舟山市3例发热伴血小板减少综合征的病原学与遗传特征

目的 对舟山市3例疑似发热伴血小板减少综合征(SFTS)病例进行病原学鉴定、确诊,并分析其遗传特征.方法 选用巢式RT-PCR测定新布尼亚病毒核酸及L、M、S3个特异性基因,并对基因扩增产物进行测序,测序结果与GenBank上公布的序列进行比对确认.用DNAStar软件构建进化树与序列距离表.用间接免疫荧光法测定患者恢复期和急性期血清新布尼亚病毒IgG抗体滴度.结果 3例SFTS患者急性期血清中均能检测到新布尼亚病毒的3个特异性基因片段,其中S基因核苷酸序列与舟山市同类基因核苷酸序列的同源性在94.4％～ 100.0％,患者恢复期血清病毒抗体滴度较急性期增高4倍以上.结论 经过病原学鉴定,3例临床疑似患者确诊为发热伴血小板减少综合征的新近感染病例.舟山市新布尼亚病毒的遗传特征比较稳定.     

青岛市首例新型布尼亚病毒L基因全长分析

目的应用real-time PCR对青岛市首例发热伴血小板减少综合征患者血清的新型布尼亚病毒进行扩增,对病毒L基因测序及序列比对技术进行分析鉴定。方法选取青岛市首例发热伴血小板减少综合征患者急性期血清1份,利用荧光RT-PCR进行测定为阳性,利用套式RT-PCR进行L特异性基因片段全长扩增并进行测序拼接,结果与Gen Bank公布的序列进行比对确认。用DNAStar软件构建进化树进行分子流行病学研究。结果青岛市首例发热伴血小板减少综合征L基因全长与江苏2014年毒株KR23076的同源性为99. 7%,与山东2010年的毒株JQ684871同源性为99. 8%。结论青岛市首例发热伴血小板减少综合征L基因序列全长鉴定成功,为青岛市该疾病研究和监测提供数据支持。     

2011-2013年济南市发热伴血小板减少综合征流行病学及病原学特征分析

目的分析济南市2011-2013年发热伴血小板减少综合征（severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS）的流行病学特征和病原学特性,为更好地预防和控制SFTS提供科学依据。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法检测济南市2011-2013年SFTS疑似病例急性期血清样本和蜱虫样本中的SFTS布尼亚病毒核酸,采用RT-PCR方法进行扩增并测序,使用DNASTAR和MEGA软件对测序结果进行序列比对和进化分析;用描述性流行病学方法对监测数据进行统计分析。结果 2011-2013年济南市共确诊95例SFTS病例,检测出3只蜱虫样本中的SFTS布尼亚病毒核酸阳性;发病地区主要集中在章丘市。对SFTS布尼亚病毒的S片段基因进行测序,结果显示2012年SFTS布尼亚病毒基因与安徽、江苏、河南分离株遗传距离相对较近。2013年SFTS布尼亚病毒基因与山东本地分离株遗传距离相对较近。结论济南市发热伴血小板减少综合征病例以新布尼亚病毒为其主要病原;夏秋季多发;中老年农民为主,具有明显职业性;发病范围逐年扩大,局部地区疫情活跃。应加强传染源的管理控制,深入开展对高危人群宣传教育和行为干预。     

辽宁省新布尼亚病毒流行特点及生物特性分析

目的 调查2009-2011年辽宁省8市发热伴血小板减少综合征新病原,探讨新布尼亚病毒在自然界中可能存在的动物宿主及传播媒介.方法 采用ELISA方法检测2009-2011年辽宁省发热伴血小板减少患者血液中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV) IgM抗体,采用间接免疫荧光染色法检测鼠肺SFTSV抗原,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测鼠肺、蜱悬液、细胞阳性分离物的SFTSV核酸,采用VERO-E6细胞对患者血液及脾悬液标本进行病毒分离鉴定,并进行核苷酸测序分析.结果 大连、丹东、抚顺、铁岭均检出SFTSV的IgM抗体阳性;103份中检出20份鼠肺SFTSV抗原阳性,但SFTSV核酸检测均阴性;20组中1组蜱悬液SFTSV核酸检测阳性并分离出SFTSV病毒;148份中有26份急性期血液样本经VERO-E6细胞分离出现细胞病变,经鉴定为SFTSV病毒,并对M片段进行核苷酸序列分析.结论 新布尼亚病毒是辽宁省4市发热伴血小板减少综合征的新病原,未检出可能的自然界中的动物宿主鼠类携带SFTSV核酸,蜱可能是其传播媒介之一.     

应用Vero细胞分离新型布尼亚病毒

目的从不明原因发热伴血小板减少综合征患者血液中分离新型布尼亚病毒。方法应用Vero细胞培养法分离病毒,并用间接免疫荧光检测法(IFA)、实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)技术进行鉴定。结果从24份不明原因发热患者血液标本中分离出6株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。结论应用Vero细胞培养法可以直接从不明原因发热患者血液中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。     

宁波发热伴血小板减少综合征流行病学监测结果分析

目的了解宁波市发热伴血小板减少综合征(新布尼亚)流行状况。方法在宁波市2家县级医院和2家乡镇卫生院建立监测哨点,采用卫生部统一的诊断标准和个案调查表对发热伴血小板减少综合征病例进行调查,对监测区患者血清进行病毒分离培养和M基因序列测定分析。结果报告11例发热伴血小板减少综合征,死亡1例。156只蜱均未检测出携带新布尼亚病毒(SFTSV),检测健康人群血清265份,SFTSV抗体阳性率为6.14%;人群抗体阳性水平随着年龄的增加而增高(P0.01)。5株宁波分离株与日本、舟山分离株亲缘关系较近,其核苷酸和氨基酸序列变异很小,序列相似性在96%以上。结论宁波市是发热伴血小板减少综合征(布尼亚病)的流行地区,应加强发热伴血小板减少综合征症状监测。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒非结构蛋白NSs原核表达载体的构建与表达

摘要:目的　利用大肠杆菌原核表达系统表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）NSs重组蛋白。方法　采用RT-PCR技术,从SFTSV毒株提取的病毒总RNA中,扩增NSs全长基因,将其克隆至pET22b（+）中构建原核表达载体pET22b-NSs,经酶切及测序鉴定后转化表达菌BL21（DE3）,IPTG诱导,通过Western Blot鉴定NSs蛋白的表达。结果　酶切、测序证明重组原核表达载体pET22b-NSs构建成功,免疫印迹法可见NSs基因编码蛋白表达。结论　实现了发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒重组NSs蛋白的原核高效表达,为进一步深入研究发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒NSs蛋白的结构与功能奠定了基础。     

江苏省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的核酸检测及全基因组序列分析

目的 对江苏省2010年发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)进行核酸检测并分析其全基因组序列.方法 用荧光定量PCR的方法对江苏省2010年SFTSV感染病例进行核酸检测,将所有阳性标本进行病毒分离,取8株代表性毒株测定其全基因组序列,序列结果用DNA Star和MEGA4软件进行分析.结果 33例发热伴血小板减少综合征疑似病例中,20例SFTSV核酸检测阳性.1例狗标本SFTSV检测也为阳性.8株SFTSV毒株全基因组序列与国内其他地区流行株的序列高度同源,其中M片段核苷酸序列同源性介于95.8％～98.7％之间,氨基酸序列同源性介于98.7％～99.7％之间;而与汉坦病毒属和白蛉热病毒属的相关序列相比差异较大,M段核苷酸序列同源性最高仅为27.1％,氨基酸序列同源性最高仅为7.3％.与一代病例密切接触后发病的二代病例序列与一代病例序列完全一致;狗携带的SFTSV序列与病人序列高度同源.结论 SFTSV江苏株与国内参考株序列无明显差异,与布尼亚病毒科的其他属序列差异巨大;SFTSV存在人传人的可能性;狗可能是SFTSV的传播宿主之一.     

两起新型布尼亚病毒感染病例的病毒序列分析

目的：分析发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒感染（SFTSV）感染患者的临床特点、流行病学以及SFTSV基因序列。方法：收集本市2014年4-6月某医院送检的2例重症发热伴血小板减少（SFTS）患者的血清标本,经核酸荧光PCR检测阳性确诊。对病毒核酸测序并与GenBank数据比对。结果：两名患者均有典型的SFTSV感染的临床症状,以发热、腹泻为首发症状,血常规见粒系及血小板呈进行性降低。从2例患者血清提取的核酸经测序,其基因序列与GenBank中的SFTSV进行比对,0428株（安庆）的RNA多聚酶、糖蛋白、NS蛋白的同源性与安徽代表株AHL/China/2011的同源性最高,均达到99%。0507株（滁州）上述目的基因与江苏株JS2011-013-1的同源性高达99%。结论：SFTSV在本地区散发存在,基因序列分析结果提示其来源或有差异。     

２０１１－２０１３年济南市发热伴血小板减少综合征流行病学及病原学特征分析

摘要：目的　分析济南市２０１１－２０１３年发热伴血小板减少综合征（ｓｅｖｅｒｅｆｅｖｅｒｗｉｔｈｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａｓｙｎ
ｄｒｏｍｅ,ＳＦＴＳ）的流行病学特征和病原学特性,为更好地预防和控制ＳＦＴＳ提供科学依据。方法　采用实
时荧光定量ＲＴ ＰＣＲ 方法检测济南市２０１１－２０１３年ＳＦＴＳ疑似病例急性期血清样本和蜱虫样本中的ＳＦＴＳ
布尼亚病毒核酸,采用ＲＴ ＰＣＲ 方法进行扩增并测序,使用ＤＮＡＳＴＡＲ 和ＭＥＧＡ 软件对测序结果进行序
列比对和进化分析;用描述性流行病学方法对监测数据进行统计分析。结果　２０１１－２０１３年济南市共确诊
９５例ＳＦＴＳ病例,检测出３只蜱虫样本中的ＳＦＴＳ布尼亚病毒核酸阳性;发病地区主要集中在章丘市。对
ＳＦＴＳ布尼亚病毒的犛片段基因进行测序,结果显示２０１２年ＳＦＴＳ布尼亚病毒基因与安徽、江苏、河南分
离株遗传距离相对较近。２０１３年ＳＦＴＳ布尼亚病毒基因与山东本地分离株遗传距离相对较近。结论　济南
市发热伴血小板减少综合征病例以新布尼亚病毒为其主要病原;夏秋季多发;中老年农民为主,具有明显
职业性;发病范围逐年扩大,局部地区疫情活跃。应加强传染源的管理控制,深入开展对高危人群宣传教
育和行为干预。
关键词：发热伴血小板减少综合征;新型布尼亚病毒;流行病学;序列分析
中图分类号：Ｒ１８１．２＋２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０７ ０６７７ ０４     

新型布尼亚病毒安徽分离株全基因组测序分析

目的对安徽省两株新型布尼亚病毒进行全基因组序列测定,分析其全基因组序列的基因特征与变异特点。方法应用22对测序引物对病毒基因组进行RT-PCR分段扩增,PCR产物直接进行序列测定,ClustalW、DNASTAR、MEGA4.1等软件分析基因组序列。结果两株病毒全基因组编码情况和已报道新型布尼亚病毒相同,未见插入和缺失;构建系统发生树可见AHZ毒株与河南省毒株进化距离最近,而AHL毒株在一支较为独立的分支上;M片段膜蛋白前体编码区氨基酸变异率最高。结论安徽省新型布尼亚病毒毒株基因组相对稳定,可能存在与河南省毒株相互传播的现象。     

Migration,recombination, and reassortment are involved in the evolution of severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus

Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus (SFTSV) has been identified as the etiological agent causing severe fever with thrombocytopenia syndrome (SFTS). SFTSV was reported in recent years as a newly emerging tick-borne virus in China, Japan and South Korea and is a novel member of the genus Phlebovirus, family Bunyaviridae, which is suspected to be transmitted by the tick Haemaphysalis longicornis. The genetic diversity and evolutionary relationships between geographically distributed SFTSV strains are currently unclear. In this study we used extensive bioinformatics analyses to provide deep insight into the mechanisms of evolution and relationships among SFTSV strains. The genetic diversity of SFTSV was characterized and found to be generated through recombination and reassortment events. Further, potential correlations between the geographic distribution and migration pathways of SFTSV were subject to in-depth analysis. The potential of birds migration related to SFTSV migration were also discussed. The results of this study will facilitate better understanding of the mechanisms of evolution of SFTSV, which will be important in developing public-health interventions and strategies for SFTS disease control and prevention in endemic areas.     

山东省烟台市人与动物新型布尼亚病毒感染调查及同源性分析

目的 了解山东省烟台市人和动物发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 （SFTSV）感染及流行情况。方法 2011年4－11月分别在烟台市的蓬莱和莱州2个SFTS病例高发地区连续采集与人密切接触的5种家养动物 （羊、 牛、 猪、 犬、 鸡） 血清标本3 576份,应用双抗原夹心ELISA方法和Real time RT-PCR方法检测血清中SFTSV总抗体和病毒核酸; 观察不同月份感染情况; 采集两地人群血清2 590份,应用间接ELISA方法检测SFTSV IgG抗体; 用Vero细胞从核酸阳性的人和动物血清中分离病毒,通过RT-PCR方法对 SFTSV S片段进行序列扩增、 同源性分析。结果 3 576份动物血清标本中SFTSV血清总抗体阳性1 439份,阳性率为40.24%,病毒核酸阳性163份,阳性率为4.56%。其中羊、 牛、 鸡、 犬、 猪抗体阳性率分别为62.78%、 52.97%、 45.56%、28.73%和1.45%,核酸阳性率分别为5.72%、 4.63%、 3.02%、 5.25%和3.73%。动物体内的抗原抗体随季节消长而变化。2 590份人群血清SFTSV IgG抗体阳性率为5.41%。对10株来自人的毒株和3株来自动物的毒株进行S片段基因序列扩增分析,显示其同源性在95.23%～100.00%,与国内其他省市分离毒株比较,其同源性在94.72%～99.13%,高度同源。结论 烟台地区存在SFTSV流行,人与家养动物普遍易感,其基因序列高度同源,提示家养动物可能作为SFTSV的增殖宿主和扩散宿主,应引起高度重视。     

从革螨和恙螨中检测到发热伴血小板减少综合征病毒核酸

目的调查革螨、恙螨携带发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)情况。方法收集黑线姬鼠和山羊体表革螨和恙螨,按属种分类,用荧光定量PCR和常规RTPCR法检测革螨和恙螨体内是否携带SFTSV基因组核酸。结果黑线姬鼠体表收集的5组小盾纤恙螨SFTSV基因组核酸均为阳性,黑线姬鼠体表收集的3组毒棘厉螨和山羊体表收集的1组毒棘厉螨SFTSV基因组核酸均为阳性。基因测序结果显示,与SFTSVJS4株NP基因比对,其同源性在99%～100%。结论小盾纤恙螨和毒棘厉螨均可携带SFTSV,具有传播SFTS的可能。     

羊及其体表蜱中SFTSV的分离培养与全基因序列分析

目的调查2012年春季江苏省某县羊及其体表蜱中发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)感染情况,并对分离到的毒株进行全基因序列分析。方法采用荧光定量RT-PCR法对标本进行SFTSV核酸检测,所有阳性标本进行病毒分离并测序,序列结果用Lasergene和MEGA4软件进行拼接和分析。结果 7只羊和从羊体上采集的93只长角血蜱中,1只羊的血清和淋巴结SFTSV核酸检测呈阳性,附着于该羊体表的1只长角血蜱病毒核酸也呈阳性,通过病毒分离获得2株SFTSV毒株,JS2012-yang01(羊)和JS2012-pi01(蜱)。序列分析结果显示,JS2012-yang01和JS2012-pi01的L、M和S基因片段的核苷酸同源性分别为99.8%、99.8%、100.0%,氨基酸同源性分别为99.6%、99.6%、100.0%,进化树分析显示两株病毒处于同一亚分支。2株毒株与中国其他地区流行的SFTSV毒株核苷酸序列同源性介于95.9%⁹9.6%(L基因),94.7%99.6%(L基因),94.7%⁹9.5%(M基因)和95.0%99.5%(M基因)和95.0%⁹9.5%(S基因),与布尼亚病毒科白蛉病毒属其他毒株序列差异较大。结论该调查中分离自羊和蜱的SFTSV高度同源。蜱虫通过叮咬吸血,可能在SFTSV从动物到人的传播过程中起媒介作用。     

济南市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒基因组特征分析

目的 分析济南市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus, SFTSV)基因组特征。方法 通过参考文献并对引物进行矫正,获得SFTSV全基因组序列。应用DNAstar 7.1、MEGA等软件对基因组序列进行基因位点、遗传进化、同源比对分析,建立L、M、S片段基因系统进化树。结果 成功获得7株济南市SFTSV全基因组序列,每株分离株基因组全长均为11 490 bp,其中L片段6 368 bp,M片段3 378 bp,S片段1 744 bp。济南市SFTSV属C基因型C3分支。与湖北、河南及山东省泰安和青岛市基因序列同源性高,呈现出明显地域性特点。核苷酸变异以碱基转(颠)换为主,2018年SFTSV分离株共存在0.03%氨基酸突变位点,2019年存在0.02%氨基酸突变位点,2020年存在0.11%氨基酸突变,2020年较2018、2019年明显增多。 结论 利用测序方法测定的济南市SFTSV,其基因组序列分析表明与我国流行的SFTSV相近,氨基酸序列突变有增多趋势,需密切关注其致病力、毒力及传播力的改变。     

2013年湖北省麻城市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒人群感染状况调查

目的调查评估麻城市人群中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)人群感染状况,为麻城市有效控制疫情提供流行病学线索。方法随机抽取麻城市3个乡镇健康人群血清共159人份,采用ELISA和Real time PCR检测发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒IgG抗体、IgM抗体和特异性核酸。结果 SFTSV-IgG抗体阳性率为5.03%,SFTSV-IgM和SFTSV-PCR全部阴性。结论麻城市是湖北省SFTSV的流行重点县市,需加强SFTSV的预防意识及快速诊断能力。