麻疹病毒分离及现行疫苗免疫效果分析

目的 分离麻疹流行病毒,与现用麻疹减毒活疫苗(Measles Vaccine,Live;MV)株病毒进行基因比较和交叉中和试验,以分析现行MV的免疫保护性.方法 由江苏省疾病预防控制中心提供2005年麻疹局部流行时急性期病人的咽拭子标本,用Veto/Slam细胞分离病毒,同时提取分离病毒和疫苗病毒核糖核酸,用逆转录-聚合酶链反应扩增血凝素蛋白(H)和核蛋白(N)基因,并进行核苷酸测序分析;另用MV免疫者的血清和麻疹病人的恢复期血清与分离野毒株和疫苗株进行交叉中和试验.结果 一次成功分离到4株麻疹野病毒,对其中1株(JS/26-05)作基因测序,N基因进化树分析为H1基因型;与疫苗株病毒基因比较,H基因核苷酸同源性为94.8%,氨基酸同源性为95.1%;N基因核苷酸同源性为94.4%,氨基酸同源性为96.2%,但碳末端150个氨基酸的同源性为90.0%.疫苗免疫者产生的中和抗体水平低于自然感染者,两者的抗体几何平均滴度分别为:针对野毒株1:9.56和1:22.40,针对疫苗株1:40.05和1:65.41,相差2.9～4.2倍;疫苗免疫产生的抗体中和野毒株的能力平均低于疫苗株4.2倍.结论 2005年江苏省局部地区麻疹流行时分离的病毒为H1基因型,麻疹分离株与现用疫苗株在基因水平上的差异明显,现用MV的免疫保护作用有所减弱,可能已影响到MV的免疫持久性.     

麻疹野病毒H1基因型在中国流行的分析

为确定现阶段中国流行的麻疹野病毒本土基因型别 ,在 1995～ 2 0 0 2年用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞 )从河南、山东、安徽、上海等 19个省 (自治区、直辖市 ,下同 )的麻疹爆发和散发病人的咽喉拭子或尿液标本中分离到麻疹病毒 15 6株。用逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)从 15 6株麻疹病毒中扩增出核蛋白 (N)基因碳末端 4 5 0个核苷酸片段。通过对扩增产物的核苷酸序列测定和分析证明 ,15 4株为麻疹病毒H1基因型 ;2株属于A基因型 ,为沪191疫苗株。由此证实 ,H1基因型已在中国广泛流行 ,为中国麻疹病毒的优势基因型。H1是麻疹病毒型内变异最大的基因型。这 15 4株H1基因型麻疹病毒 ,除外Shanxi0 0 - 6和Hunan95 - 2 3株 ,可进一步划分为H1a和H1b两个亚组。H1a的 4 5 0个核苷酸和H1b的差异在 2 0 0 %～ 4 0 0 %。H1基因型的 4 5 0个核苷酸和A基因型代表株Edmonston的基因差异在 6 0 0 %～ 7 33% ;与H2基因型代表株China94 - 1的基因差异在 5 11%～7 5 6 % ;与其它 17个基因型代表株的最大差异在 11 5 6 %。在中国开展麻疹病毒监测和建立麻疹病毒毒株库及基因数据库 ,对加速麻疹控制及未来消除麻疹都十分必要。     

江苏省2012年麻疹病毒的基因特征分析

目的对江苏省2012年麻疹病毒(measles virus,MV)进行分离,并分析其基因特征。方法对江苏省2012年麻疹咽拭子进行病毒分离,麻疹病毒分离株针对N基因进行PCR扩增,并对该PCR产物进行序列测定,结合从基因库下载的中国MV毒株序列以及世界卫生组织(WHO)MV基因型参考株一起进行分子流行病学研究。结果通过比较核苷酸和氨基酸同源性和构建亲缘关系树发现,江苏省2012年MV分离株属H1a基因型,但序列相互间存在差异。此外,通过分析江苏省2012年MV分离株的遗传距离发现,MV毒株序列同源性和亲缘关系树分析结果一致。结论江苏省2012年流行的麻疹同属H1a基因型,是由H1a基因型MV的多个传播链引起的;且MV毒株间存在序列差异,说明在江苏省流行的MV发生了一定程度的变异。     

2012～2013年杭州及周边地区儿童麻疹病毒流行株核蛋白基因测定分析

目的探讨2012~2013年杭州及周边地区儿童麻疹病毒(Measles Virus,MV)流行株核蛋白的基因特征。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测麻疹患者的咽拭子标本,对部分PCR扩增阳性的片段进行基因测序、并绘制系统进化树进行同源性分析。结果从杭州市儿童医院2012~2013年80例儿童麻疹患者的咽拭子中检测到29例MV株,经基因测序及系统进化树分析后均为H1a基因型,与该型参考株china93-2﹑china93-4核苷酸同源性为97.7%~98.9%;2012年基因型组内遗传距离(0.007)最小,2012年和2013年基因型之间的组间遗传距离(0.013)最小,而2012年、2013年基因型与A型(疫苗株)的组间遗传距离均较大,分别为0.085、0.087。结论 2012~2013年杭州地区儿童MV的优势亚型为H1a亚型,与中国其他地区报告的流行株一致。2012年与2013年的MV基因比较遗传变异较小,而与疫苗株比较遗传变异较大。     

1995～1997年辽宁,河南,河北省麻疹病毒流行株基因型分析

以反转录二步多聚酶链反应方法（ＲＴ－ＰＣＲ）直接测定麻疹病人唾液、尿液标本中的麻疹病毒（ＭＶ）血凝基因（Ｈ）、核衣壳基因（Ｎ）。以ＲＴ－ＰＣＲ产物纯化后进行ＭＶ４５０ｎｔＨ、２８２ｎｔＮ基因核苷酸片段测序分析,测序结果一致表明１９９５～１９９７年期间中国部分地区ＭＶ流行株存在２种基因型。其中一种基因型只发现１株,与ＥＤｗ５４株相同,另一种基因型占流行株的绝大多数（称新基因型）,与其它国家以前报道的ＭＶ流行株基因型的Ｎ基因最大差异为１５．４％,与ＥＤｗ５４、疫苗株相差８．８％;Ｈ基因最大差异是１０．８％     

四川省麻疹野病毒的分离和鉴定

目的　了解四川省麻疹病毒分子生物学特征 ,确定现阶段四川省流行的麻疹野病毒的基因型别。方法　用绒猴淋巴母细胞 (B95a )从一疑似麻疹散发患者的标本中分离麻疹病毒 ,通过逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR )和其序列测定方法鉴定是否为麻疹病毒。结果　四川省分离的这株毒株确定为麻疹野病毒H1基因型。结论　分离出麻疹野病毒属于H1基因型 ,和中国的本土优势流行株相同     

上海地区汉坦病毒基因分型和序列分析

[目的 ]　研究上海地区汉坦病毒基因型分布。　 [方法 ]　采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)、核苷酸测序法和系统发生树分析上海宿主动物中获得的 3 6株汉坦病毒M基因片段。　 [结果 ]　上海郊区汉坦病毒流行株有HTN型和SEO型 ,以HTN型为主 ;市区流行株为SEO型。核苷酸序列同源性及系统发生树分析表明上海地区HTN型汉坦病毒存在 3个不同分支 ,不同HTN型病毒间的核苷酸的差异在 6% -19%。　 [结论 ]　上海地区汉坦病毒以HTN型为主。可能存在汉坦病毒的不同基因亚型 ,对本市肾综合征出血热 (HFRS)的防治有重要指导意义     

麻疹病毒流行株的基因变化与现行疫苗的预防效果

麻疹病毒仅 1个血清型 ,但通过对流行株的血凝 (H)蛋白和核 (N)蛋白基因的序列分析 ,至 2 0 0 1年 10月世界卫生组织根据有关资料确认麻疹病毒有 8个基因组 (A、B、C、D、E、F、G、H) ,共 2 0个基因型。其间H蛋白基因和N蛋白基因的核苷酸差异达 7% ,而N基因COOH端的 4 5 0个核苷酸的差异在不同型之间 >12 %。中国流行的麻疹病毒主要为H基因组的H1型 ,是一种新的基因型。目前国内外使用的麻疹疫苗皆为A基因型 ,通过交叉中和试验证实 ,现行的麻疹疫苗免疫后的抗体能中和不同基因型的麻疹病毒流行株 ,但中和抗体滴度略低 ,仍可预防麻疹发生。     

浙江省麻疹病毒流行株血凝素基因的变异及其与国内外流行株的差异

目的 探讨浙江省麻疹病毒(measles virus,MV)流行株血凝素基因的变异情况,及其与国内外流行株的差异.方法 选取浙江省1999-2011年分离保存的麻疹病毒流行株33株,提取病毒核酸,采用RT-PCR法扩增其血凝素(H)基因全序列,并与GenBank上下载的中国麻疹疫苗株沪191,以及95株国内外各基因型麻疹毒株的H基因序列进行比较分析.结果 从浙江省1999-2011年麻疹患者咽拭子标本中分离麻疹病毒株33株,与1993-2007年我国其他地区麻疹流行株构建H基因系统进化树,结果表明33株浙江麻疹流行株均属于H1a亚型,流行株分布无明显时间和地域特征.以疫苗株沪191为参考株,我国2003-2011年H1a亚型流行株H基因的核苷酸、氨基酸平均变异率以及进化率分别为5.15％、4.44％和5.81％,分别高于1965-1993年(4.75％、3.86％和5.30％),以及1994-2002年(4.80％、4.08％和5.37％)流行株平均变异率与进化率;3个时间段流行株H基因非同义替换率与同义替换率的比值(dn/ds)分别为0.19、0.21和0.23,表明1993-2011年我国H1a型麻疹流行株尚未受到明显的正向选择作用.我国2003-2011年H1a亚型毒株与沪191之间,在H基因上共存在24个稳定的氨基酸变异位点;H1a亚型流行株与A基因型疫苗株间差异最大,遗传距离为0.053,氨基酸差异数为26 ～28个,而B3、D4型代表株与沪191间稳定的氨基酸差异仅为15个.另外,H1a型流行株与B、D基因型毒株间差异明显,组间遗传距离分别为0.074和0.071,氨基酸差异数达27～33个.结论 麻疹病毒H1a亚型流行株与疫苗株以及其他基因型麻疹病毒株,在H基因上存在明显差异,且该差异随时间累积而增大,应该引起足够的重视.     

2015年黔东南地区麻疹病毒分离株基因特征分析

目的 分析2015年黔东南地区麻疹病毒基因型别和特征。方法 采集疑似麻疹病例临床咽拭子标本,经Real - time RT - PCR初筛为麻疹病毒核酸阳性,使用Vero/SLAM细胞进行病毒分离,对阳性分离物提取病毒RNA,采用RT - PCR方法扩增麻疹病毒N基因羧基末端编码的634个核苷酸片段,并进行测序与分析。结果 35例疑似麻疹病例中检测到4例麻疹病毒阳性核酸,经分离得到2株麻疹病毒。基因亲缘关系显示2株为H1基因型中的H1a基因亚型。2株麻疹病毒株与H1基因型参考株MVi/Hunan.CHN/0.93/7(AF045212)比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为97.7%和98.0%;与H1a基因亚型参考株Chin9322比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%和99.3%;2株H1a基因亚型与往年及本省流行的麻疹病毒的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.2%～100%和98.0%～100%。结论 黔东南地区2015年分离到的麻疹病毒为H1a基因亚型,与贵州省本土麻疹流行的优势基因亚型一致。     

Characterization of a new genotype of measles virus detected in China and England

We report the co-circulation of a new lineage of measles virus (MV) and an Edmonston-like (Ed-like) genotype of MV in China during 1995-7. Sequence analysis of 25 strains was performed on a 282 nucleotides (nt) region of the nucleoprotein (N) gene, a 450-nt region of the haemagglutinin (H) gene and a 152-nt region of the matrix (M) gene by direct sequencing of RT-PCR amplicons obtained from clinical specimens. The entire H gene was sequenced from two strains. The results showed that 24/25 Chinese strains belonged to a new genogroup and were distinct from the vaccine strains used in China and the UK, and also from MV strains previously described in Europe, Africa and the USA. The remaining strain was Ed-like. Two strains of the new genotype (IV) and one of the Ed-like genotype were also detected in the UK in 1996.     

Genetic variability of the measles virus hemagglutinin gene in B3 genotype strains circulating in Northern Italy

Sequencing the whole measles virus hemagglutinin (H) gene, in conjunction with a 450-nucleotide region of the nucleoprotein gene (N-450), is helpful for the identification of new genotypes and as an auxiliary in outbreak characterization. In addition, it is essential to be able to predict the antigenic changes of the H protein to gain a better monitoring of the response to the vaccine. In this study, we obtained the full-length H gene sequences from 19 measles virus (MV) strains belonging to two B3 genotype variants circulating in Lombardy (Northern Italy) between July 2015 and February 2016 and evaluated the variability of the whole MV-H gene. Furthermore, we compared the obtained H amino acid sequences to all MV sequences available in the GenBank database (n = 1152 in total) and analyzed the amino acid substitutions in the H protein within clades where the Italian strains were included. We identified a higher variability in the H gene compared to the N-450 region and our results support previous studies, highlighting that the H gene is more informative for characterizing the MV B3 genotype than the N-450 sequence. Some of the amino acid substitutions were fixed in the viral population and, remarkably, some of the amino acid substitutions were typically present only in the Italian sequences. Accumulating further molecular information about MV-H gene will be necessary to enable in-depth analyses of the variability of this gene in the vaccinated population.     

2002-2007年福建省麻疹野病毒的分离与基因特性分析

[目的]收集福建省流行的麻疹野毒株,分析麻疹野病毒的基因特征。[方法]应用B95a或Vero/slam细胞,从疑似病例的咽拭子或尿液标本分离麻疹病毒,用RT-PCR方法扩增分离株病毒的N基因3'端450个核苷酸片段,分析其基因型别及遗传特征。[结果]2002年、2006-2007年共从5个设区市分离了14株麻疹野病毒,均为H1a基因亚型。14株病毒核苷酸同源性为97.8%~100%,在遗传树图中分属于4个独立分支,具有不同的来源。福建省分离株与H1基因型中国代表株、H2基因型及疫苗株S191相比,与S191差异性最大(核苷酸同源性91.0%~92.0%,氨基酸同源性88.1%~90.1%)。MV06-32、MV07-30、MV07-39和MV07-46这4株间N基因3'端450个核苷酸间同源性为100%,显示不同地区和年份来源的病毒株具有高度同源性。[结论]福建省目前监测到的麻疹野病毒均为H1基因型、H1a基因亚型,未发现其它型别;不同地区或同一地区内存在多传播链同时循环,也存在同一野病毒株可在不同地区、不同年份间持续循环传播。     

Greek measles epidemic strain, 2005-2006

The purpose of this work was the molecular study of the virus strain that caused the last measles outbreak in Greece. Twenty-four saliva specimens were obtained from selected patients serologically confirmed as measles cases between December 2005 and March 2006. Measles virus (MV) detection was performed by a nested RT-PCR. The 447-bp segment of the N gene of these MV strains was used for genotyping. The N gene sequences of the Greek MV strains were identical to each other, therefore a phylogenetic tree was constructed using one representative MV (ThesGRE/06). Our data show that the MV strain which caused the 2005-2006 outbreak in Greece belongs to genotype D6, and differs by 0.68% from the New Jersey D6 strain and by 5.5% from the MV vaccine strain Edmonston B (U03656) belonging to genotype A.     

2000年东莞市麻疹病毒流行株基因型分析

目的 了解东莞市麻疹病毒（measles virus,MV)流行株的基因型。方法 2000年4-7月间东莞市发生有55例患者的麻疹流行,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法直接检测麻疹病人急性期唾液中的麻疹病毒核糖核酸（RNA）的N基因和M基因,对任意选取的5份RT-PCR阳性标本和疫苗株沪-191的N基因扩增片段进行核酸序列测定,并进行序列系统树分析。结果 用RT-PCR方法直接检测的阳性率为87.3%;用血清抗-MV-IgM ELISA方法检测的阳性率为70.9%,抗MV-IgM阴性的病人唾液中有68.8%的标本MV-RNA阳性。序列分析结果表明此流行株的基因型与世界麻疹病毒流行株不同,差异为1.4%-11.7%,可归属于H基因型。结论 2000年东莞市麻疹病毒流行核酸序列完全相同,为H基因型,说明本次流行的麻疹病毒具有同源性,来源于同一传染源。     

上海地区2005年麻疹流行株基因特性分析

目的了解2005年上海部分地区麻疹暴发流行株的基因型别和特性,加强麻疹病毒学监测。方法采集暴发麻疹患者咽拭子标本分离病毒,通过RT-PCR扩增麻疹病毒N基因C末端450 bp核苷酸并进行序列测定,与GenBank中麻疹病毒各基因型参考株及国内其他地区的麻疹分离株进行基因比较。结果从10例麻疹患者的咽拭子标本中共分离麻疹病毒4株,均属H基因组H1基因型,型内变异0.7%-1.3%。与H1型代表株China93-7的基因同源性为98%-98.2%;与H2基因型代表株China94-1的基因差异为6.4%-6.9%。与A型代表株Edmonston的基因差异为6.7%- 6.9%;与中国麻疹疫苗株Shanghai191的基因差异为7.6%-8.0%,与国内其他地区麻疹流行株基因差异为0.2%-3.7%。结论2005年上海部分地区麻疹暴发是由H1基因型病毒引起,为中国本土流行株。     

一起麻疹爆发的病毒分离及基因型鉴定

目的了解宁夏回族自治区流行麻疹野病毒的基因型。方法2004年5月,青铜峡市某小学发生麻疹爆发,收集了3份病人急性期咽拭子标本和11份血标本,分离咽拭子中的麻疹病毒,使用逆转录-聚合酶链反应检测分离到的麻疹病毒核蛋白(N)基因,对扩增后的N基因片段进行核苷酸序列测定,并分析鉴定基因型。结果宁夏回族自治区首次分离到2株麻疹病毒;酶联免疫吸附试验捕捉法检测病人血清的IgM抗体,阳性率为100%;序列分析结果表明,这2株麻疹病毒均属于H1基因型。结论2004年引起青铜峡市麻疹流行的病毒为H1基因型。     

福建省发现输入性B3基因型麻疹病毒

目的 分析福建省2018年输入性B3基因型麻疹病毒的病原学特征。方法 采用实时荧光定量RT-PCR筛查和扩增麻疹病毒核酸阳性咽拭子及Vero/Slam细胞培养阳性产物。对麻疹病毒N基因羧基末端634个核苷酸片段进行扩增测序,比对分析构建基因亲缘性关系树。结果 分离获得2株麻疹病毒株,18条病毒核酸序列。所有福建株在亲缘关系上与WHO B3基因型参考株同属一个分支,其中标本MV18-41和MV18-42与2018年分离于中国香港地区的毒株（HongKong.CHN/35.18）核酸同源性为100.0%;其他毒株序列与2018年分离于日本的毒株（Mvs/Osaka.JPN/38.18/B3）同源性最高（99.9%）。福建株与除B3基因型外,23种WHO不同麻疹基因型参考株之间比较,福建株与B1基因型参考株核苷酸和氨基酸同源差异性最小,分别为95.1%～95.4%和95.3%;与H1基因型参考株同源差异性最大,其中与中国目前优势流行的参考株MVi/Hunan.CHN/0.93/7核苷酸和氨基酸同源差异分别为88.7%～89.0%和87.3%;在病毒N蛋白羧基末端150个氨基酸位点上,福建株与疫苗株（Shanghai-191）之间存在13个变异位点,但这些位点并未引起该蛋白区域的功能变化。结论 福建省成功分离获得2株B3基因型麻疹毒株,B3基因型麻疹病毒是福建省发现的新基因型麻疹病毒,在补充和丰富福建省麻疹病毒分子流行病学本底资料的同时也进一步警示必需加强输入性病例的监测,才能更好地完成福建省麻疹病毒的控制和消除工作。