脓毒症小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+T细胞变化及其意义

目的观察脓毒症小鼠血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的变化特点,探讨它与脓毒症病程发展间的关系。方法选择清洁级KM雄性小鼠,用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作脓毒症小鼠模型(CLP组),分别于2h、6h、12h、24h、48h、72h采血处死12只,并留取远端回肠HE染色光镜检查;流式细胞仪检测血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达水平,全自动生化分析仪检测AST、ALT、BUN、Cr等肝肾功能生化指标。以假手术组(Control组)作为对照,标本采集时间点、检测方法同CLP组。结果 CLP组血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞百分比持续增高,12h后即高于假手术组,随病程进展增高更为显著(P<0.01)。CLP2h后TNF-α水平升高即超过假手术组(P<0.01),12h到达顶峰,随后开始下降,但至CLP后72h仍高于假手术组;IL-6水平于CLP后6h出现快速升高,12h达到峰值,与假手术组相比增幅有统计学差异(P<0.01),随后下降,72h与假手术组比较无统计学差异(P>0.05);CLP2h后IL-10水平即已高于假手术组(P<0.01),12h出现快速上升改变,并持续攀升,至72h未见下降拐点。CLP后ALT、AST升高早于BUN、Cr,前者术后24h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),而后者术后48h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),随着时间的延长,ALT、AST、BUN、Cr均进一步升高,假手术组指标则回落到基线水平。结论 CLP小鼠模型CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例增加与脓毒症严重程度成正比,这种变化可能是机体逃避过度的炎症反应引发严重的组织器官损伤的自身调节反应,但有一定限度,调控Treg或将为脓毒症免疫调节治疗提供新的思路。     

脓毒症大鼠调节性T细胞凋亡对辅助性T细胞漂移的影响及血必净注射液的干预作用

目的 探讨脓毒症大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡对辅助性T细胞(Th)漂移的影响及血必净注射液的干预作用.方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、血必净组,每组8只.行盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.于第3日采用免疫磁珠法分选各组CD4+CD25+Treg并培养12 h,用流式细胞仪检测Treg凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)的分泌量;再将CD4+CD25+ Treg与CD4+CD25-T细胞1∶1共培养,刀豆素A刺激68 h,ELISA检测Th1、Th2、Th17分泌的γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-17水平.结果 正常组Treg凋亡率[(12.03±0.89)%]与假手术组[(9.48±2.17)%]比较差异无统计学意义;模型组Treg凋亡率[(5.87±0.44)%]明显低于正常组和假手术组;而血必净组的Treg凋亡率[(27.29±2.48)%]显著高于其他各组(P均<0.01).Foxp3、CTLA-4表达和IL-10分泌量随Treg凋亡率增加而减少,相关系数(r)分别为-0.878(P=0.042)、-0.877(P=0.042)、-0.743(P=0.010).与正常组比较,模型组IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值均明显升高[IFN-γ:(254.70±44.88)ng/L比(0.68±0.78)ng/L,IL-4:(8.82±0.61)ng/L比(3.48±0.98)ng/L,IFN-γ/IL-4比值:30.28±4.87比0.23±0.30,P均<0.01];而血必净组IFN-γ[(491.54±84.28)ng/L]和IFN-γ/IL-4比值(45.31±8.01)均显著高于模型组(P<0.01和P<0.05);各组间IL-17水平无明显差异(P均>0.05).结论 脓毒症时Treg凋亡率增加可减轻对效应T细胞的抑制功能,血必净注射液能有效促进脓毒症Treg凋亡,介导Th2向Th1漂移.     

儿童肺炎支原体感染者血Th17/Treg的变化分析与临床意义

目的 探讨外周血辅助性T细胞17型(helper T cell type 17,Th17)和 CD4+CD25+调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)在肺炎支原体感染儿童体内的变化及临床意义.方法 肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)感染组32例,分为普通肺炎组18例、肺炎合并肺外症状组14例;健康对照组26名.常规分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测各组外周血Th17细胞、Treg的表达频率;ELISA方法 检测血清细胞因子IL-6、IL-17水平.结果 1.MP感染组外周血Th17细胞频率高于正常对照组(P＜0.01),肺外症状组血Th17细胞频率水平高于普通肺炎组(P＜0.01);MP感染组外周血Treg细胞表达频率低于正常对照组(P＜0.01),肺外症状组血Treg细胞频率低于普通肺炎组(P＜0.01).2.MP感染组血清IL-6、IL-17水平高于正常对照组(P＜0.01);肺外症状组血清IL-6、IL-17水平高于普通肺炎组(P＜0.01).结论 在儿童MP感染者体内存在Treg与Th17细胞频率明显改变,并伴有炎症性细胞因子水平升高,提示Treg与Th17细胞的频率异常在儿童MP感染的发病机制中起着重要的作用.     

特异性细胞因子对T辅助17细胞和T调节性细胞表达的调节作用

目的 探讨多种细胞因子包括转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素2(IL-2)对CD+4T淋巴细胞的分化调节作用.方法 将人外周血T淋巴细胞、鼠脾脏T淋巴细胞在不同的刺激条件下进行体外培养,采用流式细胞仪分析活化T淋巴细胞中CD+4IL-17+T辅助17细胞(Th17细胞)、C+4IL-17+T淋巴细胞、CD+4CD+25FOXP+3T调节性细胞(Treg细胞)的表达情况.结果 鼠脾脏T淋巴细胞培养液中有TGF-β存在时可促进Treg细胞、rh17细胞和CD+8;IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(7.8±2.2)%、(12.6±3.1)%、(10.1±2.6)%.无细胞因子培养的同类细胞为实验对照组,表达水平分别为(4.8±0.6)%、(1.7±0.5)%、(1.0±0.4)%,差异均有统计学意义(q=4.09、8.80、9.61,P<0.05或P<0.01).TGF-β与IL-6细胞因子共同存在时可促进Th17和CD+8IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(17.8±5.3)%、(15.0±4.2)%,而分化受抑制的Treg细胞的表达水平为(4.I±1.2)%,与TGF-β组同类细胞表达水平比较差异均有统计学意义(q=5.03、5.17、5.04,P均<0.01).在TGF-β刺激的T淋巴细胞中加入IL-2细胞因子可使Th17细胞、CD+8;IL-17+T淋巴细胞表达减少,同时伴有Treg细胞表达量的增加;在加入抗IL-2后结果相反,即Th17细胞、CD+8IL-17+T淋巴细胞表达水平增加,Treg细胞表达水平减少.人外周血T淋巴细胞上Th17、CD+8IL-17+、Treg细胞表达水平变化趋势与鼠脾脏淋巴细胞相似.结论 不同细胞因子对于调控Th17细胞和Treg细胞之间的平衡起着十分重要的作用.     

脓毒症大鼠肠系膜淋巴结与机体免疫功能相关性研究

目的 探讨脓毒症大鼠肠系膜淋巴结(MLN)与机体促炎/抗炎免疫状态变化及其相关性.方法 雄性Wistar大鼠96只,按随机数字表法分为假手术组和模型组.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型,于术后0、6、12、24、48和72 h各取8只大鼠腹主动脉血和MLN组织,采用流式细胞仪测定全血与MLN中辅助性T细胞1/2(Th1/Th2)比值及调节性T细胞(Treg细胞)占CD4+T淋巴细胞的比例.结果 模型组腹主动脉血中Th1/Th2比值于术后6 h显著升高,12 h达高峰,随后持续降低;与假手术组比较,模型组术后6、12、24 h Th1/Th2比值显著升高(0.82±0.15比0.60±0.22,1.23±0.44比0.76±0.31,0.85±0.25比0.66±0.32),72 h显著降低(0.41±0.16比0.59±0.13,P＜0.05或P＜0.01).模型组MLN中Th1/Th2比值于术后6 h达峰值,然后显著下降;与假手术组比较,模型组术后6 h Th1/Th2比值显著升高(1.01±0.16比0.52±0.13),12、24、48、72 h显著下降(0.34±0.11比0.53±0.09,0.23±0.08比0.51±0.09,0.17±0.07比0.47±0.15,0.16±0.06比0.53±0.11,P＜0.05或P＜0.01).模型组MLN中Treg细胞比例于术后12、24、48、72 h显著高于假手术组(9.62±0.69比7.65±0.67,9.84±0.74比8.08±1.06,10.95±2.09比7.83±1.15,10.81±1.34比8.35±1.12,P＜0.05或P＜0.01).MLN中Th1/Th2比值与Treg细胞比例呈线性负相关(r=-0.882,P＜0.05).结论 严重腹腔感染导致肠源性内毒素通过MLN系统移位,MLN免疫功能障碍加速内毒素人血,进而影响全身的免疫功能,产生Th1向Th2的漂移.MLN免疫功能降低可能与内毒素介导MLN中Treg细胞比例升高有关.

Abstract：

Objective To investigate the changes in T helper cells (Th1 and Th2) of mesenteric lymph node (MLN) and blood Th1 and Th2 cells in septic rats. Methods Ninety-six male Wistar rats were randomly divided into two groups according to random number table method: sham operation group and model group. Intra-abdominal infection with sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP). Eight rats in each group were sacrificed after collection of blood samples and MLN samples at 0, 6, 12, 24, 48 and 72 hours after CLP. The ratio of Th1/Th2 and the percentage of regulatory T cell (Treg) in CD4+ T cells in blood and MLN were respectively determined by flow cytometry. Results In model group, the ratio of Th1/Th2 in abdominal aorta blood increased significantly at 6 hours and reached summit at 12 hours, then it decreased persistently, and when compared with sham group, the ratio of Th1/Th2 was significantly higher at 6, 12, 24 hours (0.82±0.15 vs. 0. 60±0. 22, 1. 23±0. 44 vs. 0. 76±0. 31, 0. 85±0. 25 vs. 0. 66±0. 32)and lower at 72 hours (0. 41±0.16 vs. 0. 59±0. 13, P＜0. 05 or P＜0. 01). The ratio of Th1/Th2 in MLN of model group reached summit at 6 hours, then decreased significantly, and when compared with sham group, the ratio of Th1/Th2 was significantly higher at 6 hours (1. 01±0.16 vs. 0. 52±0.13) and lower at 12, 24, 48 and 72 hours (0. 34±0.11 vs. 0. 53±0. 09, 0. 23±0. 08 vs. 0. 51±0. 09, 0.17±0. 07 vs. 0. 47±0.15, 0.16±0. 06 vs. 0. 53±0.11, P＜0. 05 or P＜0. 01). Compared with sham group, the percentage of Treg in MLN of model group was increased at 12, 24, 48 and 72 hours after CLP (9. 62±0. 69 vs. 7. 65±0.67, 9. 84±0. 74 vs. 8.08±1. 06, 10. 95±2. 09 vs. 7. 83±1.15, 10. 81±1. 34 vs. 8. 35±1.12, P＜0. 05 or P＜0. 01). There was a negative correlation between the ratio of Th1/Th2 and the percentage of Treg in MLN (r=-0. 882, P＜0. 05). Conclusion Cellular immune function of MLN is suppressed during severe intra-abdominal infection, which induces translocation of gut-derived endotoxin to mesenteric lymphatics,resulting in corporal immuno-suppression, with manifestation of Th1/Th2 cell shift. Immuno-suppression of MLN is related to a higher percentage of Treg due to the effect of endotoxin.     

胸腺肽α1对C57BL/6结节病肉芽肿模型小鼠的疗效分析

目的：探讨胸腺肽α1（Tα1）对结节病肉芽肿的作用。方法：将25只C57BL/6小鼠随机分为2组：模型组15只,空白对照组10只。模型组用分枝杆菌过氧化物歧化酶多肽A (superoxide dismutase A ,Sod A) 诱导结节病;空白对照组给予等剂量的磷酸盐缓冲液（PBS）。建模开始第22天,每组随机取5只小鼠处死。第22～35天,将模型组剩余的10只小鼠随机分为模型组和给药组,每组5只。给药组每天给予10 μg Tα1腹腔注射;模型组、空白对照组每天给予0.5 mL PBS腹腔注射。建模开始第36天,处死小鼠,评价肺、淋巴结的组织学改变;免疫组化法检测肉芽肿中CD4+T细胞和巨噬细胞的改变;流式细胞术检测外周血辅助性T细胞（Th1）、Th2、Th17、调节性T细胞（Treg）、CD4/CD8,并采用ELISA法检测血浆、肺组织匀浆中白细胞介素17A（IL-17A）、IL-10水平。 结果：模型组小鼠可见肉芽肿性变,肉芽肿中存在巨噬细胞和CD4+T细胞浸润;给药组组织病理学改善。给药组、模型组小鼠外周血Th1及Th17比例升高（P<0.05）;各组外周血中Treg比例、Th2比例及CD4/CD8水平差异无统计学意义。模型组小鼠血浆IL-10水平降低（P<0.05）;模型组小鼠血浆IL-17A水平升高（P<0.05）。3组小鼠肺组织IL-10含量差异无统计学意义;模型组小鼠肺组织IL-17A含量升高（P<0.05）。 结论：Tα1能减轻结节病肉芽肿小鼠病情,Tα1的治疗效应可能与降低结节病肉芽肿小鼠中较高水平的Th17相关,但结论尚须验证。     

异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4~+CD25~+T细胞及IL-6、IL-10的影响

目的观察异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4+CD25+T细胞数量以及炎症因子IL-6与IL-10浓度的影响,探讨异丙酚与脓毒症时调节性T细胞(Treg)及炎症反应的关系。方法 SPF级SD雄性大鼠48只,10～12周龄,体重230～300g,以盲肠结扎穿孔术法(CLP)制作脓毒症模型。采用随机数字表法,将其随机分为三组(n=16):异丙酚干预组(CLP+异丙酚,Pro组,n=16)、赋型剂对照组(CLP+10%脂肪乳剂,FE组,n=16)和脓毒症对照组(CLP+生理盐水,CLP组,n=16)。Pro组和FE组术毕分别经股静脉泵注射异丙酚50μg·kg-1·min-1和与异丙酚等容量的10%脂肪乳注射液,注射时间持续1h,CLP组同法注射等时等容量生理盐水。分别于术后6、12、24h经尾静脉采血,流式细胞仪检测血中CD4+CD25+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定血清IL-6、IL-10的含量;计算各组大鼠24h生存率。结果 Pro组24h生存率绝对值高于CLP组和FE组,但差异无统计学意义(χ2=2.133,P=0.344)。三组大鼠术后外周血CD4+CD25+T细胞计数均随时间延长而上升,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05);三组间比较,术后6h组间无统计学差异(P>0.05),12、24hPro组和FE组均明显低于CLP组(P<0.05),同时Pro组又显著低于FE组(P<0.05);三组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的百分比随时间变化不一致,Pro组逐渐下降而CLP组和FE组均逐渐升高,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05),组间比较与细胞计数组间比较结果类似。三组大鼠术后血清IL-6和IL-10浓度均显著升高,组内比较差异有统计学意义(P<0.05);不同的是CLP组和FE组术后6hIL-6即达到高峰,随后渐降,Pro组则高峰推迟到12h;而术后IL-10均呈持续升高改变;组间比较,Pro组术后6、12、24h血清IL-6和IL-10水平均低于CLP组和FE组(P<0.05);但FE组仅术后6h低于CLP组(P<0.05),12、24h时两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论异丙酚不能显著降低脓毒症大鼠模型24h病死率,但具有抑制急性脓毒症模型外周血中CD4+CD25+T细胞增加、降低血清炎症因子浓度的效应,从而对机体炎症反应失衡有调节作用。     

Tim-3在多发性骨髓瘤患者Th17/Treg细胞失衡中的意义

目的:探讨Tim-3在多发性骨髓瘤(MM)患者Th17/Treg失衡中的意义。方法:选取56例初诊MM患者及30例健康者,采用流式细胞术检测两组外周血CD4^+T细胞上Tim-3的表达、Th17和Treg细胞各占比例、Th17/Treg比值、Tim-3在Th17及Treg细胞上的表达、Tim-3^+Th17/Tim-3^+Treg比值。运用ELISA技术检测细胞因子IL-17和IL-10的水平。分析Tim-3^+Th17/Tim-3^+Treg平衡与临床指标的关系。结果:与对照组相比,MM患者外周血CD4^+T细胞上Tim-3表达明显增高(P<0.05)。MM患者组Th17细胞比例、Th17/Treg比值较对照组明显增高(P<0.05),MM患者Treg细胞比例较对照组低,差异无统计学意义(P>0.05)。MM患者组细胞因子IL-17、IL-10及IL-17/IL-10比值均较对照组明显增高(P<0.05)。MM患者组Tim-3^+Th17细胞水平及Tim-3^+Th17/Tim-3^+Treg比例较对照组明显增高(P<0.05),MM患者Tim-3^+Treg细胞水平较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。MM患者Tim-3^+Th17/Tim-3^+Treg比值与ISS分期、DS分期、染色体异常及sFLCR呈正相关(r=0.635、r=0.501、r=0.449、r=0.587)。结论:MM患者体内存在Th17/Treg、IL-17/IL-10及Tim-3^+Th17/Tim-3^+Treg比值增高,其中Tim-3^+Th17/Tim-3^+Treg比值与患者ISS分期、DS分期、染色体异常及sFLCR有关,提示Tim-3参与了MM患者Th17/Treg失衡。     

调节性T细胞对脓毒症中T淋巴细胞凋亡的影响

目的:探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)对脓毒症过程中效应性T细胞(Teff)凋亡的影响。方法:应用SPF级健康雄性BALB/C小鼠制备盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症模型。小鼠随机分为正常对照组、假伤组、CLP组、CLP+PC61(Treg特异性抑制剂)组、CLP+HRPN(PC61的同型对照蛋白IgG)组。免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg。采用流式细胞术观察T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA)-4及转录因子叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达以及CD25比例的变化,并检测各组小鼠CD4+CD25-T细胞的凋亡率。ELISA法检测外周血中白细胞介素(IL)-10、IL-2、IL-4和干扰素(IFN)-γ的含量变化。结果:CLP+PC61组术后48h小鼠生存率(90%)较CLP组(60%)明显升高;CLP+PC61组CD4~+CD25~+Treg中Foxp3及CTLA-4表达恢复至正常对照组水平,与CLP组差异有统计学意义(P0.05),并且CLP+PC61组CD25表达水平最低。CLP+PC61组IL-2、IFN-γ水平显著升高,与CLP组差异明显(P0.05),但IL-4、IL-10水平较CLP组出现不同程度地下降(P0.05)。此外,CLP+PC61组效应性T细胞凋亡率明显低于CLP组(P0.05)。结论:拮抗小鼠体内调节性T细胞活性可有效地减轻脓毒症状态下效应性T细胞凋亡,提高小鼠生存率。     

再生障碍性贫血外周血Th17和CD4~+ CD25~+ Treg细胞表达情况研究

本研究旨在探讨成人再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达情况。45例初发AA患者分为轻型AA(n=25)和重型AA(n=25)两组,15例正常人作为对照。应用流式细胞术检测AA患者外周血中Th17和CD4+CD25+Treg的比例,ELISA检测血清及刺激后外周血单个核细胞(PBMNC)上清液中的白介素(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并与正常对照组比较。结果表明:重型AA(SAA)组外周血Th17细胞比例,血清中IL-17及IFN-γ表达高于轻型AA(MAA)和正常人组,而重型AA组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例降低。与轻型AA和正常对照相比,重型AA患者单个核细胞培养后上清液中IL-17及IFN-γ表达水平显著增加。AA患者血红蛋白计数与Th17细胞及血清IL-17表达呈负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。结论:重型AA患者外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,贫血的严重程度与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

内皮祖细胞来源外泌体在体外循环致脑损伤中作用研究

目的 探讨内皮祖细胞来源的外泌体在体外循环引起的脑损伤中的作用机制.方法 选取雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、体外循环组与外泌体处理组,每组15只.假手术组大鼠采用气管插管机械通气,仅在右股动脉、右颈内静脉穿刺置管;体外循环组建立无血预充非停跳体外循环术后认知功能障碍模型;外泌体处理组大鼠动物模型同体外循环组,待生命体征稳定后给予无菌状态下尾静脉注射200μl外泌体悬浮液.采用Garcia神经功能评价标准评估大鼠神经功能状况;采用TUNEL染色法检测神经细胞的凋亡;采用酶联免疫吸附法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血清酸性钙结合蛋白(S-100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平;免疫蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平;流式细胞术检测辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)百分比含量.结果 与假手术组比较,体外循环组、外泌体处理组各个时间点大鼠的Gar-cia神经功能评分均明显升高,脑细胞凋亡明显,差异均有统计学意义(P<0.05).与体外循环组比较,外泌体处理组各个时间点大鼠的Garcia神经功能评分明显降低,凋亡阳性细胞明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05).体外循环组、外泌体处理组中IL-1β、TNF-α、IL-6、S-100β及NSE水平均明显高于假手术组,IL-10水平明显低于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05).外泌体处理组IL-1β、TNF-α、IL-6、S-100β及NSE水平均明显低于体外循环组,IL-10水平明显高于体外循环组,差异均有统计学意义(P<0.05).与假手术比较,体外循环组、外泌体处理组Bcl-2表达水平降低,Bax、Caspase-3表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与体外循环组比较,外泌体处理组Bcl-2表达水平升高,Bax、Caspase-3表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与假手术组比较,体外循环组、外泌体处理组中CD4+IL-17+T细胞百分比明显升高,CD4+FOXP3+T细胞百分比明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与体外循环组比较,外泌体处理组CD4+IL-17+T细胞百分比明显降低,CD4+FOXP3+T细胞百分比明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 内皮祖细胞来源的外泌体能通过调节Th17/Treg细胞的动态平衡,改善体外循环后脑损伤,其机制与抑制IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的分泌和Caspase-3/Bax/Bcl-2信号通路的活化有关.     

脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 观察脓毒症大鼠脾脏T、B淋巴细胞的数量变化及细胞凋亡情况,探讨脓毒症时免疫失衡的机制.方法 健康雄性Wistar大鼠80只,按随机数字表法分为假手术组(30只)、模型组(50只).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,于制模后6、12、24、48、96 h活杀动物取脾脏,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察脾脏组织病理变化;采用免疫组化法检测脾脏CD4~+、CD8~+T淋巴细胞和B淋巴细胞以及Bax、Bcl-2蛋白表达;采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测脾脏细胞凋亡指数.结果 光镜下观察模型大鼠脾脏白髓逐渐萎缩,淋巴小结结构破坏.制模6、12、24、48、96 h,模型组大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞数、B淋巴细胞数、Bcl-2蛋白表达均较假手术组明显降低(P均<0.01),CD8~+T淋巴细胞数与假手术组比较差异无统计学意义(P均>0.05),细胞凋亡指数及Bax蛋白表达均较假手术组显著增加(P均<0.01).相关分析表明:Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡指数呈负相关(r=0.659,P<0.01),而Bax蛋白表达与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.522,P<0.01).结论 脓毒症早期免疫功能处于紊乱状态,表现为脾脏CD4~+T淋巴细胞数、B淋巴细胞数减少,细胞凋亡显著增加;Bax、Bcl-2在脓毒症脾细胞凋亡中发挥了关键作用.     

IL-37对变应性鼻炎患者相关细胞因子免疫调控研究

目的探究白介素37(IL-37)在变应性鼻炎(AR)患者外周血单核细胞(PBMCs)的表达水平及对相关细胞因子的免疫调控分析。方法选取120例AR患者作为研究组,另选择同期健康志愿者120例作为对照组,检测各组血清IL-37蛋白及mRNA表达,辅助性T细胞1(Th1)、Th2、Th17、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)和Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞百分比及相关细胞因子水平;提取2组PBMCs,并应用浓度为100、200 ng/mL的重组人IL-37蛋白(rIL-37)干预,分析干预前后相关细胞因子水平变化。结果研究组血清IL-37水平及IL-37 mRNA表达均显著低于对照组,Th1细胞、Th17细胞百分比及Th1/Th2比例显著高于对照组,Th2细胞、CD4+CD25+Treg细胞、Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞百分比显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组IL-1β、IL-6、IL-17水平显著高于对照组,IL-4、IL-10、IL-27、IFN-γ、TGF-β1水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清IL-37与IL-1β、IL-6、IL-17存在负相关性,与IL-4、IL-10、IL-27、IFN-γ、TGF-β1存在正相关性(P<0.05)。rIL-37干预后,研究组IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-27、IFN-γ、TGF-β1各指标变化更加显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。200 ng/mL组干预PBMCs细胞各细胞因子变化水平相较于100 ng/mL组各指标变化更显著(P<0.05)。结论变应性鼻炎患者IL-37表达明显下降,进而影响了Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡,导致抑炎因子水平降低,促炎因子水平升高,在AR发病中具有重要作用。     

免疫调理治疗对脓毒症患者血CD4+CD25+T细胞的影响

目的 了解脓毒症患者外周血调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)比例水平及其与机体细胞免疫之间的关系,并探讨免疫调理治疗对其水平的影响.方法 选择滕州市中心人民医院住院治疗的脓毒症患者40例,随机分成治疗组和对照组,治疗组加用乌司他丁和胸腺肽α1作抗炎和免疫调节治疗,分别于治疗前和治疗后第3,第8天抽外周静脉血,检测T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+Tregs,TNF-α,IL-6,IL-10水平,同时APACHEⅡ评分.结果 治疗前两组患者CD4+CD25+Tregs细胞水平明显升高,总淋巴细胞数、T细胞比例下降,其中以CD4+T细胞下降更明显,CD4+/CD8+明显下降,IL-6,TNF-αt水平升高;治疗后,两组患者CD4+C125+Tregs降低,总淋巴细胞数、CD4+/CD8+比值升高,APACHEⅡ评分和IL-6,TNF-αt水平均下降,治疗组改善更明显.结论 外周血CD4+CD25+Tregs细胞比例水平,可以作为评价机体免疫能力及预后新指标;联合应用胸腺肽α1和乌司他丁治疗脓毒症,可提高患者免疫力,显著降低APACHEⅡ评分、IL-6,TNF-α水平,改善患者病情.

Abstract：

Objective To investigate the percentage of CD4 + C125 +Tregs in peripheral blood of patients with sepsis and its effect on cell immunity so as to unravel the effect of immunomodulatory therapy on it. Method Fourty patients with sepsis in ICU were randomly (random number) divided into experimental group and control group . The patients of experimental group were treated with Ulinastatin and immunoregulation agent (Thymosin αl) as well. The blood specimens were collected just before treatment, 3 days and 8 days after treatment. The percentages of CD4 + CD25 + Tregs and lymphocyte subsets were detected by using FCM (flow cytometry), and TNF-α, IL-6 and IL-10 assayed by using ELISA, and APACHE Ⅱ scores were calculated. Results Before treatment, the percentage of CD4 + CD25 + Tregs increased, and the number of lymphocytes and the percentage of T lymphocytes decreased, especially the CD4 + T lymphocytes and CD4+/CD8+ decreased more markedly, and the levels of IL-6 and TNF-α increased. After treatment,the percentage of CD4+ CD25 + Tregs was decreased, the number of lymphocytes and CD4 +/CD8 + increased, and the levels of APACHE Ⅱ score, IL-6 and TNF-α decreased especially in the experimental group decreased more significantly (P ＜ 0. 05). Conclusions The percentage of CD4 + CD25+ Tregs in peripheral blood can reflect the immune status of patients with sepsis and become a novel indicator to estimate the progress of sepsis, and the immunity and prognosis of patients. Treating the patients with Thymosin αl and Ulinastatin can raise their immunity, decrease the levels of IL-6, TNF-α and APACHE Ⅱ score and improve their prognosis.     

移植患者CD4+CD25+CD127low调节性T细胞、TGF-β1及IL-10的表达

目的观察肝肾移植患者外周血中调节性T细胞(Treg细胞)的百分比与转化生长因子β1(TGF-β1)及白细胞介素10(IL-10)水平的表达情况及其相关性。方法15例移植患者的外周静脉血,采用流式细胞术检测CD4^+CD25^+CD127^low Treg细胞的百分比,并以20例体检健康者为对照组;用酶联免疫吸附试验法检测移植患者血清中细胞因子TGF-β1、IL-10的水平,分析这2种细胞因子水平与CD4^+CD25^+CD127^low Treg细胞百分比的关系及移植前后TGF-β1、IL-10水平的差异。结果与对照组比较,移植患者移植前CD4^+CD25^+CD127^low Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);肝肾移植后CD4^+CD25^+CD127^low Treg细胞百分比下降为0。肝肾移植前CD4^+CD25^+CD127^low Treg细胞百分比与TGF-β1、IL-10的水平呈正相关(P<0.05)。TGF-β1、IL-10的水平移植后低于移植前,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD4^+CD25^+CD127^low Treg的百分比与TGF-β1、IL-10的水平存在一定相关性;移植后CD4^+CD25^+CD127^low Tre细胞百分比下降为0,可能与应用大量免疫抑制剂有关。     

急性阑尾炎腹腔镜手术前后血清炎症因子水平及细胞免疫功能变化的研究

目的 研究急性阑尾炎腹腔镜手术前后血清炎症因子水平及细胞免疫功能变化。方法 选取2016年9月-2018年12月该院收治的急性阑尾炎患者86例为研究对象,采用抽签法随机分为观察组(n=43)和对照组(n=43),对照组行开腹阑尾切除术,观察组于腹腔镜下接受阑尾切除术,比较两组手术一般情况、手术前后血清降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平、细胞免疫功能指标[白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NEUT)、T淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+和CD4~+/CD8~+)]及并发症。结果 观察组手术切口长度、术中出血量、术后排气时间和住院时间较对照组明显减少或缩短(P0.05),观察组住院费用高于对照组(P0.01);观察组术后血清PCT、IL-6和IL-8水平明显低于对照组(P0.01);观察组术后第1天WBC、NEUT低于对照组,而CD3~+、CD4~+较高于对照组,两组比较,差异均有统计学意义(P0.05);观察组并发症发生率9.30%低于对照组27.91%(P0.05)。结论 采用腹腔镜手术治疗急性阑尾炎有微创、机体免疫功能恢复好、炎症反应轻、安全性高和术后恢复快等优点,值得在临床推广实践。     

人参皂甙对烫伤脓毒症大鼠细胞免疫功能的影响

目的：探讨人参皂甙对烫伤脓毒症后细胞免疫功能的影响及其作用机制。方法：健康雄性SD大鼠66只，随机分为脓毒症组（24只）、人参皂甙组（24只）和对照组（18只）。将大鼠用沸水致背部30％总体表面积Ⅲ度烫伤，烫伤后12h腹腔注射内毒素（5mg／kg）予以“二次打击”，制成烫伤脓毒症模型。用流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、CD25^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr细胞）的细胞数。结果：“二次打击”后大鼠外周血中CD4^＋T细胞、CD25^＋T细胞比例显著下降，CD8^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋Tr细胞比例显著升高；此过程随时间而加重，各时间点与对照组比较差异均有显著性（P均〈0．01）；用药后24h、72h占淋巴细胞百分比人参皂甙组CD8^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋Tr细胞占淋巴细胞百分比显著低于脓毒症组（P均〈0．01），CD4^＋T细胞、CD25^＋T细胞比例显著高于脓毒症组（P均〈0．01）。结论：烫伤和内毒素“二次打击”后外周血中CD4^＋CD25^＋Tr细胞表达增强，人参皂甙可有效抑制其表达，显著改善烫伤脓毒症时细胞免疫功能障碍。