青岛市首例新型布尼亚病毒L基因全长分析

目的应用real-time PCR对青岛市首例发热伴血小板减少综合征患者血清的新型布尼亚病毒进行扩增,对病毒L基因测序及序列比对技术进行分析鉴定。方法选取青岛市首例发热伴血小板减少综合征患者急性期血清1份,利用荧光RT-PCR进行测定为阳性,利用套式RT-PCR进行L特异性基因片段全长扩增并进行测序拼接,结果与Gen Bank公布的序列进行比对确认。用DNAStar软件构建进化树进行分子流行病学研究。结果青岛市首例发热伴血小板减少综合征L基因全长与江苏2014年毒株KR23076的同源性为99. 7%,与山东2010年的毒株JQ684871同源性为99. 8%。结论青岛市首例发热伴血小板减少综合征L基因序列全长鉴定成功,为青岛市该疾病研究和监测提供数据支持。     

从革螨和恙螨中检测到发热伴血小板减少综合征病毒核酸

目的调查革螨、恙螨携带发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)情况。方法收集黑线姬鼠和山羊体表革螨和恙螨,按属种分类,用荧光定量PCR和常规RTPCR法检测革螨和恙螨体内是否携带SFTSV基因组核酸。结果黑线姬鼠体表收集的5组小盾纤恙螨SFTSV基因组核酸均为阳性,黑线姬鼠体表收集的3组毒棘厉螨和山羊体表收集的1组毒棘厉螨SFTSV基因组核酸均为阳性。基因测序结果显示,与SFTSVJS4株NP基因比对,其同源性在99%～100%。结论小盾纤恙螨和毒棘厉螨均可携带SFTSV,具有传播SFTS的可能。     

羊及其体表蜱中SFTSV的分离培养与全基因序列分析

目的调查2012年春季江苏省某县羊及其体表蜱中发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)感染情况,并对分离到的毒株进行全基因序列分析。方法采用荧光定量RT-PCR法对标本进行SFTSV核酸检测,所有阳性标本进行病毒分离并测序,序列结果用Lasergene和MEGA4软件进行拼接和分析。结果 7只羊和从羊体上采集的93只长角血蜱中,1只羊的血清和淋巴结SFTSV核酸检测呈阳性,附着于该羊体表的1只长角血蜱病毒核酸也呈阳性,通过病毒分离获得2株SFTSV毒株,JS2012-yang01(羊)和JS2012-pi01(蜱)。序列分析结果显示,JS2012-yang01和JS2012-pi01的L、M和S基因片段的核苷酸同源性分别为99.8%、99.8%、100.0%,氨基酸同源性分别为99.6%、99.6%、100.0%,进化树分析显示两株病毒处于同一亚分支。2株毒株与中国其他地区流行的SFTSV毒株核苷酸序列同源性介于95.9%⁹9.6%(L基因),94.7%99.6%(L基因),94.7%⁹9.5%(M基因)和95.0%99.5%(M基因)和95.0%⁹9.5%(S基因),与布尼亚病毒科白蛉病毒属其他毒株序列差异较大。结论该调查中分离自羊和蜱的SFTSV高度同源。蜱虫通过叮咬吸血,可能在SFTSV从动物到人的传播过程中起媒介作用。     

山东省烟台市人与动物新型布尼亚病毒感染调查及同源性分析

目的 了解山东省烟台市人和动物发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 （SFTSV）感染及流行情况。方法 2011年4－11月分别在烟台市的蓬莱和莱州2个SFTS病例高发地区连续采集与人密切接触的5种家养动物 （羊、 牛、 猪、 犬、 鸡） 血清标本3 576份,应用双抗原夹心ELISA方法和Real time RT-PCR方法检测血清中SFTSV总抗体和病毒核酸; 观察不同月份感染情况; 采集两地人群血清2 590份,应用间接ELISA方法检测SFTSV IgG抗体; 用Vero细胞从核酸阳性的人和动物血清中分离病毒,通过RT-PCR方法对 SFTSV S片段进行序列扩增、 同源性分析。结果 3 576份动物血清标本中SFTSV血清总抗体阳性1 439份,阳性率为40.24%,病毒核酸阳性163份,阳性率为4.56%。其中羊、 牛、 鸡、 犬、 猪抗体阳性率分别为62.78%、 52.97%、 45.56%、28.73%和1.45%,核酸阳性率分别为5.72%、 4.63%、 3.02%、 5.25%和3.73%。动物体内的抗原抗体随季节消长而变化。2 590份人群血清SFTSV IgG抗体阳性率为5.41%。对10株来自人的毒株和3株来自动物的毒株进行S片段基因序列扩增分析,显示其同源性在95.23%～100.00%,与国内其他省市分离毒株比较,其同源性在94.72%～99.13%,高度同源。结论 烟台地区存在SFTSV流行,人与家养动物普遍易感,其基因序列高度同源,提示家养动物可能作为SFTSV的增殖宿主和扩散宿主,应引起高度重视。     

安徽省新型布尼亚病毒基因测序鉴定方法的建立

目的建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒基因测序鉴定方法,对安徽省在2011年从病人血清中分离到的10株疑似发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒进行基因测序鉴定,并分析其序列特征。方法设计引物,RT-PCR法扩增病毒核酸,对扩增产物进行测序分析。结果设计的三对引物可有效扩增核酸序列,10株疑似发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒L、M、S三段基因序列和2010年我国发现毒株序列相似性93%以上,10株病毒和Phlebovirus AH12、Phlebovirus HN6两株病毒同属于一个进化分支,和白蛉病毒属的其它病毒株不在一个分枝上。结论 2011年从病人血清中分离到的10株病毒为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒,应加强安徽省对该病的监测,有效预防大范围传播。     

辽宁省新布尼亚病毒流行特点及生物特性分析

目的 调查2009-2011年辽宁省8市发热伴血小板减少综合征新病原,探讨新布尼亚病毒在自然界中可能存在的动物宿主及传播媒介.方法 采用ELISA方法检测2009-2011年辽宁省发热伴血小板减少患者血液中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV) IgM抗体,采用间接免疫荧光染色法检测鼠肺SFTSV抗原,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测鼠肺、蜱悬液、细胞阳性分离物的SFTSV核酸,采用VERO-E6细胞对患者血液及脾悬液标本进行病毒分离鉴定,并进行核苷酸测序分析.结果 大连、丹东、抚顺、铁岭均检出SFTSV的IgM抗体阳性;103份中检出20份鼠肺SFTSV抗原阳性,但SFTSV核酸检测均阴性;20组中1组蜱悬液SFTSV核酸检测阳性并分离出SFTSV病毒;148份中有26份急性期血液样本经VERO-E6细胞分离出现细胞病变,经鉴定为SFTSV病毒,并对M片段进行核苷酸序列分析.结论 新布尼亚病毒是辽宁省4市发热伴血小板减少综合征的新病原,未检出可能的自然界中的动物宿主鼠类携带SFTSV核酸,蜱可能是其传播媒介之一.     

舟山市3例发热伴血小板减少综合征的病原学与遗传特征

目的 对舟山市3例疑似发热伴血小板减少综合征(SFTS)病例进行病原学鉴定、确诊,并分析其遗传特征.方法 选用巢式RT-PCR测定新布尼亚病毒核酸及L、M、S3个特异性基因,并对基因扩增产物进行测序,测序结果与GenBank上公布的序列进行比对确认.用DNAStar软件构建进化树与序列距离表.用间接免疫荧光法测定患者恢复期和急性期血清新布尼亚病毒IgG抗体滴度.结果 3例SFTS患者急性期血清中均能检测到新布尼亚病毒的3个特异性基因片段,其中S基因核苷酸序列与舟山市同类基因核苷酸序列的同源性在94.4％～ 100.0％,患者恢复期血清病毒抗体滴度较急性期增高4倍以上.结论 经过病原学鉴定,3例临床疑似患者确诊为发热伴血小板减少综合征的新近感染病例.舟山市新布尼亚病毒的遗传特征比较稳定.     

舟山市枸杞岛一起家庭聚集性发热伴血小板减少综合征疫情调查

目的调查浙江省舟山市枸杞岛一起家庭聚集性发热伴血小板减少综合征(SFTS)疫情流行病学特征,为其预防控制提供依据。方法 2015年7月对舟山市枸杞岛SFTS患者及其密切接触者和周围环境进行流行病学调查及媒介蜱监测,采集患者血清进行发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核酸检测、序列测定和同源性分析。结果舟山市枸杞岛一对老年夫妇先后出现发热、腹泻、血小板减少等临床症状,经核酸检测确诊为SFTS,1例有蜱叮咬史;密切接触者和媒介蜱的SFTSV检测均为阴性。其中分离自1例患者的病毒核苷酸序列与我国岱山病毒株(ZJ2013-06)以及我国宁波病毒株(Rodent01/NB/CHN/2014)和日本病毒株(SPL097A/Japan)的同源性为98.8%~99.9%,而与岱山主要流行株、淮阳山及河南省流行株的同源性为94.0%~96.0%。结论首次证实舟山市枸杞岛存在SFTS流行,病例与蜱叮咬传播有关,疫情是否因候鸟迁徙扩散SFTSV有待进一步研究。     

上海地区1株SARS-Cov N基因序列分析及表达

目的通过基因克隆、序列分析以及在大肠埃希菌中的表达和分离纯化，研究上海地区1株SARS-Cov N蛋白编码基因变异情况，为SARS-Cov N蛋白应用于检测SARS感染作基础。方法用RT-PCR法从患者血清样品中扩增获取SARS-Coy N蛋白编码基因，并重组于质粒pGEX-2T。双脱氧法双向测定N基因序列，与GenBank公布的89株SARS-Cov N基因序列比对分析；重组N蛋白编码基因在E.coli中表达，亲和层析法分离纯化表达产物。结果RT-PCR扩增获取SARS-Cov N基因1269bp，测定的核酸序列与GenBank中公布SARS-Cov N基因序列比对，变异位点数1～4bp，其中导致1～3个编码氨基酸突变。重组N基因的表达质粒pGEX-2T／SARS-Cov N转化大肠埃希菌JM109，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，N基因在大肠埃希菌中高效表达，经亲和层析，得纯度〉90％的表达产物，表达的融合蛋白分子量为74000Da。结论上海地区1株SARS-Cov N蛋白编码基因与已公布的89株毒株核酸同源性为99．92％～99．68％，编码氨基酸同源性为99．8％～99．3％；该基因在E．coli中表达，经分离纯化得到高纯度表达产物，为进一步应用于SARS-Coy感染检测打下基础。     

浙江象山首例发热伴血小板减少综合征的流行病学调查

近年来,河南、湖北、山东、安徽等省相继发现并报告一些以发热伴血小板减少为主要表现的感染性疾病病例,其中少数重症患者可因多脏器损害,救治无效死亡.该病由蜱叮咬感染新型布尼亚病毒(SFTSV)所致[1].浙江省于2011年也发现并确诊了首例SFTSV感染病例[2].2012年5月14日,象山县CDC接到象山县第一人民医院电话报告,称该院收治1例发热伴血小板减少为主要表现的患者.接到报告后,象山县CDC及时对该患者进行个案调查,采集患者血清经宁波市CDC检测和浙江省CDC复测,呈SFTSV核酸阳性,5月15日该患者被诊断为宁波市首例SFTSV感染引起的发热伴血小板减少综合征(SFTS)确诊病例.现将调查结果报告如下.     

2013年湖北省麻城市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒人群感染状况调查

目的调查评估麻城市人群中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)人群感染状况,为麻城市有效控制疫情提供流行病学线索。方法随机抽取麻城市3个乡镇健康人群血清共159人份,采用ELISA和Real time PCR检测发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒IgG抗体、IgM抗体和特异性核酸。结果 SFTSV-IgG抗体阳性率为5.03%,SFTSV-IgM和SFTSV-PCR全部阴性。结论麻城市是湖北省SFTSV的流行重点县市,需加强SFTSV的预防意识及快速诊断能力。     

新型布尼亚病毒安徽分离株全基因组测序分析

目的对安徽省两株新型布尼亚病毒进行全基因组序列测定,分析其全基因组序列的基因特征与变异特点。方法应用22对测序引物对病毒基因组进行RT-PCR分段扩增,PCR产物直接进行序列测定,ClustalW、DNASTAR、MEGA4.1等软件分析基因组序列。结果两株病毒全基因组编码情况和已报道新型布尼亚病毒相同,未见插入和缺失;构建系统发生树可见AHZ毒株与河南省毒株进化距离最近,而AHL毒株在一支较为独立的分支上;M片段膜蛋白前体编码区氨基酸变异率最高。结论安徽省新型布尼亚病毒毒株基因组相对稳定,可能存在与河南省毒株相互传播的现象。     

Antibodies against Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus in Healthy Persons,China, 2013

In June 2013, a subclinical infection with severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (SFTSV) was detected in Zhejiang Province, China, prompting seroprevalence studies in 6 districts within the province. Of 986 healthy persons tested, 71 had IgG antibodies against SFTSV. This finding suggests that most natural infections with SFTSV are mild or subclinical.     

发热伴血小板减少综合征研究进展

发热伴血小板减少综合征（sFTs）是近年来在我国部分地区相继出现的感染性疾病,以发热、血小板减少和多脏器功能损害为主要临床表现,死亡率达10％。目前已经证实其由发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）感染所致。该文就SFTS的临床特征、动物模型的发病机制研究和SFTSV的流行病学、检测方法及复制特点做一概述。     

应用Vero细胞分离新型布尼亚病毒

目的从不明原因发热伴血小板减少综合征患者血液中分离新型布尼亚病毒。方法应用Vero细胞培养法分离病毒,并用间接免疫荧光检测法(IFA)、实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)技术进行鉴定。结果从24份不明原因发热患者血液标本中分离出6株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。结论应用Vero细胞培养法可以直接从不明原因发热患者血液中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。     

济南市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒基因组特征分析

目的 分析济南市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus, SFTSV)基因组特征。方法 通过参考文献并对引物进行矫正,获得SFTSV全基因组序列。应用DNAstar 7.1、MEGA等软件对基因组序列进行基因位点、遗传进化、同源比对分析,建立L、M、S片段基因系统进化树。结果 成功获得7株济南市SFTSV全基因组序列,每株分离株基因组全长均为11 490 bp,其中L片段6 368 bp,M片段3 378 bp,S片段1 744 bp。济南市SFTSV属C基因型C3分支。与湖北、河南及山东省泰安和青岛市基因序列同源性高,呈现出明显地域性特点。核苷酸变异以碱基转(颠)换为主,2018年SFTSV分离株共存在0.03%氨基酸突变位点,2019年存在0.02%氨基酸突变位点,2020年存在0.11%氨基酸突变,2020年较2018、2019年明显增多。 结论 利用测序方法测定的济南市SFTSV,其基因组序列分析表明与我国流行的SFTSV相近,氨基酸序列突变有增多趋势,需密切关注其致病力、毒力及传播力的改变。     

Prevalence of SFTSV among Asian House Shrews and Rodents,China, January–August 2013

To evaluate the role of small mammals as hosts of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (SFTSV), we tested serum samples from rodents and shrews in China, collected in 2013. SFTSV antibodies and RNA were detected, suggesting that rodents and shrews might be hosts for SFTSV.