的观察马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达的影响。方法利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型,采用荧光染色法观察心肌细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3的表达。结果与A/R组比较,PTF组缺氧/复氧损伤后有部分细胞发生凋亡形态变化,但数量较A/R组明显较少;PTF组均可明显降低细胞凋亡率(P0.05);PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤的H9c2心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。结论 PTF可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡,其作用可能是通过下调Caspase-3表达实现的。     

山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞钙超载的影响

目的:从抑制钙超载的角度探讨山茱萸总苷保护心肌细胞的作用机制。方法:采用乳鼠心肌细胞原代培养方法获得正常心肌细胞并建立缺氧/复氧损伤细胞模型,实验分正常组、模型组和山茱萸总苷低中高剂量组,培养24小时后进行细胞缺氧/复氧处理,采用Fluo4-AM荧光探针检测心肌细胞胞浆内钙离子浓度;Annexin V/PI双染法检测心肌细胞总凋亡率。结果:缺氧/复氧损伤组心肌细胞胞浆内钙离子浓度显著升高(P0.01),山茱萸总苷低、中、高剂量可明显降低心肌组织内钙离子浓度(P0.05,P0.01);缺氧/复氧模型心肌细胞凋亡率明显升高,中、高剂量山茱萸总苷可明显降低心肌细胞凋亡率(P0.01)。结论:山茱萸总苷中、高剂量预处理可以抑制缺氧/复氧损伤心肌细胞的钙超载,可能是其抗心肌细胞凋亡,保护心肌的作用机制之一。     

洋参果总皂苷对缺氧及缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用

目的：研究洋参果总皂苷对培养心肌细胞缺氧及缺氧/复氧损伤的保护作用.方法：对培养的心肌细胞建立缺氧及缺氧/复氧损伤型,实验分9组：正常细胞培养组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤＋洋参果（100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg/ml）组.分别观察单纯缺氧和缺氧/复氧后心肌细胞搏动次数及心肌细胞形态.结果：洋参果总皂苷12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml浓度,增强缺氧后心肌细胞搏动次数;从形态学观察：单纯缺氧及缺氧/复氧后,洋参果总皂苷在3.1μg/ml～50μg/ml浓度范围,给药组比阴性对照组细胞形态完整.结论：洋参果总皂苷对心肌细胞缺氧及缺氧/复氧损伤有保护作用.     

川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的实验研究

目的:观察川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的保护。方法:利用心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,川芎嗪注射液预处理对心肌细胞进行预处理。结果:川芎嗪提高心肌细胞缺氧/复氧损伤后心肌细胞存活率、减少细胞丙二醛产生、减少乳酸脱氢酶的漏出。结论:川芎嗪对乳鼠心肌细胞有预处理保护作用。其机制与提高心肌细胞抗氧自由基的能力,抑制脂质过氧反应,减轻心肌细胞膜脂质过氧化损伤,保持细胞膜结构的完整性来实现的。     

附子多糖对SD乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其机制研究

目的 以乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型模拟在体心肌缺血再灌注损伤,观察附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的作用及机制.方法 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;缺氧后适应组在细胞缺氧3h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6h;附子多糖组在缺氧3h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 mg·mL-1的培养液中,常规培养6h.MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度和心肌细胞凋亡率,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.结果 与缺氧/复氧组比较,经附子多糖后处理,可以增加心肌细胞存活率(P＜0.01),减少LDH(P＜0.01)和CK(P＜0.05)的释放,降低细胞内钙离子浓度(P＜0.05),有效抑制心肌细胞的凋亡(P＜0.05).结论 附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞产生保护效应,机制与其抑制钙超载、减轻线粒体的损伤有关.     

基于心肌细胞缺氧/复氧损伤的麦冬多糖提取工艺研究

目的:优化麦冬多糖提取工艺,并验证其对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:采用L9(34)正交试验,以麦冬多糖含量为考察指标,以溶媒量、提取时间、提取次数为考察因素,筛选麦冬多糖最佳提取工艺;单因素实验,考察其最佳醇沉浓度;在此基础上,采用体外细胞实验建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,以细胞损伤抑制率为指标,验证麦冬多糖对心肌细胞的保护作用。结果:麦冬多糖的最佳提取工艺为14倍量的水回流提取3次,每次1h,醇沉浓度以80%为宜;按此工艺提取的麦冬多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有较好的保护作用,但表现出一定的剂量、时间与药效的非线性关系。结论:本实验优化了麦冬多糖的提取工艺,同时验证了麦冬多糖对缺氧/复氧损伤型冠心病的治疗作用,为揭示其药效物质基础与大规模工业化生产提供参考。     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:探究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用氯化钴(CoCl_2)建立缺氧复氧损伤H9c2细胞模型,实验分正常对照组、模型组及荭草花提取物不同浓度组。应用MTS检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)释放量及细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot测定cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:利用800μmol/L CoCl_2缺氧22 h,复氧2 h可建立缺氧复氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,荭草花提取物能显著升高心肌细胞存活率,降低LDH、CK释放量及细胞内MDA含量,提高细胞内SOD、CAT活性,并呈浓度依赖性抑制CoCl_2诱导的缺氧复氧损伤。荭草花提取物能下调促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Bax的表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论:荭草花提取物对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

双龙方对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及活性成分筛选研究

目的 研究中药双龙方及其组分人参总皂苷、丹参总酚酸对缺氧复氧心肌损伤的保护作用,并测定其活性成分.方法 建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,采用MTT法检测给药各组细胞的存活率;同时采用HPLCMS联用对双龙方进入细胞的成分进行鉴定.结果 模型组细胞存活率明显降低,仅为8.26％,双龙方有效增加细胞存活率,为70.41％,且在各实验组中效果最好;液质鉴定其活性成分主要是:Re、Rg1、Rf、Rb1和Rd.结论 双龙方对缺氧复氧引发的心肌细胞损伤有显著的保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制心肌细胞钙离子超载有关.     

芳香新塔花黄酮抗氧化活性及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 探讨芳香新塔花黄酮(ZCF)的抗氧化活性,以及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)清除法测定ZCF的自由基捕获清除能力.体外培养原代SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型,用MTT法测定药物对心肌细胞存活率的影响,测定给药后丙二醛(MDA)的变化.结果...     

栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

[目的]探讨栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制。[方法]体外培养H9C2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。实验分为正常对照组,缺氧/复氧模型组,栀子苷预处理组。分光光度法测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化物歧化酶(SOD)活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果]与模型组比较,栀子苷预处理组能明显减少心肌细胞CK、LDH的漏出量,提高SOD活力,降低MDA含量,同时提高心肌细胞的存活率,减少心肌细胞的凋亡。[结论]栀子苷预处理对H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与增强心肌抗氧化能力、清除氧自由基以及抑制心肌细胞凋亡有关。     

三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.     

当归黄芪超滤膜提取物预处理对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤保护作用的研究

目的探讨当归黄芪超滤膜提取物预处理对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤和氧化损伤的保护作用。方法体外培养原代乳鼠心肌细胞，不同分子量及剂量当归黄芪超滤膜提取物预处理24h后，采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）诱导心肌细胞缺氧／复氧损伤模型，测定细胞存活率（MTT法）、细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果在缺氧／复氧损伤模型和氧化损伤模型中，当归红芪超滤膜提取物预处理明显提高细胞存活率，增加胞内SOD活性，降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量。结论当归红芪超滤膜提取物预处理对缺氧／复氧损伤以及氧化损伤心肌细胞都具有明显的保护作用，其可能与防止氧自由基的产生或抑制氧自由基对心肌细胞的损伤有关。     

基于中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤物质基础

目的:利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。方法:测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的HPLC,寻找香青兰入血成分;体外培养乳大鼠原代心肌细胞及H9c2细胞,用Na2S2O4或N2为缺氧剂建立缺氧/复氧损伤模型,以细胞活力、LDH释放量、T-SOD活力、MDA产量及细胞凋亡为指标,考察香青兰提取物及其含药血清、香青兰提取物不同给药剂量及不同给药时间段所采血清的处理物对细胞损伤的影响。结果:香青兰在血清中出现4个移行成分,其中3个为原型成分,1个可能为代谢产物;与模型组或空白血清组相比,香青兰提取物、含药血清及不同因素影响下的血清处理物显著降低缺氧/复氧心肌细胞LDH释放量和MDA产量(P<0.05,P<0.01),显著升高T-SOD及细胞活力(P<0.05,P<0.01),明显抑制细胞凋亡。结论:香青兰提取物4个入血成分可能为香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。     

黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮（ Scuttellaria baicalensis steams-leaf total flavonoids,SSTF）对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。     

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??OBJECTIVE To observe the effect and mechanism of Bauhinia championii flavones (BCF) on anti-hypoxia/reoxygenation injury in cardiomyocytes via inhibiting necroptosis. METHODS The cardiomyocytes hypoxia/reoxygenation injury model was developed and pretreated with Bauhinia championii flavones. ELISA was used to evaluate the contents of TNF-??, and the activities of T-AOC were determined by ultraviolet spectrophotometric method. The protein expression of RIPK3 was observed by Western-blotting, and the necroptosis rate was determined by using Annex v-FITC/PI double staining.RESULTS Compared with model group, Bauhinia championii flavones pretreatment alleviated cardiomyocytes injury, increased T-AOC level, decreased the activity of TNF-??, down-regulated the expression of RIPK3, and inhibited cardiomyocytes necroptosis(P<0.05). It had synergistic effect when combined BCF with necrostatin-1(P<0.05). CONCLUSION BCF can inhibit necroptosis and has protective effects on hypoxia/reoxygenation injury, which are associated with increasing the level of T-AOC, down-regulating TNF-?? and RIPK3, and decreasing the cardiomyocytes necroptosis rate.     

心宁复方抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：从氧自由基损伤角度探讨心宁复方有效部位群心肌保护作用机制。方法：用原代培养的心肌细胞复制SD大鼠乳鼠缺氧／复氧损伤模型,设立空白对照组,缺氧／复氧组,合贝爽注射液组,心宁复方大、中、小剂量组共6个组。各给药组在缺氧期及复氧期分别给药,测定各组心肌细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌细胞SOD活性、MDA含量。结果：心宁复方能明显提高受损心肌细胞的活力,降低LDH活性表达,增强SOD活性,减少MDA的含量。结论：抑制心肌细胞氧自由基损伤可能是心宁复方心肌细胞保护作用机制之一。     

缺氧复氧联合连二硫酸钠损伤制备心气虚细胞模型

目的：探讨心气虚细胞模型的制备方法。方法：体外培养心肌细胞,分成正常培养组、缺氧3h、4h复氧2h模型组和药物组及分别加入1mmol／LNa2S2O4、2mmol／LNa2S204、3mmol／LNa2S204-4-缺氧3h、4h复氧2h模型组和药物组。MTF法检测含药血清对细胞的毒性。以检测培养上清心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）为指标。结果：单纯缺氧／复氧以及连二硫酸钠合并缺氧／复氧均可造成心肌细胞损伤,随着缺氧时间的延长和连二硫酸钠浓度的增加,对心肌细胞的破坏程度不断加重。加入益气活血方药物血清干预后,对心肌细胞有一定的保护作用。结论：根据实验结果,选择1mmol／LNa2S2O4合并缺氧无糖4h复氧2h做为心气虚细胞模型的造模条件较好。     

双参通冠方药物血清抗缺氧复氧损伤心肌细胞Ca2+超载的机制研究

目的:探讨双参通冠方药物血清对培养心肌细胞缺氧复氧损伤Ca²⁺超载的影响及其机制。方法:培养心肌细胞,建立缺氧复氧损伤模型。运用血清药理学方法研究双参通冠方药物血清对缺氧复氧损伤心肌Ca²⁺超载的影响。荧光分光光度法测定心肌细胞胞浆[Ca²⁺]i,激光扫描共聚焦显微法观察高K+及Thapsigargin诱导的细胞内Ca²⁺变化。结果:正常心肌细胞[Ca²⁺]i值较低,缺氧复氧后显著增高,高K⁺及Thapsigargin可诱导细胞内Ca²⁺的快速增多,双参通冠方药物血清能降低缺氧复氧心肌细胞Ca²⁺升高,并能抑制高K⁺及Thapsigargin所致的细胞内Ca²⁺荧光升高。结论:缺氧复氧损伤、高K⁺及Thapsigargin均可导致心肌细胞Ca²⁺增高,双参通冠方药物血清可抗心肌细胞Ca²⁺超载,其机制可能与其抑制细胞外Ca²⁺内流和促进内Ca²⁺吸收有关。