TGF-β1中和抗体对TGF-β诱导的肌腱胶原产生和术后粘连形成的影响

目的 观察TGF-β1中和抗体对TGF-β诱导的肌腱细胞胶原产生及术后粘连形成的影响,探讨生物学调节在肌腱粘连防治中的作用.方法 取6只成年新西兰大白兔12条屈趾肌腱分离肌腱成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞,将细胞随机分成2组,实验组加入1 ng/mL TGF-β后,再加入不同浓度TGF-β1中和抗体,对照组不添加任何试剂,培养3 d后ELISA测定Col Ⅰ的产生.取84只兔行中趾屈趾肌腱切断吻合术,随机分成3组,腱鞘内分别注入生理盐水(NS组,n=36)、1.0 μg/mL TGF-β1中和抗体(1.0 μg/mL TGF-β1组,n=36)和2.0μg/mL TGF-β1中和抗体(2.0.μg/mLTGF-β1组,n=12).术后4、8周取出肌腱行肌腱粘连检测、生物力学测定、组织学观察和扫描电镜观察.1、2、4、8周后取出NS组及1.0 μg/mL TGF-β1组肌腱,原位杂交方法测定TGF-β1和Col Ⅰ mRNA的表达.结果 ELISA检测显示,TGF-β1能明显提高肌腱细胞Col Ⅰ的产生;TGF-β1抗体能降低肌腱成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞Col Ⅰ的产生,且呈剂量依赖关系.术后4、8周,NS组屈趾肌腱滑动距离较短,模拟主动屈曲度明显受限,与1.0μg/mLTGF-β1组和2.0μg/mL TGF-β1组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);最大抗断裂载荷各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).扫描电镜和组织学观察结果显示,术后4、8周NS组胶原纤维排列紊乱,1.0 μg/mLTGF-β1组和2.0μg/mL TGF-β1组胶原纤维排列整齐.原位杂交结果显示,术后各时间点1.0μg/mL TGF-β1组TGF-β1 mRNA和Col Ⅰ mRNA表达水半均低于NS组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1中和抗体能有效抑制TGF-β1在肌腱损伤修复中的作用,减少粘连形成.     

TGF-β1多克隆抗体预防屈指肌腱术后粘连的实验研究

目的 探讨应用TGF-β1多克隆抗体抑制术后屈指肌腱粘连的效果。方法 将108只来亨鸡随机分成3组，行中趾屈指肌腱切断吻合术，术中分别滴加生理盐水或低、高浓度的TGF-β1多克隆抗体，于术后1、3、8、12周取肌腱进行生物力学测试、苏木精-伊红染色、Masson胶原染色、苦味酸-天狼星红染色、TGF-β1免疫组化染色等。结果 TGF—β1多克隆抗体药物组（5μg／ml组、10μg／ml组）肌腱最大延伸率、模拟主动屈曲度要高于对照组，肌腱最大抗拉力在8周时低于对照组，在12周时与对照组无差异；与对照组比较，10μg／ml组炎症过程缩短，塑形过程加速；药物组（5μg／ml组、10μg／ml组）I胶原含量减少，Ⅰ／Ⅲ胶原比例下降，TGF—β1的表达降低。结论 TGF-β1多克隆抗体可以有效的抑制TGF-β1在肌腱损伤修复过程中的作用，减少肌腱的粘连，瘢痕组织的形成，而不影响肌腱的强度，这可能是屈肌腱损伤术后粘连潜在的有效方法之一。     

HGF拮抗TGF-β1诱导腱鞘成纤维细胞α-SMA及细胞外基质合成

目的 研究HGF能否阻抑TGF-β1诱导的腱鞘成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成.方法 选取成年新西兰大白兔7只,体重3.75～4.00 kg,无菌切取前肢中趾趾深屈肌腱,进行腱鞘成纤维细胞的分离和培养,待细胞生长成单层后,以胰蛋白酶消化传代.取第3代成纤维细胞用于实验,当细胞达到70%融合时,培养液中加入TGF-β1(5 ng/ml)及HGF(10～40 ng/ml).培养72 h后,利用Westernblot检测α-SMA表达;ELISA测定细胞Ⅰ型胶原及纤维结合素的表达.结果 TGF-β1能显著诱导α-SMA表达,半定量分析提示,TGF-β1作用后的成纤维细胞α-SMA表达量是对照组的1.8倍.随HGF的同时加入,α-SMA的表达则明显受抑制(P＜0.05),且随HGF浓度的升高其阻抑作用呈逐渐增强趋势.TGF-β1同样能诱导Ⅰ型胶原及纤维结合素的表达(P＜0.01),而HGF则可以有效地阻抑其表达,其效应呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 HGF可以有效阻抑TGF-β1诱导的腱鞘成纤维细胞α-SMA、Ⅰ型胶原及纤维结合素的表达,这为利用HGF预防和治疗屈指肌腱损伤后粘连及瘢痕在细胞和分子水平提供了依据.     

转化生长因子-β1对肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖和胶原产生的影响

目的 探讨兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖、胶原产生和转化生长因子（TGF）-β1对细胞的增殖和胶原产生的影响。方法 从兔屈趾肌腱分离腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞并培养，在使用TGF-β1培养后，细胞的数量和胶原产生量被测量，并与不使用TGF-β1培养的对照组比较。另外，通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定使用TGF-β1前后各种细胞Ⅰ型胶原基因的表达。结果 所有3种细胞均可以产生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原组织，TGF-β1使培养的细胞数量降低，但能显著性地增加Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原组织产生和Ⅰ型胶原基因的表达（P〈0．05）。结论 调节TGF-β1的水平能调节胶原组织的产生，可能为临床上防止肌腱粘连提供新的途径。     

TGF-β1抗体用于屈指肌腱术后的生物力学研究

目的 :研究屈指肌腱术中应用TGF β1中和抗体以抑制术后肌腱粘连的效果。方法 :将 5 4只来亨鸡随机分成 3组 ,行中趾屈指肌腱切断吻合术 ,术中分别给 3组鸡滴加生理盐水及 5 μg/ml和 10 μg/ml的TGF β1中和抗体 ,于术后 3、 8、 12周取肌腱进行生物力学测试。检测肌腱的粘连程度。结果 :手术后 3组平均肌腱最大抗拉力较未手术肌腱明显减弱。 8周和 12周时 ,TGF β1中和抗体组比生理盐水组减少明显。抗体组的最大延伸率高于生理盐水组 ,肌腱模拟主动屈曲度比生理盐水组略有增加。结论 :局部滴加TGF β1多克隆中和抗体有助于抑制瘢痕组织的形成 ,减轻粘连     

鸡屈趾肌腱鞘内损伤修复中转化生长因子-β1的表达

目的了解鸡屈趾肌腱鞘内损伤愈合过程中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的变化。方法42只来亨鸡随机平均分成6个实验组和1个正常肌腱对照组,切断右第3趾屈趾长肌腱后缝合并重新覆以腱鞘。分别于术后1、3、7、14、28、56d切取实验组及对照组标本,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法测定腱鞘、腱外膜和腱实质中TGF-β1的表达,将实验组分别与正常对照组比较。结果TGF-β1在正常对照组肌腱仅出现低水平表达,而在实验组肌腱的各个时间点均明显上调,术后第7天最高。免疫组化染色显示腱鞘、腱外膜的TGF-β1蛋白表达比腱实质的明显。结论TGF-β1参与鸡屈趾肌腱损伤修复的愈合过程,适当调控其在不同部位的表达程度可望既促进肌腱愈合又防止肌腱粘连。     

反义TGF-β1对周围神经生长影响的实验研究

目的 观察反义TGF-β1对大鼠坐骨神经损伤后神经纤维再生及神经功能恢复的影响. 方法 将50只成年SD大鼠随机分成3组:NS组(神经吻合术后局部注射生理盐水,20只)、反义TGF-β1组(神经吻合术后局部注射反义TGF-β1,20只)和正常对照组(不做任何处理,10只).术后6周、12周分别用免疫组化检测胶原Ⅰ、Ⅲ的表达量;显微镜下对新生神经纤维数量进行计数;应用足印分析和电生理检查技术,从功能角度判定反义TGF-β1的生物效应.结果 在6周、12周两个时相点,免疫组化结果证实,反义TGF-β1组胶原Ⅰ、Ⅲ表达低于NS组(分别为P＜0.05,P＜0.05);神经纤维计数证实,新生神经纤维数目明显优于NS组(P＜0.05);在坐骨神经功能指数测定、神经传导速度等神经功能恢复指标上,TGF-β1组优于对照组(P＜ 0.05). 结论 反义TGF-β1通过抑制胶原Ⅰ、Ⅲ的过量表达,预防神经损伤后创伤性神经瘤的形成,有利于损伤神经纤维轴索再生,使大鼠的神经功能得到了明显改善.     

TGF-β1对腱鞘成纤维细胞a-SMA及细胞外基质合成的影响

[目的]研究TGF-β1对腱鞘成纤维细胞a-SMA及细胞外基质合成的影响。[方法]培养兔趾深屈肌腱腱鞘成纤维细胞,培养液中加入TGF-β1(5ng/ml)。培养48h后,用Western-Blot检测a-SMA表达;ELISA测定细胞I型胶原及纤维结合素的表达。[结果]TGF-β1(5ng/ml)作用后的成纤维细胞a-SMA表达量明显高于对照组成纤维细胞(P0.05)。TGF-β1同样可以诱导I型胶原及纤维结合素的表达(P0.05)。[结论]TGF-β1能诱导体外培养的腱鞘成纤维细胞I型胶原、纤维结合素及a-SMA的表达,明确了TGF-β1在诱导肌腱愈合后粘连产生的机制,这为肌腱损伤后粘连及瘢痕的预防和治疗在细胞和分子水平提供了依据。     

肌腱愈合过程中转化生长因子β1基因表达的变化

目的研究兔屈趾肌腱Ⅱ区伤口愈合过程中转化生长因子β1（transforming growth factorpβ1，TGF-β1）基因表达的变化。方法取成年新西兰大白兔60只，体重4．0～4．5kg，将左前中趾屈趾深肌腱切断并采用标准Kessler缝合法修复作为实验组，分别于术后1、7、14、21、28及56d获取肌腱及腱鞘进行观察，每个时间点取10只；同一动物的右前肢正常肌腱及腱鞘作为对照组。采用原位杂交和免疫组织化学染色分析TGF—β1的表达情况。结果原位杂交结果示：实验组TGF—β1mRNA在术后1d开始上调，14～21d达高峰，56d保持较高水平；对照组存在TGF—β1mRNA的表达，但表达水平较低；实验组各时间点TGF—β1mRNA表达与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈O．05）。免疫组织化学染色：实验组术后1d，TGF—β1蛋白信号的表达增加，14～21d达高峰，56d仍保持一定水平；对照组术后各时间点存在TGF—β1蛋白信号表达，但表达水平较低。结论正常无损伤的肌腱和腱鞘能产生TGF—β1，当肌腱损伤后，细胞因子被激活，增加的细胞因子主要由肌腱细胞与腱鞘细胞产生，与肌腱的内、外源性愈合机制是一致的。     

腱鞘内肌腱与异体腱鞘内肌腱移植

目的：探讨异体腱鞘内肌腱替代自体腱鞘内肌腱作为移植材料的可行性。方法：取新西兰大白兔的趾深屈肌腱，经深低温保存４周～３个月，移植至同种异体第３趾深屈肌腱缺损处。同侧第４趾深屈肌腱用自体腱鞘内肌腱移植作对照。术后３～１２周作生物力学和组织学测定。结果：组织学发现，两组移植肌腱均无粘连或仅有轻度粘连。趾间关节活动度、肌腱缝合处抗破裂力，经统计学处理，两组间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论：异体腱鞘内肌腱可作为肌腱移植材料     

反义TGF-β1抑制兔耳增生性瘢痕的实验研究

目的：探讨反义TGF-β1脱氧寡核苷酸对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中瘢痕生成的抑制作用，研究局部使用反义。TGF-β1的有效给药途径。方法：成年日本大耳白兔20只，建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型。采用组织形态学的方法对比研究反义TGF-β1在兔耳增生性瘢痕形成中的影响，并用原位杂交法技术检测兔耳增生块内TGF-β1 mRNA、Ⅰ型胶原蛋白(colla-genⅠ)mRNA、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)mRNA的表达水平。结果：兔左耳增生性瘢痕局部注射反义TGF-β1后，按时间段取材，HE和Masgon染色显示真皮层变薄，成纤维细胞数量明显减少，胶原排列趋于一致。增生块的相对增生高度低于对照组。原位杂交显示TGF-β1 mRNA、collagenⅠmRNA、collagenⅢ mRNA阳性细胞表达率明显降低。结论：反义TGF-β1能抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程，使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。局部注射裸DNA治疗瘢痕的给药途径是可行的。     

6-磷酸果糖对肌腱细胞TGF-β及其受体表达的影响

目的通过体外培养兔肌腱的腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞,观察6-磷酸果糖对3种细胞TGF-β及其受体、TGF-β1及TGF-β1mRNA表达的影响,探讨6-磷酸果糖在肌腱愈合粘连防治中的作用机制提供实验依据。方法成年新西兰大白兔8只,雌雄不限,体重4.0～4.5kg。取兔前肢趾深屈肌腱分离培养腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞。将每种细胞随机分为2组,实验组加入6-磷酸果糖培养,对照组不加入6-磷酸果糖。分别于培养3d及24h后采用酶联免疫吸附实验定量检测TGF-β及其受体的表达,原位杂交检测TGF-β1mRNA的表达;免疫组织化学染色观测TGF-β1的表达。结果酶联免疫吸附实验显示实验组各细胞TGF-β及其受体的表达均较对照组下降,差异有统计学意义(P0.05)。TGF-β1表达平均降低程度从大到小依次为腱鞘细胞(36.1%)、腱内膜细胞(31.2%)、腱外膜细胞(31.0%),TGF-β2依次为腱鞘细胞(37.9%)、腱外膜细胞(32.1%)、腱内膜细胞(27.0%),TGF-β3依次为腱内膜细胞(42.5%)、腱鞘细胞(41.2%)及腱外膜细胞(33.3%)。TGF-β受体1、2表达平均降低程度从大到小依次为腱外膜细胞(29.9%、26.2%),腱内膜细胞(27.8%、23.5%),腱鞘细胞(23.1%、20.0%);TGF-β受体3依次为腱内膜细胞(26.1%)、腱外膜细胞(19.2%)、腱鞘细胞(15.8%)。实验组各细胞TGF-β1mRNA阳性表达率及细胞内TGF-β1mRNA表达强度均较对照组明显降低,比较差异有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色观察显示实验组各细胞TGF-β1表达均较对照组明显降低。结论6-磷酸果糖能显著降低肌腱细胞的TGF-β及其受体、TGF-β1及TGF-β1mRNA的表达,为肌腱愈合过程中调节TGF-β水平提供了一种新途径。     

TGF-β1抗体复合生物蛋白胶预防鞘管区屈肌腱粘连的组织学观察

[目的]研究TGF-β1抗体(transforming growth factor-β1antibody,TGF-β1Ab)复合生物蛋白胶(fibrin glue,FG)预防鞘管区屈肌腱粘连的作用和对肌腱愈合的影响.[方法]成年雄性来亨鸡72只随机平均分为4组,每组18只.左足第3趾趾深屈肌腱横断,四股交叉缝合肌腱,鞘管未缝合.按鞘管区给药分为4组:A组TGF-β1Ab、B组FG、C组TGF-β1Ab+FG、D组生理盐水.仅术中注入一次药物.术后1、3、8周,每组各取6只鸡第3趾行大体及组织学观测.[结果]大体观察:术后1、3、8周肌腱粘连程度分级A组与B组无统计学差异(P＞0.05),C组与其余3组比较有统计学差异(P＜0.05).组织学观测:术后3、8周A、B、D组胶原纤维排列紊乱,C组胶原纤维排列整齐.[结论]TGFβ1抗体复合生物蛋白胶可以有效预防术后肌腱粘连,不影响肌腱的正常愈合进程.     

反义TGF-β1抑制Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕形成的实验研究

目的 探讨反义TGF-β1对Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕生成的抑制作用。方法 SD大鼠Ⅲ度烫伤后，分3组进行处理：①反义TGF-β1脱氧寡核苷酸；②反义TGF-β1重组质粒；③空白对照。分别于烫伤后1，3，5，14dRT-PCR、免疫组化检测TGF-β1mRNA和蛋白质的表达。烫伤后5，14，21，28，60d原位杂交检测I型胶原mRNA的表达变化，病理检测炎性细胞浸润反应和胶原分布状况。结果 反义作用组在烫伤后14d内TGF-β1mRNA和蛋白质和表达均减少。原位杂交显示对照组在14dⅠ型胶原mRNA开始表达，28d达到高峰，随后减少，反义作用组无此现象，一直保持低表达。病理染色显示反义作用组炎性细胞浸润少，炎性反应低，胶原合成减少。结论 反义TGF-β1可抑制Ⅱ度烫伤愈合中瘢痕的形成。     

甘油合剂和透明质酸钠预防鸡鞘管区屈肌腱粘连的实验研究

目的 研究甘油合剂预测鞘管区屈肌腱粘连的作用和对肌腱愈合的影响,并与透明质酸钠的作用相比较。方法 双Ａ鸡７８只,随机分为基油合剂（ＧＭ）组,秀明质酸钠（ＳＨ）组及生理盐水（ＮＳ）组,每组各２６只。将鸡右足第三趾趾深屈肌腱切断,做改良Ｋｅａｓｌｅｒ 法缝合,并修复腱鞘,然后在修复的腱鞘内及肌腱周围注入相应药物。术后第１、２、４、６、８周取材,分别进行大体观察、组织学检查、生物力学测试。结果 ＧＭ组术     

乳酸对肌腱细胞转化生长因子-β表达的调节作用

目的探讨乳酸对免屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞转化生长因子（TGF）-β及其受体产生的影响。方法从兔屈趾肌腱分离腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞并分别进行培养，在使用25mmol／L的乳酸培养后，酶联免疫吸附试验定量检测TGF-β及其受体的表达，同时应用原位杂交和免疫组织化学技术测量TGF-β的表达。结果乳酸能显著增加3种细胞所有TGF-β及其受体的表达（P〈0．05），其中腱鞘细胞的TGF-β1和TGF-β增加值最大，腱外膜细胞的TGF-β1和TGF-β的受体增加值最大，腱内膜细胞则为TGF-β增加值最大；乳酸还显著增加3种细胞的TGF-β表达。结论乳酸能显著增加肌腱细胞的TGF-β、TGF-β受体和TGF-β mRNA的表达，因此为肌腱愈合过程中调节TGF-β水平提供新的途径。     

生物蛋白胶预防鸡趾鞘管区屈肌腱粘连的实验研究

目的 研究生物蛋白胶预防鸡趾鞘管区屈肌腱粘连的作用。方法 种禽褐鸡60只，随机分为生物蛋白胶组（FG）和生理盐水组（NS），每组各30只动物。将第三、四趾趾深屈肌腱切断，作改良Kessler法缝合，不修复腱鞘，然后在腱鞘内肌腱周围及皮下按分组注入相应药物。术后第2、4、6周取材，分别进行大体观察、组织学检查、生物力学测定。结果 术后2、4、6周，组织学检查示两组动物肌腱吻合处的炎症细胞浸润情况及肌腱的愈合进程无明显差别。缝合处粘连半定量评分、将肌腱拉出鞘管所需最大力量、耗功，FG组与NS组相比，差异均无显性意义（P＞0．05）。结论 局部应用FG不能有效预防术后肌腱粘连，但不影响肌腱的愈合进程，也不引起额外的炎症反应。     

核心蛋白聚糖抑制兔屈趾肌腱术后粘连的实验研究

目的探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)抑制兔屈趾肌腱术后粘连的效果.方法日本大耳白兔18只,其后肢第2趾供实验用,将伸屈趾肌腱横断,作改良的Kessler缝合,不缝合腱鞘,右侧腱鞘内肌腱缝合位点直接注射DCN 100 μl (0.25 mg/ml)作为实验趾;左侧直接注射PBS 100 μl作对照趾.术后2、4及8周取材,行大体观察、生物力学检测和组织学观察.结果大体观察,术后各时间点实验趾的粘连程度明显小于对照趾.生物力学检测显示各时间点实验趾肌腱滑移距离和关节总屈曲度明显大于对照趾,差异有统计学意义(P＜0.05).组织学观察见实验趾术后2周成纤维细胞增生不明显,4周增生明显,8周胶原纤维排列规则,直径大小均一;对照趾2周成纤维细胞增生,4周成纤维细胞增生减少,8周胶原纤维排列不规则,直径大小不一.结论核心蛋白聚糖能明显减少屈趾肌腱损伤的术后粘连,调节胶原纤维的形成,促进肌腱愈合.     

反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对大鼠肝星状细胞功能的影响

目的观察反义转化生长因子(TGF)βⅠ型受体(TβRⅠ)表达质粒对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及细胞外基质分泌的影响.方法双酶灌注和梯度离心法分离大鼠HSC,将构建的反义TβRⅠ真核细胞表达质粒与pcDNA3空质粒经脂质体转染培养活化的HSC,通过RT-PCR、Western印迹检测外源导入质粒在HSC中的表达,采用MTT法、3H-TdR掺入法检测细胞增殖情况,ELISA法检测TGF-β1含量变化,并应用Western印迹检测HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达.结果反义TβRⅠ真核细胞表达质粒可抑制活化HSC中TβRⅠ mRNA及蛋白表达.与pcDNA3转染组相比,反义TβRⅠ质粒表达可抑制HSC增殖(P＜0.01),降低TGF-β1含量(P＜0.05),抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌(P＜0.05).结论重组反义TβRⅠ表达质粒可在HSC中获得较好表达,并可显著抑制HSC增殖及细胞外基质分泌.     

主被动活动促进屈肌腱腱鞘修复的实验研究

目的：探讨术后早期活动对屈肌腱腱鞘修复的影响，方法：将144只来亨鸡等三趾趾深屈肌腱部分切断后直接缝合并切除II区部分腱鞘，按手术后活动与否随机平分成3组，A组为主动活动组，B组为被动活动组，C组为制动组，于术后1，2，3，4，8，12周各时间组取材，进行形态学观察及生物力学测定，所得数据作统计学处理，结果：A、B组均有新生腱鞘形成，无致密粘连，A组的新生腱鞘明显比B组成熟，C组无新生腱鞘形成，腱周形成致密粘连，肌腱滑动度及趾关节总屈曲率示A组＞B组＞C组，A，B组，B，C组相比两者差异有显著意义（P＜0．01，P＜0．05），结论：早期活动是新生腱鞘形成的决定因素，主动活动能更有效地促进腱鞘修复。