Nogo受体在早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用

目的:探讨Nogo受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。方法:链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组,对照组;DM组;siNgR组:DM大鼠玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列;siRNA空白组:DM大鼠玻璃体内给予阴性核苷酸序列。1mo后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western-blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果:对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.74±0.49,7.21±0.96,6.41±1.34及4.02±0.53nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(P<0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(P>0.05)。结论:NgR表达增加是糖尿病RGC凋亡的重要原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达有关。     

GPR120通过抑制核因子-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　探讨GPR120对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响及可能机制。方法　健康雄性SD大鼠按55 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。模型诱导成功后,将大鼠随机分成三组:糖尿病组、鱼油预处理组(鱼油1 g·kg^-1每天1次灌胃;鱼油的主要成分为omega-3,omega-3为GPR120通路激活剂)、安慰剂组(玉米油1 g·kg^-1每天1次灌胃),每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组（对照组和糖尿病组大鼠每天1次灌胃等剂量PBS缓冲液）。12周后,气相色谱法检测各组大鼠视网膜组织中二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）含量,HE染色检测RGC密度,免疫荧光染色检测视网膜GPR120蛋白表达,Western blot检测视网膜GPR120、核因子-κB（NF-κB）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白相对表达量。结果　与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显减少（均为P<0.01);与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显增加（均为P<0.01)。GPR120主要分布于RGC层。对照组大鼠RGC密度为(437.06±4.72) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(35.65±0.89)%、(12.42±0.58)%、(13.76±0.08)%;糖尿病组大鼠RGC密度为 (329.75±3.51) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3 蛋白相对表达量分别为(24.14±0.46)%、(38.94±0.45)%、(25.14±0.45)%;鱼油预处理组大鼠RGC密度为(412.44±3.62) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(31.59±0.77)%、(18.11±0.58)%、(20.14±0.61)%。与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显降低;与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01)。糖尿病组与安慰剂组相比,各指标差异均无统计学意义(均为P＞0.05)。结论　GPR120激活对糖尿病大鼠RGC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。     

银杏叶制剂EGb 761对外伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨银杏叶提取物制剂EGb 761对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGC)存活的影响.方法 大鼠48只经荧光金逆行标记后制备视神经损伤的动物模型,随机分为治疗组和对照组,两组分别给予EGb 761 150 mg/kg·d和生理盐水灌胃.在视神经损伤后4d、7d及14d观察视网膜铺片,进行RGC计数.结果 大鼠视神经损伤后4d、7d及14d,RGC数量持续减少,但治疗组均高于对照组,各时间点的差异均有统计学意义(依次为P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).结论 EGb761可促进视神经损伤后RGC的存活,对RGC有保护作用.     

齐墩果酸对糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应和视网膜神经节细胞损伤的影响

目的 探讨齐墩果酸对糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应和视网膜神经节细胞(RGC)损伤的影响。方法 取6周龄健康清洁级雄性SD大鼠30只,将大鼠随机分为对照组、糖尿病组和齐墩果酸组,每组10只。对照组大鼠给予鼠维持饲料喂养,糖尿病组和齐墩果酸组给予高脂饲料喂养。4周后,按照35 mg·kg^-1的剂量给予糖尿病组和齐墩果酸组大鼠腹腔内注射链脲佐菌素,对照组注射相应体积的柠檬酸钠缓冲液。次日尾静脉采血,大鼠空腹血糖≥11.1 mmol·L^-1说明造模成功。剔除2只造模失败的大鼠,最终对照组10只大鼠,糖尿病组9只,齐墩果酸组9只。齐墩果酸组大鼠每天给予100 mg·kg^-1齐墩果酸灌胃,对照组及糖尿病组每天给予等量的溶剂灌胃。干预8周后处死大鼠,摘取双侧眼球。分离大鼠左眼视网膜,检测大鼠视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。将大鼠右侧眼球固定后,石蜡包埋、切片,HE染色观察视网膜组织形态,免疫组织化学染色计算RGC密度并检测核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达情况。结果 ...     

褪黑素对糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞凋亡的影响

目的研究褪黑素对糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞凋亡的影响。方法将54只健康雄性8周龄SD大鼠,随机分为正常对照组、糖尿病组及褪黑素组各18只,各组再按4周、8周、12周3个时间点随机分为3小组,每组各6只大鼠。正常对照组不进行干预;糖尿病组大鼠给予一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg·kg-1,以诱导糖尿病大鼠模型;褪黑素组在成功建立糖尿病大鼠模型后给予褪黑素(10mg·kg-1·d-1)灌胃进行干预。每只大鼠取左眼眼球,制作石蜡组织病理学切片,应用TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡情况。结果正常对照组4周、8周、12周均未见视网膜神经细胞凋亡。糖尿病组4周可见视网膜神经细胞凋亡,糖尿病组8周和12周视网膜神经节细胞凋亡指数较同期正常对照组大鼠均明显升高,糖尿病组4周、8周、12周凋亡指数分别为(0.48±0.53)%、(5.66±2.10)%和(11.83±1.58)%,8周及12周与同期正常对照组相比差异有统计学意义(均为P=0.000)。褪黑素4周组与同期糖尿病组神经细胞凋亡情况无明显差异,褪黑素组8周及12周较同期糖尿病组神经细胞凋亡情况有不同程度的减轻,视网膜神经节细胞凋亡指数有所下降,褪黑素组4周、8周、12周凋亡指数分别为(0.30±0.74)%、(1.67±0.54)%和(7.73±0.95)%,褪黑素组8周及12周时与同期糖尿病组相比差异有统计学意义(均为P=0.000)。结论褪黑素能够通过减轻糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞的凋亡,达到神经保护的目的。     

桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用

目的　探讨桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法　选取12周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组10只、糖尿病组10只、IOP组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1）10只和抑制剂组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1+锌原卟啉20 mg·kg^-1）10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用一次性腹腔注射10 g·L^-1链脲佐菌素（60 mg·kg^-1）制作糖尿病大鼠模型,桦褐孔菌多糖采用灌胃法给药;抑制剂组在桦褐孔菌多糖灌胃前24 h将锌原卟啉经腹腔注射给大鼠。正常对照组和糖尿病组灌胃相同体积的生理盐水,并于12周后禁食不禁水12 h后进行实验。将分离到的新鲜视网膜,石蜡包埋,切片,用于HE染色和免疫组织化学染色。检测视网膜样品组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）含量;采用HE染色观察视网膜形态并检测视网膜神经节细胞密度;免疫组织化学染色观察细胞HO-1阳性染色情况;采用Western blot法检测视网膜HO-1、Nrf2和COX-2蛋白的表达。结果　造模后12周,糖尿病组、IOP组、抑制剂组大鼠体质量均低于正常对照组,血糖浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。造模后,糖尿病组大鼠视网膜组织中SOD、GSH的含量均明显低于正常对照组(均为P<0.01);MDA含量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。IOP组视网膜组织中SOD、GSH含量高于糖尿病组及抑制剂组,MDA含量显著低于糖尿病组及抑制剂组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组、糖尿病组、抑制剂组和IOP组视网膜神经节细胞密度分别为（2300±100）个·mm^-2、（1400±100）个·mm^-2 、（1505±95）个·mm^-2、（2250±95）个·mm^-2。Western blot结果显示:糖尿病组HO-1、Nrf2及COX-2蛋白的表达均高于正常对照组（均为P<0.01）。IOP组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达高于糖尿病组,COX-2蛋白的表达低于糖尿病组（均为P<0.01）;抑制剂组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达低于IOP组,COX-2蛋白的表达高于IOP组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。结论　桦褐孔菌多糖能够通过激活Nrf2通路降低糖尿病大鼠视网膜氧化应激及炎症反应。     

银杏叶提取物对大鼠持续性高眼压下的视网膜神经节细胞活性的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物(extractof Ginkgo bilobaleaves,EGb)对大鼠持续性高眼压损伤下的视网膜神经节细胞(retinalganglioncells,RGC)活性的保护作用。方法:健康SD大鼠20只,采用烧烙法,烙闭大鼠左眼2条浅层巩膜静脉,制作大鼠持续性高眼压模型,从中选出眼压稳定在实验要求(眼压>26mmHg)的大鼠12只随机分为A组(对照组)和B组(EGb治疗组)。治疗组予EGb每日150mg/kg灌胃治疗,对照组为空白对照,不做任何处理。1mo后处死大鼠摘取眼球,制作眼球标本,常规石蜡切片,AgNOR染色观察RGC细胞核内的银染颗粒。采用计算机图象分析系统对RGC细胞核内的银染颗粒进行定量分析。结果:A组大鼠模型眼RGC细胞核内银染颗粒为1.33±0.07个/细胞,B组为1.83±0.09个/细胞,B组模型眼较A组模型眼RGC细胞核内银染颗粒多,其差异有显著性意义(P<0.05)。两组模型眼较正常眼的RGC细胞核内银染颗粒明显减少,其差异有显著性意义(P<0.05)。结论:大鼠持续性高眼压可导致RGC细胞核内银染颗粒减少,而EGb对RGC活性有部分保护作用。     

Colivelin对视神经保护作用的初步研究

目的初步探讨Colivelin对大鼠外伤性视神经损伤后的神经保护作用和机理,及其保护效果是否具有剂量依赖性。方法 40只健康2月龄Wistar大鼠,随机分为模型组、安慰剂组及Colivelin低剂量组(10-6 μmol·L-1 Colivelin)、Colivelin中剂量组(10-4μmol·L-1Colivelin)、Colivelin高剂量组(10-2 μmol·L-1 Colivelin),每组8只。40只大鼠均做单侧视神经损伤模型,模型组另一侧未做任何处理的8眼为空白对照组。应用无创血管夹建立大鼠视神经夹伤模型,造模后30 min Colivelin治疗组玻璃体内分别注射不同浓度Colivelin 5 μL,安慰剂组注射5μLPBS缓冲液,模型组和空白对照组不给予任何治疗。注药后7d,通过视网膜切片技术,进行HE染色观察视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的形态及数目,TUNEL染色法检测RGC的凋亡以及免疫组织化学法检测视网膜中caspase-3的表达。结果 HE染色可见空白对照组视网膜各层细胞排列整齐密集,模型组、安慰剂组、Colivelin治疗组均可见部分RGC核固缩,但随着Colivelin注射浓度的增加,RGC发生核固缩的数量减少。RGC计数:空白对照组每400倍光镜视野下RGC数量为25.750±1.264,模型组为8.236±1.239,安慰剂组为8.514±1.222,Colivelin低剂量组为14.500±1.021,Colivelin中剂量组为16.250±1.319,Colivelin高剂量组为18.097±1.323,除模型组与安慰剂组之间差异无统计学意义(P>0.05)外,其他各组之间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TUNEL染色:模型组和安慰剂组注药后7 d TUNEL染色可见大量凋亡细胞,Colivelin治疗组凋亡细胞数量随Colivelin注射浓度的增加依次递减。RGC细胞凋亡率:模型组为(60.928±2.961)%,安慰剂组为(61.446±2.755)%,Colivelin低剂量组为(58.432±2.835)%,Colivelin中剂量组为(51.948±2.802)%,Colivelin高剂量组为(47.656±2.331)%。Caspase-3表达:模型组、安慰剂组及Colivelin低剂量组、中剂量组、高剂量组均可见caspase-3表达。平均光密度值显示,模型组和安慰剂组相比caspase-3表达无明显差异(分别为0.482±0.012和0.486±0.012),均高于Colivelin治疗组(均为P<0.05),并且Colivelin低剂量组、中剂量组、高剂量组组间差异亦均有统计学意义(分别为0.411±0.017、0.326±0.018、0.234±0.016;均为P<0.05)。结论 Colivelin能有效增加视神经损伤后RGC的数量,抑制其凋亡,减少caspase-3表达,且这一作用呈剂量依赖性。     

丝胶对糖尿病大鼠视网膜氧化应激和微炎症状态的改善作用

目的　探讨丝胶对糖尿病大鼠视网膜氧化应激和微炎症状态的改善作用。方法　采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素腹腔注射法建立糖尿病大鼠模型,将24只成模大鼠随机分为丝胶治疗组和糖尿病模型组,每组12只,另取同周龄12 只正常大鼠作为正常对照组,成模后丝胶治疗组给予丝胶溶液空腹灌胃、糖尿病模型组及正常对照组给予等体积生理盐水灌胃每天1次,共35 d。药物干预后,检测3组视网膜组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）的含量;采用Western blot法检测视网膜核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）、血红素氧合酶1（heme oxygenase 1,HO-1）、核因子-κB（nuclear factor kappa-B,NF-κB）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）蛋白的表达,苏木素-伊红染色法观察视网膜形态结构。结果　各指标三组间整体比较差异显著（均为P<0.01）。丝胶治疗组大鼠视网膜中MDA含量、NF-κB和TNF-α蛋白表达水平分别为（4.145±0.282）mmol·gprot^-1、0.232±0.027和0.761±0.058,较糖尿病模型组的（6.813±0.446）mmol·gprot^-1、0.334±0.024、0.994±0.084均显著降低（均为P<0.05）。丝胶治疗组大鼠视网膜中还原型GSH含量、Nrf2和HO-1蛋白表达水平分别为（78.518±4.317）mg·gprot^-1、0.591±0.054和 0.954±0.091,较糖尿病模型组的（59.890±5.932）mg·gprot^-1、0.351±0.044、0.585±0.054均显著升高（均为P<0.05）。糖尿病模型组大鼠视网膜各层细胞排列紊乱,内界膜肿胀,神经节细胞可见空泡、水肿样改变,丝胶治疗组大鼠视网膜各层细胞形态较规则、排列轻度紊乱,病理变化较糖尿病模型组明显减轻。结论　丝胶可改善糖尿病视网膜氧化应激和炎症介质的损伤,延缓糖尿病视网膜病变发展。     

右美沙芬对糖尿病视网膜神经病变中Caspase-3表达的影响

目的 观察右美沙芬对糖尿病大鼠视网膜神经病变中Caspase-3表达的影响.方法 健康成年Sprague Dawley大鼠48只,12只作为正常对照组(D组),36只大鼠链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,并随机分为糖尿病模型组(A组),10 mg·kg-1右美沙芬治疗组(B组;造模成功后一次性腹腔注射10 mg·kg-1右美沙芬),30 mg·kg-1右美沙芬治疗组(C组;造模成功后一次性腹腔注射30 mg·kg-1右美沙芬),每组各12只.各组分别于4周末、8周末各处死大鼠6只,行免疫组织化学法检测视网膜组织Caspase-3蛋白的表达.结果 视网膜Caspase-3光密度值:A组4周、8周时分别为0.256±0.031和0.374±0.234,B组分别为0.244±0.122和0.352±0.152,C组分别为0.174±0.021和0.256±0.138,D组分别为0.074±0.018和0.072±0.233.A组4周Caspase-3蛋白表达主要见于神经节细胞层,8周时阳性表达进一步增加,扩展到内核层.C组Caspase-3表达变化规律与A组基本一致,但4周、8周时阳性表达量均低于A组(均为P＜0.05),A组与B组间4周和8周时Caspase-3阳性表达量差异均无统计学意义(均为P＞0.05).D组4周、8周时大鼠视网膜上几乎无Caspase-3阳性表达.结论 早期糖尿病大鼠视网膜Caspase-3参与了糖尿病视网膜病变的发病机制,右美沙芬可以抑制Caspase-3蛋白的表达,对糖尿病视网膜病变有一定的治疗作用.     

藏红花素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）时藏红花素对视网膜细胞凋亡数目、凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响，探讨缺血再灌注时藏红花素对视网膜的保护作用机制。方法　选取体质量200~250 g的健康雄性SD大鼠24只，随机分为4组:对照组、模型组、藏红花素低剂量组和藏红花素高剂量组，每组6只。藏红花素低剂量组、高剂量组分别于造模前3 d、30 min定时腹腔注射5 g·L^-1藏红花素5 mg·kg^-1、50 mg·kg^-1。造模成功后24 h处死大鼠并摘取眼球。使用电镜观察各组大鼠视网膜细胞结构，TUNEL染色检测视网膜凋亡细胞数量，免疫组织化学染色法观察凋亡相关蛋白Caspase-3在视网膜中的表达。结果　视网膜TUNEL染色发现，对照组视网膜组织中几乎未发现凋亡细胞的阳性表达，模型组视网膜神经节细胞层和内核层中发现大量棕黄色着色的细胞，其凋亡细胞数为（27.40±0.96）个，藏红花素低剂量组可见神经节细胞层、内核层凋亡细胞数较模型组减少，凋亡细胞数为（8.40±0.41）个，与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）；藏红花素高剂量组凋亡细胞数较模型组和低剂量组明显减少，凋亡细胞数为（4.30±0.47）个，和藏红花素低剂量组相比差异有统计学意义（P<0.01）。对照组大鼠视网膜组织Caspase-3染色阴性，模型组视网膜神经节细胞层可见棕黄色颗粒位于细胞浆内，藏红花素低剂量组Caspase-3蛋白表达量与模型组类似，藏红花素高剂量组Caspase-3蛋白表达量与对照组类似。结论　藏红花素能通过降低Caspase-3蛋白含量及凋亡细胞数，从而有效保护视网膜免受RIRI。     

补阳还五汤加减对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨补阳还五汤加减对高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞的保护作用.方法 90只SD大鼠随机分为假手术组(n=30)和高眼压模型组(n=60).造模成功大鼠56只被随机分为治疗组(n=28)和对照组(n=28).造模后4周,模型治疗组给予补阳还五汤加减浓缩剂灌胃,其余2组灌服等剂量生理盐水,每组随机选取10只动物经上丘注射50 μL体积分数10% DiI.用药后4周行视网膜神经节细胞的TUNEL染色、DiI阳性细胞计数、节细胞凋亡率的检测.结果 假手术组视网膜无TUNEL阳性细胞,模型治疗组及模型对照组视网膜均存在明显的TUNEL阳性细胞.假手术组视网膜神经节细胞数为1 685.49±583.47,对照组为405.61±229.88,而治疗组为1 069.74±387.53.治疗组明显多于对照组而少于假手术组.假手术组视网膜神经节细胞凋亡率为(7.32±6.89)%,对照组为(41.23±8.76)%,治疗组为(23.12±10.11)%.治疗组明显低于对照组而高于假手术组.结论 补阳还五汤加减可通过抑制青光眼大鼠视网膜神经节细胞凋亡而发挥视神经保护作用.     

糖尿病大鼠视网膜氧化应激损伤及葛根素的干预作用

目的研究糖尿病大鼠视网膜氧化应激指标的变化及葛根素对其的干预作用。方法 40只清结级雄性SD大鼠,其中构建糖尿病大鼠模型30只,随机分为糖尿病模型组、葛根素低剂量组和葛根素高剂量组,每组10只;另设一正常对照组(10只鼠)。造模成功后,葛根素低剂量组与葛根素高剂量组分别给予葛根素250mg·kg-1·d-1和500mg·kg-1·d-1,正常对照组与糖尿病模型组每日给予3mL灭菌生理盐水。均经食道灌胃给药,每日1次,连续4周。4周后测定各组鼠血清及视网膜中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxidant capability,T-AOC)的变化,免疫组织化学法检测视网膜组织8-羟-2’-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]活性,Western blot法检测p38MAPK蛋白表达。结果造模后4周,与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠血清与视网膜组织中SOD活性明显下降,分别为(83.20±5.51)U·mL-1、(122.96±10.98)U·mg-1;MDA含量显著增高,分别为(29.58±0.41)μmol·L-1、(8.87±0.49)μmol·g-1;视网膜中T-AOC含量明显下降,为(1.72±0.31)U·mg-1(均为P<0.05)。gn糖尿病模型组相比,葛根素低剂量组血清SOD活性升高,为(97.80±1.75)U·mL-1(P<0.05),但其他指标变化不大(均为P>0.05)。与糖尿病模型组相比,葛根素高剂量组血清与视网膜组织中SOD活性升高,分别为(114.17±4.02)U·mL-1、(146.48±8.04)U·mg-1;视网膜TAOC含量升高,为(2.12±0.37)U·mg-1;血清和视网膜MDA含量降低,分别为(20.73±1.51)μmol·L-1、(5.73±0.76)μmol·g-1(均为P<0.05)。正常对照组大鼠视网膜中8-OHdG、PARP阳性细胞极少,糖尿病模型组表达较正常对照组明显增加,葛根素干预后表达明显减弱,葛根素高剂量组作用更显著。Western blot结果显示:各组大鼠视网膜中总p38MAPK表达无明显差异(P>0.05),但糖尿病模型组视网膜p38MAPK的磷酸化程度较正常对照组显著增强,高剂量葛根素干预后p38MAPK的磷酸化程度明显下降(P<0.05)。结论糖尿病大鼠存在视网膜的氧化应激损伤,葛根素可减轻该损伤作用,其机制可能与p38MAPK信号途径有关。     

重组碱性成纤维细胞生长因子通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)的保护作用。方法　雄性SD大鼠40只，随机分成对照组、糖尿病组、rbFGF组、rbFGF+DAPT组(DAPT为Notch1通路的特异性拮抗剂)，每组10只。后三组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 诱导糖尿病模型。模型诱导成功后，rbFGF组给予rbFGF 10 μL(200 U)玻璃体内注射给药，rbFGF+DAPT组在给予rbFGF基础上加用DAPT(10 μmol·L^-1)。注射12周后，HE染色检测RGC密度，免疫组织化学染色检测神经元再生相关蛋白GAP-43、Notch1蛋白表达，Western blot检测GAP-43、Notch1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3相对表达量。结果　与对照组RGC密度(433.49±6.02)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(8.96±0.26)%、Notch1阳性率(45.04±0.46)%及Caspase-3 (27.91±0.63) %蛋白表达相比，糖尿病组RGC密度(328.35±6.43)mm^-2，Notch1荧光强度(31.66±0.40)%蛋白表达明显降低，GAP-43荧光强度(13.66±0.52)%、Caspase-3 (48.91±0.64)%蛋白表达明显增加(均为P<0.05)；而与糖尿病组相比，rbFGF组RGC密度(425.30±7.98)个·mm^-2，Notch1阳性率(41.76±0.62)% 及GAP-43荧光强度(33.05±0.37)%蛋白表达明显增加，Caspase-3 (28.86±0.71)%蛋白表达明显降低(均为P<0.05)；而rbFGF+DAPT组RGC密度(324.91±8.22)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(14.27±0.64)%、Notch1阳性率(30.40±0.82)%及Caspase-3 (47.63±0.68)%蛋白表达均无明显变化(均为P>0.05)。结论　rbFGF可上调糖尿病状态下视网膜GAP-43蛋白表达，下调Caspase-3蛋白表达，进而提高RGC的存活，其机制可能与激活Notch1信号通路有关。     

MK-801对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞的保护作用

目的：探讨MK-801对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞(retinal ganglial cells, RGC)的保护作用。 方法：制备SD大鼠慢性高眼压模型,36只SD大鼠随机分为空白对照组、慢性高眼压＋生理盐水对照组、慢性高眼压＋MK-801处理组,各组12 只。观察并比较各组大鼠在不同时间点（处理后1, 4, 7和10d）谷氨酸含量、视网膜总厚度和内层厚度、RGC数目及RGC凋亡情况。 结果：在各时间点,慢性高眼压大鼠（MK-801处理组和生理盐水对照组）视网膜谷氨酸含量均较空白对照组高（P<0.05）; MK-801处理组视网膜谷氨酸含量比同期生理盐水对照组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色表明MK-801处理组和空白对照组视网膜总厚度和内层厚度均大于生理盐水对照组（P＜0.05）,RGC数目高于生理盐水对照组（P＜0.05）。MK-801处理组RGC 层凋亡阳性细胞的表达少于生理盐水对照组。 结论：MK-801可通过阻断谷氨酸介导的神经毒性作用,对慢性高眼压RGC起到保护作用。     

依托咪酯对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞的保护作用

目的:观察依托咪酯(ET)对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞(RGC)存活的作用.方法:成年雌性SD大鼠42只,眶内距视神经根部1mm处切断左侧视神经,残端留置浸有荧光金(50g/L)的明胶海绵逆行标记RGC.术后大鼠随机分为ET(4mg/kg,ip,1次/d)治疗组、1,2-丙二醇(PG)溶剂对照组、生理盐水对照组和正常对照组.再根据术后不同存活时间将前3组动物分为7d和14d两个亚组,正常对照组动物则存活2d.于相应存活时间点处死动物,取出各组大鼠左侧视网膜平铺后计数存活RGC并得出RGC的平均密度.结果:术后7dET治疗组存活RGC平均密度为1 307±55/mm2,显著高于PG对照组(1 128±75/mm2)和生理盐水对照组(1 068±75/mm2,P＜0.001).然而,未能在术后14d观察到ET的这种保护作用,因为ET治疗组存活RGC平均密度(210±36/mm2)与PG对照组(215±20/mm2)和生理盐水对照(208±19/mm2)间无显著差异(P＞0.05).结论:ET在视神经切断后一定时期内对RGC具有神经保护作用.     

白藜芦醇对大鼠糖尿病性白内障抗氧化损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠抗氧化损伤的保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和白藜芦醇治疗组,每组各30只。模型组及白藜芦醇治疗组采用链脲佐菌素诱发糖尿病,白藜芦醇治疗组按400mg.kg-1体质量给予白藜芦醇灌胃,灌注后4周、8周、12周观察3组大鼠晶状体混浊度的变化情况;同时检测晶状体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathi-one peroxidase,GSH-PX)及过氧化氢酶(catalase,CAT)的变化;采用RT-PCR检测晶状体中铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn superoxide dismutase,CuZnSOD)mRNA表达水平。结果正常对照组大鼠晶状体始终透明。灌注后12周白藜芦醇治疗组晶状体混浊度高于正常对照组(χ2=8.26,P<0.05),但与糖尿病模型组相比明显减轻(χ2=14.72,P<0.05)。糖尿病模型组大鼠晶状体中SOD、GSH-PX以及CAT活性分别为:(10.39±1.25)U·mg-1、(24.36±1.05)U·mg-1、(1.62±0.24)U·mg-1,明显低于正常对照组的(40.16±1.87)U·mg-1、(67.86±1.24)U·mg-1、(5.57±1.54)U·mg-1。与糖尿病模型组相比,白藜芦醇能增强SOD、GSH-PX和CAT活性,分别为(29.06±1.33)U·mg-1、(47.58±2.35)U·mg-1、(3.26±0.47)U·mg-1。此外,白藜芦醇还能上调糖尿病大鼠晶状体内CuZnSODmRNA的表达(P<0.05)。结论白藜芦醇能增加晶状体抗氧化酶活力,能从多个环节发挥对糖尿病白内障的抗氧化作用,从而延缓白内障的发生和发展。     

洛美利嗪对糖尿病早期大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的： 探讨洛美利嗪(lomerizine,LOM)对糖尿病早期大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡的保护作用及其机制。

方法： SD大鼠随机分为对照组(CON)、糖尿病组(DM)及洛美利嗪组(LOM),每组40只大鼠。DM和LOM组链脲佐菌素(STZ)按60mg/kg一次性腹腔注射诱导糖尿病模型,CON组给予等量无菌柠檬酸钠溶液腹腔注射。LOM组于糖尿病鼠模型成模后,每日予LOM 60mg/kg灌胃,CON组和DM组采用等量生理盐水灌胃。于第4,8,12wk分别行HE、透射电镜、TUNEL检测RGCs的凋亡情况,同时采用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子的浓度。

结果：(1)形态学观察：随病程延长,逐渐出现RGCs数量减少、细胞排列紊乱的病理改变。透射电镜下可见DM组RGCs出现不同阶段的凋亡征象,且随病程延长逐渐加重。LOM组与同期DM组对比,在第8,12wk时RGCs凋亡征象减弱。(2)TUNEL检测：CON组大鼠视网膜神经节细胞层未见凋亡细胞。DM组4wk时视网膜神经节细胞层偶见TUNEL 阳性细胞,并随病程延长逐渐增多,凋亡指数与同期CON组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。LOM 组8,12wk时,与同期DM组比较,染色阳性的RGCs明显减少,凋亡指数明显下降,差异显著(P<0.01)。(3)激光共聚焦显微镜钙离子浓度检测：DM组与同期CON组比较：DM组8,12wk 的RGCs内钙离子荧光染色强度明显升高,有显著差异(P<0.01)。LOM组与同期DM组比较：LOM 组8,12wk的RGCs内钙离子荧光染色强度明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。

结论：LOM对糖尿病大鼠早期RGCs的凋亡具有保护作用。     

糖皮质激素对糖尿病大鼠视网膜神经元再生的影响

目的：探讨糖皮质激素对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经元的损伤作用。

方法：选取清洁级雄性SD大鼠,腹腔注射链脲佐菌素建立DM模型,利用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)配置RU486溶液。DM模型建立成功后,腹腔注射糖皮质激素受体拮抗剂RU486为RU486治疗组,腹腔注射DMSO为糖尿病组。正常大鼠腹腔注射DMSO为对照组。3mo后,检测大鼠体质量、血糖、血清糖皮质激素(glucocorticoid,GC)浓度,HE染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)密度,利用Western blot和免疫荧光结合光密度值分析的方法,对神经元轴突再生标志物生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)及突触数量标志物突触素(synaptophysin,SYN)的表达进行半定量分析。

结果：与对照组相比,糖尿病组大鼠血糖明显升高,体质量明显下降,血清GC浓度明显升高,RGC密度明显降低,视网膜GAP-43表达增强,SYN表达明显减弱(均P<0.01); 与糖尿病组相比,RU486组RGC密度明显增加,视网膜GAP-43和SYN表达明显增强(均P<0.01)。

结论：拮抗GC的作用可能促进了糖尿病大鼠视网膜神经元轴突再生,增加了突触数量,恢复了视网膜RGC密度,结果提示GC长期升高可能参与了糖尿病视网膜病变的发生发展。     

KLF7对TLR4/NLRP3炎症小体激活的抑制作用及其对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响北大核心

目的探讨Krüppel样因子7(KLF7)通过抑制Toll样受体4/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TLR4/NLRP3)炎症小体的激活对视网膜缺血-再灌注(RIR)损伤大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响。方法将60只大鼠随机分为对照组、RIR组和KLF7组,每组20只。RIR组和KLF7组建立RIR模型,KLF7组大鼠腹腔注射2μL AAV2-KLF7腺病毒,对照组和RIR组大鼠注射100μL PBS。HE染色观察大鼠视网膜形态变化,显微镜下测量神经节细胞层(GCL)厚度和GCL中RGC数量,Western blot检测大鼠视网膜组织中KLF7、TLR4、髓样分化因子初次应答基因88(MYD88)、NLRP3、肿瘤坏死因子受体相关分子6(TRAF6)蛋白表达水平,TUNEL检测RGC凋亡,ELISA法检测大鼠视网膜组织中白细胞介素(IL)-18和IL-1β表达水平。结果对照组大鼠的视网膜内界膜平滑完整。RIR组大鼠内核层、外核层细胞排列明显疏松、紊乱,RGC数量减少。KLF7组大鼠RGC数量较RIR组减少,视网膜较前变薄,但视网膜损伤程度较RIR组明显减轻。与对照组相比,RIR组和KLF7组大鼠GCL厚度及GCL中RGC数量均降低,TUNEL阳性RGC占比升高,KLF7、TLR4、MYD88、NLRP3、TRAF6蛋白相对表达水平以及IL-18、IL-1β表达水平均升高(均为P<0.05);与RIR组相比,KLF7组大鼠GCL厚度及GCL中RGC数量均升高,TUNEL阳性RGC占比降低,KLF7、TLR4、MYD88、NLRP3、TRAF6蛋白相对表达水平以及IL-18、IL-1β表达水平均降低(均为P<0.05)。结论KLF7具有减轻RIR损伤的作用,KLF7可能通过抑制TLR4/NLRP3炎症小体的激活来减轻RIR的损伤。