BV6诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡定量蛋白组学研究

目的：通过定量蛋白组学技术探讨Smac类似物BV6影响人卵巢癌SKOV3细胞生长的可能机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各浓度梯度BV6干预SKOV3细胞48 h后的生长抑制率,计算抑制率为50%时的药物浓度为半数抑制浓度（IC50）,以0.05、0.1、0.2 μmol/L BV6进行后续实验;光镜下观察对照组与0.05 μmol/L BV6处理组48 h后的细胞形态变化,应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术结合液相串联质谱策略筛选差异蛋白并行生物信息分析;蛋白质印迹（Western blotting）检测对照组、不同浓度BV6处理组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表达。结果：BV6可以抑制SKOV3细胞的生长增殖,且呈剂量依赖性,多组间方差分析及任意组间两两比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。按公式计算BV6作用于SKOV3细胞48 h的IC50为0.40 μmol/L。基于发现错误率（FDR）＜1%,对照组与0.05 μmol/L BV6处理48 h组筛选到349个差异蛋白,其中251个蛋白表达上调、98个蛋白表达下调,经生物信息学分析显示差异蛋白与RNA转录、蛋白质翻译、细胞分裂增殖、凋亡信号调节及肿瘤血管生成密切相关。Western blotting结果显示高、中、低浓度BV6干预SKOV3细胞48 h后与对照组相比,Caspase-3蛋白表达增加,其中高BV6组的Caspase-3蛋白表达最高,组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论：BV6通过抑制RNA转录、蛋白质翻译进程、细胞分裂增殖及肿瘤血管生成,促进Caspase-3凋亡信号活化介导SKOV3细胞死亡。     

3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对顺铂(DDP)诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,用PI3K/Akt通路抑制剂3-MA预处理SKOV3细胞3h,再用DDP作用48h,经Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测凋亡率,TUNEL法检测凋亡指数(AI),Western blot检测凋亡蛋白caspase3,caspase9的表达。结果:3-MA预处理后,DDP诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡率为(37.04±7.15)%,凋亡指数为58.0±5.20,而单用DDP组凋亡率为(10.46±0.65)%,凋亡指数为26.0±3.46。3-MA预处理后,DDP诱导的SKOV3细胞凋亡率和凋亡指数均较单用DDP组明显提高(P<0.05)。caspase3,caspase9蛋白的表达也明显增强。结论:3-MA可上调caspase3,caspase9蛋白的表达,通过内源性途经增强DDP促卵巢癌细胞SKOV3的凋亡活性。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡和自噬的作用机制

目的:观察MG132对卵巢癌SKOV3细胞株生长的影响,以及自噬、凋亡相关因子的表达,初步探讨MG132抑制卵巢癌细胞生长的作用机制。方法:以0.5,1.5,2.5,3.5μg/mL浓度MG132作用于SKOV3细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫组织化学(IHC)、蛋白质印迹(Western blotting)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测自噬Beclin1因子、凋亡Caspase-3因子的表达。结果:MG132作用SKOV3细胞后细胞生长受到抑制;MG132的作用随细胞浓度和时间逐渐增加,细胞凋亡率逐渐增加;IHC检测发现Beclin1、Caspase-3阳性表达;Western blotting检测发现Beclin1、Caspase-3、Bim、Bax蛋白表达增加,与MG132浓度的增加呈正相关,Bcl-2蛋白表达减少,与MG132浓度的增加呈负相关;MG132组Caspase-3和Beclin1的mRNA表达量均高于对照组(P0.05)。结论:蛋白酶体抑制剂MG132对卵巢癌SKOV3细胞生长有抑制作用,呈浓度和时间依赖性,其抑制作用与凋亡和自噬有关。     

维生素E琥珀酸酯诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)对人卵巢腺癌细胞系SKOV3的生物学效应及机制.方法依培养基中有无加VES,将培养的SKOV3细胞分为对照组和实验组,通过MTT比色法检测VES对该细胞系杀伤率的影响;通过光学显微镜、透射电镜观察及流式细胞仪分析检测凋亡;利用caspase-3荧光检测探讨VES作用、SKOV3细胞的作用机制.结果VES处理SKOV3细胞后,细胞存活率明显降低,光镜下见明显形态学改变,电镜下见各个时期的凋亡细胞,流式细胞仪测定发现典型的凋亡峰,活性caspase-3荧光强度增加.结论VES能诱导卵巢腺癌SKOV3凋亡并可能通过激活caspase家族实现.     

丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的:观察中药丹参有效提取成分之一丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖和凋亡的诱导作用,及对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其可能的抗肿瘤作用机制.方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分组,实验组给予不同浓度Tan ⅡA处理细胞,倒置显微镜及四甲基...     

丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的：观察中药丹参有效提取成分之一丹参酮ⅡA（TanⅡA）对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖和凋亡的诱导作用,及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分组,实验组给予不同浓度TanⅡA处理细胞,倒置显微镜及四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法观察实验组与对照组细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测凋亡率及细胞周期变化;免疫荧光细胞化学法检测细胞MMP-2、VEGF蛋白表达改变;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测MMP-2、VEGFmRNA表达水平。结果：TanⅡA对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖具有抑制作用,呈时间-剂量依赖性;实验组较对照组G0/G1期细胞数量增多,而S期细胞数量减少;MMP-2、VEGF蛋白表达及基因表达明显下调,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：TanⅡA对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用;TanⅡA可下调细胞MMP-2、VEGF的表达,这可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3分子的构建及其致卵巢上皮性癌细胞凋亡的实验研究

目的 构建能自我激活的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3分子,并探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的致凋亡作用.方法利用基因重组技术构建活性caspase-3分子--rev-caspase-3及其重组腺病毒--Ad-rev-casp3;应用免疫组化方法、细胞计数试剂盒8、流式细胞仪和蛋白印迹法分别检测rev-caspase-3作用后卵巢癌细胞系AO细胞中活性caspae-3蛋白的表达情况、细胞存活率、凋亡率、细胞周期、caspase-3活性亚单位p17和聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶(PARP)的分解产物p85的表达水平,应用透射电镜观察rev-caspase-3作用后细胞的超微结构,实时PCR技术检测细胞中凋亡相关基因的表达情况;建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型,观测rev-caspase-3作用后裸鼠生存情况及肿瘤体积的变化.结果 Ad-rev-casp3作用后的AO细胞中显著表达活性caspase-3蛋白,细胞质明显棕染;细胞中活性caspase-3亚单位p17和PARP裂解片段p85的表达水平升高.Ad-rev-casp3以感染复数(MOI)为70作用后的AO细胞存活率为30.3%,凋亡率为40.2%.Ad-rev-casp3以MOI=10作用后的细胞凋亡率只为3.4%,但此时S期细胞比例高达56.5%,G1期比例下降至9.8%,与未感染Ad-rev-casp3(MOI=0)的AO细胞的S期和G1期比例显著不同(P均＜0.05).Ad-rev-casp3作用后的AO细胞呈现显著的凋亡形态改变,电镜下见明显的凋亡小体形成;细胞中活性caspase-3基因的表达水平显著升高,为9.44.Ad-rev-casp3能显著延长荷瘤裸鼠的生存期,平均生存时间为(213±16)d,并显著抑制移植瘤的生长,在第1次注射后53 d时抑瘤率为70%.结论 表达rev-caspase-3的重组腺病毒载体对卵巢癌细胞有强烈的致凋亡作用,并可显著延长荷瘤裸鼠的生存期,抑制肿瘤生长.     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞系SKOV3凋亡的实验研究

目的:探讨三氧化二砷对体外培养的SKOV3细胞的生物学效应和作用机制。方法:用MTT法、流式细胞术、电镜检测体外培养的SKOV3细胞在三氧化二砷作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测P53/Bcl-2/Bax的mRNA水平。结果:(1)三氧化二砷对SKOV3细胞的增殖抑制作用随浓度升高和作用时间延长而明显增强,其72hIC50约6μmol/L;(2)流式细胞术证实6μmol/L三氧化二砷作用24h能使SKOV3出现G2M阻滞,作用72h诱导细胞凋亡达高峰,凋亡率为18.60％,作用96h则趋向坏死;6μmol/L三氧化二砷作用72h用电镜术也检测到凋亡细胞存在。(3)RT-PCR法显示SKOV3细胞在6μmol/L三氧化二砷作用2h、6h、24h、48h均显示Bax上调和Bcl-2的下调,其中Bax的上调以2h最显著。而Bcl-2的表达则随作用时间延长而逐渐下降,P53则未检测到表达。结论:在体外三氧化二砷能抑制SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡,72h IC50约为6μmol/L。其诱导凋亡机制可能与Bax的上调和Bcl-2的下调相关。     

针灸大鼠血清诱导人卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡及相关因子的研究

目的:观察针灸大鼠血清对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖和凋亡及相关因子Fas的影响。方法:针灸剌激Wister大鼠双侧足三里、三阴交穴,每日2次,连续6天,取大鼠"针灸血清"分别作用于SKOV3细胞,MTT法检测细胞的生长,48h后流式细胞术检测细胞凋亡率及Fas表达率。结果:Fas表达率明显增高,SKOV3细胞生长受到明显抑制,作用48h后的对照组、艾灸组和电针组细胞凋亡率分别为1.17%、9.36%和5.12%。结论:针灸血清可能通过增加Fas的表达诱导SKOV3细胞凋亡。     

阿司匹林对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响以及对凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的作用。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析阿司匹林对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用,用流式细胞术分析方法定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的表达。结果:阿司匹林对SK-OV3细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈量效和时效的关系;1、5、10mmol/L3个浓度的阿司匹林处理细胞48h后,细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,而且G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高,细胞被阻滞在G2/M期,细胞周期也发生明显改变;阿司匹林可抑制卵巢癌细胞的bcl-2mRNA表达,而上调bax mRNA的表达。结论:阿司匹林能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡。此作用可能与阿司匹林抑制细胞bcl-2mRNA的表达和上调bax mRNA表达有关。     

Fn14活化凋亡增强人上皮性卵巢癌细胞顺铂敏感度的研究

目的：探讨成纤维细胞生长诱导因子14（Fn14）对人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞的顺铂（DDP）敏感度的影响及其可能机制。方法：蛋白质印迹（Western blotting）法检测EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中Fn14蛋白的表达情况,选择低表达Fn14蛋白的细胞株转染Fn14过表达质粒后,观察转染后细胞株的Fn14蛋白、凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达情况。CCK-8法检测细胞增殖能力及DDP半数抑制浓度（IC50）。流式细胞学检测细胞凋亡。结果：人EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中,A2780/DDP细胞株Fn14蛋白表达水平最低。Fn14过表达质粒转染A2780/DDP细胞后,细胞内Fn14表达水平上调（P＜0.05）;细胞的增殖能力无变化,但细胞DDP的IC50显著降低（P＜0.05）。流式细胞学检测结果进一步显示Fn14可以增加DDP诱导的A2780/DDP凋亡细胞数目。同时,Western blotting结果显示促凋亡蛋白caspase-3表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降（P＜0.05）。结论：Fn14可能活化凋亡通路进而提高A2780/DDP细胞对DDP的敏感度。     

卵巢癌细胞凋亡及相关基因的检测

探讨Ｂｃｌ－２、ｐ５３、Ｆａｓ基因与卵巢癌细胞凋亡的关系。方法４４例卵巢癌术后石蜡包埋组织切片后,应用原位末端标记法及免疫组化法进行相关检测。结论Ｂｃｌ－２、ｐ５３、Ｆａｓ基因可能过调控细胞凋亡而参与卵巢癌的发生与发展。     

甲状腺素转运蛋白对卵巢癌细胞株的影响及机制研究

目的:探讨甲状腺素转运蛋白(transthyretin,TTR)对卵巢癌细胞株SKOV-3及OVCAR-3迁移和侵袭的影响及其机制.方法:用Lipofectamine 2000搭载转染TTR小干扰RNA(siRNA)或non-target siRNA(对照组)入细胞,采用划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检...     

S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究

目的：探究鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体（S1P/S1PR）对人卵巢癌SKOV3细胞促血管生成作用的影响和机制。方法：管腔形成实验探究S1P对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的影响;实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测S1P处理后的人卵巢癌SKOV3细胞中血管生成因子白细胞介素8（IL-8）、IL-6、血管内皮生长因子（VEGF）的变化情况;设计合成小干扰RNA（siRNA）干扰序列基因沉默SKOV3细胞中S1PR1、S1PR2和S1PR3的表达,蛋白质印迹（Western-blot）和qRT-PCR检测SKOV3细胞中S1PR的下调结果;qRT-PCR检测S1PR对SKOV3细胞IL-8、IL-6、VEGF表达的影响。结果：管腔形成实验结果显示,S1P处理后的SKOV3细胞培养上清液重悬人脐静脉内皮细胞融合细胞（EA.hy926）,其管腔形成的数量多于对照组（t=3.667,P=0.021）,表明S1P促进了人卵巢癌细胞SKOV3的促血管形成能力。S1P处理后的SKOV3细胞中血管生成因子IL-8、IL-6、VEGF mRNA的表达水平较对照组升高,差异有统计学意义（均P＜0.05）。S1PR1和S1PR3基因沉默可显著降低SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的mRNA表达水平,差异有统计学意义（均P＜0.05）,而S1PR2基因沉默后IL-8、IL-6、VEGF的mRNA变化不明显。结论：S1P通过S1PR1/3上调人卵巢癌SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的表达,从而增强了SKOV3细胞的促血管生成作用,S1P/S1PR通路有望成为抑制卵巢癌生长的治疗新靶点。     

孕激素对人卵巢癌细胞株H08910细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨孕激素（Ｐ）对人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０细胞体外增殖及凋亡的调控作用。方法 选用人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０进行体外培养,实验组中加入含有同浓度Ｐ的培养液,对照组加入等量空白培养液,采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,光学显微镜和透射电子显微镜进行形态学观察,终末脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）计数凋亡细胞,流式细胞仪间     

siRNA LSINCT5联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LSINCT5联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响。方法:选取SKOV3细胞株,采用小干扰技术将LSINCT5基因片段转入卵巢癌SKOV3细胞中,同时联合顺铂作用于卵巢癌细胞。按不同处理因素将SKOV3细胞分为5组:对照组、NC-siRNA组、顺铂组、LSINCT5-siRNA+顺铂组和LSINCT5-siRNA组。CCK-8检测转染后SKOV3细胞对顺铂的敏感性。显微镜下观察细胞的生长状况及形态变化。Western blot和RT-PCR法分别检测与凋亡相关的Caspase 3蛋白和基因表达水平。结果:CCK-8显示,3μg/ml顺铂作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度。沉默LSINCT5能显著提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。LSINCT5-siRNA+顺铂组中Caspase 3蛋白和mRNA相对表达量均明显高于其他各组(P0.05)。结论:沉默LSINCT5提高了卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。沉默LSINCT5联合顺铂能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,促进卵巢癌细胞凋亡。