五味子乙素对BaP致HTR8-SVneo细胞损伤的保护作用及机制

目的：研究五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）预防苯并芘（BaP）致人绒毛膜外滋养层细胞（HTR8-SVneo）损伤的作用机制。方法：通过新型四唑化合物（MTS）法观察和测定,最终选取0.5,1,2 μmol/L Sch B分别作用HTR8-SVneo细胞24 h后再给予20 μmol/L Bap染毒处理24 h,MTS检测各组细胞生长情况;JC-1荧光染色法观察各组线粒体膜电位荧光强度变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞内促凋亡蛋白（Bax）、细胞色素C（cytochromec,cyt-c）蛋白浓度;蛋白质印迹法（Western blotting）检测各组的凋亡蛋白（Caspase-9）。结果：①BaP染毒组OD值为1.187±0.015,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后的OD值分别为1.483±0.022、1.489±0.048和1.531±0.240,差异有统计学意义（P＜0.05）。②BaP染毒组线粒体荧光强度弱,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后的荧光强度较强,差异有统计学意义（P＜0.05）。③BaP染毒组Bax、cyt-c蛋白浓度升高,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内Bax、cyt-c蛋白浓度降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。④BaP染毒组细胞内caspase-9蛋白表达升高,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内caspase-9蛋白表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Sch B可以预防BaP致HTR8-SVneo细胞损伤,其作用机制可能与抗线粒体途径有关。     

五味子乙素降低苯并芘对HTR-8/SVneo细胞毒性作用的体外研究

目的：探索苯并芘[Benzo（a）pyrene,BaP]是否对人早孕胎盘绒毛膜外滋养层细胞HTR-8/SVneo具有毒性作用以及五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）是否可以降低BaP的毒性作用。方法：以HTR-8/SVneo细胞为载体,构建BaP对HTR-8/SVneo细胞的染毒模型和Sch B对HTR-8/SVneo细胞的保护模型,利用MTS细胞增殖实验检测不同浓度的BaP单独给药和Sch B联合BaP给药对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响。结果：0.01,0.1 μmol/L浓度的BaP并不抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖（P＞0.05）,而1,10,100 μmol/L浓度的BaP对HTR-8/SVneo细胞的增殖有抑制作用（P＜0.05）且随着其作用时间（6,12,24,36和48 h）的延长而增大,但作用24 h后其抑制作用趋于平衡,通过绘制HTR-8/SVneo细胞的生长曲线发现,20 μmol/L的BaP对HTR-8/SVneo细胞作用24 h后的抑制作用最佳,其抑制率达到24.95%;0.01,0.1,1 μmol/L浓度的Sch B并未抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖（P＞0.05）,高于10 μmol/L的Sch B抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖（P＜0.05）。0.25,0.5,1,2 μmol/L的Sch B可以降低BaP的毒性作用且对HTR-8/SVneo细胞没有毒性作用,且其保护作用随着浓度增加而增大（P＜0.05）,其中2 μmol/L的Sch B对HTR-8/SVneo细胞的保护作用最强,保护率达到17.84%。结论：BaP对HTR-8/SVneo细胞具有毒性作用,而一定浓度范围内的Sch B可以有效地降低BaP的这种毒性作用。     

五味子乙素对BaP致HTR-8/SVneo侵袭力损伤的保护

目的：以人绒毛膜外滋养层细胞（human trophoblast HTR-8/SVneo,简称HTR）细胞株为研究载体,研究五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）对苯并芘（benzo[a]pyrene,BaP）致HTR细胞侵袭力损伤的影响。方法：实验分为对照组、BaP染毒组、不同浓度Sch B（0.5,1,2 μmol/L）干预染毒组,通过新型四唑化合物（MTS）法检测细胞增殖情况,明确BaP染毒及Sch B干预剂量;通过Transwell侵袭实验检测BaP染毒后以及Sch B干预后细胞侵袭力的改变。结果：①MTS检测细胞增殖情况：与对照组相比,20 μmol/L浓度BaP作用后细胞增殖明显下降（P＜0.01）,不同浓度Sch B（0.5,1,2 μmol/L）干预后细胞增殖情况优于BaP染毒组（P＜0.05）。②Transwell细胞侵袭实验：与对照组相比,BaP染毒组细胞侵袭力明显下降（P＜0.01）,不同浓度Sch B干预组细胞侵袭力也呈下降趋势（P＜0.05）;与BaP染毒组相比,Sch B干预组细胞侵袭力明显提升（P＜0.05）。结论：一定浓度的BaP会对HTR的细胞增殖及侵袭力造成损伤,Sch B可以预防BaP对HTR细胞增殖造成的损伤,同时提高细胞侵袭力。     

表没食子酸酯诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的：探讨表没食子酸酯（EGCG）对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：SKOV3细胞分为4组,即阴性对照组（以正常培养液培养）、EGCG低浓度组（1 μmol/L EGCG）、EGCG中浓度组（10 μmol/L EGCG）和EGCG高浓度组（100 μmol/L EGCG）。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率,Hoechs染色观察细胞核凋亡,电镜观查细胞形态,蛋白质印迹（Western blot）检测Caspase-3表达。结果：细胞增殖抑制实验结果显示,EGCG低、中、高浓度组SKOV3细胞的增殖率为（81.33±3.71）%、（67.00±7.21）%和（54.67±3.84）%,与阴性对照组（101.00±3.06）%比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。Hoechst33258染色结果显示,EGCG低、中、高浓度组凋亡细胞比例分别为（16.77±2.48）%、（24.33±3.70）%和（39.67±4.11）%,与阴性对照组[（2.00±1.45）%]相比差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。电镜观察结果显示,随着EGCG作用浓度的增加,SKOV3细胞超微结构损害程度逐渐明显。此外,EGCG可以升高Caspase-3表达水平。结论：EGCG通过增强Caspase-3表达诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax表达的影响.方法 用浓度为0、25、50、100 μmol/L的DEHP作用于原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞24 h,逆转录(RT)PCR法检测滋养细胞凋亡相关基因Bcl-2和bax的mRNA表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2和bax的蛋白表达水平;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法和双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡情况.结果 (1)Bcl-2表达水平:当DEHP浓度为0、25、50、100 μmol/L时,Bcl-2 mRNA表达水平分别为1.00±0.05、1.03±0.04、1.04±0.03、1.04±±0.04,分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05);Bcl-2蛋白表达水平分别为0.11±0.02、0.11±0.04、0.12±0.02、0.12±0.03,分别比较,差异也无统计学意义(P>0.05).(2)bax表达水平:当DEHP浓度为50、100 μmol/L时,bax mRNA表达水平分别为0.96±0.04、1.02±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.81±0.05)比较,差异有统计学意义(P<0.05),bax蛋白表达水平分别为0.63±0.04、0.81±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.23±0.05)比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(3)细胞凋亡率:浓度为50、100 μmol/L的DEHP作用24 h后,双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡率分别为(18.8±2.6)%和(20.3±2.0)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(10.6±1.4)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法检测细胞滋养细胞凋亡率为(18.1±4.6)%和(19.5±1.2)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(11.2±3.1)%]比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 DEHP可通过增加细胞凋亡相关基因bax的表达,促进细胞滋养细胞凋亡,但对Bcl-2的表达无明显影响.     

NQO1基因在五味子乙素降低苯并（a）芘对HTR-8/SVneo细胞毒性中的作用研究

目的：探索醌氧化还原酶1[NAＤ（Ｐ）Ｈ：ｑuinine oxidoreductase1,NQO1]基因在五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）降低苯并（ａ）芘[Benzｏ（ａ）ｐｙrene,BaP]对人早孕胎盘绒毛膜外滋养层细胞（human trophoblast HTR-8/SVneo,HTR-8/SVneo）毒性中的作用。方法：在前期实验的基础上,以HTR-8/SVneo细胞为载体,利用基因转染技术、MTS细胞增殖实验、实时聚合酶链反应（real-time PCR）等方法从细胞层面分析NQO1基因干扰后Sch B细胞保护率的变化以及NQO1基因干扰前后各组NQO1 mRNA的表达量变化。结果：在细胞层面上,NQO1基因干扰后,20 μmol/L的BaP对HTR-8/SVneo细胞增殖的抑制作用增强,抑制率达到30.48%;0.50、1.00、2.00 μmol/L的Sch B仍然降低了BaP的毒性作用,但其细胞保护率均明显下降,细胞保护率分别为4.68%、9.56%、14.85%;同时,在基因表达层面上,NQO1基因干扰后Sch B激活NQO1的能力明显下降,其中0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、5.00 μmol/L的Sch B作用后NQO1 mRNA的表达量从NQO1基因干扰前是对照组的1.36、1.40、1.46、1.79、2.30、2.91、1.42倍,分别降至1.22、1.24、1.30、1.53、1.71、2.01、1.29倍。结论：NQO1基因的激活在Sch B降低BaP对HTR-8/SVneo细胞毒性作用中起到重要作用。     

小分子细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol联合泰素治疗卵巢癌的实验研究

目的:检测flavopiridol联合泰素对人卵巢癌细胞系SKOV3、裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型的治疗作用。方法:应用CCK-8法、流式细胞术和原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测flavopiridol和泰素作用后卵巢癌细胞系SKOV3的细胞存活率和凋亡率;应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测作用前后细胞中cyclinD1的表达:应用ELISA法检测细胞中活性caspase-3的表达。建立裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol和泰素治疗前后裸鼠肿瘤体积的变化并计算抑瘤率,用TUNEL和免疫组化法分别检测作用前后肿瘤组织中的凋亡情况和微血管密度(MVD)值。结果:flavopiri-dol(300nmol/L)或泰素(1μmol/L)单独应用24h均能显著降低细胞存活率,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,并下调细胞中cyclinD1的表达。Taxol先作用24h再用flavopiridol作用24h的联合用药对二者的上述作用产生显著的协同效应:联合用药后细胞存活率为(5.2±0.8)%,凋亡率为(51.10±2.52)%,caspase-3活性相对值为0.602±0.008,cy-clinD1相对表达水平为0.264±0.076。Flavopiridol和泰素单独应用均能显著抑制皮下移植瘤生长(抑瘤率分别为84.5%和85.7%),并降低肿瘤组织MVD值(分别为12.4±4.7vs 35.2±10.3和15.2±2.9 vs 35.2±10.3)。二者联合应用抑瘤作用稍差(抑瘤率68.9%),抑制MVD作用(23.0±5.1 vs 35.2±10.3)也不及单药治疗。结论:Flavopiridol和泰素均能通过致凋亡作用显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤生长,二者联合应用对体外培养的卵巢癌细胞具有协同杀伤作用,但体内治疗中无协同抑瘤作用。     

山奈酚对子宫肌瘤体外抑制作用的实验研究

目的:研究山奈酚对离体人子宫肌瘤细胞增殖的影响,为其用于子宫肌瘤的临床药物治疗进行前期的摸索。方法:进行人子宫肌瘤细胞原代、传代培养及鉴定。取用第3~5代子宫肌瘤细胞,3个浓度的山奈酚(12μmol/L、24μmol/L、48μmol/L)干预24小时、48小时、72小时,并设溶剂对照组(无水乙醇,体积比为0.1%)。采用CKK-8法检测子宫肌瘤细胞的增殖变化;并通过荧光定量RT-PCR法和Western-blot法检测雌激素受体(ER)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达。结果:不同时间和浓度组间的A450值比较,差有统计学意义(P0.05),山奈酚对子宫肌瘤有一定抑制增殖作用。山奈酚可抑制ER mRNA、IGF-1 mRNA表达,且该作用随山奈酚浓度增加而有所增强(P0.05)。山奈酚可抑制VEGF mRNA,该作用与山奈酚浓度无明显关系(P0.05)。山奈酚可抑制ER、VEGF、IGF-1蛋白的表达,且该作用随山奈酚浓度增加而有所增强(P0.05)。结论:山奈酚能抑制离体人子宫肌瘤细胞增殖,下调ER、IGF-1和VEGF mRNA和蛋白的表达。     

三氯生对人绒毛膜滋养层细胞HTR8-SVneo功能影响的研究

目的探讨三氯生(triclosan,TCS)对人绒毛膜滋养层细胞增殖、凋亡和迁移以及主要细胞因子表达等细胞生理现象的影响。方法 2019年1月至9月于南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心体外培养人绒毛膜滋养层细胞系HTR8-SVneo,用不同浓度的TCS(0、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)、10~(-4)mol/L)处理。CCK-8实验检测细胞增殖活性;Annexin-V/7-AAD双染色检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子-2(IGF-2)、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP2)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP3)的表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)对E-cadherin和Ncadherin表达水平进行检测。结果经10~(-4)mol/L TCS处理后,HTR8-SVneo细胞增殖活性下降(0.95±0.04 vs.1.29±0.04,P0.001),早期、晚期凋亡细胞比例升高[(21.3±0.6)%、(28.7±0.7)%vs.(1.3±0.2)%、(2.3±0.2)%,P0.001],细胞迁移能力下降(17.0±4.4 vs. 90.0±2.1,P0.001),IGF-1、IGF-2、IGFBP2和IGFBP3[(70.5±15.1)μg/L vs.(146.4±8.6)μg/L、(304.3±34.5)μg/L vs.(488.5±19.6)μg/L、(6.5±1.3)μg/L vs.(11.1±1.2)μg/L、(20.4±0.9)μg/L vs.(34.6±2.5)μg/L,P0.001]表达水平下降,HTR8-SVneo细胞E-cadherin表达上调50%以上,而N-cadherin表达降低近50%(P0.001)。结论 TCS可以抑制HTR8-SVneo细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,并影响IGF-1、IGF-2、IGFBP2和IGFBP3细胞因子的分泌和细胞上皮-间质转化。     

紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞作用的实验研究

目的探讨注射用紫杉醇脂质体对人宫颈癌细胞系的杀伤作用。方法以0．01μmol／L、0．1μmol／L、1μmol／L、10μmol／L和100μmol／L浓度梯度的含注射用紫杉醇脂质体培养基作用于人宫颈癌细胞系HeLa细胞，并设对照（普通培养基，不含药物），通过MTT、显微镜观察细胞形态、流式细胞分析技术检测该药对细胞生长的影响；以Western blot分析细胞外信号调节激酶（ERK）、磷酸化细胞外信号调节激酶（P—ERK）蛋白表达情况。结果经上述不同浓度紫杉醇脂质体作用48h后，细胞存活率下降；镜下观察显示部分细胞皱缩变形，崩解坏死，细胞脱壁悬浮；流式细胞结果显示细胞凋亡率逐渐增加，分别为（14．16±4．78）％、（43．68±16．21）％、（63．70±3．74）％、（63．51±2．29）％、（72．84±10．77）％和（74．69±7．52）％；细胞周期各时相中，S期比例减少；Western blot显示HeLa细胞的P—ERK蛋白表达逐渐减弱（0．7645±0．0198、0．7592±0．0072、0．2655±0．0356、0．3232±0．0229、0．1467±0．0091）。结论紫杉醇脂体可抑制宫颈癌HeLa细胞的生长，对HeLa细胞的作用可能通过抑制MAPK信号转导通路达到抑制肿瘤的目的。     

NS-398对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制及诱导凋亡作用的研究

目的研究环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398在宫颈癌治疗中的可能性。方法用不同浓度NS-398作用于人宫颈癌HeLa细胞,CCK-8法检测NS-398对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪PI染色法检测细胞周期改变;AnnexinⅤ-FITC/PI双标法检测细胞早期凋亡。结果 NS-398对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用。其抑制率随着药物浓度的增高而增加,随着药物作用时间的延长而显著增高。与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显减少,而S期细胞明显增多,两组比较,差异有统计学意义(P0.05);NS-398作用24h后,在10μmol/L组的HeLa细胞凋亡率为5.60%;20μmol/L组凋亡率为12.89%,而40μmol/L组的凋亡率高达27.03%,对照组HeLa细胞无凋亡。结论 NS-398对宫颈癌细胞具有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。其对宫颈癌细胞的作用可能与诱导癌细胞凋亡有关。     

补肾益气方激活哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)通路影响人早孕细胞滋养层细胞生长

目的:研究补肾益气方对人早孕细胞滋养层细胞增殖和早期凋亡的影响及其可能的信号转导通路。方法:体外分离培养人早孕细胞滋养层细胞,并添加不同浓度的喂服3d补肾益气方中药的大鼠血清,培养48h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖活力,流式细胞术检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达、Annexin Ⅴ FITC/PI双染色法检测细胞早期凋亡。结果:与体积分数20%对照血清组(B2组)比较,体积分数10%(A1组)及20%(A2组)补肾益气方含药血清作用48h,上调细胞滋养层细胞增殖活力、促进PCNA表达、降低凋亡细胞百分率(P<0.05),上述指标均呈剂量-效应关系。哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)通路的特异性抑制剂雷帕霉素抑制20%含药血清诱导的细胞增殖活力及PCNA蛋白表达,增加凋亡细胞百分率。结论:补肾益气方对人早孕细胞滋养层细胞的生长具有促进作用,mTOR信号通路可能是中药促进细胞滋养层细胞增殖、减少细胞凋亡的主要信号转导通路之一。     

Relaxin has anti-apoptotic effects on human trophoblast-derived HTR-8/SV neo cells

Abstract

The study was conducted to evaluate the effects of human relaxin on apoptosis in the human trophoblast derived HTR-8/SV neo cell line, which is a possible model of human extravillous trophoblasts (EVTs). HTR-8/SV neo cells, cultured in phenol red free RPMI1640 medium, were treated with different doses of human recombinant (rH2) relaxin in serum-deprived conditions. RT-PCR was used for evaluating relaxin receptor: RXFP1 and RXFP2 expression in HTR-8/SV neo cells. The cell death was examined by TUNEL assay. Furthermore, we investigated caspase-3, cleaved PARP and Bcl-2 expressions by Western blot analysis to recognize the translational effects of anti-apoptotic and pro-apoptotic proteins. RXFP1 and RXFP2 mRNA expression was observed in HTR-8/SV neo cells. Compared with untreated control cultures, treatment with rH2 relaxin, decreased TUNEL-positive rate in HTR-8/SV neo cells was observed. Western blot analysis revealed that treatment with rH2 relaxin decreased the expression of caspase-3 and cleaved PARP, but in contrast increased Bcl-2 expression in those cells. These results suggest that rH2 relaxin has anti-apoptotic effects on HTR8/SV neo cells by decreasing pro-apoptotic caspase-3 and cleaved PARP expression and up-regulating anti-apoptotic Bcl-2 expression.     

5-羟色胺对人胎盘滋养细胞钙通道的影响

目的探讨5-羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响。方法将体外培养的胎盘滋养细胞分成3组,低深度5-羟色胺组(5-TH,1μmol/L)、高浓度5-TH组(10μmol/L)和对照组。采用全细胞膜片钳方法,在胎盘滋养细胞外液中分别加入L-型钙通道阻滞剂、T-型钙通道阻滞剂、钠通道阻滞剂及5-TH,检测其电流值。结果在-60～-50mV电压时,胎盘滋养细胞L-型钙通道开放,-40～-30mV时,其最大峰值电流为(82.31±6.46)皮安(pA)。加入尼莫地平(Nimodpine)可阻断大部分电流。氟桂利嗪(Flunari-zne)和替曲朵辛(TTX)不能抑制该电流成分。加入1μmol/L和10μmol/L5-TH,其峰值电流分别为(104.77±10.84)pA和(117.16±9.67)pA,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);加入5-TH(1μmol/L)和Nimodpine、5-TH(10μmol/L)和Nimodpine后,峰值电流分别为(85.35±6.54)pA和(89.42±7.62)pA,与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论5-TH可激活胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加。     

Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞功能的影响

目的:研究Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:利用蛋白质印迹法检测Netrin-1在HeLa细胞的表达,并通过MTT、侵袭实验和流式细胞仪分别检测10,50和100ng/mlNetrin-1对HeLa细胞增殖能力、侵袭能力和凋亡的影响。结果:(1)Netrin-1在HeLa细胞有表达,其相对表达量为0.389±0.026;(2)MTT实验结果显示,Netrin-1可以促进HeLa细胞增值,表现为时间和剂量依赖性,与对照组有显著差异(P<0.05或P≤0.01);(3)Netrin-1处理组细胞迁移数分别为314±16,487±15和553±19,均明显多于对照组180±10(P均<0.05);(4)在Netrin-1干预下,HeLa细胞凋亡率呈递减趋势,与对照组比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论:HeLa细胞表达的Netrin-1与宫颈癌的侵袭转移有关,Netrin-1促进HeLa细胞增殖和侵袭能力,并抑制HeLa细胞凋亡,可能为未来宫颈癌的治疗提供依据。