血小板裂解液对大鼠骨髓间充质干细胞生长的影响

背景:血小板裂解液是将浓缩血小板进一步裂解后所获得的液体成分,含有多种生物活性因子.有研究认为血小板裂解液可促进成骨细胞的增殖,而其对骨髓间充质干细胞生物学功能的影响还不太了解.目的:探讨血小板裂解液对大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖的影响.设计、时间及地点:独立样本观察,于2007-09/2008-01在山西省医用组织库完成实验.材料:清洁级成年健康Wistar大鼠8只.方法:取2只大鼠股骨,全骨髓培养法传代扩增骨髓间充质干细胞.自6只大鼠心内采血,采用3次离心结合反复冻融法制备血小板裂解液.取第5代骨髓间充质干细胞,以含10%胎牛血清的L-DMEM/F12作为基础培养基组,在此基础上分别加入血小板裂解液至终浓度为1%和5%作为条件培养基组.主要观察指标:ELISA法测定血小板裂解液中生长因子含量.CASY细胞分析仪计数活细胞.双缩脲法全自动生化分析仪检测细胞总蛋白含量.倒置显微镜动态观察细胞形态变化与生长状况.结果:[1]血小板裂解液中的血小板衍生生长因子、转化生长因子B 1、胰岛素样生长因子1和血管内皮细胞生长因子含量分别为(300±30), (140±25), (80±35), (70±20)ng/L.[2]自培养第3天开始,条件培养基组活细胞数均明显高于基础培养基组(p<0.05),且含5%血小板裂解液的条件培养基组升高幅度尤为显著,于第3天达到对数生长期,比基础培养基组提前约1d,细胞总数在第4,9天时达基础培养基组的近3倍.[3]培养1周后条件培养基组每106个细胞中的总蛋白含量均显著高于基础培养基组(P<0.05).[4]骨髓间充质干细胞在不同浓度血小板裂解液培养条件下,细胞形态基本一致,多为长梭形,类似于成纤维细胞.结论:血小板裂解液是多种生长因子的承载体系,具有丝裂原功效,可在体外促进大鼠骨髓间充质干细胞的生长增殖,且该效应存在一定程度的剂量依赖性.     

血小板裂解液在骨组织工程中的应用

 背景：以血小板裂解液修复骨缺损不仅去除了残余细胞结构,降低了免疫原性,而且还保留了其中的多种生长因子,可为异体或异种移植创造条件。 目的：总结归纳有关对能促进骨生长的血小板裂解液相关研究及应用方式进行综述。 方法：以“tissue engineering, bone defect, gene therapy, growth factor”为检索词,检索PubMed数据库(2004-01/2011-01),以“血小板血浆,骨组织工程,血小板裂解液,生长因子”为检索词,检索CBM数据库(2004-01/2011-01)。文献检索语种为英文和中文。纳入血小板裂解液促进骨的再生和修复的文献,排除重复文献。 结果与结论：计算机初检得到340篇文献,根据纳入排除标准,对其中23篇文献进行分析。目前研究证实,血小板裂解液可促进骨髓基质干细胞和成骨细胞的增殖;与生物陶瓷或自体骨复合,可明显促进骨缺损的修复。合理应用血小板裂解液对骨的再生和修复具有重要意义。关键词：血小板裂解液;成骨细胞;骨缺损;细胞生长因子;骨组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.20.041     

骨移植的过去、现在和未来

目的 了解骨移植的过去、现在和未来发展趋势.方法 广泛回顾国内外近年骨移植领域的发展历程,明确未来发展趋势.结果 骨移植经历300多年漫长发展,现在已形成自体骨、异体骨、异种骨、人工合成骨和复合骨等多种骨移植形式,自体骨和异体骨移植仍占主要地位;未来骨移植将进一步优化材料设计,细胞、生长因子与各种支架材料复合构建理想复合骨移植材料,将成为重要发展方向.结论 实现快速骨整合和生理性骨重建是骨移植的发展趋势.     

压力保护支具在老年股骨粗隆间骨折术后康复训练中的应用

目的 观察带有压力传感保护装置(自主研发)的康复训练支具在骨折早期进行康复训练对骨折愈合的效果.方法 选取40例资料完整、符合条件的老年股骨粗隆间骨折行动力髋螺钉内固定术后患者,随机分为实验组和对照组各20例.实验组患者应用带压力传感器保护装置(自2008年5月开始研制带有压力传感保护装置的康复训练支具,2009年1月至2010年6月临床推广应用)的下肢康复训练支具,在术后不同时期,根据患者具体情况,由医师通过计算机调控支具应力阈值,按照预定的个性化康复计划,指导患者借助双拐进行负重行走康复训练.对照组采用传统的康复治疗方法.按照统一的标准评价骨折临床愈合和骨性愈合时间.结果 随访13.0～24.0周,平均17.6周.实验组临床愈合时间7.0～12.0周,平均9.1周;骨性愈合时间12.0～16.0周,平均13.7周.对照组临床愈合时间9.0～13.0周,平均11.3周;骨性愈合时间14.0～20.0周,平均16.6周.2组间骨折临床愈合时间和骨性愈合时间经独立样本t检验,结果显示2组间骨折临床愈合时间和骨性愈合时间差异均有统计学意义(t值分别为5.174、5.846,P均＜0.01).最终2组骨折均愈合,无骨折移位,无内固定物折断、松脱、失效等不良并发症.结论 应用带有压力传感保护装置的康复训练支具,在骨折早期由医师根据患者体重调控间断纵向应力刺激阈值,指导患者进行有效的量化的个性化康复训练,可以达到促进骨折愈合、缩短疗程、减少并发症目的.进一步证明在一定范围内间断的压应力刺激对骨折愈合有促进作用.

Abstract：

Objective To observe the effect of pressure-protective brace with pressure-sensitive device in the early stage rehabilitation training enhance bone healing, shorten the treatment course and reduce complications,a kind of independently developed pressure-protective brace with pressure-sensitive device was utilized with quantified discontinuous longitudinal stress stimulation under doctors' regulation according to procedure. Methods The pressure-protective brace with pressure sensitive device for rehabilitation training was developed in May 2008 ,and was applied in clinics during January 2009 to June 2010. Forty elder patients,with complete clinical data, underwent Dynamic Hip Screw (DHS) internal fixation of femoral intertrochanteric fracture were were enrolled into this study. These cases were assigned into experimental group and control group with 20 patients respectively. The patients of experimental group performed lower extremity rehabilitation training wearing the pressure-protective brace. The load training of lower extremities with double crutches was modulated by doctors through regulating the threshold value of pressure in different time and different condition after operation according to the prearranged rehabilitative plan of individuation. The controls were instructed to performed lower extremity rehabilitation training in traditional way. Both the clinical healing and bone union time in all cases were evaluated according to the uniform standard. Results Total 40 patients were followed up for 13.0 - 24. 0 weeks ( average, 17.6 weeks ). Clinical healing time was 7.0 - 12. 0 weeks ( average,9. 1 weeks ) and bone healing time was 12. 0 - 16.0 weeks(average,13. 7 weeks)in experimental group. While in control group,the clinic healing time and bone union time was 9. 0 - 13.0 weeks( average, 11.3 weeks) and 14. 0 -20. 0 weeks (average, 16. 6 weeks)respectively. The Independent T-test results showed that whether clinic healing time or bone healing time presented significant differences between experimental group and the controls( P＜0. 01 ). All of the fractures in these two groups were healed at the end time of follow up without adverse complications,including fracture displacement, implant break, implant loose and failure. Conclusion The pressure-protective brace with pressure sensitive device used for quantifying rehabilitation training can enhance bone union, shorten the treatment course and reduce complications. This method further proves that discontinuous compressive stress in a certain range can stimulate fracture healing.     

异体冻干颗粒骨复合骨髓基质干细胞源性成骨细胞体外生物相容性研究

[目的]评价异体冻干颗粒骨体外生物相容性,为其作为骨组织工程支架材料的临床应用提供实验依据。[方法]4周龄SD大鼠,雌雄不限,采用全骨髓贴壁法体外培养骨髓基质干细胞(BMSCs),取生长状态良好的第3代BMSCs行成骨诱导培养并鉴定。制备异体冻干颗粒骨浸提液,将成骨诱导7d的BMSCs加入浸提液作为实验组,未加浸提液的为对照组,培养1、3、5d,采用MTT法检测异体冻干颗粒骨浸提液对细胞增殖的影响。成骨诱导7d的BMSCs按1×106/ml接种于异体冻干颗粒骨上,倒置相差显微镜、扫描电镜观察与其复合培养的细胞在材料上的生长情况;酶消化法消化复合于冻干颗粒骨上的成骨细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化。[结果]BMSCs成骨诱导7d,ALP染色示胞浆内可见阳性蓝染颗粒,胞核呈红色。MTT法检测结果显示细胞在浸提液中生长与增殖状态良好,实验组与对照组差异无统计学意义(P0.05);倒置相差显微镜可见颗粒骨表面粘附多数成骨细胞;扫描电镜观察可见细胞在材料表面粘附、伸展并能增殖、分泌产生细胞外基质;流式细胞术检测显示,异体颗粒骨对细胞周期无影响,实验组细胞均为正常2倍体细胞。实验组与对照组差异无统计学意义(P0.05)。[结论]异体冻干颗粒骨无细胞毒性并具有良好的组织细胞相容性,为其临床应用提供了实验依据。     

自体富血小板-白细胞凝胶复合同种异体骨移植对大段骨缺损的干预效应

目的探讨自体富血小板-白细胞凝胶(PLRG)复合同种异体骨移植对大段骨缺损的干预效应。方法制备自体PLRG与大段同种异体脱钙骨(1.5 cm)后,取成年健康日本大耳白兔30只,制双侧桡骨中段1.5cm缺损,分A、B两组,每组15只30侧,A组缺损处嵌插植入同种异体骨段,其管腔内及两断端连接处用PLRG封闭;B组嵌插单纯植入异体脱钙骨段作为对照。移植12周时经放射学、组织学及组织形态计量学、生物化学和生物力学检测,评价骨缺损的重建修复效果。结果 (1)X线及骨密度计量分析显示,A组断端桥接良好,骨密度显著高于B组(P<0.05);(2)组织学观察发现,移植区A组新生骨形成和移植骨破骨细胞性骨吸收均较B组活跃,形态计量分析显示单个视野的成骨面积显著大于B组(P<0.05);(3)碱性磷酸酶活性检测显示,A组显著高于B组(P<0.05);(4)抗弯生物力学测试显示,A组破断载荷和破断能量均显著高于B组(P<0.05)。结论 PLRG可加速大段骨缺损再生修复,并促进大段同种异体骨骨重建。     

成骨细胞及血管内皮细胞复合同种异体颗粒骨治疗大鼠股骨头坏死

目的 探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)来源的大鼠同种异体成骨细胞(osteoblast,OB)及血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)与同种异体颗粒骨复合后治疗大鼠创伤性股骨头坏死(osteonecrosis of th...     

Kartogenin对软骨再生作用的研究进展

目的综述小分子化合物kartogenin(KGN)在骨性关节炎(osteoarthritis,OA)治疗中对抑制软骨退变及促进软骨再生的研究进展。方法广泛查阅近年来KGN对OA治疗作用研究进展的相关文献。结果 KGN可以改善软骨代谢的微环境,促进软骨合成代谢中软骨标志物的表达。KGN已经用于促进软骨再生的软骨组织工程研究中,通过与不同的材料结合,可以提高对软骨的保护作用,并促进软骨细胞的形成。结论 KGN可以促进间充质干细胞向软骨细胞的分化,抑制OA疾病的进程,望成为一种OA疾病调修药物,但仍需进一步研究。     

衰老因素在骨关节炎病理机制中的作用

骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种常见的退行性关节疾病,可引起关节疼痛、肿胀甚至功能紊乱。是引起发达国家和发展中国家老年人群关节疼痛,身体残疾和生活质量下降的主要原因。其中,关节软骨细胞外基质(Chondrocyte extracellular matrix,ECM)的分解代谢增加是骨关节炎发展和进展的关键因素。目前,导致基质转换失调的分子机制尚未完全阐明,但是细胞衰老,炎症介质表达的增加以及与组织再生潜能相关的氧化应激等都是OA发展的重要因素,所有这些因素都与衰老有着密切联系。所以本综述将阐述OA中衰老相关的细胞和结构变化,以对OA的发病机制有进一步的认识。     

肝外伤术后胆道出血1例分析

1病例介绍 患者,男,20岁.因肝破裂修补术后2个月,反复便血半个月,以"肝外伤术后,上消化道出血"收住院.入院前2个月因车祸致肝破裂,在当地医院2次行修补术.半个月前出现上腹间歇性疼痛,向背部放射,伴呕吐、黑便.后上述症状反复发作,继之出现心悸、冷汗等.经保守治疗后缓解.近日患者食欲不振,明显消瘦.查体:T 38.4℃,P112次/分,Bp 17/8kPa,皮肤、粘膜轻度黄染,舟状腹,右上腹见"T"形切口疤痕,腹肌紧张,压痛,无反跳痛,肝脾肋下未及,肠鸣音活跃.实验室检查:血Hb 57.0g/L,ALT 110U/L,GGT 330U/L.腹部B超:肝右叶巨大血肿(脓肿?),胆囊增大.进一步诊断为:肝外伤后肝脓肿合并胆道出血.手术探查发现胆囊增大约10cm×7cm,张力大.