骨肉瘤组织FLIP和FADD及Caspase-8蛋白表达与细胞凋亡相关性的研究

目的:探讨FLIP、FADD和Caspase-8在人骨肉瘤组织及骨软骨瘤组织中的表达及其与骨肉瘤细胞凋亡的关系.方法:应用免疫组化法检测FLIP、FADD和Caspase-8蛋白在43例骨肉瘤组织及30例骨软骨瘤组织中的表达,并经图像分析系统检测FLIP、FADD和Caspase-8蛋白的平均光密度(OD)值.用激光扫描共聚焦显微镜检测骨肉瘤及骨软骨瘤中细胞凋亡分布情况并对各因子之间进行相关性分析.结果:FLIP蛋白阳性物质在骨肉瘤中的表达高于骨软骨瘤,P<0.05;而FADD 和 Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的表达低于骨软骨瘤,P<0.05.FLIP和Caspase-8蛋白在骨肉瘤中表达呈负相关,r=-0.843,P<0.05;而FLIP、FADD蛋白在骨肉瘤中表达无相关性.骨肉瘤组细胞凋亡指数(AI) 显著低于骨软骨瘤组,P<0.05;FLIP蛋白表达与细胞凋亡指数呈负相关,r=-0.726,P<0.05;而Caspase-8蛋白表达与骨肉瘤细胞凋亡呈正相关,r=0.446,P<0.05; FADD蛋白表达与与凋亡指数无相关性.结论:FLIP蛋白对骨肉瘤细胞凋亡有抑制作用,Caspase-8蛋白在骨肉瘤中呈低表达,抑制了肿瘤细胞凋亡.如能抑制FLIP的表达,促进Caspase-8的表达,可提高骨肉瘤细胞对凋亡的敏感性.     

骨保护素/骨保护素配体（OPG/OPGL）在骨髓基质干细胞复合同种骨修复骨缺损中的表达及意义

目的 探讨OPG/OPGL蛋白在骨髓基质干细胞（BMSCs）复合同种骨移植修复大鼠桡骨缺损中的表达及意义.方法 4周龄SD大鼠BMSCs体外分离培养,取生长状态良好的第3代细胞复合同种骨.同时取8周龄SD大鼠32只,雌雄不限,制备大鼠双侧桡骨中段5mm节段性骨缺损模型.采用自身对照的方法 ,一侧植入BMSCs及同种异体骨颗粒复合物作为实验组;另一侧植入等量单纯同种异体骨颗粒作为对照组.按术后2、4、8、12周4个时间点（每个时间点8只）处死动物并立即于骨缺损部位取材,大体及组织学观察、免疫组织化学（PV法）检测OPG、OPGL蛋白的表达.免疫组化所得数据经计算机图像分析系统计算其平均光密度值（OD值）.结果 术后各时间点大体形态与组织学观察：实验组骨缺损修复速度均明显优于对照组;OPG蛋白免疫组化结果 显示：2、4、8周实验组OPG的表达高于对照组（P＜0.05）,而12周时两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;OPGL蛋白免疫组化结果 显示：2、4周实验组OPGL的表达高于对照组（P＜0.05）,而8、12周时两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 骨缺损修复区OPG、OPGL蛋白表达水平与骨修复愈合程度密切相关.OPG蛋白表达升高,其成骨作用加强, 而OPGL蛋白表达则相反.提示OPG的高表达可促进骨愈合,减少骨吸收;反之则促进骨吸收.     

TRAIL、Ki-67蛋白在人骨肉瘤中表达及其与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系

目的:通过观察TRAIL、Ki-67在人骨肉瘤组织中的表达规律及其相互关系,探讨二者与骨肉瘤细胞增殖、凋亡的相关性.方法:用免疫组织化学方化法检测TRAIL、Ki-67蛋白在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达,用TUNEL方法通过激光扫描共聚焦显微镜检测骨肉瘤及骨软骨瘤组织中的细胞凋亡分布情况并计算增殖和凋亡指数.结果:骨肉瘤组织TRAIL蛋白表达强度低于骨软骨瘤(t=-5.51,P＜0.05);而Ki-67蛋白表达高于骨软骨瘤(t=17.69,P＜0.05).TRAIL和Ki-67在骨肉瘤中的表达呈负相关(r=-0.8444,P＜0.01).骨肉瘤中细胞凋亡指数(AI)显著低于骨软骨瘤(P＜0.01);而增殖指数(PI)显著高于骨软骨瘤(P＜0.01).骨肉瘤中Ki-67蛋白表达与细胞凋亡指数之间呈负相关(r=-0.562 2,P＜0.01);而TRAIL蛋白表达与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.6350,19<0.01),而与增殖指数呈负相关(r=-0.553 0,19<0.01).结论:TRAIL参与细胞凋亡的调控,可能是诱导骨肉瘤细胞凋亡的分子基础之一;Ki-67在肿瘤细胞的增殖与凋亡中具有重要作用,骨肉瘤组织中Ki-67明显过表达,而TRAIL蛋白表达明显下调,表明两者在骨肉瘤的发生、发展中起拮抗作用.如能抑制Ki-67的表达,促进TRAIL的表达,有可能提高骨肉瘤细胞的凋亡敏感性.     

医学领域的新型骨科植入材料-多孔钽

一种新型的多孔生物材料-多孔钽解决了一些传统的骨科植入材料使用的局限性及弊端,如低孔隙率、低摩擦系数、应力遮挡等。基础研究及临床研究显示,钽材料是一种具有良好生物相容性、耐腐蚀性和较高摩擦系数的多孔生物材料。目前已在骨科领域中得以应用。如脊柱融合、人工髋膝关节、股骨头缺血性坏死等手术中,并取得了令人鼓舞的临床效果。然而,仍需要进一步研究证实多孔钽在基础理论中的优势及在临床的应用,以达到在临床上长期生物固定的作用。本文对多孔金属钽的物理、化学性质,体内、外生物学特性以及在临床中的应用作一综述。     

基质金属蛋白酶9及TGF-β_1 mRNA和蛋白在骨关节炎中的表达

目的 TGF-β1对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨起保护作用,探讨OA中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的相关性,为临床治疗OA寻找有效的干预靶点提供理论依据。方法取自愿捐赠的关节软骨及滑膜标本,其中OA患者60例(实验组),外伤截肢、交叉韧带断裂、盘状软骨损伤与半月板损伤患者20例(正常对照组)。行HE染色观察关节软骨与滑膜的病理组织学改变,免疫组织化学染色观测MMP-9及TGF-β1蛋白表达,原位杂交技术检测MMP-9及TGF-β1 mRNA表达;并进行相关性分析。结果 HE染色显示实验组关节软骨细胞固缩、坏死、排列紊乱,细胞外基质断裂,关节滑膜细胞肥大增生、淋巴细胞和单核细胞浸润,多数小血管增生;正常对照组软骨细胞排列整齐、基质染色均匀,滑膜组织无慢性炎症表现、无明显增生。两组均可见MMP-9、TGF-β1 mRNA和蛋白阳性表达,阳性细胞包括软骨细胞、滑膜衬里层细胞及滑膜下层的血管内皮细胞、成纤维细胞、炎性浸润细胞等。实验组MMP-9及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P<0....     

异体冻干颗粒骨复合骨髓基质干细胞源性成骨细胞体外生物相容性研究

[目的]评价异体冻干颗粒骨体外生物相容性,为其作为骨组织工程支架材料的临床应用提供实验依据。[方法]4周龄SD大鼠,雌雄不限,采用全骨髓贴壁法体外培养骨髓基质干细胞(BMSCs),取生长状态良好的第3代BMSCs行成骨诱导培养并鉴定。制备异体冻干颗粒骨浸提液,将成骨诱导7d的BMSCs加入浸提液作为实验组,未加浸提液的为对照组,培养1、3、5d,采用MTT法检测异体冻干颗粒骨浸提液对细胞增殖的影响。成骨诱导7d的BMSCs按1×106/ml接种于异体冻干颗粒骨上,倒置相差显微镜、扫描电镜观察与其复合培养的细胞在材料上的生长情况;酶消化法消化复合于冻干颗粒骨上的成骨细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化。[结果]BMSCs成骨诱导7d,ALP染色示胞浆内可见阳性蓝染颗粒,胞核呈红色。MTT法检测结果显示细胞在浸提液中生长与增殖状态良好,实验组与对照组差异无统计学意义(P0.05);倒置相差显微镜可见颗粒骨表面粘附多数成骨细胞;扫描电镜观察可见细胞在材料表面粘附、伸展并能增殖、分泌产生细胞外基质;流式细胞术检测显示,异体颗粒骨对细胞周期无影响,实验组细胞均为正常2倍体细胞。实验组与对照组差异无统计学意义(P0.05)。[结论]异体冻干颗粒骨无细胞毒性并具有良好的组织细胞相容性,为其临床应用提供了实验依据。     

骨关节炎患者膝关节软骨和滑膜中p38MAPK、NF-κB的表达及其意义

①目的探讨骨关节炎（Osteoarthritis,OA）中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB（NF-κB）蛋白的表达及其意义。②方法采用免疫组织化学技术检测60倒OA患者及20例正常对照组膝关节软骨与滑膜中磷酸化p38（P-p38）、NF-κBp65的表选,并进行相关性分析。③结果P-p38、NF-κBp65蛋白在实验组阳性表达的积分光密度（IOD）值均显著高于正常对照组（P〈0．01）实验组P-p38及NF-κBp65蛋白表达成正相关（r=0．426,P〈0．01）。④结论p38MAPK及NF-κB信号转导通路在OA关节软骨和滑膜细胞中被激活,P-p38的高表达可能促进了NF-κB的表达,二者对OA的发生发展起重要作用。     

成骨细胞及血管内皮细胞复合同种异体颗粒骨治疗大鼠股骨头坏死

目的 探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)来源的大鼠同种异体成骨细胞(osteoblast,OB)及血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)与同种异体颗粒骨复合后治疗大鼠创伤性股骨头坏死(osteonecrosis of th...