大鼠激素性坏死股骨头Runx2、Osterix表达的变化

目的：研究大鼠激素性坏死股骨头内Runx2、Osterix基因表达和蛋白合成动态变化,探讨与骨合成代谢的关系。方法：用臀肌注射糖皮质激素和强迫负荷运动的方法制作股骨头坏死大鼠模型,HE染色确定模型诱导成功,提取大鼠股骨头内总RNA及总蛋白,行实时荧光定量PCR及Western blot检测,研究激素性股骨头坏死时股骨头内Runx2、Osterix基因表达、蛋白合成的动态变化。结果：造模8、10、12周时,模型组大鼠股骨头内Runx2和Osterix基因表达、蛋白合成较正常组减少,两者mRNA的表达量分别为正常组的0.9621、0.3259、0.0512和0.9661、0.2026、0.0194倍,且随时间推移两者的基因表达、蛋白合成呈下降趋势。结论：激素性股骨头坏死早期,股骨头内Runx2、Osterix mRNA表达和蛋白合成降低,抑制骨形成。     

激素相关性股骨头坏死股骨头内VEGF和BMP-2的表达

[目的]研究兔激素相关性股骨头坏死股骨头内血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）基因表达的动态变化特点。[方法]用LPS（10μg／kg体重）间隔24h两次静注加MPS3次肌注的方法制作的兔股骨头坏死模型，设计兔相关的探针和引物，通过免疫组化、原位杂交并直接提出股骨头内总RNA进行实时荧光定量PCR，研究不同时相点兔坏死股骨头内VEGF和BMP-2基因表达的动态变化特点。[结果]在造模至第4、8、12、16周时，股骨头内VEGF和BMPl2基因的表达免疫组化、原位杂交结果均为阴性；实时荧光定量PCR结果发现表达量均远低于空白对照组。[结论]在LPS加MPS制作的兔股骨头坏死模型中，股骨头内的VEGF和BMP12基因表达均受抑制。     

恒古骨伤愈合剂对激素性坏死股骨头内VEGF基因表达的影响

目的：研究中药恒古骨伤愈合剂对兔坏死股骨头内VEGF基因表达的影响。方法：成年新西兰大白兔分为4组：A组（空白对照组），B组（正常兔服用恒古骨伤愈合剂），C组（造模后不喂恒古骨伤愈合剂），D组（造模后喂恒古骨伤愈合剂），每组24只。以大肠杆菌内毒素（LPS）（10μg／kg体重）间隔24h静注2次加甲基强的松龙（MPS）肌注3次制作兔股骨头坏死模型后，B组和D组用恒古骨伤愈合剂，A组和C组用等量生理盐水，按计算出的药量灌胃，1次／2d。于喂药至第4、8、12周时取股骨头行免疫组化、原位杂交并提取总RNA行实时荧光定量PCR，动态观察兔股骨头内VEGF基因表达的变化特点。结果：喂药至第4、8周时，比较D组与C组股骨头内VEGF基因表达量的差别无统计学意义。喂药至第12周时，D组与C组股骨头内VEGF基因表达量的差别具有统计学意义（P=0．042〈0．05）。B组与A组比较差别无统计学意义。结论：LPS加MPS制作的兔股骨头坏死模型中股骨头内VEGF基因表达受抑制。中药恒古骨伤愈合剂可促进坏死股骨头内源性VEGF基因的表达，以用药时间长者效果明显。恒古骨伤愈合剂对正常兔股骨头内VEGF基因的表达无影响。     

hVEGF165及hBMP-7共表达重组腺相关病毒载体对兔激素性股骨头坏死的修复作用研究

目的探讨hVEGF165及hBMP-7双基因共表达重组腺相关病毒载体对兔激素性股骨头坏死的修复作用。方法应用细菌脂多糖联合甲基强地松龙制备兔激素性股骨头坏死模型。30只经MRI筛选造模成功动物随机分为模型组、髓芯减压组和病毒治疗组。病毒治疗组动物于髓芯减压术后将rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7病毒载体注入减压区内。选取病毒注射后12周时间点分别行核素骨扫描,股骨头大体观察、HE染色、VEGF和BMP免疫组化染色检测。结果 MRI检测、大体观察以及HE染色发现早期股骨头坏死动物模型建立成功,且病毒治疗组较髓芯减压组及模型组相比股骨头坏死表现明显减轻,VEGF及BMP表达增强,髓腔组织代谢旺盛,组间差别有统计学意义（P〈0.05）。结论重组腺相关病毒载体rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7通过增加髓腔组织的血运、增强股骨头区骨组织质量提高激素性股骨头坏死区骨修复能力。     

激素性股骨头坏死与髋关节骨关节炎患者离体标本相关因子表达水平的比较研究

目的探讨激素性股骨头坏死与髋关节骨关节炎患者股骨头标本内PPARγ、Runx2、DKK-1表达水平的差异性。方法选取于四川大学华西医院骨科因股骨头坏死和髋关节骨关节炎行全髋关节置换术患者共40例,其中激素性股骨头坏死（A组）和髋关节骨关节炎（B组）患者各20例。经患者及家属同意后收集该40例患者所置换的股骨头标本进行HE染色及免疫组化检测PPARγ、Runx2、DKK-1三因子表达水平。结果 A组患者股骨头标本HE染色显示空骨陷窝率均大于50%,符合股骨头坏死病理诊断标准;免疫组化结果显示PPARγ、DKK-1因子大量阳性表达,其中PPARγ阳性表达面积百分比约13%,DKK-1阳性表达面积百分比约53%,而runx2极少阳性表达,阳性表达面积百分比约2%。而骨关节炎组患者股骨头标本HE染色显示较少空骨陷窝。免疫组化结果显示PPARγ、DKK-1少量阳性表达,其中PPARγ阳性表达面积百分比约2%,DKK-1阳性表达面积百分比约4%,而Runx2大量阳性表达,阳性表达面积百分比11%左右。结论 PPARγ和DKK-1两因子在A组表达水平显著高于B组,而Runx2则在骨关节炎组表达水平显著高于A组,均具有显著统计学意义（P〈0.05）。PPARγ、DKK-1、Runx2三因子属于调控骨髓基质细胞向成骨细胞和脂肪细胞分化以及骨吸收的重要调控因子。因此,激素性ONFH发生可能是通过影响骨髓基质细胞代谢失衡导致ONFH的发生,主要为通过增加PPARγ表达量减少Runx2表达量使骨髓基质细胞向脂肪细胞分化增加而向成骨细胞分化减少,同时破骨细胞活性增强,骨坏死修复作用减弱,最终导致ONFH发生。     

健骨方对兔激素性股骨头坏死股骨头局部过氧化物酶体增殖物激活受体的影响

目的:健骨方是临床上治疗激素性股骨头坏死的经验方,具有补肾活血、健脾化痰作用,主要由何首乌、泽泻、山楂、骨碎补、枸杞子、黄芪、地黄、丹参、当归、党参、女贞子、甘草等药物组成,本研究旨在探讨其对激素性股骨头坏死兔股骨头局部PPARγ影响。方法:以18只健康SPF级新西兰家兔为研究对象,随机分成空白对照组、模型组、健骨方组。健骨方组予灌胃健骨方混悬液,每公斤体重10ml,含生药0.719g/ml;其余灌胃生理盐水,每公斤体重10ml。3周后肌注甲泼尼龙珀酸钠,40mg/kg,继续常规饲养3周后测定股骨头局部糖皮质激素水平、PPARγ以及造模前后血浆糖皮质激素水平。结果:造模前血浆糖皮质激素水平组间差异无统计学意义(P=0.301)。3周后,与空白对照组比较,模型组血浆糖皮质激素水平升高(P=0.001);与模型组比较,健骨方组血浆糖皮质激素水平降低(P=0.001)。股骨头局部糖皮质激素含量,与空白对照组比较,模型组明显升高(P=0.001);与模型组比较,健骨方组降低(P=0.001)。股骨头局部PPARγ含量,与空白对照组比较,模型组升高(P=0.018);与模型组比较,健骨方组降低(P=0.033)。结论:健骨方可能通过降低PPARγ含量抑制股骨头局部成脂分化,达到防治激素性股骨头坏死的作用。     

华山壮骨散对激素性股骨头坏死大鼠BMP/Smad/UPP通路的作用机制

目的基于BMP/Smad/UPP通路探讨华山壮骨散对糖皮质激素性股骨头坏死大鼠的作用机制。方法将SD大鼠分成5组:A组为正常组,B组为模型组,C组为阳性对照药壮骨关节丸组,D、E组为华山壮骨散高剂量组、低剂量组,A组不做任何处理,B、C、D、E组均注射醋酸泼尼松龙20 mg/kg,每周两次,复制糖皮质激素性股骨头坏死动物模型;A、B组给予生理盐水灌胃,C、D、E组分别给予相应药物灌胃治疗。10周后分别取大鼠股骨头、肾脏进行RT-PCR检测并分析;检测BMP/Smad/UPP通路中BMP4、Smad4、Smurf1、Smurf2的mRNA表达。结果各组大鼠BMP4、Smad4、Smurf1和Smurf2的mRNA均有表达,与正常组相比,模型组各项指标显著降低(P0.05),提示糖皮质激素性股骨头坏死的发病机制与BMP/Smad/UPP通路的异常密切相关;与模型组相比,实验高剂量组股骨头和肾组织BMP4、Smad4、Smurf1、Smurf2的mRNA表达均明显增加(P0.05);壮骨关节丸组股骨头中BMP4、Smurf1、Smurf2表达明显增加(P0.05)。结论华山壮骨散通过提高模型大鼠股骨头和肾组织BMP4和Smad4 mRNA表达,上调Smurf1和Smurf2 mRNA表达,从而达到防治糖皮质激素性股骨头坏死的目的。     

激素性股骨头坏死病程中股骨头局部VEGF mRNA表达的变化及意义

目的：探讨激素性股骨头坏死病程中股骨头局部血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA）表达的变化及意义，方法：新西兰大白兔36只，随机均分成正常对照组和模型组，每组18只。模型组用内毒素加激素注射造成股骨头坏死。两组动物分别于造模后6、10、14周各处后6只行股骨头组织学检查和VEGFmRNA原位杂交观察。结果：光镜观察示模型组股骨头骨小梁变细、空骨陷窝增加，成骨细胞数量减少，这些表现随着时间的推移逐渐加重，软骨下血窦计数减少，各时段均低于正常组，差异有显著性意义（P＜0．05或P＜0．01）。原位杂交显示，模型组兔的股骨头6周时血管周围有VEGFmRNA阳性表达，10例时血管、成骨细胞的表达逐渐减少，14周时稍有所增加，结论：股骨头坏死后血管修复能力下降，血管内皮细胞的功能受到破坏影响，增加股骨头局部VEGF可能有助于股骨头坏死的修复。     

TNFα和VEGF在激素性股骨头坏死中的变化

[目的]通过应用马血清、激素作用新西兰兔，诱导激素性股骨头坏死动物模型。分析TNFα、VEGF在激素性股骨头坏死中的作用。[方法]将20只健康新西兰兔随机分成2组，每组10只。A组为模型组。每只用马血清10ml／kg。经兔耳缘静脉注射。间隔2周，按5ml／kg剂量连续2d注射马血清各1次。间隔2周后，注射醋酸泼尼松龙。按7．5mg／kg腹腔注射3次。B组：正常对照组。动物注射激素5周后，采血，应用ELISA法测血清中TNF-α浓度。处死模型组，标本进行常规组织病理学检查，免疫组化分析股骨头VEGF的表达。[结果]模型组兔血清TNF-α浓度明显高于正常组（P〈0．01）。组织病理学检查显示：部分血管栓塞。骨髓腔内造血组织明显减少。免疫组化结果显示：骨细胞及骨髓组织VEGF表达明显减少。[结论]血清中TNF-α浓度升高及股骨头骨髓组织VEGF表达减少可能是激素性股骨头坏死发生的重要因素。     

hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞体内移植后hBMP-2的活性检测

目的 探究人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein-2 ,hBMP-2)基因植人兔股骨头坏死模型体内后的活性，为后续实验奠定理论基础。方法 1.采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2.将造模成功的兔子随机分为A、B、C3组（n = 12) ,A组不植人材料，为对照组，B、C组分别植人DBM/BMSCs、hBMP-2/BMSCs/DBM；3.术后第1、第2、第3 周各组分别处死4只兔子，分别运用PCR、RTFQ-PCR、Western Blot检测股骨头内hBMP-2基因和蛋白的表达量，评估hBMP-2 基因在兔体内的活性。结果 植人后，在第1、第2、第3周，PCR结果示：A、B两组KBMP-2基因呈阴性表达，C组hBMP-2基因呈阳性表达；RTFQ-PCR 示：C 组相对表达量分别为 1，0.947 ±0.025,0.895 ±0.059, P = 0. 081； Western blot 示：A、B 两组 hBMP-2蛋白在兔体内呈阴性表达,C组hBMP-2蛋白呈阳性表达；凝胶成像系统分析显示：C组hBMP-2蛋白表达灰度值（目的/内参）分别为：0. 530 ± 0. 056、0. 507 ± 0. 066、0. 475 ±0. 086，且两两之间比较P> 0. 05。结论 hBMP-2基因转染BMSCs植人兔股骨头坏死模型体内后能够稳定表达，进而能够持续诱导BMSCs向骨细胞分化,达到修复股骨头坏死的目的。     

活血通络方加不同引经药对股骨头坏死兔成骨相关因子的影响

目的:观察活血通络方配伍不同引经药对股骨头坏死兔血清骨钙素(BGP)、骨形态发生蛋白-2(BPM-2)含量及股骨头BMP-2mRNA表达的影响,探讨其防治股骨头坏死的作用机制。方法:健康雄性日本大耳白兔98只,体重2.2～2.8kg。84只兔经液氮冷冻左侧股骨头法建立股骨头坏死模型后,随机分为6组,每组14只:模型组,活血通络方组,以及活血通络方分别加牛膝、独活、细辛、桔梗组(分别简称活骨、牛膝、独活、细辛、桔梗组)。另外14只设为伪手术组。造模后药物组分别给予相应的中药,模型和伪手术组给予生理盐水灌胃,所有动物皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(30μg·kg-1·d-1,连续7d)。实验2、4周时分别取材,放射免疫法和酶联免疫法分别检测血清BGP和BMP-2含量,左侧股骨头行苏木精-伊红染色观察组织病理学改变,原位杂交法检测BMP-2mRNA表达。结果:与伪手术组相比,模型组股骨头空骨陷窝率显著增多,2周时血清BGP升高,4周时血清中BMP-2含量及股骨头BMP-2mRNA降低。与模型组相比,活骨组空骨陷窝率降低,2、4周时血清BGP、BMP-2含量及股骨头BMP-2mRNA的表达均升高。与活骨组比较:牛膝组4周时空骨陷窝率显著减少,血清BGP、BMP-2及股骨头BMP-2mRNA升高;桔梗组空骨陷窝有降低趋势,且2、4时周血清BGP降低,2周时血清BMP-2降低,4周时股骨头BMP-2mRNA降低;独活组2周时血清BMP-2含量和股骨头BMP-2mRNA的表达升高;细辛组各项指标未见明显改变。结论:引经药牛膝可以进一步提高活血通络方上调血清BGP、BMP-2含量和股骨头内BMP-2mRNA表达的作用,这可能是其促进骨成有效防治股骨头坏死的机制之一。     

重组腺相关病毒介导 VEGF 和 BMP 双基因共表达对兔早期激素性股骨头坏死的修复作用

 目的 探讨重组腺相关病毒介导 VEGF 和 BMP 双基因共表达对兔早期激素性股骨头坏死的修复作用。方法制备兔早期激素性股骨头坏死模型,经 MRI 筛选的成模动物随机分为 rAAV-IRES-hrGFP（AAV-GFP）、rAAV-hVEGF₁₆₅- IRES-hrGFP（AAV-VEGF）、rAAV-hBMP-7-IRES-hrGFP（AAV-BMP）及 rAAV-hVEGF₁₆₅-IRES-hBMP-7（AAV-VEGF/BMP）四组。通过髓芯减压手术分别将四种重组腺相关病毒载体直接注射入各组髓芯减压区内（25 μl/侧）。注射 12 周后分别应用 Western blot 检测、HE 及免疫组织化学染色、MR 检查、核素骨扫描、股骨头血管墨汁灌注冰冻切片、Micro-CT 及股骨头生物力学检测等方法综合评估重组腺相关病毒载体对兔早期激素性股骨头坏死的修复作用。结果 兔早期激素性股骨头坏死模型成模率可达 73.33%。病毒注射 12 周后,rAAV-hVEGF₁₆₅-IRES-hBMP-7 载体有效表达 hVEGF₁₆₅及 hBMP-7 基因,并产生 hVEGF₁₆₅及 hBMP-7 目的蛋白;体内表达的 hVEGF165 目的蛋白通过增加股骨头内新生血管数量改善血供,促进了骨坏死区组织代谢;体内表达的 hBMP-7 目的蛋白通过增加股骨头区骨矿物质密度,促进髓芯减压后骨生成。AAV-VEGF/ BMP 组重组腺相关病毒载体较 AAV-VEGF 组及 AAV-BMP 组更有效地提高了兔早期激素性股骨头坏死的修复效果。结论 hVEGF₁₆₅和 hBMP-7 双基因共表达重组腺相关病毒载体通过增加股骨头的血供及增强股骨头骨质量,对兔早期激素性股骨头坏死具有良好的修复作用。     

雷奈酸锶对大鼠激素性股骨头坏死的作用及其机制研究

[目的]研究雷奈酸锶对大鼠激素性股骨头坏死的作用及其机制。[方法]将60只Wistar大鼠采用激素造模法造模(每日腹腔注射强的松20 mg/kg,连续注射4周,同时灌胃阿莫西林溶液预防感染)。造模成功的大鼠随机分为对照组和实验组,对照组(生理盐水组)30只大鼠给予灌胃生理盐水;实验组(雷奈酸锶组)30只大鼠给予灌胃雷奈酸锶干预(900 mg/kg·d)。干预12周后处死大鼠取材,行HE、油红O染色;免疫组织化学染色检测两组股骨头内DKK-1、Wnt3a、GSK-3β、β-catenin、Rux-2及PPAR-γ2等表达水平。[结果]通过计算骨小梁空骨陷窝率得出对照组与实验组大鼠股骨头坏死发生率分别为66.67%(20/30)和56.67%(17/30)(P<0.05)。同时与对照组相比,给予雷奈酸锶干预的实验组脂肪细胞数量明显减少且其体积明显减小(P<0.05);免疫组织化学法结果显示实验组大鼠股骨头内DKK-1、PPARγ2的表达明显低于对照组,而实验组大鼠股骨头内Wnt3a、GSK-3β、β-catenin、Rux-2的表达明显高于对照组(P<0.05)。[结论]雷奈酸锶可以通过抑制大鼠激素性股骨头坏死模型的DKK-1过表达,激活经典Wnt信号通路,进而促进成骨分化及成骨活性,抑制其成脂分化,在一定程度上防治早期激素性股骨头坏死的发生和发展。     

坏死状凋亡通路抑制剂在兔早期激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨坏死状凋亡及其抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)在兔早期激素性股骨头坏死中的作用机制,为股骨头坏死的研究提供新的理论依据。方法选取84只健康成年新西兰兔,雌雄不限,体重(2.9±0.3)kg,适应性喂养1周。选择60只采用激素联合脂多糖法构建早期激素性股骨头坏死模型,其余24只为空白对照模型。造模6周后MRI对动物模型进行筛选,50只发生早期股骨头坏死,选2只进行病理学观察,其余48只利用简单随机数法随机平均分为模型组和治疗组,治疗组给予每日1.65 mg/kg剂量静脉注射Nec-1,模型组和空白对照组按同剂量每日注射生理盐水,给药后分别于2、4、8周三个时间点处死动物并取双侧股骨头标本,通过大体观察、HE染色及透射电镜观察骨坏死情况;免疫组化及Western Blot检测受体相互作用蛋白1(RIP-1)的蛋白表达情况。利用单因素方差分析比较三组不同时间点空骨陷窝率,利用Quantity One半定量分析各组及同一组不同时间点蛋白表达情况,利用Image Pro Plus对免疫组化各组及同一组不同时间点平均蛋白吸光度行半定量分析,对半定量结果行单因素方差分析。结果兔早期股骨头坏死模型成模率83.3%。Nec-1治疗组在不同时间点的透射电镜下形态学改变及平均空骨陷窝率较模型组均改善(t值分别为2.41,2.43,4.13,P均小于0.05),但均劣于空白组(t值分别为8.42,8.80,11.38,P均小于0.05);免疫组化半定量分析示RIP-1表达治疗组与模型组相比在第2周,第4周,第8周均有统计学差异(t值分别为6.28,4.00,2.35;P均小于0.05)。Western Blot电泳结果提示RIP-1蛋白表达趋势与免疫组化结果相同,半定量分析示治疗组与模型组在第2周,第4周,第8周RIP-1表达有统计学差异(t值分别为6.89,3.69,2.50;P均小于0.05)。结论坏死状凋亡参与激素性股骨头坏死的发生,Nec-1通过对坏死状凋亡抑制从而对激素性股骨头坏死有一定的保护作用。     

siRNA腺病毒载体预防兔酒精性股骨头坏死的动物实验研究

目的观察靶向PPARγ基因siRNA腺病毒载体预防兔酒精性股骨头坏死（ONFH）的作用效果。方法新西兰种家兔60只,随机分为5组,每组12只。正常对照组（N）：采用灌胃法,给予10％葡萄糖溶液10ml／（kg·d）;单纯马血清致敏组（H）：马血清致敏后,给予同量10％葡萄糖灌胃,作为对照;马血清致敏＋酒精组（M）：马血清致敏后,采用灌胃法,给予烈性白酒（含酒精46％,V／V）10ml／（kg·d）,作为模型组;酒精＋空载体组（CO）：马血清致敏后灌酒,将空载体组病毒滴液注入动物一侧股骨头内;马血清致敏＋酒精＋重组腺病毒组（S）：实验组,马血清致敏后灌酒,将siRNA腺病毒滴液注入动物一侧股骨头内。在灌酒后第4、8周末分批处死动物,观察其股骨头病理学变化。RT—PCR检测股骨头组织中PPARγ mRNA和Osteocalcin mRNA的表达。结果M、CO组中,PPAγ mRNA高表达,Osteocalcin mRNA低表达,空骨陷窝百分比及最大脂肪细胞平均直径明显增大、骨小梁面积分数降低,与N、H组相比差异均有统计学意义;S组中,PPARγ mRNA低表达,Osteocalcin mRNA高表达,空骨陷窝百分比、最大脂肪细胞平均直径、骨小梁面积分数均与H、N组接近,差异均无统计学意义。结论靶向PPARv基因siRNA腺病毒载体能够有效阻断酒精诱导的家兔股骨头内骨髓基质细胞内PPAγ mRNA表达及成脂分化,预防酒精性ONFH的发生。     

不同应力刺激下犬坏死股骨头自然修复过程的研究

目的探讨不同负重后股骨头内不同应力环境对犬股骨头缺血性坏死修复的相关性。方法比格犬27只,2（4侧）只作为正常对照组,1只在液氮冷冻双侧股骨头造模后两周检测股骨头坏死情况,确定造模成功,其余24只随机分组,建立不同应力环境的坏死股骨头模型,A组6只（12髋）高应力模型：建立双侧液氮冷冻股骨头坏死模型,并随机固定犬一侧前肢腕掌关节,增加在活动中后肢触地时间和地面反力的模型;B组6只（12髋）中等应力模型：建立双侧液氮冷冻的坏死股骨头,不固定肢体;C组12只（12髋）低应力模型：建立单侧股骨头坏死模型,并限制该侧后肢膝关节使其不能触地负重。所有试验动物均每天正常活动30分钟,分别于术后4周、8周、12周对股骨头行组织学观察、力学抗压强度及骨密度测定。结果组织学观察结果、力学强度及骨密度测定结果显示C组在坏死骨修复和成骨方面较A组略高,但差异无统计学意义（P〉0.05）,B组都较同时期的A、C两组明显增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论坏死股骨头在修复过程中给予适当的应力刺激后,股骨头的抗压强度、骨密度都有明显的提高,组织学观察也有明显的改善,适当的应力刺激有利于骨组织的修复。     

骨保护素/骨保护素配体在大鼠创伤性股骨头坏死中的表达及意义

[目的]探讨大鼠创伤性股骨头坏死模型中OPG/OPGL蛋白表达及意义。[方法]6个月龄SD大鼠32只,雌雄不限。分组:实验组按术后1、2、4、6周4个时间点将动物随机分成4组,每组8只。对照组采用自身非实验侧股骨头做正常对照。采用圆韧带离断方法制备大鼠创伤性股骨头坏死动物模型;分别于术后1,2,4,6周处死动物。光镜下观察股骨头坏死病理形态学改变;采用CM IAS真彩色医学图像分析系统检测骨髓腔内脂肪组织与造血组织比值并计数骨组织内空骨陷窝百分率;免疫组化技术检测OPG/OPGL蛋白在股骨头坏死组织中的表达。[结果]成功的复制出大鼠股骨头坏死进展期模型,呈现出典型股骨头坏死不同时期病理改变;股骨头坏死不同时期实验组空骨陷窝百分率高于对照组(P0.05);实验组骨髓腔内脂肪组织与造血组织的面积比值高于对照组(P0.05);免疫组化检测结果显示实验组OPG蛋白在股骨头坏死不同时期表达的光密度值(OD值)均明显低于对照组(P0.05);OPGL蛋白表达高于对照组(P0.05)。[结论](1)本实验成功复制了大鼠股骨头坏死模型并在一定程度上反映了股骨头坏死的病理变化过程;(2)股骨头坏死局部OPG、OPGL表达水平与病变严重程度密切相关,OPG表达随病程的延长逐渐降低;而OPGL表达水平则相反。提示OPG的过度表达可抑制破骨细胞功能,减少骨吸收;反之则促进骨吸收。如能提高坏死局部OPG浓度可以抑制骨丢失,将有助于股骨头修复,可能为股骨头坏死的早期治疗提供新方法。     

激素诱发股骨头坏死动物模型的形态及影像学观察

目的:使用大剂量激素建立兔激素性股骨头坏死模型。方法:成年日本大耳白兔32只,随机分为模型组(16只)与对照组(16只)。模型组每周2次肌肉注射醋酸泼尼松龙10mg/kg,对照组每周2次肌肉注射生理盐水,每只2ml,共6周。观察实验后第2、4、6周两组动物股骨头光镜及透射电镜组织病理学变化。结果:模型组股骨头骨质疏松,光镜下空骨陷窝数增多,脂肪细胞数增多,透射电镜股骨头部分骨细胞体积缩小,核暗变性,较多骨细胞已坏死溶解成碎片。结论:大剂量激素可导致兔股骨头缺血性坏死。     

富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响

目的研究富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响。方法随机将40只新西兰兔随机分为模型组、富血小板血浆(3%)组、骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组、富血小板血浆(3%)+骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组。建立兔股骨头坏死模型,术后4w分别向各组股骨头内髓芯减压后注射富血小板血浆、骨髓间充质干细胞。另设空白组10只新西兰兔。空白组与模型组不注射任何物质作为对照。造模后第14周,取材。通过HE染色观察兔股骨头骨髓腔内的病理学及骨陷窝空缺率变化情况。酶联免疫(ELISA)法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平的变化。结果与模型组相比,各治疗组骨髓腔内骨小梁变粗,脂肪细胞减少,骨细胞增多,骨陷窝空缺率降低(P0.05);各治疗组兔血清VEGF的含量增加,股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平提高。结论富血小板血浆与骨髓间充质干细胞可调节BMP-2/Smads信号通路,促进股骨头骨细胞增殖,减少骨陷窝空缺率。