移植的嗅鞘细胞在大鼠正常和挫伤脊髓内的迁移

目的明确移植的嗅鞘细胞在脊髓内的迁移特点。方法来源于7日龄绿荧光Sprague Dawley大鼠嗅鞘细胞分别移植于正常大鼠脊髓、脊髓挫伤模型大鼠脊髓损伤部位中心及其临近组织,1周后取材观察移植细胞在脊髓内的迁移能力。结果移植嗅鞘细胞在正常脊髓内主要沿脊髓纵轴方向从注射位点向两侧在白质和灰质内迁移,绝大部分迁移细胞排列无规则;移植于脊髓损伤部位中心的嗅鞘细胞主要围绕注射位点沿脊髓纵轴呈椭圆形分布,占据损伤部位并分布于其周围的脊髓内,小部分在白质内向头侧和尾侧迁移,迁移距离较短;移植于距离损伤部位头侧和尾侧1mm处的嗅鞘细胞的主要在白质和灰质内沿脊髓纵轴向损伤部位迁移,还分别有一小部分沿中央管迁移。移植细胞可表达髓磷脂相关蛋白和神经丝。结论移植的嗅鞘细胞可在脊髓内迁移,其迁移能力取决于其自身特性,移植环境是影响其迁移的重要因素。     

侧脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血再灌注大鼠运动及认知功能的影响

背景：将骨髓基质细胞经侧脑室移植治疗大脑中动脉阻断缺血所致脑梗死模型鼠已取得一定效果,但尚未见对其认知功能的影响。目的：观察骨髓基质细胞侧脑室移植对大脑中动脉阻断缺血模型大鼠行为认知功能的影响,并观察脑梗死灶大小的变化和植入骨髓基质细胞的迁移路径。方法：制作SD大鼠大脑中动脉阻断缺血2h再灌注模型后随机分为3组,骨髓基质细胞组及磷酸缓冲液组分别于梗死侧侧脑室注射骨髓基质细胞悬液5μL（含约1.0×106个细胞）或等量的磷酸缓冲液,模型组和不造模的正常组不作任何处理。应用平衡木实验观察大鼠运动协调能力,水迷宫实验观察其游泳速度及空间学习记忆能力;苏木精-伊红染色观察梗死灶大小的变化,免疫组化观察BrdU阳性细胞的迁移路径。结果与结论：骨髓基质细胞组在移植后第3,7,14天平衡木评分均有显著改善（P〈0.05）。移植后第7~10天,骨髓基质细胞组大鼠的游泳速度均快于磷酸缓冲液组（P〈0.05）。骨髓基质细胞组大鼠寻找平台潜伏期的时间明显缩短（P〈0.05）,在原平台象限所占时间百分比和路程百分比及穿越平台次数明显增加（P〈0.05）。移植后7,14d,各模型组大鼠苏木精伊红染色均可见典型的脑缺血梗死病灶,梗死面积百分比无明显差异。BrdU染色显示,移植后第1天,阳性细胞都聚集在移植侧侧脑室,以紧密排列的细胞团形式存在于脑室壁;第3天大部分细胞穿越脑室壁以单个细胞形式向周围缺血区迁移;第14天移植细胞在梗死的纹状体、皮质可见。提示大脑中动脉阻断缺血后24h侧脑室移植骨髓基质细胞可明显改善运动协调能力及空间学习记忆能力;移植骨髓基质细胞未能减小梗死灶大小,但侧脑室移植的骨髓基质细胞可存活并定向性地迁移至缺血的纹状体和皮质。     

脑内注射人胚鞘细胞对颅脑损伤大鼠神经及运动功能缺失的影响

背景：中枢神经再生失败的主要原因之一是损伤后中枢神经内的微环境(缺乏生长所需的神经营养因子、分泌产生抑制因子、胶质瘢痕形成等)不利于轴突的再生。为了促进中枢神经系统损伤后轴突再生，改善损伤区再生微环境很重要。其中嗅鞘细胞是近年来最为吸引人注目的一种治疗中枢神经损伤的有力工具。目的：探讨嗅鞘细胞在大鼠颅脑损伤中的作用及其是否能在颅脑损伤后减少神经功能上的缺失。设计：以实验动物为研究对象，随机对照实验研究。单位：一所大学医院的神经外科。材料：实验在2003—04／08在开封铁路医院神经外科中心实验室完成。选用成年健康Spraque-Dawley大鼠100只，雌雄不拘，体质量250～350g，随机分为正常组，脑损伤组，生理盐水组，嗅鞘细胞组。每组25只。每组再分为5个亚组，每个亚组5只大鼠：干预：制备颅脑损伤的大鼠模型，在受伤后立即将嗅鞘细胞移植到受损的脑组织中，1，4d，1，2，4周对大鼠进行神经损伤评分，将大鼠处死观察嗅鞘细胞在脑组织中的分布情况。主要观察指标：①大鼠的神经功能恢复情况：②嗅鞘细胞在脑组织中的分布情况。结果：在术后2，4周时，嗅鞘细胞组NSS评分与脑损伤组和生理盐水组相比，差异有显著性意义。通过苏木精一伊红染色切片中的形态结构或GFAP和p^75免疫化学，可见嗅鞘细胞在移植部位存活并迁移到周围邻近组织。统计不同时问段的5个6nm厚的冠状位组织切片中的p^75阳性细胞总量，发现嗅鞘细胞的数量随着时间的推移逐渐变少。结论：颅脑创伤后立即移植嗅鞘细胞到创伤的脑组织，嗅鞘细胞可在移植部位存活并迁移到周围邻近组织，与对照组相比，给予嗅鞘细胞能显著的降低颅脑创伤后引起的神经运动功能障碍。     

侧脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血再灌注大鼠运动及认知功能的影响

背景:将骨髓基质细胞经侧脑室移植治疗大脑中动脉阻断缺血所致脑梗死模型鼠已取得一定效果,但尚未见对其认知功能的影响。目的:观察骨髓基质细胞侧脑室移植对大脑中动脉阻断缺血模型大鼠行为认知功能的影响,并观察脑梗死灶大小的变化和植入骨髓基质细胞的迁移路径。方法:制作SD大鼠大脑中动脉阻断缺血2h再灌注模型后随机分为3组,骨髓基质细胞组及磷酸缓冲液组分别于梗死侧侧脑室注射骨髓基质细胞悬液5μL(含约1.0×106个细胞)或等量的磷酸缓冲液,模型组和不造模的正常组不作任何处理。应用平衡木实验观察大鼠运动协调能力,水迷宫实验观察其游泳速度及空间学习记忆能力;苏木精-伊红染色观察梗死灶大小的变化,免疫组化观察BrdU阳性细胞的迁移路径。结果与结论:骨髓基质细胞组在移植后第3,7,14天平衡木评分均有显著改善(P<0.05)。移植后第7~10天,骨髓基质细胞组大鼠的游泳速度均快于磷酸缓冲液组(P<0.05)。骨髓基质细胞组大鼠寻找平台潜伏期的时间明显缩短(P<0.05),在原平台象限所占时间百分比和路程百分比及穿越平台次数明显增加(P<0.05)。移植后7,14d,各模型组大鼠苏木精伊红染色均可见典型的脑缺血梗死病灶,梗死面积百分比无明显差异。BrdU染色显示,移植后第1天,阳性细胞都聚集在移植侧侧脑室,以紧密排列的细胞团形式存在于脑室壁;第3天大部分细胞穿越脑室壁以单个细胞形式向周围缺血区迁移;第14天移植细胞在梗死的纹状体、皮质可见。提示大脑中动脉阻断缺血后24h侧脑室移植骨髓基质细胞可明显改善运动协调能力及空间学习记忆能力;移植骨髓基质细胞未能减小梗死灶大小,但侧脑室移植的骨髓基质细胞可存活并定向性地迁移至缺血的纹状体和皮质。     

嗅鞘细胞移植促进脊髓损伤修复的长期实验和临床观察

目的：嗅鞘细胞在大鼠完全损伤脊髓内长期存活和修复作用的研究以及嗅鞘细胞移植治疗人类脊髓损伤的观察。方法：解放军北京军区总医院全军骨科中心实验室用新生Wistax大鼠嗅球做嗅鞘细胞原代纯化培养，大量增殖后植入完全损伤的大鼠脊髓内，同时设立注入DMEM培养液和单纯椎板切除的对照组。术前及术后2，4，8，16和24周进行动物神经功能评定(BBB评分)；术后24周取损伤段及其邻近脊髓标本，行苏木精—伊红染色、嗜银染色，及透射电镜观察了解脊髓再生情况；同时荧光显微镜下观察Hoechst标记的嗅鞘细胞在体内存活情况。选择解放军北京军区总医院2003—06／12住院的脊髓损伤患者进行嗅鞘细胞移植，术后随访。结果：①手术后4周，嗅鞘细胞移植组，DMEM注射组开始有运动功能恢复，嗅鞘细胞移植组运动功能好于DMEM注射组(P&;lt;0．01)；在各个时间段BBB分值嗅鞘细胞移植组均高于DMEM注射组(P&;lt;0．01)。②苏木精—伊红及嗜银染色显示，嗅鞘细胞移植组，DMEM注射组脊髓损伤区及其近端都有神经纤维，排列紊乱，嗅鞘细胞移植组数量多于DMEM注射组(P&;lt;0．01)，但都少于相应节段的对照组(P&;lt;0．01)。③24周后荧光显微镜下观察到Hoechst标记的嗅鞘细胞仍存在于OEG移植组脊髓损伤段周围。④透射电镜结果见嗅鞘细胞移植组胶质瘢痕近端大量新生有髓神经纤维并形成S型突触连接。⑤患者运动功能无显著改善(P&;gt;0．01)，感觉功能恢复明显(P&;lt;0．01)。结论：①移植的嗅鞘细胞可在受体内长期存活(至少6个月)并迁移。②嗅鞘细胞移植能促进轴突再生，并对脊髓功能有一定的修复作用。     

细胞联合移植修复大鼠脊髓损伤的可行性

背景：嗅鞘细胞和骨髓间充质干细胞均可修复脊髓损伤，两者联合能否发挥出更佳的修复效果还不太清楚。目的：观察唉鞘细胞和骨髓间充质干细胞联合移植修复脊髓损伤的效果。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-06／2007-10在临沂市人民医院和昆明医学院完成。材料：健康清洁级成年SD大鼠，雌性，体质量220～280g，分为：正常对照组（n=5）、嗅鞘细胞移植组（n=10）、骨髓间充质干细胞移植组（n=10）、联合细胞移植组（n=10）、手术对照组（n=10）。方法：分离大鼠嗅球组织和股骨，分离培养嗅鞘细胞和骨髓间充质干细胞。暴露大鼠脊髓予以尖刀离断制备完全脊髓损伤动物模型，正常对照组仅打开椎板未行脊髓离断，嗅鞘细胞移植组、骨髓间充质干细胞移植组、联合移植组分别在断端及远近端注射嗅鞘细胞、骨髓间充质干细胞及嗅鞘细胞＋骨髓间充质干细胞悬液，采取3点注射，3点的注射深度分别为0．5mm、1．0mm和1．5mm。手术对照组在脊髓离断后仅注射培养基。主要观察指标：将嗅鞘细胞和骨髓间充质干细胞制成细胞悬液后接种培养，并应用P75抗体和BrdU抗体对联合培养的细胞进行免疫荧光鉴定。移植后评定大鼠脊髓功能恢复情况，并观察病理学改变和细胞存活情况。结果：联合培养的细胞部分相互编织成网，部分呈条索状，荧光鉴定双标阳性者为嗅鞘细胞，只发红色荧光而不发绿色荧光者为骨髓间充质干细胞。移植嗅鞘细胞和骨髓间充质干细胞的大鼠脊髓功能均有改善，移植4周后，联合移植组脊髓功能恢复优于单细胞移植组。病理学观察显示，手术对照组脊髓结构破坏严重，损伤处可见大量空洞及神经元胞体萎缩，周围存在较多的空洞及组织液化，细胞数目较少，神经纤维排列紊乱；移植鞘细胞及骨髓间充质干细胞后脊髓结构仍破坏严莺，但是空洞面积较少，有较多细胞存在，神经纤维排列较为整齐，荧光显微镜下见脊髓损伤处有较多的细胞核发出红色荧光，在脊髓损伤处的远近端也见有较多阳性细胞存在，联合移植组可见两种细胞同时存在，但细胞分布乱，无明显的排列方向，未见明显的迁徙现象。结论：嗅鞘细胞与骨髓间充质干细胞在体外可以很好的联合培养，修复脊髓损伤，并且联合移植的恢复效果较单一细胞移植更为理想。     

移植脊髓中嗅鞘细胞的生物学特性

背景：嗅鞘细胞被证明有修复损伤脊髓的作用,但对其移植后的生物学特性了解不多.目的：观察移植的嗅鞘细胞在损伤脊髓中的迁移方式.设计：随机对照实验.材料：2个月雄性SD大鼠38只,体质量（350&;#177;20）g.方法：实验于2004-02/05在中山大学北校区动物实验中心进行.①取SD大鼠2只用于嗅鞘细胞提取,将嗅鞘细胞用双苯亚甲胺染色.②取SD大鼠36只,随机分为3组,近端组,远端组和对照组,每组12只.近端、远端组建立大鼠胸髓损伤模型.分别于脊髓损伤近端、远端注入嗅鞘细胞悬液;对照组不损伤胸髓,仅注射嗅鞘细胞悬液.主要观察指标：术后1,2,4,6周荧光显微镜下观察脊髓中嗅鞘细胞的分布.结果：36只大鼠,分为3组,术后近端组死亡1只;远端、对照组各死亡2只.进入结果分析29只.各组大鼠脊髓中嗅鞘细胞分布：术后2,4,6周,近端组和远端组的嗅鞘细胞进一步沿着脊髓长轴纵向迁移,最远达8 mm,能够穿过瘢痕,到达断端对侧的细胞数量很少;对照组嗅鞘细胞只是局部的扩散,没有迁移.结论：嗅鞘细胞的迁移主要沿着轴突进行,向头端和尾端迁移的数量和速度都没有明显区别,嗅鞘细胞只在损伤的脊髓中进行迁移.     

电针对脑梗死大鼠神经前体细胞增殖水平的影响

目的研究电针治疗对脑梗死病灶周围及海马处神经前体细胞增殖水平的影响。方法采用易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)，电凝法制成大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。行神经行为学功能评定、神经前体细胞标记及电针治疗，免疫组化染色观察并计数电针治疗后梗死灶边缘、对侧镜区及双侧海马5-溴脱氧尿核苷(bmmodeoxyuridine，BrdU)标记的细胞。结果MCAO后神经功能评分减低，约5d后恢复正常。电针治疗促使梗死灶边缘、对侧镜区BrdU阳性细胞增多，随着治疗时间增加，细胞增多更明显。结论电针治疗可促使神经前体细胞增殖及迁移，可能是电针促进康复疗效的重要机制之一。     

脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血损伤后神经功能恢复的影响

目的：采用脑室系统注入体外培养的骨髓基质细胞，观察其对神经功能损伤修复的影响及其在脑内的存活、迁移、分化情况。 方法：实验于2004-03／12在中国医科大学神经内科实验室完成。①将28只Wistar大鼠随机分为假手术组（n=6），模型组（n=8），梗死半球移植组（n=7），健侧半球移植组（n=7）。②除假手术组外，其他3组大鼠采取longa法制备大脑中动脉梗死模型，梗死后次日将培养的骨髓基质细胞悬液（10μL，约1&;#215;10^5个细胞）注入梗死半球移植组和健侧半球移植组大鼠侧脑室，模型组注入等量的磷酸盐缓冲液。③通过神经功能评分观察大鼠脑神经功能恢复情况，采用免疫组织化学方法观察移植入脑的骨髓基质细胞的存活、迁移及分化情况。 结果：28只大鼠全部进入结果分析。①神经功能缺损评价：假手术组动物无神经功能缺损。移植前各组梗死后大鼠神经功能损害评分差异无显著性（P〉0．05），移植2周后梗死大鼠神经功能均有不同程度恢复，但梗死半球移植组、健侧半球移植组评分明显低于模型组（6．7l&;#177;0．49，6．86&;#177;0．38，8．63&;#177;0．52，P〈0．05）。②大鼠脑病理改变：苏木精-伊红染色显示大脑中动脉梗死大鼠的缺血区脑组织稀疏，细胞数量明显减少且间隙增大。假手术组则无此表现，表明大鼠脑梗死模型制作成功。③脑组织切片免疫组织化学染色结果：可见来源于骨髓基质细胞的细胞（5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞经免疫组织化学染色呈暗棕色）在脑组织内存活，并且聚集于缺血梗死区域。在梗死半球移植组对侧半球脑组织内未发现5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞；在健侧半球移植组仅在移植损伤道周围发现少量5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞。应用免疫双标染色随机选取10个5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞区域计数发现大鼠脑梗死后14d约1．2％的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经元标志蛋白特异性烯醇化酶，约6％的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白。 结论：经脑室移植的骨髓基质细胞对梗死后大鼠神经功能的恢复有明显促进作用。不同脑脊液途径移植的骨髓基质细胞对神经功能缺损的修复无明显差异。经脑室系统途径移植的骨髓基质细胞可在脑组织内存活，血管下间隙为骨髓基质细胞在脑组织内迁移提供途径。脑损伤是骨髓基质细胞迁移、分化的主要原因。     

MMP-2／Notch1转染的嗅鞘细胞移植对急性脊髓损伤的作用

目的：观察 MMP-2／Notch1转染嗅鞘细胞（OEG）移植对急性大鼠脊髓损伤的作用。方法将构建的 MMP-2／Notch1的质粒导入嗅鞘细胞,并移植入急性脊髓损伤大鼠体内,连续观察12周,与接受单纯OEG移植的脊髓损伤大鼠进行比较。结果移植转染MMP-2／Notch1能够增强嗅鞘细胞的迁移能力,移植到脊髓损伤大鼠体内与对照组比较,能减少组织的缺损、轴突的坍塌、神经元的坏死凋亡,抑制胶质细胞的过度增殖。结论 MMP-2／Notch1转染的嗅鞘细胞相对于单独转染嗅鞘细胞能更有效的促进脊髓损伤功能的修复。     

SPIO标记脂肪干细胞移植治疗大鼠脑梗死的磁共振示踪成像研究

目的通过采用多聚左旋赖氨酸（PLL）与超顺磁氧化铁纳米微粒（SPIO）的复合物对脂肪干细胞（ADSCs）体外进行标记,观察SPIO标记ADSCs脑内移植治疗大鼠脑梗死的分布和迁徙情况。方法显微镜下直接结扎大脑中动脉方法制备大鼠脑梗死模型36只,随机分成缺血未干预对照组（12只）、磁性标记ADSCs移植组（12只）和未磁性标记ADSCs移植组（12只）,采用立体定向方法脑内移植。对移植后大鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,病理组织化学染色观察ADSCs在体内的分布情况,并用磁共振成像的方法在体观察ADSCs的分布,并与病理结果进行对比。结果移植后3周神经系统行为学评分显示移植组动物明显改善,ADSCs脑内移植后3周MRT2WI显示移植区低信号改变并通过胼胝体向病灶迁移。病理组织检查显示磁共振低信号改变区可见普鲁士蓝染色阳性细胞。结论移植ADSCs可以有效地促进大鼠脑梗死后神经行为功能的恢复,MRI可用于在体评价经SPIO和PLL复合物标记的ADSCs细胞移植后在体内的分布、迁移过程。     

ADSC移植对大鼠大脑中动脉闭塞脑梗死模型梗死灶周围DCC和NF-200表达的影响

目的分析脂肪来源干细胞(ADSC)移植对大鼠大脑中动脉闭塞脑梗死模型梗死灶周围神经丝蛋白200(NF-200)和结直肠癌缺失蛋白(DCC)表达的影响。方法取36只SD大鼠,其中30只用于构建脑梗死大鼠模型,随机分为假手术组(不插入线栓,注入生理盐水)、脑梗死组(插入线栓,注入生理盐水)、移植组(插入线栓,注入ADSC悬液),三组各10只;剩余6只用于分离培养ADSC。分别于造模后第1、2周,采用荧光显微镜观察ADSC在大鼠脑组织中的迁移情况;通过免疫印迹法测定NF-200和DCC蛋白在大鼠脑梗死病灶周围皮质中的表达情况;采用免疫荧光法测定NF-200和DCC在大鼠脑梗死病灶周围皮质中的分布情况。激光扫描共聚焦显微镜下观察DCC蛋白在梗死灶周围皮质中的定位。结果经荧光显微镜观察可见,移植组脑组织中可见PKH-26标记的ADSC,且多见于脑梗死周围皮质中。经免疫印迹法检测可知,相比假手术组,脑梗死组造模后第1、2周脑梗死病灶周围皮质中NF-200蛋白表达明显下调,DCC蛋白表达明显上调(P<0.05);与假手术组比较,移植组造模后第1周脑梗死病灶周围皮质中NF-200蛋白表达明显下调(P<0.05),造模后第1、2周DCC蛋白表达明显上调(P<0.05);移植组与假手术组造模后第2周NF-200表达的比较,并无显著差异(P>0.05);相比脑梗死组,移植组造模后第1、2周脑梗死病灶周围皮质中NF-200和DCC蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。经免疫荧光组织化学染色法检测可知,脑梗死组与移植组脑梗死病灶周围皮质中NF-200和DCC蛋白的表达较假手术组更加明显,且移植组更加明显;NF-200蛋白在大鼠脑梗死病灶周围皮质中主要定位于神经元轴突中,DCC蛋白呈现条索状表达。激光扫描共聚焦显微镜下观察可见,DCC蛋白主要定位于大鼠脑梗死病灶周围皮质中NF-200阳性的神经元轴突中。结论通过颈动脉注射途径移植的ADSC可移至大鼠脑梗死病灶周围皮质中,且其促进神经元轴突再生修复的作用机制可能与诱导脑梗死病灶周围皮质NF-200和DCC表达密切相关。     

嗅鞘细胞移植对实验性变态反应性脑脊髓炎髓鞘修复及运动功能的影响

目的：观察嗅鞘细胞（OECs）对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）的髓鞘修复的意义。方法：培养、纯化OECs后，移植组将OECs悬液注入EAE大鼠的侧脑室；假手术组按以上方法注入等量生理盐水；观察二组大鼠运动功能评分、组织病理学变化以及神经元细胞凋亡表达情况。结果：OECs移植组运动功能评分显著优于假手术组。差异有显著意义（P〈0．05）；组织病理切片可见嗅鞘细胞移植组髓鞘修复明显优于假手术组：OECs移植组在各时间点上神经细胞凋亡的表达均明显低于假手术组，差异有显著意义（P〈0．05）。结论：OECs移植可以促进自身免疫性脑脊髓炎的髓鞘修复，改善运动功能，减少神经元细胞凋亡的程度，对神经元有保护作用。     

移植脊髓中嗅鞘细胞的生物学特性

背景嗅鞘细胞被证明有修复损伤脊髓的作用,但对其移植后的生物学特性了解不多.目的观察移植的嗅鞘细胞在损伤脊髓中的迁移方式.设计随机对照实验.材料2个月雄性SD大鼠38只,体质量(350±20)g.方法实验于2004-02/05在中山大学北校区动物实验中心进行.①取SD大鼠2只用于嗅鞘细胞提取,将嗅鞘细胞用双苯亚甲胺染色.②取SD大鼠36只,随机分为3组,近端组,远端组和对照组,每组12只.近端、远端组建立大鼠胸髓损伤模型.分别于脊髓损伤近端、远端注入嗅鞘细胞悬液;对照组不损伤胸髓,仅注射嗅鞘细胞悬液.主要观察指标术后1,2,4,6周荧光显微镜下观察脊髓中嗅鞘细胞的分布.结果36只大鼠,分为3组,术后近端组死亡1只;远端、对照组各死亡2只.进入结果分析29只.各组大鼠脊髓中嗅鞘细胞分布术后2,4,6周,近端组和远端组的嗅鞘细胞进一步沿着脊髓长轴纵向迁移,最远达8 mm,能够穿过瘢痕,到达断端对侧的细胞数量很少;对照组嗅鞘细胞只是局部的扩散,没有迁移.结论嗅鞘细胞的迁移主要沿着轴突进行,向头端和尾端迁移的数量和速度都没有明显区别,嗅鞘细胞只在损伤的脊髓中进行迁移.     

植入式皮质电刺激缺血性脑卒中大鼠皮质神经丝蛋白200的表达

背景：前期研究中发现单独皮质电刺激治疗16d能改善脑卒中后的运动功能障碍,增加梗死灶周围皮质微管相关蛋白2的表达。目的：观察植入式皮质电刺激对缺血性脑卒中模型大鼠皮质神经丝蛋白200表达的影响。方法：建立SD大鼠右侧大脑中动脉缺血性脑卒中模型,随机分成电刺激组和非刺激组,两组造模1周后植入电刺激器,电极放置在脑梗死区边缘皮质表面,电刺激组施加电刺激,非刺激组不施加电刺激。植入14d后终止电刺激,6周后用免疫荧光染色和免疫荧光图像分析系统定量分析梗死灶周边、梗死对侧皮质神经丝蛋白200的表达水平。结果与结论：与非刺激组比较,电刺激组梗死灶周边、梗死对侧皮质神经丝蛋白200表达水平均较高（P〈0.05）。表明皮质电刺激可增加梗死灶周边及梗死对侧皮质神经丝蛋白200的表达,诱导双侧皮质神经元轴突的可塑性改变。     

不同数量神经干细胞移植治疗实验性脑梗死

背景:研究已经确证脑梗死后进行神经干细胞移植可以促进动物神经功能恢复。目的:观察在大鼠实验性脑梗死后移植不同数量神经干细胞的效果,以期寻找出能有效促进神经功能恢复的最小移植数量。方法:提取Wistar胚胎鼠脑组织,体外培养神经干细胞。利用线栓法制作Wistar大鼠脑梗死模型。在大鼠脑梗死第7天,取培养第12天的神经干细胞,预标记BrdU后通过立体定向、微量注射泵方法,分别移植低6×105、中8×105、高10×105数量的神经干细胞,并设立假移植组,通过抓握牵引实验、斜板实验评价移植3个月时4组动物的行为学变化,以及BrdU、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等免疫组织化学染色方法检测移植后神经干细胞与周围宿主整合及向神经元、神经元胶质细胞分化情况。结果与结论:神经干细胞移植后能在宿主脑内存活,并分化为神经元和胶质细胞促进功能恢复。移植神经干细胞后3个月时,各移植组与假移植组相比行为学评分均有显著性升高;中等数量移植组大鼠各项行为学评分明显优于低等数量移植组,而中、高等数量移植组两组之间差异没有显著性意义。提示脑梗死后移植不同数量神经干细胞可改善因脑梗死造成的功能障碍,8×105数量神经干细胞移植可以较少的数量发挥较好移植效果。     

单独皮层电刺激对脑卒中大鼠MAP-2表达水平的影响研究

目的观察植入式皮层电刺激对缺血性脑卒中模型大鼠微管相关蛋白-2表达的影响。方法选择105只健康成年SPF级雄性SD大鼠,采用线栓法制作大脑中动脉阻塞模型后,MRI筛选24只Bederson评分为1-4分的皮层梗死大鼠。随机分为电刺激组13只和非刺激组11只。造模1周后,两组大鼠均植入电刺激器,电极放置在脑梗死区边缘皮层表面。非刺激组大鼠植入刺激器后不施加电刺激,电刺激组大鼠给予电刺激,电刺激组大鼠在植入电刺激器2周后终止电刺激。6周后,采用免疫荧光染色法和免疫荧光图像分析系统定量分析比较两组大鼠梗死灶周边及梗死对侧皮层微管相关蛋白-2的表达水平。结果电刺激组大鼠梗死灶周边及梗死对侧皮层微管相关蛋白-2的表达水平均高于非刺激组（t=12．189、2．454,P％0．05）。结论单独植入式皮层电刺激治疗缺血性脑卒中大鼠,能够增加梗死灶周围及梗死灶对侧皮层微管相关蛋白-2的表达水平,诱导双侧皮层神经元的可塑性改变。     

脑内注射人胚鞘细胞对颅脑损伤大鼠神经及运动功能缺失的影响

背景中枢神经再生失败的主要原因之一是损伤后中枢神经内的微环境(缺乏生长所需的神经营养因子、分泌产生抑制因子、胶质瘢痕形成等)不利于轴突的再生.为了促进中枢神经系统损伤后轴突再生,改善损伤区再生微环境很重要.其中嗅鞘细胞是近年来最为吸引人注目的一种治疗中枢神经损伤的有力工具.目的探讨嗅鞘细胞在大鼠颅脑损伤中的作用及其是否能在颅脑损伤后减少神经功能上的缺失.设计以实验动物为研究对象,随机对照实验研究.单位一所大学医院的神经外科.材料实验在2003-04/08在开封铁路医院神经外科中心实验室完成.选用成年健康Spraque-Dawley大鼠100只,雌雄不拘,体质量250～350 g,随机分为正常组,脑损伤组,生理盐水组,嗅鞘细胞组.每组25只.每组再分为5个亚组,每个亚组5只大鼠.干预制备颅脑损伤的大鼠模型,在受伤后立即将嗅鞘细胞移植到受损的脑组织中,1,4 d,1,2,4周对大鼠进行神经损伤评分,将大鼠处死观察嗅鞘细胞在脑组织中的分布情况.主要观察指标①大鼠的神经功能恢复情况.②嗅鞘细胞在脑组织中的分布情况.结果在术后2,4周时,嗅鞘细胞组NSS评分与脑损伤组和生理盐水组相比,差异有显著性意义.通过苏木精-伊红染色切片中的形态结构或GFAP和p75免疫化学,可见嗅鞘细胞在移植部位存活并迁移到周围邻近组织.统计不同时间段的5个6μm厚的冠状位组织切片中的p75阳性细胞总量,发现嗅鞘细胞的数量随着时间的推移逐渐变少.结论颅脑创伤后立即移植嗅鞘细胞到创伤的脑组织,嗅鞘细胞可在移植部位存活并迁移到周围邻近组织,与对照组相比,给予嗅鞘细胞能显著的降低颅脑创伤后引起的神经运动功能障碍.     

Mapping transplanted stem cell migration after a stroke: a serial, in vivo magnetic resonance imaging study

Preferential migration of stem cells toward the site of a lesion is a highly desirable property of stem cells that allows flexibility in the site of graft implantation in the damaged brain. In rats with unilateral stroke damage, neural stem cells transplanted into the contralateral hemisphere migrate across to the lesioned hemisphere and populate the area around the ischaemic infarct. To date, the migration of neural stem cells in the damaged brain has been mainly inferred from snapshot histological images. In this study, we demonstrate that by pre-labelling neural stem cells with the bimodal contrast agent Gadolinium-RhodamIne Dextran [GRID, detectable by both magnetic resonance imaging (MRI) and fluorescent microscopy], the transhemispheric migration of transplanted neural stem cells contralateral to a stroke lesion can be followed in vivo by serial MRI and corroborated by subsequent histological analyses. Our results indicate that neural stem cells migrated from the injection tract mainly along the corpus callosum within 7 days of transplantation and extensively re-populated the peri-lesion area by 14 days following implantation. In contrast, neural stem cells transplanted into sham controls did not show any substantial migration outside of the injection tract, suggesting that the transcallosal migration observed in the stroke-lesioned animals is due to neural stem cells being attracted by the lesion site. In vivo tracking of the migration of neural stem cells responding to damage will greatly enhance our understanding of optimal transplantation strategies as well as how neural stem cells promote functional and anatomical recovery in neurological disorders.     

尾静脉注射骨髓基质细胞和腹腔注射粒细胞集落刺激因子治疗大鼠脑梗死

背景：骨髓间充质干细胞具有成神经分化特性,有很多试验也证实粒细胞集落刺激因子可以用于改善脑梗死后的神经功能.目的：比较静脉移植骨髓间充质干细胞和腹腔注射粒细胞集落刺激因子动员干细胞来治疗大脑中动脉闭塞模型大鼠疗效.方法：实验以改良的Zea-longa线栓法阻断大脑中动脉建立SD大鼠脑梗死模型,造模24 h后分别通过尾静脉注射骨髓间充质干细胞或腹腔注射粒细胞集落刺激因子.结果与结论：两种治疗方法均可改善脑梗死模型大鼠的运动和认知功能,且粒细胞集落刺激因子对脑梗死模型大鼠的运动和认知功能的改善比尾静脉注射骨髓间充质干细胞明显,移植后第7,14天,粒细胞集落刺激因子组梗死面积小于骨髓间充质干细胞组（P 〈 0.05）,粒细胞集落刺激因子组BrdU阳性细胞数多于骨髓间充质干细胞组（P 〈 0.05）.提示粒细胞集落刺激因子动员骨髓干细胞治疗脑梗死的疗效可能优于骨髓间充质干细胞静脉注射的移植方法.